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1 第四章放射性标记化合物和放射性药物

2 一 基本概念 重要参数 放射性浓度 (radioactive concentration) 放射化学纯度 (radiochemical purity) 放化纯度 = 标记物的放射性活度样品总的放射性活度 放射性比活度 (specific activity) 同位素标记与非同位素标记 100% 用同种放射性核素取代各种有机分子中的化学元素, 称为同位素标记 (isotopic labelling)

3 无法采用同位素标记的情况下, 可以选用性质和原子半径相接近的放射性核素来替代, 称为非同位素标记 (non-isotopic labelling) 定位标记与非定位标记 定位标记 (specific labelling) 是指将核素标记在化合物的指定位置上 在化合物不同部位引入两种不同的示踪核素进行标记, 称为双标记化合物 (double labelling compounds) 如果标记原子的结合部位无法确定, 称为非定位标记 (nonspecific labelling)

4 二 放射性核素标记化合物的制备 放射性核素的选择 不能改变原有化合物的理化和生物学特性 ; 要有合适的放射性半衰期 ; 容易测量 ; 标记方法较为简便 ; 可以接受的价格

5 制备方法分类 同位素交换法 化学合成法 生物合成法 络合物 / 螯合物合成法 基本方法 14 C 3 H 和 125 I 都是生命研究中最常用的示踪原子, 同时, 还有 32 P 和 35 S

6 三 放射性核素标记化合物的纯化和鉴定 放射性化合物的要求 放射化学纯度 >95%; 在示踪过程中稳定 ; 不影响生命体生理代谢过程 ( 吸收 分布 排泄 转运 代谢等 ); 放射性杂质的来源 : 游离的放射性核素 ; 杂质被标记上放射性核素 ; 在运输和贮存过程中, 放射性化合物出现脱标和辐射自分解形成的杂质

7 放射性化合物 标记率测定 分离纯化 1. 标记率的测定 产品的质量鉴定 放射性标记化合物的纯化和鉴定过程 标记率 = 标记物的放射性投入的总放射性 100% 常用方法包括放射性纸层析法 (paper chromatography) 薄层 层析法 (thin layer chromatography TLC) 柱层析和蛋白沉淀法

8 1) 基本原理 层析法是采用层析纸或层析薄板作为固定相, 展开液作为作为流动相, 根据不同组分的吸附力 分配系数 带电粒子性质和数量以及其他等方面的差异, 使各组分在固定相上的移动距离出现差异, 将不同组分有效地区分开来 采用比移值 (Rf) 代表各组分移动的相对速度 Rf = 待测组分和原点的距离 ( l) 流动相的前沿和原点的距离 ( L) 100% 2) 基本操作 a. 固定相的选择 b. 展开剂的选择 c. 层析的点样与展开

9 3) 结果的测量 a. 放射自显影 b. 分段测量 c. 放射性扫描 标记物放射峰的 cpm总和标记率 (%) = 100% 全部层析轨迹上 cpm总和 4) 注意事项 a. 必须确认层析条件能将样品中的各组分有效分开 ; b. 高比活度的标记化合物, 点样加载体 ; c. 低比活度的样品可多次点样, 用氮气吹干

10 2. 标记物的分离纯化 1) 层析法 快速 简便, 仅适用于少量体积的样品纯化 2) 柱层析法 将固体相装填如一定体积的柱中, 将样品加到固定相之上, 用洗脱液淋洗, 样品中的各种化合物, 由于吸附 分配的差异, 或由于离子所带电荷的数量 性质不同, 或分子量的差异, 在层析柱淋洗过程的速度不同, 各组分的洗出有前后之分, 从而达到 分离目的 具有准确 高效 灵敏 应用范围广的特点 a. 凝胶过滤层析法 b. 离子交换层析法 c. 亲和层析法

11 3) 透析法和超滤法 简便, 但费时, 并且纯化程度不高, 应用范围不广 2. 标记物的鉴定 1) 放化纯度测定 2) 放射性浓度测定 3) 放射性比活度的测定 4) 生物活性和免疫活性的测定

