+ 西安交通大学学报医学版第卷桥本氏甲状腺炎 ' 19 ) 1 11*' 的特点是甲状腺抗体甲状腺过氧化物酶 &6 和抗甲状腺球蛋白的产生和甲状腺抗原特异性淋巴细胞代谢导致甲状腺功能异常进而通过免疫效应细胞渗透进甲状腺导致腺体逐渐被摧毁迄今为止研究已经证实 ' 受到多种因素的

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腾梅
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1 第卷第期年月西安交通大学学报医学版!" #$# # %&'&!& 临床研究基因多态性与汉族人群桥本甲状腺炎的遗传关联李苗刘百灵张晨黄丽丽姜珏周琦西安交通大学第二附属医院超声科陕西西安 # 西安市儿童医院超声科陕西西安西安交通大学第二附属医院骨一科陕西西安 # 摘要目的研究汉族群体中 $%&$ 基因变异与桥本氏甲状腺炎 ' 潜在的联系评估 $%&$ 单倍型对免疫介导性炎症疾病易感性的影响方法对例 ' 病例样本和例健康对照值的个 $(& 进行基因分型结果在女性群体和整个群体中 )*++ 与 ' 显著相关等位基因分别为 +## 和基因型分别为 + 和进一步基于单体型的分析表明 )*,)*++ 单体型也仅在女性群体中与 ' 显著相关 - + 而在男性群体中不相关结论 $%&$ 基因在 ' 的发病机制和病因中起着一定的作用关键词单核苷酸多态性炎症桥本氏甲状腺炎遗传分析汉族中图分类号. # 文献标志码 + +!"# $ $%$" & ' $ # #!# # ' # "#"% # /0 1 /0 1, 1 2' (34" ' (3/1, 1 50 (35!" 2'6 71 8" )9" : ) *! "$" :1 1 " ' *1 :; ")*1 ;1 # 8" )9" : ) *! ;1 41 )" *' *1 ;1 8" )9"6 " :6) " 1*"$" :1 1 " ' *1 :; ")*1 ;1 #41 () *( # $ ($ " ) * " ) + ) " # $ ($ # **,*" "" & -."$'( * /#!01& # ) " # * # " " )+ " "&$ $'( " ", # # # *"& - " ++ # # " ) "$'( # " ) *&1 # " # " #,++ * $ ($ # " ) & 0"" +0 # " * &," # # # * " # # " ) *& $ ($ " ) & +, -),# " * * ** ) * " # ) 收稿日期 +,, 修回日期 +,, 基金项目国家自然科学基金资助项目 ( + 陕西省社会发展科技攻关项目 ( +$ $! )" "( 1 (!) $1""! 1 :41 ( +"$ 1 8" " 9"."*" )&) " :$ 1 &) 1"( +$ 通讯作者周琦 %, 优先出版 1 " 9* " 1 +. # # 9,,

