2 CHP50 3 CHP50 CHP50 CHP50 Ji Chuanranxinghouqiguanyan HuoyimiaoCHP50 Zhu Laryngotracheitis VaccineLiveStrain CHP50 CHP50 SPF 100EID 50 /0.1ml2 1:101 1011 SPF 5 0.2ml 37120 24 24 4 2135 SPF 10 0.1ml 10 1014 35 23 PBS 1 /0.2ml 10 3 1011 SPF 5 0.2ml 37120 EID 50 10 3.0 EID 50 14 SPF 30 20 4

1 10 21 0.2ml10 3 EID 50 ILT-PA.VSD-171-ET-(18.05.98) 710 9090 10 2 1000 / 28 18 [LABORATORIOS HIPRA,S.A. ] Avda. La Selva, 135. 17170 Amer (Girona) Spain CHP50 PBS ph 6.9 7.3 30ml/ CHP50 CHP50 Laryngotracheitis VaccineLiveStrain CHP50 Ji Chuanranxinghouqiguanyan HuoyimiaoCHP50 Zhu 5

CHP50 10 3.0 EID 50 1000 30ml 1 1 0.03ml 1420 4 1016 1 34 1 2 3 42 5 1000 / 10 / 28 18 [LABORATORIOS HIPRA,S.A. ] Avda. La Selva, 135. 17170 Amer (Girona) Spain 0034972430660 0034972430061 6

CHP50 CHP50 1000 / 28 18 CH/80 CH/80 (CH/80 ) Ji Chuanranxingfashinangbing HuoyimiaoCH/80 Zhu lnfectious Bursal Disease VaccineLiveStrain CH/80 CH/80 SPF 10-5 3760 4 0.5ml 4.5ml 4 10-5 0.5ml4 8 0.5ml4 377 7

710 SPF 20 10 10 10 21 3 3738 5%CO 2 7 CPE Reed-Muench 10 3.7 TCID 50 710 SPF 20 10 1/5 10 21 100 BID BC6/85 96 80 80 2 11000 /22500 / 28 18 CH/80 CH/80 Infectious Bursal Disease VaccineLiveStrain CH/80 Ji Chuanranxingfashinangbing HuoyimiaoCH/80 Zhu CH/80 10 3.7 TCID 50 1 1000 30ml 1 0.03ml 8

1/2 1 1000 13 510L 49 1223L1016 2737L 1 2 3 4 5 11000 /22500 / 10 / 28 18 LABORATORIOS HIPRA,S.A. Avda. La Selva, 135. 17170 Amer (Girona) Spain 0034972430660 0034972430061 CH/80 CH/80 10002500/ 28 18 9

C C C Zizhu C Xing Chanqijiamosuojunbing Dachangganjunbing Erlian Miehuoyimiao Clostridium Perfringens Type C - Escherichia Coli Bacterin-Toxoid K88pPS002 K99NL-1005 NADC 1471 F41NADC 1471 987P NADC 1413 LT B NL-1001 C NL-1003 C 8 0.5ml7 ELISA K88K99F41 987P ELISA LT B 1.00R.P. C 10 11 2ml/25 10ml/310 20ml/ 420 40ml/525 50ml/650 100ml/ 28 18 : l K88 ELISA 10

1.1 1.1.1 1.1.1.1 1.1.1.2 1.1.1.3 1.1.1.4 1.1.1.5 1.1.1.6 RELPOT 3.1 1.1.2 1.1.2.1 0.05mol/LpH 9.6±±±±0.1) 0.159 g 0.293 g 100 ml 1.1.2.2 PBS ph 7.2±±±±0.1 1.1.2.3 0.6mol/LpH 9.3±±±±0.1 8.20 g 94 ml 10mol/L ph 9.3±±±±0.1 67m1 1.1.2.4 PBST0.05Tween 20 PBS 1.1.2.5 1 PBST 1.1.3 1.1.3.1 K88 1.1.3.2 1.1.3.2.1 K88 1.1.3.2.2 K88 1.1.3.3 K88 1.1.3.4 ABTS A B Kirkegaard & Perry 1.2 11