12 四 放射性核素标记化合物的辐射自分解 概念 : 标记化合物中所含放射性核素产生的电离辐射作用, 导致标记化合物分子本身的结构被破坏而丧失原有特性的现象, 统称为辐射自分解 (autoradiolysis,arl) 1. ARL 的类型 1) 初级内分解 (primary internal decomposition): 指核素本身衰变引起标记物分子结构发生变化, 其 ARL 的方式为标记物化学结构的变化, 而非电离辐射所形成, 因此, 目前尚无有效的预防方法 2) 初级外分解 (primary external decomposition): 指核素衰变所发出的射线引起标记物分子化学键的断裂, 从而改变标记化合物的化学和生物学特性, 可采取一定的方式降低其发生率

13 3) 次级分解 (secondary decomposition): 指核素衰变所发出的射线使溶剂产生自由基和活性氧, 进而造成标记物本身或临近化合物化学结构的改变, 产生机制类似于放射生物学中的间接作用, 因此, 选择合适的溶剂对控制 SD 的发生具有重要意义 2. 影响因素 射线的品种和能量 ; 放射性标记物的比活度和浓度 ; 所用的溶剂 ; 样品的纯度 ; 储存的温度 ;

14 3. 控制辐射自分解的方法 控制放射性比活度和放射浓度 ; 选择适当的溶剂 ; 加入自由基清除剂 ; 降低贮存的温度 ; 对标记化合物进行纯化 ;

15 一 概念 分类和特点 放射性药物是指含有放射性核素 能够用于医学诊断和治疗的一类特殊制剂 放射性药物的分类 放射性药物的特点 具有放射性 不稳定性 化学质量小 存在 ARL

16 放射性药物的特殊要求 放射性核素的选择 1. 治疗用放射性核素 2. 被标记物无毒副作用, 无致敏性, 纯度高, 有靶向性, 能够被核素标记 3. 标记方法简单 快速, 无需纯化 4. 在一定时间内较为稳定

17 放射性药物的作用机制 代谢途径 脏器摄取 离子交换 弥散和分布 细胞吞噬 特异结合

18 二 放射性药物的制备 放射性药物的制备途径 放射性核素的产生 配体的合成 标记 放射性核素的来源 反应堆生产品种多 产量大 操作简单 但产品富中子, 伴有 β - 衰变, 不利于制备诊断用药物, 并且子核和母核分离较为困难

19 加速器生产 大部分为贫中子核素 通常发生 β + 衰变或电子俘获, 有利 于核医学显像 核素发生器 主要有 99 Mo- 99m Tc 188 W- 188 Re 113 Sn- 113m In 发生器等 生产简便, 成本低廉, 但洗脱效率低, 洗脱曲线峰较宽, 峰位靠后导致洗脱体积较大, 放射性浓度低 配体 - 被标记物 使用剂量在毫克级以下, 无毒副作用 能提供至少一个功能团, 便于放射性核素标记

20 放射性核素标记后的产品在体内外具有稳定性 易于制成药盒 标记方法 ( 略 ) 制备中应考虑的因素 ( 略 ) 三 质量控制与质量检验 理化检验 形状 放射性核素的鉴别 放射性核纯度 放射性核纯度 = 放射性核素纯度总放射性活度 100%

21 放射性活度 ph 值 放化纯度 化学纯度 生物学检验 无菌检查 热源检查 生物分布 生物活性 其他

22 四 常用放射性药物的介绍 含锝 99m Tc 的放射性药物 高锝 [ 99m Tc] 酸钠 主要用于甲状腺 脑 唾液腺 异位胃粘膜显像和 制备含 [ 99m Tc] 放射性药品 锝 [ 99m Tc] 亚甲基二膦酸盐 ( 99m Tc-MDP) 主要用于全身和局部骨显像, 诊断骨关节疾病和原 发 转移性骨肿瘤 锝 [ 99m Tc] 依菲替宁注射液 ( 99m Tc-FHIDA) 主要用于肝胆系统显像, 诊断肝外胆管阻塞 胆囊 炎和胆管炎等胆道系统疾病

