世界中医药 207 年 9 月第 2 卷第 9 期 235 我国是一个胃癌大国, 多数患者就诊时已属中晚期, 丧失手术根治可能化疗是中晚期胃癌主要的治疗措施, 但疗效不容乐观, 且伴有显著的治疗相关毒性中医药在胃癌治疗中扮演着重要角色, 可以改善患者生命质量控制临床症状提高缓解率减低治疗相

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1 234 WORLDCHINESEMEDICINE September207,Vol.2,No.9 新加良附方抑制人胃癌细胞增殖的分子机制李亚石凤芹 2 朱陵群田劭丹 ( 北京中医药大学东直门医院血液肿瘤科, 北京,00700;2 北京中医药大学东直门医院中医内科学教育部重点实验室和北京市重点实验室, 北京,00700) 董青侯丽摘要目的 : 探讨新加良附方及其主要成分薯蓣皂苷药物血清对人胃癌细胞 BGC 823 的增殖抑制作用及可能的作用机制方法 : 制备新加良附方及薯蓣皂苷药物血清, 并作用于胃癌细胞株 BGC 823, 使用 MTS 方法检测细胞增殖抑制率 ; 采取实时 PCR 方法观察新加良附方及薯蓣皂苷药物血清对人胃癌细胞 BGC 823 中 caspase 3 及 p53 表达的影响 ; 采取实时 PCR 方法检测胃癌细胞中 mir 34a 表达水平结果 : 新加良附方药物血清及薯蓣皂苷药物血清对胃癌细胞 BGC 823 有明显的增殖抑制作用, 并且其作用与时间正相关新加良附方对胃癌细胞的增殖抑制作用在 48h 72h 高于其主要成分薯蓣皂苷 ; 人胃癌 BGC 823 细胞中 caspase 3 的表达明显低于其在正常胃黏膜上皮细胞 GES 中的水平,p53 基因表达水平高于正常 GES 细胞中的 p53 表达水平新加良附方药物血清及薯蓣皂苷药物血清作用于 BGC 823 细胞后其 caspase 3 表达水平均明显上升, 且随着时间增加其表达量升高 ;p53 基因表达水平下降, 并且与时间负相关新加良附方与其主要成分薯蓣皂苷相比较, 两者对 caspase 3 p53 的调控作用无明显差异 ; 胃癌细胞中 mir 34a 表达水平高于正常胃黏膜上皮细胞 GES 结论: 新加良附方及其主要成分薯蓣皂苷可以显著抑制胃癌 BGC 823 细胞的生长, 新加良附方对胃癌细胞的抑制作用高于其主要成分薯蓣皂苷新加良附方及薯蓣皂苷抑制胃癌细胞增殖作用可能与增加凋亡相关蛋白 caspase 3 表达, 抑制突变型 p53 表达相关 mir 34a 可能发挥癌基因的作用, 应明确其作用并进行下一步研究关键词新加良附方 ; 胃癌 ;caspase 3;p53;miR 34a MolecularMechanismsofXinjialiangFufanginInhibitingHumanGastricCancerCelProliferation LiYa,ShiFengqin,ZhuLingqun 2,TianShaodan,DongQing,HouLi (DepartmentofOncologyandHematology,DongzhimenHospitalafiliatedtoBeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing 00700,China;2KeyLaboratoryofChineseinternalmedicine,Ministryofeducation,Dongzhimenhospital, BeijingUniversityofChineseMedicine,BeijingKeyLaboratoryofinternalmedicine,Beijing00700,China) Abstract Objective:ToexploretheinhibitoryefectofXinjialiangFufangserumandDioscinserumontheproliferationofhuman gastriccancercelsbgc 823andtheposiblemechanismoftheiraction.Methods:ToprepareXinjialiangFuFangserumandDios cinserumandactonthehumangastriccancercelsbgc 