1.2.1 1.2.1.1 K88 100μμμμμμμμl 1.2.1.2 5±±±±316120 1.2.1.3 PBST 3 1.2.2 1.2.2.1 1.0ml K88 6ml 1530320r/min 60±±±±5 1.2.2.2 K88 1.2.2.3 6ml l1 lml 1530320r/min 60±±±±5 1.2.3 1.2.3.1 PBST BH 125μμμμμμμμl 1.2.3.2 K88 12 1 1.2.3.3 A 250μμμμμμμμl 1.2.3.4 A 125μμμμμμμμl B 2 G H PBST 12 14 18 116 132 164 1128 * 12 14 18 116 132 164 l128 * 1.2.3.5 100μμμμμμμμl 12

1.2.3.6 1530320r/min 30±±±±5 1.2.3.7 PBST 3 1.2.4 1.2.4.1 1 PBST K88 100μμμμμμμμl 1.2.4.2 1530320r/min 30±±±±5 1.2.4.3 PBST 3 1.2.5 1.2.5.1 ABTS A B ll 100μμμμμμμμl 1.2.5.2 1530 1.2.5.3 1A 2A 405nm 1.300±±±±0.200 405nm 490nm 1.2.6 RELPOT 3.1 1.2.6.1 OD 0.100.150 1.2.6.2 OD OD 1.2.6.3 OD 12 14 18 l16 132 164 1128 RELPOT l0.822 l1.644 13.288 16.576 113.152 126.304 l52.608 1.2.6.4 OD 13

1.2.6.5 1.2.6.6 RELPOT R.P. 1.3 K88 1.4l R.P. 1.00 R.P. 1.3.1 1.3.1.1 1.3.1.1.1 6 0.95 1.3.1.1.2 2 1.3.1.1.3 OD 60 1.100 5 1.500 2 1 3 1.3.1.2 0.81.25 3 1 1.3.2 RELPOT 1.3.2.1 RELPOT 1.3.2.1.1 3 3 1.3.2.1.2 2 1.3.2.1.3 OD 60 1.100 5 1.500 2 1 3 1.3.2.2 3 14

1 1.3.2.3 1 3 2 2 K99 ELISA 2.1 2.1.1 2.1.1.1 2.1.1.2 2.1.1.3 2.1.1.4 2.1.1.5 2.1.1.6 RELPOT 3.1 2.1.2 2.1.2.1 0.05mol/LpH 9.6±±±±0.1 0.159 g 0.293 g 100 ml 2.1.2.2 PBS ph 7.2±±±±0.1 2.1.2.3 0.6mol/LpH 9.3±±±±0.1 8.20 g 94 ml 10mol/L ph 9.3±±±±0.1 67ml 2.1.2.4 /PBST0.05Tween 20 PBS 2.1.3 2.1.3.1 K99 2.1.3.2 2.1.3.2.1 K99 2.1.3.2.2 K99 2.1.3.3 K99 15

2.1.3.4 ABTS A B Kirkegaard & Perry 2.2 2.2.1 2.2.1.1 K99 100μμμμμμμμl 2.2.1.2 5±±±±316120 2.2.1.3 PBST 3 2.2.2 2.2.2.1 K99 11 6ml lml1530320r/min 60±±±±5 2.2.2.2 K99 2.2.2.3 6ml l1 lml 1530320r/min 60±±±±5 2.2.3 2.2.3.1 PBST BH 125μμμμμμμμl 2.2.3.2 K99 l16 1 2.2.3.3 A 250μμμμμμμμl 2.2.3.4 A 125μμμμμμμμl B 2 G H PBST 116 132 164 * 116 132 164 16

l128 1256 1512 l1024 l128 1256 1512 l1024 * 2.2.3.5 100μμμμμμμμl 153015±±±±2 2.2.3.6 1530320r/min 30±±±±5 2.2.3.7 PBST 3 2.2.4 2.2.4.1 1800 K99 l00μμμμμμμμl 2.2.4.2 1530320r/min 30±±±±5 2.2.4.3 PBST 3 2.2.5 2.2.5.1 ABTS A B l1 l00μμμμμμμμl 2.2.5.2 2.2.5.3 1A 2A 405nm l.3±±±±0.2 405nm 492nm 2.2.6 RELPOT 3.1 2.2.6.l OD 0.100.15 2.2.6.2 OD OD 2.2.6.3 OD 2.2.6.4 2.2.6.5 RELPOT R.P. 2.3 K99 1.48 R.P. 1.00R.P. 17

