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1 第 26 卷第 5 期 2017 年 10 月激光生物学报 ACTA LASER BIOLOGY SINICA Vol.26No.5 Oct.2017 doi: /j.isn 三种免疫学方法在矽肺合并肺结核诊断中的价值研究余艳艳 1, 朱权 1, 肖丽佳 1 1, 余平 ( 中南大学湘雅医学院免疫系, 湖南长沙 ) 摘要 : 目的 : 探讨 T 淋巴细胞酶联斑点实验 (T SPOT) 结核菌素皮肤试验 (tuberculintest,tst) 以及结核抗体 (tuberculosisantibody) 在矽肺合并肺结核 (pulmonarysilicosiscomplicatedwithtuberculosis) 诊断中的应用价值方法 : 收集 2015 年 8 月 7 日至 2016 年 5 月 20 日确诊为矽肺结核感染患者 41 例非矽肺结核患者 90 例健康体检学生对照组 40 例, 对三组人群经以上免疫学方法检测的结果进行统计分析结果 :1) 矽肺结核非矽肺结核及健康人群中 T SPOT 阳性率分别为 73.17% 93.33% 15%, 三者两两比较差异有统计学意义 ; 矽肺结核非矽肺结核及健康人群中 TST 阳性率分别为 58.54% 88.89% 32.5%, 非矽肺结核患者与健康人群及矽肺结核患者之间, 差异均有统计学意义, 但矽肺结核患者与健康人群之间, 差异无统计学意义 ; 矽肺结核非矽肺结核及健康人群中结核抗体阳性率分别为 36.58% 42.22% 52.5%, 三者两两比较差异均无统计学意义 2) 三种检测方法在矽肺结核患者中的敏感性分别为 73.17% 58.54% 36.58%, 差异有统计学意义, 其中 T SPOT 及 TST 的敏感性均高于结核抗体方法 (P<0.05); 特异性分别为 85% 67.5% 47.5%, 其中 T SPOT 的特异性高于结核抗体方法 (P<0.05); 阳性预测值分别为 83.33% 64.86% 41.67%, 阴性预测值分别为 75.56% 61.36% 42.22%, 三种方法的阳性及阴性预测值存在差异, 均有统计学意义 3)T SPOT 在 I I I 期矽肺结核检测的阳性率分别为 52.38% 94.12% 100%,I 期与 I 期或 I 期的阳性率之间差异有统计学意义,I 期与 I 期之间阳性率差异无统计学意义结论 :T SPOT 方法具有较高的敏感性及特异性, 对矽肺结核辅助诊断及临床分期具有较好的应用价值关键词 : 尘肺结核 ;T SPOT;TST; 结核抗体 ; 诊断方法中图分类号 :R 文献标志码 :A 文章编号 : (2017) TheValueofThreeImmunologicalMethodsintheDiagnosisofSilicosis ComplicatedwithPulmonaryTuberculosis YUYanyan 1,ZHUQuan 1,XIAOLijia 1,YUPing 1 (DepartmentofImmunology,XiangYaSchoolofMedicine,CentralSouthUniversity,Changsha410000,Hunan,China) Abstract:Objective:ToinvestigatethevalueofTlymphocyteELISAdotexperiment(T SPOT),tuberculinskintest (TST)andtuberculosisantibodyinthediagnosisof.patientswithpulmonarytuberculosisinsilicosis.Methods:Forty 收稿日期 : ; 修回日期 : 基金项目 : 十二五国家重大科技专项从基因水平系统研究鉴定结核分支杆菌特异性保护抗原 (2013zx ) 作者简介 : 余艳艳, 女, 湖南长沙人, 主管检验师, 主要从事结核病免疫学研究 ( 电话 ) ;( 电子邮箱 ) @qq.com 通讯作者 : 余平, 女, 湖南长沙人, 教授, 博士生导师, 主要从事免疫学研究 ( 电话 ) ;( 电子邮箱 )yu ping1953@sina.com