823anddetectthecelproliferationinhibitoryrateusingMTSasay.To observetheefectofxinjialiangfufangserumanddioscinserumontheexpresionofcaspase 3andp53inhumangastriccancer celsbgc 823usingRT PCRmethod.TodetecttheexpresionlevelofmiR 34aingastriccancercelusingRT PCRmethod.Re sults:xinjialiangfufangserum anddioscinserum havesignificantcelproliferationinhibitoryefectagainstthehumangastric cancercelsbgc 823anditsefectisdirectlyproportionaltotime.TheproliferationinhibitoryefectofXinJiaLiangFuFangserumis beterthandioscinserumat48hand72h.theexpresionlevelofcaspase 3inhumangastriccancercelsBGC 823islowerthan thenormalgastricmucosaepithelialcelsges,whileitsp53expresionlevelishigherthanthenormalges cel.afterthexin JiaLiangFuFangserumandDioscinserum haveactedonthebgc 823cel,itscaspase 3geneexpresionlevelsignificantlyin creasedandtheexpresionlevelhasincreasedwithtime,whilethep53geneexpresionleveldecreasedandisinverselyproportion altotime.theregulationofcaspase 3andp53genebetweenXinJiaLiangFuFangserumandDioscinserumhasnostatisticaldifer ence.theexpresionlevelofmir 34aingastriccancercelishigherthanthenormalgastricmucosaepithelialcelsGES.Con clusion:xinjialiangfufanganddioscincansignificantlyinhibittheproliferationofhumangastriccancercelsbgc 823andtheir efectmayberelatedtotheincreaseofcaspase 3expresionandtheinhibitionofmutatedp53expresion.MiR 34amightplaya roleofoncogeneanditisnecesarytostudyfurtherforthenextresearch. KeyWords Caspase 3;MiR 34a;P53;Dioscin;Gastriccancer;XinjialiangFufang 中图分类号 :R289 5;R735 2 文献标识码 :A doi:0.3969/j.isn 基金项目 : 北京中医药大学面上项目 ( 中青年教师类 )(205 JYB JSMS063); 国家自然科学基金面上项目 ( ) 作者简介 : 李亚 ( ), 女, 在读博士, 住院医师, 研究方向 : 中西医结合防治恶性肿瘤,E mial: @63 com; 石凤芹 ( ), 女, 博士, 主治医师, 研究方向 : 中西医结合防治恶性肿瘤及血液病,E mial:shifengqinbj@sina com 通信作者 : 侯丽 (969 2 ), 女, 博士, 主任医师, 教授, 科室主任, 研究方向 : 中西医结合防治恶性肿瘤,E mial:houli203@26 com