2.3.1 2.3.1.1 2.3.1.1.1 6 0.95 2.3.1.1.2 2 2.3.1.1.3 OD 60 1.1 5 1.5 2 1 3 2.3.1.2 0.81.25 3 1 2.3.2 RELPOT 2.3.2.1 RELPOT 2.3.2.1.1 3 3 2.3.2.1.2 2 2.3.2.1.3 OD 60 1.1 5 1.5 2 1 3 2.3.2.2 3 1 2.3.2.3 1 3 2 18

3 F4l ELISA 3.1 3.1.1 3.1.1.1 3.1.1.2 3.1.1.3 3.1.1.4 3.1.1.5 3.1.1.6 RELPOT 3.1 3.1.2 3.1.2.1 0.05mol/LpH 9.6±±±±0.1 0.159 g 0.293 g 100 ml 3.1.2.2 PBS ph 7.2±±±±0.1 3.1.2.3 0.6mol/LpH 9.3±±±±0.1 8.20 g 94 ml l0mol/l ph 9.3±±±±0.1 67m1 3.1.2.4 /PBST0.05Tween20 PBS 3.1.2.5 2BSA PBST 3.1.2.6 1PBST 3.1.3 3.1.3.1 F41-50 3.1.3.2 3.1.3.2.1 F41 3.1.3.2.2 F41 3.1.3.3 F41-65 19

3.1.3.4 IgGH L Kirkegaard & Perry 3.1.3.5 ABTS A BKirkegaard & Perry 3.2 3.2.1 3.2.1.1 F41 l00μμμμμμμμl 3.2.1.2 5±±±±316120 3.2.1.3 PBST 3 3.2.2 3.2.2.1 2.0ml F41 6ml 1530320r/min 60±±±±5 3.2.2.2 F41 3.2.2.3 PBS 116 6ml l 1 lml1530320r/min 60±±±±5 3.2.3 3.2.3.1 PBST BH 125μμμμμμμμl 3.2.3.2 F41 l70 3.2.3.3 A 250μμμμμμμμl 3.2.3.4 A 125μμμμμμμμl B 2 G H PBST 170 l140 * 132 164 20

1280 l560 l1120 12240 14480 l128 1256 1512 11024 l2048 * 3.2.3.5 100μμμμμμμμl 3.2.3.6 ELISA 1530320r/min 30±±±±5 3.2.3.7 PBST 3 3.2.4 3.2.4.1 2BSA PBST F41 l00μμμμμμμμl 3.2.4.2 1530320r/min 30±±±±5 3.2.4.3 PBST 3 3.2.5 3.2.5.1 1PBST IgG H L 16000 l00μμμμμμμμl 3.2.5.2 1530320r/min 30±±±±5 3.2.5.3 PBST 3 3.2.6 3.2.6.1 ABTS A B ll l00μμμμμμμμl 3.2.5.2 1530 3.2.5.3 1A 2A 405nm 1.300±±±±0.200 405nm 492nm 3.2.7 RELPOT 3.1 3.2.7.1 OD 0.1000.150 3.2.7.2 OD OD 21

3.2.7.3 OD 170 l140 1280 l560 l1120 12240 14480 RELPOT l52.63 l105.26 1210.52 1421.04 1842.08 11684.16 l3368.32 3.2.7.4 OD 3.2.7.5 3.2.7.6 RELPOT R.P. 3.3 F41 1.36 R.P. 1.00 R.P. 3.3.1 3.3.1.1 3.3.1.1.1 6 0.950 3.3.1.1.2 2 3.3.1.1.3 OD 60 1.100 5 1.500 2 1 3 3.3.1.2 0.8001.250 22

3 1 3.3.2 RELPOT 3.3.2.1 RELPOT 3.3.2.1.1 3 3 3.3.2.1.2 2 3.3.2.1.3 OD 60 1.100 5 1.500 2 1 3 3.3.2.2 3 l 3.3.2.3 1 3 2 4 987P ELISA 4.1 4.1.1 4.1.1.1 4.1.1.2 4.1.1.3 4.1.1.4 4.1.1.5 4.1.1.6 RELPOT 3.1 4.1.2 4.1.2.1 0.05mol/LpH 9.6±±±±0.1 0.159 g 23