23 锝 [ 99m Tc] 植酸盐注射液 ( 99m Tc-Phy) 主要用于肝脏占位或破坏性疾病以及肝缺血性疾病, 肝 功能明显低下时, 脾和骨髓浓聚增加 锝 [ 99m Tc] 依沙美肟注射液 ( 99m Tc-HMPAO) 主要用于脑血流灌注显像, 诊断脑血管疾病, 脑外伤 癫痫 痴呆症 脑死亡以及脑功能和正常脑生理活动 锝 [ 99m Tc] 司它比注射液 ( 99m Tc-MIBI) 主要用于心肌显像 肾脏显像 包括锝 [ 99m Tc] 双半胱氨酸注射液 ( 99m Tc-EC) 锝 [ 99m Tc] 巯替肽 注射液 ( 99m Tc-MAG3) 锝 [ 99m Tc] 喷替酸盐注射液 ( 99m Tc-DTPA) 等

24 碘 铬 碳标记的放射性药物 碘 [ 131 I] 化钠胶囊 ( 131 I-Cap) 用于甲状腺吸碘功能测定 邻碘 [ 131 I] 马尿酸钠 ( 131 I-Hipp) 用于肾功能测定 铬 [ 131 I] 酸钠 ( 51 Cr-Hipp) 用于测定红细胞寿命 血小板寿命 红细胞 容量及血容量, 也可用于脾显像 尿素 [ 14 C] 胶囊 ( 14 C-Urea) 用于诊断幽门螺旋杆菌

25 镓 铊标记的放射性药物 枸橼酸镓 [ 67 Ga] ( 67 Ga -Citate) 用于肿瘤和炎症的定位诊断和 鉴别诊断 氯化亚铊 [ 201 Tl] ( 201 TlCl) 用于心肌显像, 对心肌梗塞 冠心病的诊断 预后及随访观察有较 大价值

26 正电子发射半衰期核素的放射性药物 氟 [ 18 F] 化钠 骨显像效果优于 99m Tc-MDP 2- 氟 [ 18 F]-2- 脱氧葡萄糖 ([ 18 F]-FDG) 用于脑 心肌 肿瘤和炎症显像 [ 13 N]- 氨注射液 ( 13 N-NH 3 ) 用于心肌血流灌注显像 结合 18 F- FDG 可评价局部心肌存活能力 [ 11 C]- 雷可派用于与多巴胺 D2 受体神经系统的疾病显像

27 [ 11 C]- 甲硫氨酸 用于与氨基酸的摄取和蛋白质合成有关的肿瘤显像, 特别是神经胶质瘤显像 检测肿瘤的治疗效果优于 18 F- FDG 治疗用放射性药物 治疗放射性药物的主要特点 : 利用辐射作用杀伤细胞 ; 具有较高的靶 / 非靶比值 ; 根据病变部位和范围选择不同的放射性核素 碘 [ 131 I] 化钠口服溶液 ( 131 I) 的治疗 用于治疗甲状腺机能亢进和甲状腺癌转移灶

28 磷 [ 32 P] 酸钠盐口服溶液 ( 32 P) 治疗骨转移癌 ; 骨组织的过度增生 ; 抑制血液疾病的细胞异常增生 ; 治疗各类皮肤病 来昔决南钐 ( 153 Sm-EDTMP) 用于治疗转移性骨癌 氯化锶 ( 89 Sr) 用于治疗转移性骨癌 锝 [ 99 Tc] 亚甲基二膦酸盐 ( 99 Tc-MDP) 用于治疗类风湿性关节炎

29 五 单抗放射性药物 单抗放射性药物 多肽放射性药物 六 放射性药品的管理 放射性药物属处方药, 按 放射性药品管理办法 和 中华人民共和国药品管理法 进行管理, 实行 放射性药品 使用许可证 制度 一级许可证 : 使用市售体外放免试剂盒及直接使用的放射性药品 ; 二级许可证 : 除可使用一级许可证药物外, 还可使用核素和核素发生器及配套药盒自行制备放射性药品 ; 三级许可证 : 除可使用二级许可证药物外, 还可自行研制放射性药品 ;

30 第五章示踪技术及放射性核素显像技术

31 放射性核素示踪技术 体内示踪技术 体外示踪技术 器官与组织显像 体外放射分析 功能测定 体液和细胞容积测定 细胞参入实验 放射自显影 代谢与转化研究 活化分析