2 444 激光生物学报第 26 卷 onecasesofsilicosistbinfection,ninetycasesofnonsilicosistuberculosis,fortycasesofhealthymedicalstudentsas controlgroupwerecolectedfromaugust7,2015tomay20,2016,altheabovesamplesweredetectedbytheabove threeimmunologicalmethods,andtheresutsofdiferentmethodswereanalyzed.result:1)thepositiveratesoft SPOT insilicosis,nonsilicosistuberculosisandhealthypeoplewere73.17%,93.33% and15% respectively,therewere significantdiferencesbetweenthetwogroupsinthethreemethods:thepositiveratesoftstinsilicosis,nonsilicosistu berculosisandhealthypeoplewere58.54%,88.89% and32.5% respectively,comparedwithnonsilicosistbpa tients,thediferenceswerestatisticalysignificant.therewerenosignificantdiferencesbetweenhealthypeopleandsili cosispatients,comparedwithnonsilicosispatients,thediferencesbetweenhealthypeopleandnonsilicosispatients werestatisticalysignificant.thepositiveratesoftbantibodyinsilicosis,nonsilicosis,tuberculosisandhealthypeople were36.58%,42.22% and52.5%,respectively.therewerenostatisticalysignificantdiferencesbetweenthetwo groupsinthethreemethods.2)thesensitivityofthethreedetectionmethodsinsilicosispatientswas73.17%,58. 54% and36.58%,respectively,andthediferenceswerestatisticalysignificant:thesensitivityoft SPOTandTST washigherthanthatoftbantibody,thediferenceswerestatisticalysignificant,thespecificitywas85%,67.5% and 47.5%,respectively,thediferenceswerestatisticalysignificant,ThespecificityofT SPOTwashigherthanthatoftu berculosisantibodymethod,thediferencewasstatisticalysignificant;thepositivepredictivevaluewere83.33%,64. 86%,41.67%,andnegativepredictivevaluewere75.56%,61.36%,64.44%,thediferencesbetweenpositive andnegativepredictivevalueofthreemethods,werestatisticalysignificant.3)thepositiverateoft SPOTinI, I, I phasetuberculosilicosisdetectionwas52.38%,94.12%,100%,thereweresignificantdiferencebetweenthepositive rateofiand Iphaseor Iphase,therewerenosignificantdiferencebetween Iand Ipositiverate.Conclusion:T SPOThashighsensitivityandspecificity,andisanefectivemethodinthediagnosisandclinicalstagingofsilicosis. Keywords:pneumoconiosis;T