睾丸原发性淋巴瘤 + 6 是一种罕见的结外非霍奇金淋巴瘤 约占睾丸恶性肿瘤的 /A 占 的 A #A 其主要临床病理类型 # 为弥漫性大 细胞淋巴瘤 研究发现 睾丸免疫环境异常与 6 免疫监视机制衰减及免疫逃逸密切 相关 我们前期研究发现 树突细胞免疫表型及胞内因子异常在睾丸精原细胞瘤发生发展过程起

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1 现代泌尿外科杂志 #& 年 月第 # 卷第 期 临床研究 树突状细胞在睾丸原发性淋巴瘤组织中的免疫表型分析 朱昱宏 刘 冲 郑文忠 董道全 张恩溥 范龙龙 李贤新 # 北京大学深圳医院泌尿外科 广东省男性生殖与遗传实验室 广东深圳 / & $# 深圳市孙逸仙心血管医院外科 广东深圳 / # 郑州大学附属第一医院妇产科 河南郑州 /&&/# #!! #& #! $& &! $ # 3 :3 5,7 < 7 < -7, - :@ # < * 7 ; > + * 7 / & $# < + 5 * / # < +7 > * /&&/#5 * # # # +##$# # # ## # #, $ # # -+# # # # $ # # +#, # # # # # # +###! #!#+ + + / + #+ -, 1, & # ## / # 1 -, #, # ## # # # # # + + / # # # # ## # + + /+ -, 1, # # # &&/ $# + 1 #, # ## # + 1 +# +# + /1 +## +#+ 1 +#-, 1 # #, # ## +#, $ # +, - # #, # +# +# $ 摘要 目的 研究树突状细胞 <5 在睾丸原发性淋巴瘤 6 患者睾丸组织中的免疫表型及其分子机制 方法 采用免疫组织化学染色法 : 5 检测 & 例正常人及 例睾丸原发性淋巴瘤患者睾丸组织中 5< <5 :75< <5- #5< - <:< 表达水平 并进行体视学分析与统计 结果 正常睾丸及睾丸原发性淋巴瘤患者睾丸组织中均有 5< <5 :7 5< <5- # - <:< 阳性细胞表达 其中 5< <5- # - <:< 阳性细胞表达分布于睾丸间质区域 5< 及 <5 :7 在睾丸间质区域及生精细胞中均可见阳性表达 睾丸原发性淋巴瘤患者睾丸组织中 5< <5 :75< - <:< 表达水平较正常睾丸显著增高 且差异有统计学意义 & &/ 正常睾丸及睾丸原发性淋巴瘤患者睾丸组织中均未见 5< 阳性细胞表达 结论 睾丸原发性淋巴瘤患者睾丸组织中 5< 1 髓样 <5 <5 <5 :7 1 间质型 <5 5< 1 <5 - <:< 表达水平显著增高 提示睾丸原发性淋巴瘤患者睾丸组织中表现为耐受性 <5 并在睾丸免疫环境失稳态及肿瘤细胞免疫豁免过程中起重要作用 关键词 睾丸原发性淋巴瘤 树突状细胞 耐受性 <5 免疫环境失稳态 免疫豁免 中图分类号 $ 文献标志码 - & $ && # #& & && 收稿日期 #& & &$ 修回日期 #& & 基金项目 国家自然科学基金 / #/ $&### 深圳市科创委基金 25 2#& & & $ $&/ 25 2#& $&# &&# 通信作者 李贤新 教授 主任医师, $ 作者简介 朱昱宏 男 汉族 在读硕士研究生 研究方向 泌尿生殖系肿瘤, $/& #!