2 + 西安交通大学学报医学版第卷桥本氏甲状腺炎 ' *19 * ) 1 11*' 的特点是甲状腺抗体甲状腺过氧化物酶 &6 和抗甲状腺球蛋白的产生和甲状腺抗原特异性淋巴细胞代谢导致甲状腺功能异常进而通过免疫效应细胞渗透进甲状腺导致腺体逐渐被摧毁迄今为止研究已经证实 ' 受到多种因素的影响遗传和环境诱发因素都参与 ' 的发病机制此外最近的一项研究表明与男性相比女性患自身免疫性甲状腺疾病的风险更高之前的关联研究已经证明几个候选基因位点的变异对个体出现 ' 症状的风险有所贡献在这些候选基因中 $%&$ 基因最受关注该基因编码硒蛋白 $ 并且在许多组织中广泛表达 $%&$ 编码的蛋白质有个氨基酸基因位于人类染色体 + # 长度只包含个外显子 4.. ( 的研究首次提出 $%&$ 基因与免疫和炎症过程相关的应激反应相关最近的研究发现 $%&$ 基因中的 )*++ 与, 包括 ' 在内的许多疾病有潜在的关联性然而 $ ( 6$ 之前的一项关于 $%&$ 与 ' 正相关的研究是针对葡萄牙群体的虽然关联性研究是一种阐述某些复杂疾病遗传机制的强大工具但一项关联研究, 并不能解释许多疾病的潜在遗传风险尽管在欧洲群体中 $%&$ 与 ' 具有显著关联性但潜在的生物学机制在很大程度上还是未知的并且致病的基因位点仍然未知因此仍然需要探索 $%&$ 多态性和 ' 在其他遗传学独立群体中的潜在关联性本研究的目的在于探讨汉族群体中 $%&$ 基因变异与 ' 潜在的联系评估 $%&$ 单倍型对免疫介导性炎症疾病的易感性的影响材料与方法研究对象本文为病例, 对照研究随机采集 # 例样本年龄 + 岁我们采用的汉族个体来自陕西省且代以内没有迁移史为了避免社会经济地位成为一个潜在的混杂因素所有的参与者都有相近的社会经济水平生活状态年收入基础教育和专业特点作为主要的社会经济指标采用口头方式与参与者进行面对面访谈 ' 患者共例为病例组女性例男性例年龄 ++ 岁岁均由西安交通大学第二附属医院自年月至 # 年月收集患者选择标准甲状腺肿大超声回声不均匀呈网格样血流信号丰富高水平的 1, &6 正常范围 #0 9/ 或 1, 正常范围 0 9/ 有或没有临床和生化甲状腺功能减退采用罗氏 46 $ +%+! " 免疫化学分析仪检测甲状腺功能对于疑似病例要采用细针抽吸活体组织进行诊断为控制潜在的混杂因素排除曾患过甲状腺癌和或进行过甲状腺手术的患者所有患者只接受过甲状腺激素替代疗法名无关健康对照组女性 # 例男性 + 例年龄 + 岁 # 岁均来自同一家医院的健康体检中心没有甲状腺病史或家族史众所周知尤其是女性大约有的甲状腺功能正常个体表现出高水平的甲状腺特异性自体抗体她们有可能患有自身免疫性甲状腺炎因此本研究中的健康对照个体为甲状腺功能正常超声检查未有变化且甲状腺自身抗体阴性同时排除患有任何共病性心脏疾病自身免疫感染肌肉骨骼或恶性疾病或最近经历过手术或外伤的个体本研究遵守赫尔辛基宣言的伦理道德规范经西安交通大学伦理委员会批准所有参与者填写书面知情同意书所有受试者的基本特征和主要临床信息见表表病例组与对照组受试者的人体测量基线参数 8"9 ) 1 ) ")1*1* 11 ) 9"")* : ) 1")1 11* ) * 项目病例组 - 对照组 - 性别女男 # + 年龄范围岁 ++ + 年龄中位数岁甲状腺大小正常度 # ( " 度 + ( " 度 ++ ( " 家族史阳性 + ( " 阴性 # 9 / # # # 9 / # # $' 90 / # # + +# 1, &6 0 9/ # ## + 1, 0 9/ ##+ + # # 性别参数的均衡性检验值为 ## 卡方值为. 方法通过 $(& 和 ' 数据库选择候选 $(& 位点在汉族群体中的作为初步筛选再从中选择位于 $%&$ 基因上游和下游区域内的位点基于此标准我们最终选择了个 $(& 位点 )*# + )* )*# + # )*+ # )* )*++ 和 )*## 这些位点分布在包含 $%&$ 基因的长的区域内用基因组提取试剂盒 3" 918( <1, " $1"1:10 4 $ 提取外周血白细胞中