SPOT;TST;tuberculosisantibody;diagnosticmethod 0 前言肺结核是感染了结核分枝杆菌后导致的肺部疾病, 其传染性强, 对人类健康构成严重的威胁随着社会经济发展, 对环境的污染不断加重, 导致肺结核发病率在 21 世纪呈现快速上升的趋势, 同时由于抗生素的滥用, 耐药菌株广泛传播 [1], 导致许多肺结核患者迁延不愈因此肺结核仍是全球的主要公共卫生问题之一, 快速诊断和治疗活动性结核患者, 同时需要尽早发现潜伏性结核感染 [2], 是防治结核病的重要措施矽肺也被称为肺硅沉着症, 由于患者长期从事采矿粉尘等行业, 吸入了大量微小的二氧化硅颗粒或其他粉尘微粒这些有害颗粒在肺部沉积, 诱导巨噬细胞对其进行吞噬, 吞噬了有害颗粒的巨噬细胞不能酶解消化这些有害颗粒, 从而在细胞内部出现了颗粒性沉积, 最终导致巨噬细胞崩解破碎, 释放的溶酶体酶等物质损伤组织, 同时诱发更强的炎症反应 [3] 沉积的有害颗粒持续损害机体, 即使患者脱离了从业环境, 矽肺仍然继续进展, 导致进行性的肺功能减退, 并严重损害人体免疫系统的稳态 [4] 由于免疫力低下, 矽肺患者在接触到结核分枝杆菌后很容易发展为矽肺合并结核, 两种肺部疾病相互促进, 严重损害机体健康, 因此这类人群应该被高度重视 20 世纪年代, 我国各地报告矽肺结核合并率为 7.9% -75%, 平均为 20% 左右, 明显高于 2010 年我国第五次结核病流行病学抽样调查 15 岁及以上人群活动性肺结核患病率的 0. 5% [5], 并且矽肺结核病变化进展快, 病理改变较复杂, 复发率高, 易恶化且预后不良在我国结核病规划中应尽可能地推行统一标准方案, 但实际上不可能覆盖所有病例, 同时矽肺结核治疗不同于单纯肺结核, 疗程较单纯肺结核的治疗要长 [6 11], 因此对矽肺结核患者的早期诊断和治疗具有重要的临床意义, 最终目的是使患者得到有效及时的治疗, 降低死亡率肺结核和矽肺两种病变互相掺杂, 病理基础复杂, 痰检阳性率低并且在影像表现上改变了矽肺与肺结核各自原有的特征等因素, 这也给诊断增加了难度, 故容易造成误诊漏诊目前在结核病的辅助检查中的免疫学诊断方法有结核菌素皮肤试验 (TST) 结核抗体检测结核感染 T 淋巴细胞酶联斑点实验 (T SPOT.TB), 这三种方法各有优缺点本文旨在讨论以上三种免疫学方法在矽肺结核感染中的诊断价值, 通过分析各种检测方法的优缺点以找出相对优化的诊断方法

3 第 5 期余艳艳等 : 三种免疫学方法在矽肺合并肺结核诊断中的价值研究资料与方法 1.1 一般资料选择 2015 年 8 月 7 日至 2016 年 5 月 20 日于湖南省胸科医院呼吸内科就诊的矽肺结核感染患者 41 例, 其中 Ⅰ 期 21 例 Ⅱ 期 17 例 Ⅲ 期 3 例, 非矽肺结核患者 90 例, 健康体检学生对照组 40 例 ( 健康对照组为健康体检的学生, 要求无结核接触史无临床症状胸片检查无异常且无其他疾病的健康人群 ), 共计 171 例 1.2 诊断标准 (1) 肺结核诊断依据中华人民共和国卫生行业标准肺结核诊断标准 (WS ) ;(2) 矽肺及矽肺分期诊断依据指导性国家标准 2009 年版尘肺病诊断标准 GBZ [12] 上述所有患者都符合诊断标准 1.3 方法试剂 T SPOT.TB 试剂盒由上海复星科技有限公司提供 ; 结核菌素试验 TST 由四川成都生物技术公司生产, 剂型 50U/mL; 结核抗体试剂盒由北京健乃喜生物技术有限公司提供试验方法 T SPOT.TB 试验 :1) 采集 5mL 外周静脉血于肝素抗凝管中, 离心获得外周血单个核细胞 (PBMC); 2) 显微镜下计数细胞并配置浓度为个细胞 /100μL 的标准细胞悬液 3) 向 T SPOT.TB 试剂盒内加入细胞培养液作阴性对照, 加入植物血凝素 (PHA) 作阳性对照, 另外两孔分别加入抗原 A(ES AT 6) 和抗原 B(CFP 10) 各 50μL, 然后每孔加入 100μL 含有 PBMC 的细胞悬液, 在 37,5%CO 2 条件下孵育 16 20h 4) 用 PBS 缓冲液 (PH 值为 ) 洗涤, 加入碱性磷酸酶标记的抗 IFN γ 单克隆抗体 50μL,4 孵育 2h, 再次 PBS 洗涤, 每孔加入显色液 50μL 避光室温静置 8min, 蒸馏水冲洗后用放大镜计数每孔斑点数观察结果阳性结果判读 : 当阴性对照孔点数为 0 5 时, 测量孔点数减去对照孔点数 6; 当阴性对照孔点数 6 时, 测量孔点数两倍对照孔点数 TST 试验 : 向左前臂内侧中上 1/3 内侧部位注入 5IUTST, 使局部形成皮丘 72h 后观察结果, 计算局部硬结平均直径大小结果判断 :( 横径 + 纵径 )/2<5mm( ) 为阴性 ; >5mm(+) 10 19mm(++) 为阳性 ; 20mm 或伴有水泡溃破为强阳性 (+++) 结核抗体试验 : 取出试剂盒, 平衡至室温后再取出检测卡并平放于水平桌面上吸取 50μL 血清样本滴加于检测卡上的样本孔内, 另加一滴样本稀释液以防产生气泡在 10min 内判读结果阴性结果 : 仅出现一条质控线, 说明没有检测到结核抗体阳性结果 : 在质控线出现的情况下, 反应线出现, 说明检测到结核抗体 2 统计学处理方法采用 SPSS20.0 软件进行数据处理及统计学分析计数资料以例数或百分率表示, 三种方法在矽肺结核中的敏感性特异性阳性预测值及阴性预测值按下列公式计算 : 敏感性 = 真阳性数 /( 真阳性数 + 假阴性数 ), 特异性 = 真阴性数 /( 真阴性数 + 假阳性数 ), 阳性预测值 = 真阳性数 /( 真阳性数 + 假阳性数 ), 阴性预测值 = 真阴性数 /( 真阴性数 + 假阴性数 ), 采用 X 2 检验, 三种检测方法在不同组检出的阳性率以及 T SPOT 在不同期别矽肺结核患者中的阳性率比较采用 95% 可信区间 (95%CI= 均数 ±95% 对应的界值标准误 ) 以 P<0.05 为差异有统计学意义 3 结果 (1) 对三种检测方法阳性率的 95% 可信区间比较发现, 肺结核组的 T SPOT 阳性率 (93.33%) 高于矽肺结核组 (73.17%), 差异有统计学意义肺结核组 TST 的阳性率 (88.89%) 高于矽肺结核组 (58.54%), 差异有统计学意义, 但健康人群与矽肺结核患者比较 (58.54%vs32.5%), 差异无统计学意义肺结核组结核抗体的阳性率为 42.22%, 矽肺结核组的阳性率为 36.58%, 健康组的阳性率为 52.5%, 两两比较差异均没有统计学差异见表 1 (2) 对 41 例矽肺结核患者分别用 T SPOT TST 结核抗体方法进行检测, 得出的敏感性分别为 73.17% 58.54% 36.58%, 三种方法之间差异具有统计学意义 (X 2 =11.290,P=0.004); 特异性分别为 85% 67.5% 47.5%, 差异具有统计学意义 (X 2 =12.675,P=0.020); 阳性预测值分别为 83.33% 64.86% 41.67%, 差异具有统计学意义 (X 2 = ,P=0.001); 阴性预测值分别为 75.56%

4 446 激光生物学报第 26 卷 61.36% 42.22%, 差异具有统计学意义 (X 2 = ,P=0.005) 见表 2 进一步两两比较, 结果发现 :T SPOT 与 TST 方法的敏感性和特异性无统计学差异,TST 与结核抗体方法相比, 特异性无差异, 敏感性的差异有统计学意义 (X 2 =3.961,P= 0.047),T SPOT 方法的敏感性及特异性明显优于结核抗体方法, 差异有统计学意义 (X 2 =11.081,P= 0.001,X 2 =12.579,P=0.000) 见表 3 表 1 三种检测方法阳性率比较 [%(95%CI)] Tab.1 Comparisonofthepositiveratesof3detectionmethods 组别 Groups 例数 (n) Casenumber T SPOT TST 结核抗体 Tuberculosisantibody 健康组 Healthygroup 矽肺结核组 Silicosistuberculosisgroup 肺结核组 Tuberculosisgroup 40 15(7.06,29.07) 32.5(20.08,47.98) 52.5(37.5,67.06) (58.07,84.3) 58.54(43.37,72.25) 36.58(23.59,51.88) (86.21,96.91) 88.89(80.74,93.85) 42.22(32.03,52.54) 表 2 三种检测方法结果比较 Tab.2 Comparisonof3detectionmethods 检测方法 Detection methods 矽肺结核组 Silicosis tuberculosis 