32 第一节放射性核素示踪技术

33 一 放射性核素示踪技术的原理及特点 概念 是利用放射性核素及其标记化合物作为示踪剂来研究生物机体各种物质的吸收 分布 排泄 转移及转化规律的一门科学 基本原理 与被示踪的物质有同一性 ; 与被示踪的物质有可区别性 ; 特点 灵敏度高, 最低水平可达 ~10-15 mol; 检测方便, 不受其他非放射性杂质的干扰 ;

34 合乎生理条件, 应用放射性示踪剂可使用少至生理剂量来研究物质在整体中的变化规律, 而且不改变原物质 ; 能定位, 可通过放射自显影技术在组织器官内进行定位及定量分布, 与病理组织切片技术结合起来可进行细胞水平的定位, 与电子显微镜技术结合起来可进行亚细胞的定位观察 基本类型 整体示踪实验 : 多用于研究物质吸收 分布 转运及排泄过程 ; 离体示踪实验 : 多用于某些特定物质如蛋白质 核酸等的转化规律以及某些精细结构的功能研究 ; 双标记示踪实验 : 多用于研究物质代谢过程中某分子内两部分的代谢规律, 或某种分子在不同形态或不同物质的运动转化规律 ;

35 合适的示踪物 射线类型 : 整体实验采用 131 I 99m Tc, 离体试验采用 3 H 14 C 和 125 I 半衰期 放化纯度 >95% 衰变产物的毒性 比活度 核素的标记位置 : 应注意标记物在体内的稳定性及同位素效应

36 合适的测定方法 示踪剂量的估算 放射性标记物分布的不均一性 ; 放射性标记物代谢速率的不一致 ; 实验观察时间的不一致 ; 剂量应在安全范围内 放射性样品的制备 不能有非放射性杂质干扰 ; 须做回收率校正

37 数据采集 放射性含量 : 可用来反映不同组织浓聚某种物质的能力, 标记代谢物的放射性含量常用于反映某种物质的转化速率 比活度 : 用于研究内源性物质的动态分布代谢 相对比活度 : 两个解剖部位中同一化合物的比值或两种化合物比活度的比值 同位素效应 初级同位素效应 : 反应直接涉及同位素所在化学键时发生的同位素效应 次级同位素效应 : 同位素效应发生在邻近的化学键 溶剂同位素效应 : 溶剂中某种原子被同位素取代后影响溶质的反应速率, 称为同位素效应

38 二 放射性核素稀释法 原理 利用质量守恒原理, 根据稀释前后总放射性不变, 计算需探测物质的质量或体积 分类 S M = S ( M + 2 ) M C V = C ( V + 2 ) V 正稀释法和反稀释法

39 应用 要求标记物和待测物在化学性质上和生物学行为上完全一致 放射性活度和质量在稀释前后的测量值必须非常准确 要求样品有非常高的纯度, 同时有足够的样本量 测定生理性物质的体内代谢库 ; 测定生物整体中某些体液成分的数量 ; 评价其它超微量分析方法的可靠性

40 第二节放射性核素显像技术

41 一 显像仪器 闪烁扫描仪 显像仪器 γ 照相机 γ 照相机 ECT SPECT PET 准直器晶体光电倍增管脉冲幅度分析器 显示系统

42 1. 准直器 (collimator) 保证 γ 照相机的分辨率和定位准确 平行孔型 准直器 多孔型 针孔型 发散型 会聚型 斜孔型 2. 晶体 (crystal) 射线进入晶体产生荧光信号

43 3. 光电倍增管 (photomultiplier tube) 吸收荧光信号, 转变为电压信号输出 由这些输出信号的综合和加权, 最终形成显像图 在显像图中的定位取决于每一个光电倍增管感受到的信号的多少和强度 所以光电倍增管的数量多少与定位的准确性有关 数量多可增大显像的空间分辨率, 增加定位的准确性 4. 脉冲高度分析器 (pulse amplitude analyzer) 在 γ 照相机上通过调节脉冲高度分析器的阈值和测量道的窗宽, 选择性地记录目标脉冲信号用作显像而排除本底及其他干扰信号 5. 显示系统 有电子学线路和计算机构成 γ 照相机的信号分析和数据处理系统, 现代新型的 γ 照相机在每一个光电倍增管的底部设置信号处理线路, 这样就可减少信号的失真, 提高准确度和空间分辨率