0.293 g 100 ml 4.1.2.2 PBS ph 7.2±±±±0.1 4.1.2.3 0.6mol/LpH 9.3±±±±0.1 8.20 g 94 ml l0mol/l ph 9.3±±±±0.1 67ml 4.1.2.4 /PBST0.05Tween20 PBS 4.1.2.5 2BSA PBST 4.1.2.6 1PBST 4.1.3 4.1.3.1 987P 4.1.3.2 4.1.3.2.1 987P 4.1.3.2.2 987P 4.1.3.3 987P -65 4.1.3.4 IgGH L Kirkegaard & Perry 4.1.3.5 ABTS A BKirkegaard & Perry 4.2 4.2.1 4.2.1.1 987P 11000 l00μμμμμμμμl 4.2.1.2 5±±±±316120 4.2.1.3 PBST 3 4.2.2 4.2.2.1 2.0ml 987P 24

6ml 1530 320r/min 60±±±±5 4.2.2.2 987P 4.2.2.3 6ml 11 lml 1530320r/min 60±±±±5 4.2.3 4.2.3.1 PBST BH 125μμμμμμμμl 4.2.3.2 987P l16 4.2.3.3 A 250μμμμμμμμl 4.2.3.4 A 125μμμμμμμμl B 2 G H PBST 116 132 164 1128 l256 l512 l1024 * 12 14 18 116 132 164 1128 * 4.2.3.5 100μμμμμμμμl 4.2.3.6 1530320r/min 30±±±±5 4.2.3.7 PBST 3 4.2.4 4.2.4.1 2BSA PBST l10000 987P 1BB6-3D6 l00μμμμμμμμl 4.2.4.2 1530320r/min 30±±±±5 4.2.4.3 PBST 3 25

4.2.5 4.2.5.1 1PBST IgG H L l5000 l00μμμμμμμμl 4.2.5.2 1530 320r/min 30±±±±5 4.2.5.3 PBST 3 4.2.6 4.2.6.1 ABTS A B l1 100μμμμμμμμl 4.2.6.2 1530 4.2.6.3 1A 2A 405nm 1.300±±±±0.200 405nm 492nm 4.2.7 RELPOT 3.1 4.2.7.1 OD 0.1000.150 4.2.7.2 OD OD 4.2.7.3 OD RELPOT 116 l6.58 132 l13.16 164 126.32 1128 l52.64 1256 1105.28 1512 1210.56 11024 l421.12 4.2.7.4 OD 4.2.7.5 4.2.7.6 RELPOT R.P. 4.3 987P 1.44 R.P. 1.00R.P. 4.3.1 4.3.1.1 26

4.3.1.1.1 6 0.95 4.3.1.1.2 2 4.3.1.1.3 OD 60 1.100 5 1.500 2 1 3 4.3.1.2 0.8001.250 3 1 4.3.2 RELPOT 4.3.2.1 RELPOT 4.3.2.1.1 3 3 4.3.2.1.2 2 4.3.2.1.3 OD 60 1.100 5 1.500 2 1 3 4.3.2.2 3 1 4.3.2.3 1 3 2 5 LT B ELISA 5.1 27

5.1.1 5.1.1.1 5.1.1.2 5.1.1.3 5.1.1.4 5.1.1.5 5.1.1.6 RELPOT 3.1 5.1.2 5.1.2.1 PBSpH7.0±±±±0.1 5.1.2.2 1BSA PBS 5.1.2.3 0.05Tween20 PBSPBST 5.1.2.4 0.2mol/LpH 7.0±±±±0.2 10.76g 17.37g l00ml 5.1.2.5 A 4-0.0025 mol/l 0.17 mol/l 0.17mol/L 25mg 4-50ml 0.17mol/L 5.1.2.6 B 0.0017mol/L 99m1 lml 30H 2 0 2 lml 0.3H 2 0 2 49ml 0.2mol/L A B 11 5.1.2.7 1.0mol/L 5.1.2.8 1.0mol/L 5.1.3 5.1.3.1 5.1.3.2 LT B 5.1.3.3 LT B 5.1.3.4 A- 28