3 期李苗刘百灵张晨等 $%&$ 基因多态性与汉族人群桥本甲状腺炎的遗传关联的基因组 8( 并存储在 = > 以用于 $(& 分析所有的 $(& 位点都采用飞行时间质谱的高通量分析方法进行基因分型最终采集的数据使用 ")?") 软件 $"!" 9 进行分析每个 $(& 位点的分型率均大于且总体分型率大于因此后续研究的准确性得以保证 / 统计学处理采用 ' 1" # 评估每个 $(& 在病例组和对照组中的哈迪, 温伯格平衡 ' ),,@"1") "!1 1)1!9',@% 等位基因和基因型关联分析使用遗传学分析软件 4/ & # 进行分析 ' 1" # 用于计算候选位点的连锁不平衡 1 " 1*"!1 1)1!9/8 为进一步检测重要 $(& 附近的 /8 结构我们以 ' 作为参考数据库来生成一个区域的 /8 单倍型频率使用 3%(%46 ( 0(3 计算所有单倍型包括稀有单倍型频率都通过置换检验进行似然比测试检测其显著性 4. 0$ 和 ; 研究认为单倍型频率估算中较小的差异可以在异质性检验统计中产生非常大的差异因此我们也进行了单倍型关联中连锁不明确的比分检验通过置换获得最大的表.1 位点等位基因和基因型频率的关联分析单倍型特异性分数分析和值进而通过 ' $ * " + 进行分析同时我们通过分层分析来探究性别对单个 $(& 和单倍型关联分析的影响单倍型分析中的全局值计算都是基于病例, 对照组中单倍型频率分布的差异设 - 为显著性阈值此外在研究设计阶段我们使用 &3 计算了统计学效力. 结果.01 位点等位基因和基因型频率的关联分析实验获得了例 ' 患者和例对照样本中个 $(& 的基因型数据这个位点分布在包含 $%&$ 在内的范围内所有的 $(& 在病例组和对照组中均是高度多态性的且符合 ',@% 在综合分析中 )*++ 表现出显著的等位基因关联性 - - # 基因型关联分析也证实了这一结果 - 其他 + 个 $(& 的等位基因和基因型分析均为有显著性差异表 ** 1 1 " "" " " " ":)"!"1"* :*1 "$(& $(& 位点等位基因数频率值基因型频率值 ',@% 平衡值可信区间 )*# 病例 ++ +# ## # #+# + + #+ # 对照 #+ ++ # ###+ # # )* 病例 # # + # # # + 对照 ## # #+ )*# + # 病例 # # # 对照 ++ + # ++ ## # # + )*+ # 病例 # # # + + # 对照 # # # )* 病例 + # + # # +#+ + # ++ # 对照 # # # + + #+ # + # )* 病例对照 ++ # +# + # )*## 病例 # + + # # # # + # # 对照 + #+# # + # ##

4 西安交通大学学报医学版第卷.. 单倍型的关联分析我们检测了个 $(& 基因型数据中的 /8 结构并确定了一个单倍型块图根据图我们发现了个两 $(& 的 /8 块并在图所示的区域 /8 块得到证实图汉族人群个 1 位点的连锁不平衡分析 1 %*19 1 :/8" "" " 1) :$(&* ", " 1 $%&$ ""1 "' 41"*"! 1 标记对之间的 /8 结构利用阴影矩阵表示. / 单倍型基因频率及关联分析在这个单倍型中几个常见 $(& 与 )*++ 密切相关进一步对该 /8 块进行单倍型关联分析发现 )*, )*++ 的两 $(& 单倍型具有显著性值全局 - + 表其中种单倍型 "' & 3 "' & 和 "' &#4 都与 ' 显著相关尤其是 ' &# 但病例组的频率较对照组增加了倍 - 而 ' &43 在病例, 对照组中没有统计学差异 - # 3%(%46 ( 0(3 与 ' $ * 计算的单倍型频率相似因此 4. 0$ 和 ; 认为的单倍型频率估算中较小的差异可以在异质性检验统计中产生非常大的差异的说法对本研究的影响微乎其微. 性别特异性等位基因与基因型关联分析为探讨性别在关联分析中的潜在影响我们进行了男女分层研究结果发现 )*++ 在女性样本中的等位基因及基因型都与 ' 相关联值分别为 +## 和 + 而在男性样本中显著性不明显表 # 与此相似单倍型分析也只在女性样本中有显著相关性全局 - + 表 ' & 在女性病例样本中的频率较对照组中约高出倍分布有统计学差异 - # 而 ' & 3- # 表现出保护效应在女性对照组中频率更高表在男性样本中个单倍型均未发现疾病关联性图. 基于千人基因组中国北京人群和日本人群群体数据的... 位点的区域性连锁不平衡结构图 1." 1 /8 :)*++ *" " ' 4' A5& ") : ")$(&* )*++ 1*1 1 " 1 9 * " 其他 $(& 位点与 )*++ 的 ) 值用菱形表示