2 睾丸原发性淋巴瘤 + 6 是一种罕见的结外非霍奇金淋巴瘤 约占睾丸恶性肿瘤的 /A 占 的 A #A 其主要临床病理类型 # 为弥漫性大 细胞淋巴瘤 研究发现 睾丸免疫环境异常与 6 免疫监视机制衰减及免疫逃逸密切 相关 我们前期研究发现 树突细胞免疫表型及胞内因子异常在睾丸精原细胞瘤发生发展过程起重要 作用 本研究通过免疫组化 : 5 染色技术检测树突状细胞 <5 亚群 <5 <5 <5 在正常及 6 睾丸组织中的表达及分布 并分析 <5 在 6 发病过程中的作用 材料与方法 标本收集与制备 筛选符合研究标准 6 睾丸病理组织石蜡标本 例 年龄在 / 至 $& 岁之间 正常睾丸组织标本 & 例 年龄在 至 / 岁之间 登记病例资料 用药史 外伤史 和生育史等 诊断标准和筛选标准 并填写 知情同意书 本研究正常对照睾丸组织标本选自 #&& #& # 年我院泌尿外科前列腺癌睾丸去势手术或睾丸外伤行睾丸切除患者 6 标本选自 #&&/#& $ 年我院泌尿外科因睾丸肿瘤行睾丸切除术者 纳入本研究标准为 睾丸 及附属结构 为首要诊断部位 诊断 个月后未见其他器官病灶 我院 # 名病理科医师同时确定诊断为 6 弥漫性大 细胞淋巴瘤 所有样本均经过多聚甲醛固定 A 浓度 并常规石蜡包埋处理备用 主要试剂及仪器 5< 鼠抗人单克隆抗体 武汉三鹰公司 5< 鼠抗人多克隆抗体 -> 3;<5 :7 兔抗人多克隆抗体 ->3; <5- # 兔抗人单克隆抗体 武汉三鹰公司 :< 兔抗人多克隆抗体 ->3;5< 鼠抗人多克隆抗体 ->3; - < 鼠抗人单克隆抗体 ->3;<- 福州迈新生物科技有限公司 3 * 6 鼠 兔 试剂盒 福州迈新生物科技有限公司 莱卡显微镜 < &&&> 免疫组织化学染色 二步法 石蜡标本切片 切片厚度为 / 附于防脱玻片 烘干处理 二甲苯脱蜡处理 两次 每次 #& 进行梯度乙醇水化标本 &&A &&A /A /A&A /A 过氧化氢 & A 避光孵育 #&,< - & && 微波加热修复 #& 自然冷却 - 封闭 / 2 34 # #& 室温 一抗 最远浓度 度冰箱孵育过夜 二抗温箱 孵育 / <- 显示反应 苏木紫染核 水化及透明处理 中性树胶封片 阴性对照采用相应 : 7 替代一抗孵育过程 统计学方法 : 5 图像采集者施盲 每标本病变典型处采集 / 个高倍视野 6 #&& 另 # 名未参与实验设计人员负责统计每相同高倍视野中阳性细胞数并相互确认结果间差异无显著性 &B&/ 细胞计数在 : / &3- 软件下进行 安排另外 名未参加实验设计者负责统计实验结果 两组间比较采用样本均数间的 检验 实验数据表示为 8&B&/ 为差异有显著性 统计软件为 6 $ 结 果 * 在正常及 睾丸组织中的表达与分布 正常睾丸可见少量 5< 1 <5 表达分布于睾丸间质区域 精曲小管内生精细胞亦可见 5< 表达 6 组织内可见大量 5< 1 <5 呈浸润性分布 二者组间差异有显著性 & &/ 图 * 在正常及 睾丸组织中的表达与分布 正常睾丸可见少量 <5 :7 1 <5 表达分布于睾丸间质区域 精曲小管内生精细胞及支持细胞亦可见 <5 :7 表达 6 组织内可见大量 <5 :7 1 <5 呈浸润性分布 二者组间差异有显著性 & &/ 图 * 在正常及 睾丸组织中的表达与分布 正常睾丸可见少量 5< 1 <5 表达分布于睾丸间质区域 6 组织内可见 5< 1 <5 散在分布 二者组间差异有显著性 & &/ 图 * 在正常及 睾丸组织中的表达与分布 正常及 6 睾丸组织均可见少量 <5- # 1 浆样树突状细胞 <5 <5 呈散在分布 二者组间差异无显著性 & &/ 图 # *2 及 在正常及 睾丸组织中的表达与分布 正常睾丸可见少量 - < 1 细胞散在分布于睾丸间质区域 6 组织内可见大量 - < 1 细胞呈浸润性分布 二者组间差异有显著性 & &/ 图 正常睾丸可见 :< 呈散在分布于睾丸间质区域 6 组织内可见大量 :< 1 细胞呈浸润性分布 二者组间差异有显著性 &B&/ 图 本研究未发现 5< 1 <5 在正常及 6 睾丸组织中表达!