2 世界中医药 207 年 9 月第 2 卷第 9 期 235 我国是一个胃癌大国, 多数患者就诊时已属中晚期, 丧失手术根治可能化疗是中晚期胃癌主要的治疗措施, 但疗效不容乐观, 且伴有显著的治疗相关毒性中医药在胃癌治疗中扮演着重要角色, 可以改善患者生命质量控制临床症状提高缓解率减低治疗相关并发症延长生存时间等, 让患者从治疗中受益, 具有多角度多靶点的综合疗效优势课题组前期对 67 例进展期胃癌研究分析显示脾胃虚寒气滞血瘀型是本病最基本的证型, 因此陈信义教授结合研究发现及长期临床实践经验提出胃癌发病的关键病机是为脾阳不振聚湿生痰, 进而导致寒痰凝滞胃脘阻滞气机, 气机不畅, 气滞血瘀, 终至形成积聚瘕, 并确立胃癌的基本治疗法则温中散寒行气活血, 在经典名方良附丸基础上加穿山龙组成新加良附方 ( 高良姜 : 香附 : 穿山龙为 2) 用于治疗胃癌 [ 2] 前期研究发现新加良附方的抑瘤作用可能与其调节 caspase 3 Bcl 2 Akt Survivin Fas/FasL 等表达有关 [3 9], 但是关于 caspase 3 上游基因在胃癌细胞中的表达情况及与新加良附方主要成分薯蓣皂苷的关系并未涉及, 作用机制和靶点尚未明确因此为进一步明确新加良附方抗胃癌的效应机制, 我们将从凋亡入手进一步研究其对 caspase 3 p53 及与 mir 34a 相关的通路的影响, 探讨可能的机制, 为临床治疗胃癌提供依据材料与方法材料动物与细胞 6 周龄 SD 雄性大鼠 0 只, 体重 (300±20)g, 购自中国医学科学院肿瘤医院实验动物中心实验前动物于国家药物安全评价中心 SPF 级别实验室适应周, 饲养条件为 (22±3), 光暗周期 2h/2h, 自由摄食饮水人胃癌细胞株 BGC 823 及人胃黏膜上皮细胞株 GES 细胞购自中国医学科学院肿瘤医院肿瘤细胞库 2 药物新加良附方由北京中医药大学东直门医院制剂室提供, 实验用药采用同一批号药物, 薯蓣皂苷购于成都普菲德生物技术有限公司 (20mg/ 支, 批号 :506) 3 试剂与仪器 RPMI 640 DMEM 培养基购自 HyClone 公司, 胎牛血清购自天津康源公司, 胰蛋白酶 Trizol 购自美国 Sigma 公司,MTS 购自 Promega 公司, 氯仿异丙醇无水乙醇购自北京化工厂, DEPC 水购自 GenStar 公司,miR 34a 茎环引物及 p53 caspase 3 β actin mir 34a U6 的实时 PCR 引物购自北京擎科新业公司,OligoDT AMV Bufer 5 AMV Bufer dntp RNA inhibitor SYBR Premix ExTaq 购自大连宝生物工程公司 2 方法 2 分组将 0 只 6 周龄 SD 雄性大鼠随机分为新加良附方组 ( 新加良附方颗粒剂 ) 薯蓣皂苷组, 每组 5 只 2 2 给药方法参考前期实验结果, 新加良附方组大鼠以新加良附方每天 5g/(kg 鼠重 ) 灌胃, 薯蓣皂苷组以薯蓣皂苷每天 0 45g/9kg 鼠重 ) 灌胃, 次 /d, 连续 5d 2 3 检测指标与方法 ) 药物血清的制备 : 0 只 6 周龄 SD 雄性大鼠于末次给药次日无菌条件下腹主动脉取血,3000r/min 离心 5min 4 离心分离血清,56 灭活 30min, 用 0 22μm 针头滤器灭菌后分装, 置于 -20 冰箱保存, 备用 2)MTS 实验 : 细胞常规培养于含 0% 血清的 RPMI 640 培养基,37 5%CO 2 饱和湿度条件下培养箱常规传代培养取对数生长期的 BGC 823 细胞, 以含 0% 血清的 RPMI 640 培养基调节细胞浓度至细胞 /ml, 接种于 96 孔细胞培养板,00μL/ 孔, 设置调零组对照组新加良附方组和薯蓣皂苷组, 每组设 3 个复孔, 培养过夜后换为无血清培养基, 按实验药物分组向每孔加入受试血清 0μL, 药物作用于细胞 24h 48h 72h 后, 每孔加 MTS 溶液 20μL, 置于 37 5%CO 2 饱和湿度条件下培养箱培养 ~4h 后, 用全自动酶标仪在波长 490nm 处读取吸光度 (A 值按公式计算细胞抑制率 : 细胞抑制率 (IR)=[-( 实验组 A490nm 值 - 空白组 A490nm 值 )/( 对照组 A490nm 值 - 空白组 A490nm 值 )] 00% 3) 实时 