5 期李苗刘百灵张晨等 $%&$ 基因多态性与汉族人群桥本甲状腺炎的遗传关联表 / 单倍型基因频率及关联分析 ' "*:)"!" ** 1 1 *1* 单倍型编码单倍型 )*, )*++ 3""!1 频率病例组对照组值整体值 ' * * 频率病例组对照组值整体值单倍型 43 # + ## 单倍型 3 # # + 单倍型 + + 单倍型 # 基于次置换检验结果基于每个 /8 区段内 $(& 位点组成的所有单倍型频率的比较表性别特异性等位基因与基因型关联分析 #3" ")*"1:1 " " " " ** 1 1 *1*1 :"9 "* 9 "* $(& 位点等位基因数频率值基因型频率值 ',@% 平衡值可信区间 )*# 女性病例 + + # ## # 对照 ++ +# + # #+ # 男性病例 # + # ++ + # + ## # + 对照 # + #+ # + # )* 女性病例 + ##+ + # # + # # + ++# 对照 #+ + ### #+ # #+ # # + # + 男性病例 ## # # # ++ 对照 # ++ +# + + )*# + # 女性病例 # # +## #+ # + # + + 对照 + #+ # # 男性病例 # + ## ++ +# + 对照 # +# # )*+ # 女性病例 # + # # +# + + # + # 对照 # + +# + + +# + 男性病例 + + # ## 对照 # # + + # + # )* 女性病例 # # + + # # # + # # 对照 # +# +# # # + + 男性病例 # # ## + # + # # # +# 对照 # ## # + # + )* 女性病例 # + +## + # 对照 # + # + # # + # # 男性病例 # + # +## + 对照 # # + )*## 女性病例 #+ # #+ # + ++ # # + ## + 对照 +# # #+ + # + 男性病例 + # # # # + + 对照 + # ++ # #+ # #