真阳性假阴性 True False positive negative 敏感性 (%) 健康组 Healthy 真阴性 True 假阳性 False Sensibility group negative positive 特异性 (%) Specificity 阳性预测值 Positive predictive value 阴性预测值 Negative predictive value T SPOT TST 结核抗体 X P 表 3 三种检测方法敏感性及特异性的两两比较 Tab.3 Comparisonofsensitivityandspecificitybetweenthreemethods 实验方法 Experimentalmethod 实验方法 Experimentalmethod 敏感性 (%)Sensibility 特异性 (%)Specificity P X 2 P X 2 T SPOT TST 结核抗体 TST 结核抗体 (3) 将矽肺结核患者分为 I 期 I 期 I 期, 不同期别的患者数依次为 21 例 17 例 3 例用 T SPOT 方法检测其阳性率分别为 52.38% 94.12% 100% 对不同期别所得的阳性率计算其 95% 可信区间, 结果表明在 I 期与 I 期矽肺结核患者检出的阳性率的差异 (52.38% vs94.12%) 具有统计学意义 ;I 期与 I 期矽肺结核患者检出的阳性率的差异 (52.38% vs100%) 具有统计学意义 ;I 期与 I 其矽肺结核患者检出的阳性率之间的差异 (94.12% vs100%) 无统计学意义见表 4

5 第 5 期余艳艳等 : 三种免疫学方法在矽肺合并肺结核诊断中的价值研究 447 表 4 矽肺结核分期 T SPOT 检测方法阳性率比较 [%(95%CI)] Tab.4 ComparisonofthepositiveratesofsilicosistuberculosisstagebyT spotdetection 期别 NO.ofperiods 例数 (n) Casenumber 阳性率 (%) Positiverate 95%CI Ⅰ Ⅱ Ⅲ 讨论矽肺是临床常见的一种尘肺, 由于细小的二氧化硅颗粒在肺内沉积, 导致肺部广泛结节性纤维化, 在矽肺的基础上合并结核分枝杆菌感染是矽肺的严重并发症根据文献报道, 矽肺患者是肺结核的好发人群, 全国尘肺流行病学调查结果显示尘肺合并结核感染率为 19.35% [13] 矽肺结核的临床表现较为复杂, 疾病进展速度较快因此早期诊断并提高矽肺结核的诊断率对后续患者尽早治疗具有重要的临床意义当前临床上诊断结核或矽肺结核的指标包括影像学检查病理活检痰结核分枝杆菌分离培养免疫学方法等由于矽肺结核患者的 X 射线表现具有不典型和多变性, 痰涂片抗酸染色检出率低, 造成临床诊断困难, 因此寻求更有效的辅助诊断方法成为当务之急免疫学方法具有快速简便检测仪器便宜等特点, 我们选择了 T SPOT TST 以及结核抗体检测三种常用的免疫学方法进行研究上述检测方法在肺结核诊断的应用研究较多, 但在矽肺结核辅助诊断中的研究, 国内外文献鲜有相关报道 T SPOT 试验法是一种酶联免疫斑点检测方法, 感染结核杆菌患者外周单核细胞中存在致敏的 T 淋巴细胞, 这些淋巴细胞在受到结核杆菌特异抗原 A 和抗原 B 刺激后分泌 IFN γ, 通过荧光计数释放 IFN γ 的 T 淋巴细胞的个数我们对 T SPOT 检测三个组的阳性率的 95% 可信区间进行了比较, 发现非矽肺结核组的阳性率 (93.33%) 高于矽肺结核组 (73.17%) 和健康组 (15%), 并且这种差异有统计学意义非矽肺结核组的 T SPOT 阳性率明显高于矽肺结核组, 由于患者患有两种慢性消耗性疾病, 机体免疫功能已经严重下降, 患者体内 T 细胞处于低应答状态, 可能是阳性率低于非矽肺结核组的原因之一另外, 矽肺结核组中有 3 例合并了非结核分支杆菌感染, 未将合并非结核分枝杆菌感染的对象区分出来, 导致矽肺结核组 T SPOT 阳性率要低于非矽肺结核组近年来非结核分枝杆菌发病率逐年升高, 有文献指出矽肺合并非结核分支杆菌感染的病人中, 胞内致病性分枝杆菌所占比例为 60%, 为人类主要的非结核分枝杆菌致病性菌种 [14] 这也提示临床医生, 当 T SPOT 结果阴性的时候, 需要结合培养结果和分子生物学方法检测, 区分结核分支杆菌与非结核分支杆菌感染 TST 检测结果与 T SPOT 检测结果的趋势一致, 