PCR 检测方法 : 检测新加良附方及薯蓣皂苷药物血清对 caspase 3 及 p53 表达的影响 : 首先检测未经药物作用的细胞中 caspase 3 及 p53 表达水平收集对数生长的 BGC 823 及 GES 细胞个, 提取总 RNA, 反转为 cdna, 在包含上下游引物 cdna SYBRPremixExTaq 等的反应体系中, 以 β actin 为内参, 每组设 3 个复孔, 进行实时 PCR 扩增 caspase 3 引物序列如下 :F:TTCA GAGGGGATGTTGTAGA,R:AATAACCAGGTGCTGT GGAGTA;p53 引物序列如下 :F:CTCTGACTGTAC CACCATCCAC,R:CAAACATGCACCTCAAAGCT;β actin 引物序列如下 :F:GACATCCGCAAAGACCTG, R:AACGCTTCACGAATTTGCGT 进一步检测药物作用后胃癌细胞中 caspase 3 及 p53 表达变化实

3 236 WORLDCHINESEMEDICINE September207,Vol.2,No.9 验药物分为 3 组 : 对照组新加良附方药物血清组和薯蓣皂苷药物血清组取对数生长期的 BGC 823 细胞, 以含 0% 血清的 RPMI 640 培养基调节细胞浓度至细胞 /2mL, 接种于 6 孔细胞培养板,2 ml/ 孔置于 37 5%CO 2 饱和湿度条件下培养箱培养过夜后弃掉旧培养基, 将无血清的 RPMI 640 培养基 800μL 加入细胞中, 按实验药物分组向每孔加入受试血清 200μL, 分别收集药物作用 24 h 48h 前后细胞, 检测 caspase 3 及 p53 在胃癌细胞中的表达水平, 方法同前进一步我们检测胃癌细胞中 mir 34a 表达水平 : 收集对数生长的 BGC 823 及 GES 细胞个, 提取总 RNA, 反转为 cd NA, 在包含上下游引物 cdna SYBRPremixExTaq 等的反应体系中, 以 U6 为内参, 每组设 3 个复孔, 进行实时 PCR 扩增 mir 34a 引物序列如下 :F: GCGTGGCAGTGTCTTAGCT,R:TGGGTTCATTTCT GGGTCTT;U6 引物序列如下 :F:CTCGCTTCGGCAG CACA,R:AACGCTTCACGAATTTGCGT 实时 PCR 产物的定量校正和判定分析 : 采用比较 Ct 值方法来定量 caspase 3 p53 及 mir 34a 表达水平, 用 β ac tin/u6 作为内参, 将每个样本的 Ct 值与内参照的 Ct 值相减, 即 Ct= 检测基因 Ct 值内参基因 Ct 值, 计算其相对表达量 2 - CT 值 3 统计学方法应用 SPSS7 0 统计软件进行数据处理, 计量资料以均数 ± 标准差 ( x±s) 珋表示,2 组资料的比较采用独立样本的 t 检验, 多组资料的比较采用单因素方差分析及 LSD t 检验, 若不符合正态分布, 采用非参数 H 检验, 以 P<0 05 为差异有统计学意义 2 结果 2 新加良附方及薯蓣皂苷药物血清对胃癌细胞的增殖抑制作用通过 MTS 方法检测新加良附方及其主要成分薯蓣皂苷对 BGC 823 细胞的增殖抑制影响, 结果显示新加良附方及薯蓣皂苷药物血清对细胞增殖抑制率在 24h(23 67±0 79)% (2 2± 2 88)%;48h(45 50± 43)% (35 79±5 3)%; 72h(65 9±2 35)% (44 28±3 4)%; 明显高于对照组, 差异有统计学意义 (P<0 05); 新加良附方对胃癌细胞的增殖抑制率在 24h 48h 72h 各时间点比较, 差异有统计学意义 (P<0 05), 新加良附方对胃癌细胞增殖抑制率随时间的增加而升高 ; 薯蓣皂苷对胃癌细胞的增殖抑制率在 3 个时间点比较, 差异有统计学意义 (P<0 05), 薯蓣皂苷对胃癌细胞的增殖抑制率与时间正相关新加良附方药物血清对细胞增殖抑制率在 48h 72h 高于薯蓣皂苷药物血清, 差异有统计学意义 (P<0 05) 见图图药物对胃癌细胞增殖抑制率注 :P<0 05 表示差异有统计学意义 2 2 胃癌细胞中 caspase 3 及 p53 表达水平实时 PCR 结果显示胃癌细胞 BGC 823 中 caspase 3 