6 # 西安交通大学学报医学版第卷表性别特异性单倍型频率的关联分析 3" "),*"1:1 "*:)"!" ** 1 1 *1*1 :"9 "* 9 "* )*,)*++ 女性男性值单倍型病例对照病例对照女性男性整体值单倍型 43 + # +# 女性单倍型 3 # + # # + 单倍型 # # # # # + 男性单倍型 # 4 # # # # 基于次置换检验结果基于每个 /8 区段内 $(& 位点组成的所有单倍型频率的比较 / 讨论有研究已经表明 $%&$ 基因在挪威群体中是先兆子痫的一个显著风险因子另一项针对芬兰群体的研究也表明与冠心病或缺血性中风有潜在的联系然而德国的一项研究却并未发现 $%&$ 基因与炎症性肠病 0 8 的易感性相关在这项研究中 $%&$ 基因多态性并没有影响 0 8 患者的某种 + 疾病表型或增加 (, 水平在意大利和德国人口的另一项研究也未能证实 $%&$ 与年轻患者的中风有显著关联性我们的研究目的是探索 $%&$ 基因中个常见 $(& 多态性位点与中国汉族人群中的 ' 潜在的关联性据我们所知这是首次开展了中国汉族群体中 $%&$ 基因与疾病的遗传关联性研究为检测常见风险变异是否存在群体差异我们将本研究与 $ ( 6$ 的研究进行了比较在这两项研究中 )*++ 都与 ' 显著关联其等位基因被认为是风险等位基因然而我们也发现两项研究间的一些差异在我们的研究中 )*++ 的值为而 $ ( 6$ 的为 ' 病例组中 )*++ 的等位基因频率在本研究中较 $ ( 6$ 的研究低很多分别为 + 和 + 此外 )*++ 在我们的研究中出现的性别特异性关联性并没有出现在 $ ( 6$ 的研究中事实上我们并不能简单的从几个 $(& 分析中得到结论在我们的研究中两个特定单倍型 ' & 和 ' &# 4 已被证明是 ' 的主要危险因素而 ' &#4 的频率太低不足以认为它与 ' 相关联此外我们发现 )*++ 较单倍型的关联性更强 )* 并不与 ' 关联我们可以合理地推测单倍型的关联可能是由于 )*++ 先前的一项研究已经报道了 $%&$ 多态性与冠心病具有性别特异性效应该研究的作者提出性别差异可能是源于疾病病因或男女荷尔蒙分泌不同虽然他们研究的冠心病与我们的 ' 不同但这两项研究结果相似都表明 $%&$ 基因的影响具有性别差异事实上一些流行病学研究也发现 ' 与性别相关在研究设计阶段我们使用 &3 计算了统计学效力研究结果显示 $(& 和单倍型关联分析的效力分别为和假阳性率为推测的值为我们还需要采集更大包括更多男性的样本进一步研究证实性别特异性相互作用确实存在尽管这些研究的关联模式有一些相似之处上述差异的原因可能是种族差异遗传异质性多态性类型差异样本的性别和年龄差异我们的结果也是可信的首先单个 $(& 及基于单倍型的分析都显示出显著关联性其次对于汉族群体地理学群体和遗传背景相匹配有助于避免产生潜在的群体分层问题因此群体分层似乎并不是一个原因因为我们的所有受试者都来自同一个地理学群体此外在两个民族群体中汉族和欧洲群体得到相似的结论再次证明了 ' 与 $%&$ 的关联性但本研究也存在一定的局限性一是我们的研究结果需要在其他民族群体中重复验证因为 $(& 和单倍型结构在不同民族间会出现多样化统计学显著性差异可能是偶然发生的二是我们不能完全排除其他一些潜在的混杂因素如吸烟和酗酒和其他一些基因可能会影响 ' 发病众所周知 $%&$ 多态性可以影响促炎性细胞因子的循环水平此外人体的炎症反应机制非常复杂成百上千的基因可能参与炎症反应过程因此对所有这些相关基因的综合分析可以揭示基因多态性在 ' 的发病机制中的作用本研究结果显示等位基因可能是 ' 的一个高风险等位基因而 $%&$ 所参与的 ' 发病的分子学机制尚不清楚有待于进一步研究以前的研究已经表明 )*++ 与炎性细胞因子 0/, 0/,+ 和 (, 的循环水平相关等位基因与 $%&$ 基因表达减少有关 $%&$ 基因损伤与巨噬细胞中 0/,+ # 和 (, 分泌增加相关 )*++ 的 33 基因型也显示出硫氧还蛋白还原酶活性与血清硒显著相关性此外等位基因导致硒蛋白 $ 活性降低等

7 期李苗刘百灵张晨等 $%&$ 基因多态性与汉族人群桥本甲状腺炎的遗传关联 # 位基因 3 是压力环境下完全启动子活性所必须的这些发现与上述 $%&$ 多态性功能学研究结果一致因此我们可以合理地推测 $%&$ 在炎症中的作用等位基因携带者患 ' 的风险更高另外本研究中发现的显著性 $(& 位于 $%&$ 基因的启动子区该区域可能是功能相关变异区可能为未来研究的兴趣点总之本研究进一步证明了 $%&$ 基因与 ' 的关联性作为一种研究 ' 发病机制的新视角本研究表明了该基因在 ' 病因中的重要作用针对 ' 的关联性分析及其潜在的遗传异质性和慢性炎症机制研究的复杂模式进一步研究并在更广泛范围内尤其是在不同种族的样本中重复是非常有必要的参考文献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编辑卓选鹏

材料方法

材料方法生物技术通报张发洲杨慧兰为了构建单纯疱疹病毒型感染细胞多肽真核表达质粒应用技术从株的基因组中扩增基因并连接至真核表达载体对阳性克隆进行菌落酶切和测序鉴定后成功构建了重组质粒用转染试剂盒将重组质粒转染至细胞中并用及检测其表达情况结果显示基因在细胞中得到正确表达真核表达质粒的构建成功为进一步研究对宿主细胞的影响奠定了基础单纯疱疹病毒型感染细胞多肽