肺结核组的阳性率 (88.89%) 高于矽肺结核组 (58.54%), 差异有统计学意义进一步验证了矽肺结核患者体内免疫功能尤其是细胞免疫能力严重下降, 导致 T SPOT TST 等试验的敏感性降低研究表 [15,16] 明矽肺患者 T 细胞表面标志 CD3,CD4 及 CD4/ CD8 比值降低, 矽肺并发肺感染及肺结核患者下降得更低,CD8+T 细胞在数量上无明显差异矽肺患者细胞免疫功能下降的原因可能与粉尘颗粒抑制 T 淋巴细胞的产生和成熟及影响 T 淋巴细胞亚群功能有关 [17] 吸入的粉尘颗粒导致巨噬细胞功能受损, 分泌生物活性物质功能减弱, 从而导致 T 淋巴细胞的活化增殖分化过程受阻, 其具体机制有待进一步探讨 TST 主要应用结核菌素纯蛋白衍生物 (PPD) 致敏, 由于 PPD 是含有 200 多种蛋白的混合物, 与卡介苗有相似的抗原成分, 且容易与其他的非致病性分枝杆菌成分发生交叉感染, 阳性率会出现较大波动, 影响检测的准确性在我国由于卡介苗的广泛接种,TST 并不能真实反映我国人群结核杆菌 [18] 感染的真实情况 Ling 等研究发现 TST 受环境机体免疫力状况等因素的影响, 诊断敏感度和阴性预测值都比较低其次,TST 对于感染结核菌 2 周之内近期免疫受抑制者重症患者年幼儿童及营养不良器官移植者缺乏足够灵敏度, 可作为结核病的筛查与辅助检测指标结核抗体试验结果经过阳性率的 95% 可信区间的比较发现, 肺结核组结核抗体的阳性率为 42.22%, 矽肺结核组的阳性率为 36.58%, 健康组的

6 448 激光生物学报第 26 卷阳性率为 52.5%, 两两比较差异均没有统计学差异结核抗体是由机体感染结核杆菌后针对结核菌素混合抗原所产生的一组免疫球蛋白, 由于这些抗原成分非常复杂, 因此在非矽肺结核与矽肺结核患者机体中都能产生多种抗体, 而这些抗体中的大多数并不具有保护效应同时接种过卡介苗的人群也可能出现抗结核抗体, 因此其临床价值有待商榷 ; 储新民 [19] 等报道结核抗体对结核类疾病诊断的敏感性和特异性都远低于 T SPOT 等其他结核检测方法故结核抗体单独应用于诊断结核的价值较小, 只能作为辅助检测指标或用于结核病的初筛为了对比分析三种诊断方法在矽肺结核中的诊断价值, 我们对检测方法的敏感性特异性阳性预测值以及阴性预测值进行了比较, 发现 SPOT 相对于 TST 结核抗体检测, 具有较高的敏感度特异度诊断符合率等 T SPOT 已被疾病预防控制中心 (centersfordisease control,cdc) 推荐作为筛查诊断结核感染的方法之一 [20] 一项系统的回顾和 Meta 分析发现 : 外周血 T SPOT 对活动性结核病诊断的灵敏度和特异度分别为 81% (95%CI:78 84%) 和 59% (95%CI:56 62%) [21] 在我们的研究中 T SPOT 在矽肺结核诊断的敏感性及特异性均较高, 分别为 73.17% 及 85%, 说明 T SPOT 同样适用于我国矽肺结核的快速诊断, 作为结核病的筛查与辅助检测重要指标, 优于 TST 及结核抗体检测方法矽肺是病理学上通常将其分为 I I I 期, 由于矽肺是一种慢性进行性肺功能的疾病, 分期越高, 合并结核杆菌感染的几率越大相关研究结果显示, 矽肺结核合并率 I 期 (45.1%)> I 期 (19.3%)>I 期 (13.8%) I 期矽肺病合并结核发生率高达 45.1%, 是矽肺患者结核总合并率的 3 倍我们的结果中 I 期矽肺结核患者 T SPOT 阳性率达到了 94.12%, 而在 I 期矽肺结核患者中更是高达 100% 究其原因, 很大一部分是由于样本数量有限, 所得结果偏离实际值的可能性较大, 期待后续以更大样本量进一步研究综上所述, 在矽肺结核的诊断上,T SPOT 检查是重要的辅助诊断依据矽肺结核病变进展快, 对患者机体危害大, 因此矽肺病合并肺结核应该早发现早治疗, 在矽肺期别较低时应及时治疗, 延缓矽肺进展的时间, 或将矽肺病控制在低的期别, 从而降低矽肺病合并肺结核发生率, 提高患者的生命质量由于本研究所收集的病例有限且在数量上分布不是很恰当, 因此有待更大的样本量更全面详实的实验数据对三种免疫学方法在尘肺合并肺结核的诊断价值方而予以进一步的探究参考文献 [1] 姜世闻, 胡屹. 耐药结核病的流行简况 [J]. 