相对表达量约为人胃黏膜上皮细胞 GES 细胞的 (0 2895±0 0547) 倍, 显著低于其在 GES 细胞中的表达水平, 差异有统计学意义 (P<0 05);p53 在胃癌细胞 BGC 823 中相对表达量为 GES 细胞的 ( 769±0 0400) 倍, 高于其在人胃黏膜上皮细胞 GES 中的表达水平, 差异有统计学意义 (P< 0 05) 2 3 药物作用后胃癌细胞 caspase 3 表达水平变化新加良附方药物血清作用于 BGC 823 细胞 24 h 48h 后 caspase 3 相对表达量约为对照组 ( ±0 7599) 倍 (5 0027±0 866) 倍,24h 与 48h 比较, 差异均有统计学意义 (P<0 05), 提示新加良附方可上调 caspase 3 的表达, 与时间正相关 ; 薯蓣皂苷药物血清作用于 BGC 823 细胞 24h 48h 后 caspase 3 相对表达量为对照组 (3 4553±0 5554) 倍 ( 9685± 9008) 倍,24h 与 48h 比较, 差异均有统计学意义 (P<0 05) 提示薯蓣皂苷可上调 caspase 3 表达水平, 与时间正相关 ;2 组比较, 差异无统计学意义 (P >0 05) 但新加良附方对 caspase 3 表达水平的调控显示出优于其主要成分薯蓣皂苷的趋势见图药物作用后胃癌细胞 p53 表达水平变化新加良附方药物血清作用于 BGC 823 细胞 24h 48h 后 p53 相对表达量为对照组 (0 5807±0 23) 倍 (0 272±0 0775) 倍,24h 与 48h 比较, 差异均有统计学意义 (P<0 05) 提示新加良附方可下调 p53 表达水平, 作用与时间负相关薯蓣皂苷药物血清作用于 BGC 823 细胞 24h 48h 后 p53 相对表达量为对照组 (0 6003±0 83) 倍 (0 2999±

4 世界中医药０１７年９月第１卷第９期１７０００７１倍４ｈ与４８ｈ比较差异均有统计学意义分可以起到抗肿瘤的作用如有学者报道高良姜及Ｐ００提示薯蓣皂苷可下调表达水平作香附的提取物可以抑制肿瘤细胞的生长新加良附用与时间负相关组之间比较差异无统计学意方作为中药复方成分复杂在今后的研究中我们可表达调控显示义Ｐ００但新加良附方对以进一步明确新加良附方中其他有效成分出优于其主要成分薯蓣皂苷的趋势见图半胱天冬酶ｃ又称凋亡蛋白酶是细胞凋亡执行者是一组对底物天冬氨酸部位有特异水解作用的蛋白酶其中心富含半胱氨酸可以分为启动型和效应型其中后者主要包括ｃ６和７ｃ是ｃ家族最重要的凋亡执行者之一被认为是整个凋亡级联反应的一个关键调节点１０受及其靶基因的调控可诱发并加速凋亡的进行１１本实验显示ｃ表达水平在胃癌细胞表中较正常人胃黏膜上皮细胞中低提示ｃ图药物作用后ｃ表达水平达的降低与胃癌的发生发展密切相关新加良附方及主要成分薯蓣皂苷药物血清作用于胃癌细胞后其ｃ水平均升高提示两者可提高ｃ蛋白表达水平参与调控细胞的凋亡过程基因有野生型和突变型种野生型是肿瘤抑制基因它与细胞的生长阻滞和凋亡有关在许多肿瘤细胞中有的缺失和突变则凋亡过程减弱突变的基因失去正常生物学活性不能诱导受损图药物作用后表达水平胃癌细胞中ｍｉ４表达水平实时ＰＣＲ方８和正常胃黏膜上皮细胞法检测胃癌细胞系ＢＧＣＧＥＳ１中ｍｉ４的表达情况ＢＧＣ８细胞中ｍｉ４相对表达量约为ＧＥＳ１细胞中ｍｉ４表达水平的０７１±７９４４倍较ＧＥＳ１细胞ｍｉ０４表达显著增高差异有统计学意义Ｐ０见图４细胞的凋亡这些细胞就成为癌细胞的前身通过其靶基因发挥作用从而影响细胞的细胞周期及凋亡过程促进肿瘤的发生发展１本实验显示胃癌细胞ＢＧＣ８中突变表达水平较正常细胞ＧＥＳ１水平增高新加良附方药物血清和薯蓣皂苷药物血清作用于胃癌细胞后其表达水平降低提示两表达水平有关者抑癌作用可能与抑制突变型但是对于ｃ及表达水平的调控新加良附方与薯蓣皂苷相比较并无明显差异这提示我们新加良附方对胃癌细胞的增殖抑制作用除了参与凋亡的调控可能仍与细胞周期及衰老等其他途径相关这也显示了中药抗肿瘤的多靶点多途径作用因此今后我们将从细胞周期等多方面进行研究微小ＲＮＡｍｉＲＮＡ是一类长度约个核苷酸的非编码单链小分子ＲＮＡ在转录后水平沉默基因图４ｍｉ４表达水平讨论的表达为近年的研究热点研究发现ｍｉ４受直接调控是重要的靶基因其可以通过调新加良附方药物血清可显著抑制细胞增殖作控ｃＢｃｌ等凋亡相关蛋白表达来调控细胞用呈时间依赖性这与课题组前期基础研究结果一的凋亡过程１１６能够直接抑制ＳＩＲＴ１从而调控致方中主要成分薯蓣皂苷是穿山龙的提取物亦的转录活性因此ｍｉ４在基因的调控通可明显抑制细胞增殖但是其对细胞的增殖抑制率４作为抑癌基因路中发挥着重要作用１７ｍｉ在４８ｈ７ｈ均低于新加良附方药物血清这提示在不同肿瘤中呈低表达１８而本实验发现胃癌细胞我们新加良附方中除了薯蓣皂苷外尚有其他有效成ＢＧＣ８中ｍｉ４表达较ＧＥＳ１细胞中表达水平