44 SPECT 单探头 SPECT 相当于用大视野 γ 照相机的探头通过可旋转的机架围绕探头的中心, 绕病人进行旋转, 每隔一定角度采集图像 ( 多平面显像 ), 通常以每隔 3 o 或 6 o 采集一帧平面显像,360 o 采集 64 帧图像 然后通过计算机处理 重建成断层显像 图像重建方法采用滤波反投射技术 (filtered backprojection, FBP) SPECT 的基本操作过程 : A. 影像的获取, 包括获取时间 剂量 ; 图像大小 ; 角度 ; 探头移动方式等 B. 影像的重组, 包括标定靶器官 选取横切面影像 衰减矫正 选取冠切 矢切 斜切等图像

45 3-D 图像的效果 : 所呈现的图像明暗醒目

46 正电子断层成像 1. 湮灭辐射 (annihilation radiation) β + 粒子通过物质时, 其动能完全消失后, 可与物质中的自由电子相结合而转化为一对发射方向相反 能量分别为 0.511MeV 的 γ 光子 0.511MeV MeV

47 2. 正电子发射断层显像的原理 用成相反方向 ( 互成 180 o ) 排列的两个探头探测 γ 光子, 当光子与探测器相互作用, 产生荧光光子并形成一个电脉冲, 脉冲幅度分析器选 择能量辐射 511keV 的电脉冲送入电子学线路, 电子学线路把呈相反 方向并在 5-15ns 内发生的两个电脉冲信号送入显像系统, 计算机系统以此闪烁数据为基础, 生成图像 3. 正电子发射核素的 SPECT 显像 采用符合线路技术利用电子准直技术无需铅准直器具有一机两用功能其晶体部分仍采用 NaI(Tl)

48 4. 正电子发射核素的 PET 显像 PET 的结构 : 晶体 电子准直 符合线路和飞行时间技术, 计算机数据处理系统, 图像显示 断层床等 可应用与静态和动态断层显像, 并能进行定量分析 探头多采用锗酸铋 (BGO) 晶体, 此外还有硅酸镥 (LSO) 硅酸钆 (GSO) 晶体 PET 和 SPECT 的不同点 : 1. 空间分辨率高 ; 2. 采用电子准直的复合计数, 灵敏度 分辨率和探测效率均高于 SPECT; 3. 应用的放射性核素多为人体重要组分的化学元素, 参与机体代谢, 和人体生理状况 ;

49 4. PET 容易进行衰减校正和进行定量分析 功能测定仪 1. 甲状腺功能测定仪 2. 肾图仪

50 二 放射性核素显像技术 原理 放射性核素或者所标记的化合物, 能够被靶脏器 靶组织选择性的摄取形成高浓聚或充盈缺损, 从而使其与周围脏器组织形成放射性浓度差别 ; 采用核医学显像仪器探测到这种放射性浓度差别, 从而获得脏器或组织中放射性药物分布状态的静态 动态或断层影像 显像类型 静态显像 动态显像

51 局部显像 全身显像 平面显像 断层显像 早期显像 延迟显像 阳性显像 静息显像 负荷显像

52 图像分析法及要点 静态图像 1. 注意被检器官与解剖标志和邻近器官之间的关系, 确定器官有无移位和反位 2. 被检器官的外形和大小是否正常, 轮廓是否清晰完整, 边界是否清楚 3. 以受检器官的正常组织放射性分布为基准, 比较判断病变组织的放射性分布是否增高或降低 正常或缺如 动态图像 1. 显像顺序是否正常的代谢和功能状态 2. 时相变化即影像的出现或消失时间是否符合正常规律

53 断层图像 扫描顺序, 横断面是自下而上获取横断层面影像 ; 矢状面是自右向左获取矢状断层影像 ; 冠状面自前向后依次获取冠状断层影响 放射性核素显像特点 功能成像 安全无创伤 单独的 ECT 图像分辨率低于解剖成像, 可采用与解剖学图像融合技术

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