中国防痨杂志, 2010,32(2):352. JIANGShiwen,HUYi.Theepidemicofdrug resistanttubercu losis[j].chinanationaldefensejournal,2010,32(2):352. [2] 姜友定, 陈穗, 江涛, 等.183 例结核性肺病的微创于术治疗 [J]. 中华肺部疾病杂志电子版,2016,9(4):400. JIANGYouding,CHENSui,JIANGTao,etal.183casesoftu berculouslungdiseasewithminimalyinvasivesurgery[j].chi najournaloflungdiseases,2016,9(4):400. [3] TSANTESA,TASSDPOULOSS,PAPADHIMITRIOU SI,et al.suboptimalerythropoieticresponsetohypoxamiainidiopath icpulmonaryfibrosis[j].chest,2003,124(1): [4] GOLDYNSR,CONDOSR,ROM W N.Theburdenofexpo sure ralateddifuselungdisease[j].seminrespircritcare Med,2008,29(6):591. [5] 中华人民共和国卫生部.2010 年全国结核病流行病学抽样调查资料汇编 [M]. 北京 : 人民卫生出版社,2012:5. TheMinistryofHealthofthePeople srepublicofchina.a compilationofdataonthesamplingoftuberculosisepidemiology inchinain2010 [M]. Beijing:People shealth Pres, 2012:5. [6] 杨力, 张钊, 左云. 尘肺合并肺结核的诊治研究进展概述 [J]. 职业卫生与病伤,2015,6(30): YANGLi,ZHANGZhao,ZUOYun.Summaryoftheprogresof diagnosisand treatmentofpneumoconiosistuberculosis[j]. JournalofOccupationalHealthandDamage,2015,6(30): [7] 王一丹, 唐浩, 陈卉, 等. 尘肺病合并肺结核发生情况的 meta 分析 [J]. 职业与健康,2015,1(31): WANGYidan,TANGHao,CHENHui,etal.Meta analysisof pneumoconiosiscomplicatedwithtuberculosis[j].occopand Health,2015,1(31): [8] 王峥, 张建芳, 钱青俊. 我国职业性尘肺病诊断标准的演变和发展 [J]. 中国工业医学杂志,2017,1(30): WANGZheng,ZHANGJianfang,QIANQingjun.Theevolution anddevelopmentofdiagnosticcriteriaforoccupationalpneumo coniosisinchina[j].chinesejindmed,2017,1(30): [9] 陈安启, 程振, 韩素敏. 煤工尘肺复治肺结核两种治疗方案疗效分析 [J]. 中国防痨杂志,2001,23(3):179. CHENAnqi,CHENGZhen,HANSumin.Analysisofthethera peuticefectsoftwotreatmentregimensforthetreatmentofpul monarytuberculosisincoalindustry[j].chinanationaldefense Journal,2001,23(3):179. [10] 吴芝荣, 余德和, 林震勋. 复治矽肺结核化疗效果观察 [J]. 中华劳动卫生职业病杂志,1994,12(1):16 18.

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材料方法

材料方法生物技术通报姜燕采用鼠抗人血红蛋白单克隆抗体和胶体金标记鼠抗人血红蛋白单克隆抗体及对照抗体羊抗鼠利用双抗体免疫夹心反应原理特异性地结合人血红蛋白抗原在内可得到胶体金显色结果的原理研制便潜血单克隆一步法胶体金检测试卡用于诊断因各种原因引起的消化道出血疾病应用杂交瘤技术制备两株鼠抗人血红蛋白抗体方法检测效价免疫胶体金技术制备胶体金检测试卡法检测效价的结果显示鼠抗人