5 238 WORLDCHINESEMEDICINE September207,Vol.2,No.9 升高, 这与部分报道不符有学者研究发现 mir 34a 作为抑癌基因在肿瘤发生发展中起着重要的调控作用, 但另有一些学者关于 mir 34a 起到癌基因还是抑癌基因的作用存在不同意见, 如研究发现在非小细胞肺癌患者肿瘤组织中 mir 34a 的表达明显高于正常组织 [9] [20],Osawa 等分析手术后 30 例胃癌患者肿瘤组织 mirna 表达, 发现 mir 34a 表达水平高于正常组, 有学者发现在肝癌组织中 mir 34a 高表达 [2], 并提示可能与机体增殖与凋亡不平衡有关, 这些研究均提示 mir 34a 可能发挥癌基因作用, 故 mir 34a 作用及其机制有待进一步研究结合文献报道, 分析所得结果, 考虑除了 mir 34a 可能发挥癌基因作用外, 还可能存在以下原因 : 实验所需的 mir 34a 茎环引物及 PCR 引物存在非特异性可能, 因此应继续查阅文献寻找可靠的引物序列进行实验 ;Cao 等 [22] [23] [24] 陈艳辉及 Yang 等发现在不同胃癌细胞系中其 mir 34a 表达亦不同, 分析其结果可能与细胞株分化程度有无淋巴结转移及能否分泌粘液素相关, 因此我们将检测多种细胞系中 mir 34a 表达以明确不同细胞系中其差异性表达情况同时检测高表达 mir 34a 细胞对细胞增殖及凋亡的影响以明确其作用明确 mir 34a 作用后, 我们将继续检测新加良附方及薯蓣皂苷对胃癌细胞 mir 34a 表达水平及甲基化的影响, 明确新加良附方及薯蓣皂苷如何从表观遗传学方面调控肿瘤发生发展并启动细胞增殖细胞凋亡血管生成等过程, 进行体外体内实验观察其作用机理, 为临床治疗胃癌提供依据参考文献 [] 刘庆, 李忠, 田劭丹, 等.67 例进展期胃癌中医证型研究分析 [J]. 北京中医药大学学报,204,37(4): [2] 王婧. 新加良附颗粒治疗晚期胃癌临床研究 [D]. 北京 : 北京中医药大学,200. [3] 庄严, 董青, 陈信义, 等. 新加良附颗粒含药血清体外诱导人胃癌细胞凋亡研究 [J]. 中国实验方剂学杂志,2007,3(8): [4] 田劭丹, 董青, 侯丽, 等. 新加良附方对移植性人胃癌细胞 Survivin 与 Caspase 3 蛋白表达影响 [J]. 现代生物医学进展,2009,9(2): ,4065, 封 2. [5] 田劭丹, 董青, 侯丽, 等. 新加良附方对移植性人胃癌细胞 Bax/ Bcl 2 表达影响 [J]. 中国医药指南,200,8(9): [6] 董青, 田劭丹, 侯丽, 等. 新加良附方对移植性人胃癌细胞 Fas/ FasL 表达影响 [J]. 中国医学创新,200,7(5): [7] 倪磊, 田劭丹, 马成杰, 等. 新加良附方影响人胃癌裸小鼠移植瘤新生血管形成的研究 [J]. 山西中医.200,26(4): [8] 许晶, 侯丽, 武苗, 等. 新加良附方联合 5 Fu 对裸鼠胃癌移植瘤 Bax/Bcl 2 表达的影响 [J]. 世界中西医结合杂志,203,8(7): [9] 宋延平, 许晶, 赵林涛, 等. 新加良附方联合 5 Fu 对裸鼠胃癌移植瘤 Survivin/Caspase 3 表达的影响 [J]. 