3 年 < 月第 5< 卷第 < 期 :KG 图 $!#OB 分析 B!$$2#!B M #NH# B!$/在正常及 JLA 睾丸组织中的表达$QRRQ+RR及其柱状图 E! S`::的表达# ]! `S F XUH 的表达# S! S`:A的表达*小线框$m588&代表目标区域#右下角 大 方 框 代 表 目 标 区 域 m788 视野#& 代表生精小管管腔#箭头代表阳性细胞*标尺为 :88** 图!#OB 在正常及 JLA 睾丸组织中的表达$QRRQ+RR及其柱状图 小线框$m588&代表目标区域#右下角大方框代表目标区域 m788 视 野#& 代 表 生 精 小 管 管 腔#箭 头 代 表 阳 性 细 胞* 标 尺 为 :88**! *+, &, /&, 1#2 &*, # #! $& $ *134,

4 R, 5<H, < JA, PJ/Q :K6 图 *!#OB 分析 OLM!& 及 #! 在正常及 JLA 睾丸组织中的表达$QRRQ+RR及其柱状图 E! LNE`9 的表达# ]! X`[ 的 表 达* 小 线 框 $m588&代 表 目 标 区 域#右 下 角 大 方 框 代 表 目 标 区 域 m788 视 野#& 代 表 生 精 小管管腔#箭头代表阳性细胞*标尺为 :88** 加氧酶$ 1/ A 15 < ` -+*1A > X`[&在 诱 导 Z 淋巴细胞调节性 Z 细胞$ *& A Z *& +Z *! 讨! 论 TNZ 是一类 较 为 罕 见 的 结 外 淋 巴 瘤常 见 于 老 G 辅助性 Z 细胞 :K$! Z :K Z!:K&辅助性 Z # 弥漫性大细胞性淋巴瘤滤泡性淋巴瘤或其它病理类 细胞 :辅 助 性 Z 细 胞 5$! Z :! Z # # 5Z!:Z!5&向 耐 受 性 极 化 过 程 中 起 重 要 作 型少见 6*免疫表型方面 TNZ 主要 为 ] 系 Z 系及 用 7*本研究发现 TNZ 睾 丸 组 织 中 S`::I `S> ZHY 细胞性淋巴 瘤 少 见 K@ *TNZ 发 展 快 速预 后 与X`[ 表达水平较正常水平显著增高提示 S`::I 较差其 G 年生存率 为 :6e #G8e ;* 研 究 表 明睾 `S>可能通过表 达 分 泌 X`[ 调 控 Z * 或 Z!5 极 化过程进而参与肿瘤细胞免疫逃逸过程* 年患者 *绝大多数 TNZ 为 HLN主要病理类型为 丸免疫环境异常与 免 疫 监 视 机 制 衰 减 及 肿 瘤 细 胞 免 疫逃逸过程密切相关 7*本研 究通过 XLS 分 析正常 及 TNZ 患者睾丸组织中 `S> 亚 群 及 分 布发 现 `S> 在 TNZ 患者睾丸 组 织 中 表 达 水 平 显 著 增 高提 示 睾 丸 `S>异常在 TNZ 免 疫 监 视 机 制 衰 减 及 肿 瘤 细 胞 免疫逃逸过程中可能发挥重要作用* `S 是 最 强 的 抗 原 提 呈 细 胞 $ A1 1# > 1 1* * & 作 为 连 接 机 体 固 有 免 疫 及 适 应 性 免 疫 的 ETS,桥 梁 -是 机 体 产 生 Z 淋 巴 细 胞 免 疫 应 答 的 始 动 `S 特 异 性 XSEJ 抓 取 非 整 合 素 $`S ># C & 为 型 跨 XSEJ Abb 1*11 1 * 1 `SFUH X X * 膜受体是 `S>表面 S 凝 集 素 受 体$ 1 +# # > SN9>&的主要 成 员其 可 通 过 识 别 人 类 免 疫 缺陷 病 毒 $!&A1&1/ C 1+B &>LXR&包 膜蛋 白 $ *#:58&捕 获 病 毒并 将 其 传 递 给 Z 淋 巴 细 胞造成 Z 淋巴细胞免 疫反应 异 常 :7*`SF XUH 为 >`S>的 相 对 特 征 标 记 物在 成 熟 型 `S 中 表 达 :G * 者:8:5*按 `S>来源分布分化程度及免疫功能可将 本研究发现睾丸间质散在分布 `SF XUHI `S>提示 其分为!`S> >`S>未 成 熟 性 #`S>郎 格 汉 斯 细 胞 其在维持睾丸免疫屏障稳态中起重要作用*此外其 :< `S>成熟性 `S>耐受性 `S>及炎症性 `S> * 可作为 LXR 病毒残留于获得性免疫缺陷综合征患 者 本课题 组 前 期 研究 发现精原细 胞瘤 中 S`:: I 睾丸的 接 合 点 :6*`SF XUHI `S> 在 TNZ 中 的 表 `S>表 达 水 平 较 正 常 睾 丸 组 织 显 著 增 高这 类 达及 作 用 至 今 仍 无 相 关 文 献 报 道本 实 验 通 过 XLS S`:: `S>呈集落状 分 布并 表 达 吲 哚 胺 5 < 双 染色发现 TNZ 睾 丸 组 织 大 量 浸 润 `SF XUHI 提 示 I! *+, &, /&, 1#2 &*, # #! $& $ *134,