中国科技论文在线精品论文.203,6(23): [0]LeeY,AhnC,HanJ,etal.ThenuclearRNase IDroshainitiates micrornaprocesing[j].nature.2003,425(6956): []ChenH,YangX,FengZ,etal.PrognosticvalueofCaspase 3ex presionincancersofdigestivetract:ameta analysisandsystematic review[j].intjclinexpmed.205,8(7): [2]TarasovV,JungP,VerdoodtB,etal.Diferentialregulationofmi crornasbyp53revealedbymasivelyparalelsequencing:mir 34a isap53targetthatinducesapoptosisandg arest[j].celcycle, 2007,6(3): [3]BommerGT,GerinI,FengY,etal.p53 mediatedactivationofmir NA34candidatetumor suppresorgenes[j].curbiol,2007,7 (5): [4]CorneyDC,Flesken NikitinA,GodwinAK,etal.MicroRNA 34b andmicrorna 34caretargetsofp53andcooperateincontrolofcel proliferationand adhesion independentgrowth[j].cancerres, 2007,67(8): [5]NavaroF,LiebermanJ.miR 34andp53:NewInsightsintoaCom plexfunctionalrelationship[j].plos One.205,0(7): e [6]HeL,HeX,LoweSW,etal.microRNAsjointhep53network anotherpieceinthetumour suppresionpuzle[j].natrevcancer. 2007,7(): [7]YamakuchiM,LowensteinCJ.MiR 34,SIRTandp53:thefeedback loop[j].celcycle.2009,8(5): [8]LodyginD,TarasovV,EpanchintsevA,etal.InactivationofmiR 34a byaberantcpgmethylationinmultipletypesofcancer[j].celcy cle,2008,7(6): [9]FranchinaT,AmodeoV,BronteG,etal.CirculatingmiR 22,miR 24 andmir 34aasnovelpredictivebiomarkerstopemetrexed based chemotherapyinadvancednon smalcellungcancer[j].jcel Physiol,204,229(): [20]OsawaS,ShimadaY,SekineS,etal.MicroRNAprofilingofgastric cancerpatientsfrom formalin fixedparafin embeddedsamples[j]. OncolLet.20,2(4): [2]PineauP,VoliniaS,McJunkinK,etal.miR 22overexpresioncon tributestolivertumorigenesis[j].procnatlacadsciusa.200, 07(): [22]CaoW,FanR,WangL,etal.Expresionandregulatoryfunctionof mirna 34aintargetingsurviviningastriccancercels[J].Tumour Biol.203,34(2): [23] 陈艳辉.miR 34a 抑制人胃癌细胞生长与侵袭的实验研究 [D]. 衡阳 : 南华大学,203. [24]YangB,HuangJ,LiuH.miR 335directly,whilemiR 34aindirectly modulatesurvivinexpresionandregulategrowth,apoptosis,andin vasionofgastriccancercels[j].tumourbiol,206,37(2): ( 收稿责任编辑 : 杨觉雄 )

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