5 现代泌尿外科杂志 #& 年 月第 # 卷第 期 6 睾丸组织相关 <5 分化水平较高 具有一定调控 淋巴细胞分化的作用 5< 的生物学作用是呈递脂类抗原的分子 其作为郎格汉斯细胞 5 的特征性标志物 5 主要分布于表皮 其在抗病原微生物侵 入及免疫监视肿瘤细胞中起关键作用 本研究发现 6 睾丸组织 5< 1 <5 较正常显著增加 但是 5< 总表达丰度较低 由此我们推测 6 发生过程中 5< 1 <5 表达水平升高有限 无法有效清除肿瘤细胞 造成肿瘤细胞免疫逃逸 正常生理条件下 <5 主要分布于外周血及次级淋巴组织器官 <5 对机体外源性抗原物质提呈较弱 其主要通过 及 提呈内源性抗原物质 并可通过释放 : 类干扰素活化 5< 1 5< 1 及自然杀伤细胞 ; 发挥免疫防御作用 本研究发现正常及 6 组织中均有少量 <5- # 1 <5 表达 二者差异无统计学意义 - < 是 类主要组织相容性复合体 > 5 本研究发现 6 及正常睾丸组织中均表达 - < 且 6 睾丸组织 < 表达水平较正常睾丸组织显著增高 提示 6 睾丸组织相关 <5 分化相对成熟 并具有一定抗原提呈功能 由此我们推测 6 发生过程中 -65 表达 - < 水平随肿瘤抗原增加而增高 但无法诱导有效的 淋巴细胞杀伤机制 综上所述 本研究通过分析正常及 6 睾丸组织中各 <5 亚群改变 发现正常睾丸间质中 <5 为未完全成熟型 提示其在维持睾丸免疫屏障中发挥重要作用 在 6 患者睾丸组织中 <5 <5 及 5< 1 <5 表达水平显著增高 且主要表现为具有一定成熟度及抗原提呈功能的耐受型 <5 提示其可能通过表达 <5 :7 - < 并分泌 :< 等耐受性细胞因子调控 或 # 极化过程 进而参与肿瘤细胞免疫逃逸过程 本研究为精原细胞瘤免疫诊断提供新的潜在指标 对开发设计精原细胞瘤免疫治疗方案具有一定的临床意义 值得注意的是 本研究仅通过 : 5 染色初步探讨 6 相关 <5 的表型特征 进一步需要通过 65 > 及流式细胞术进行验证 此外 仍需体外细胞功能实验研究其确切分子生物学机制 参考文献 5; , -<- < #& $ $ / ## #;, -,;, <, : , #& / ## ##$ - < 3,2,7<,3 5 >! *!! + 2 #&& #$ $ - :6:- * + 2 #&&$$/ # & # / / : 4: -- - <, / $#$ $ / $, 2- -: 37, $! $ & : ;: : :- 2 E :, /# /$ 5-2; * 2 5 $ $ #&/ --:; - -, 3 3:; 6 E *! #& / $# &,: : + +* + : > 2 2, / # $#,: - < > *:#& # & ## # 4-; ; < > * :#& & #/ /& / ;,5,4;, < * + < *, #& //& / <, :, ,:2,,,; < + <5 :7 1 :4 2 #&& # /7,:2,,,;, :, 2, - :<, : :5- : <5 :7* + :5-2 5 #&&& &&// / // $, : -7- ;, -,2 * + > :4 :4 * * #&& 3 <,-3@2 -,< 2 - *, #& & # 5 : :-; 4 <-,; 4 -,::- 6 * #& /# - <36, :< : +; + * 2 : #& / & & 编辑 王 玮!

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