5.1.4 5.1.4.1 5.1.4.2 LT B 5.2 5.2.1 (μμμμμμμμl) PBS (μμμμμμμμl) 110 100 900 l200 100 110 1900 l400 1000 1200 1000 1800 1000 l400 1000 11000 400 1200 1600 12000 200 1200 1800 14000 1000 12000 1000 18000 1000 14000 1000 ELISA 1 7.8m1 16 l00mm 2.0ml 2 1.0mol/L ph 12.0±±±±0.1 ph 12.21 phl2 7 3 10.0±±±±0.05ml 4 0.5ml 0.5ml 1.0mol/L 5 2 6 100μμμμμμμμl 1900μμμμμμμμl PBS 13 l00mm ph 1 200 7 PBS 8 ELISA 6 LT B 1 LT B 1.0μμμμμμμμg/ml 29

2 13 l00mm PBS LT B 2 l32 LT B ng/ μμμμμμμμg/ml 50 1.0 12 25 0.5 14 12.5 0.25 18 6.25 0.13 116 3.13 0.06 132 1.56 0.03 5.2.2 5.2.2.1 l00μμμμμμμμl 5.2.2.2 37±±±±2 2 ±±±±15 5.2.2.3 5±±±±3 14 5.2.3 5.2.3.1 PBS 3 5.2.3.2 300μμμμμμμμl 1BSA PBS 5.2.3.3 37±±±±2 1030 5.2.4 5.2.4.1 PBS 3 5.2.4.2 LT B 50μμμμμμμμl3 / 50μμμμμμμμl2 / 30

50ng/=11 5.2.4.3 37±±±±2 6075 5.2.5 5.2.5.1 PBST 1 PBS 2 5.2.5.2 LT B 50μμμμμμμμl 5.2.5.3 37±±±±2 6075 5.2.6 5.2.6.1 1BSA PBS 3 5.2.6.2 A- 50μμμμμμμμl 5.2.6.3 37±±±±2 6075 5.2.7 5.2.7.1 1 PBS 3 5.2.7.2 200μμμμμμμμl 5.2.7.3 37±±±±2 560 5.2.7.4 490nm 1.0±±±±0.1 490nm 630nm 5.2.8 RELPOT 3.1 5.2.8.1 OD 0.050.15 5.2.8.2 OD OD 5.2.8.3 OD 31

RELPOT 11 141.8410 12 183.6820 14 1167.3640 18 1334.7280 116 1669.4560 132 11338.9120 5.2.8.4 OD 5.2.8.5 5.2.8.6 RELPOT R.P. 5.3 LT B 1.62 R.P. 1.00R.P. 5.3.1 5.3.1.1 5.3.1.1.l 6 0.95 5.3.1.1.2 2 5.3.1.1.3 OD 60 0.9 5 0.9 2 1 3 5.3.1.2 0.81.25 3 1 5.3.2 RELPOT 5.3.2.1 RELPOT 32

2 1 3 5.3.2.1.1 3 3 5.3.2.1.2 2 5.3.2.1.3 OD 60 0.9 5 0.9 5.3.2.2 3 1 5.3.2.3 1 3 2 6 C 6.1 6.1.1 48 6.1.2 6.1.3 6.1.4 lg 0.25g 100ml ph 7.212125 4 6.1.5 CF-1 1620g 6.2 6.2.1 8 lml2023 2 2 1417 7 7 6.2.2 10 IU/ml 6.2.3 10L0 10L+ 6.2.4 10L0 10 10L+ 10 33

6.2.5 lml 10L0 6.2.6 1 6.2.7 5 0.2ml 24 6.3 6.3.1 10 l0 L0 6.3.2 10 10 L+ 80 6.3.3 10 L0 10 2 BTN1 BTN2 BTN3 BTN 6.4 6.4.1 IAU L0 L+ β 6.4.2 L0 1 6.4.3 L+ 1 80 34

1 1 2 13 24 3 * * * * / 35

36 2 l 21 32 43 * * * * /

ELISA l 2 3 4 A B C D E F G H C C Clostridium Perfringens Type C - Escherichia Coli Bacterin-Toxoid Zizhu C Xing Chanqijiamosuojunbing Dachangganjunbing Erlian Miehuoyimiao K88K99F41987P LT B 1.00 RP C β 10 IU C 2ml 2 3 2 2 37

2 1 1 2 3 4 2l 5 6 11 2ml /25 10ml /310 20ml /4 20 40ml/525 50ml/650 100ml/ 150 /2100 / 28 18 Division of Pfizer Inc 601 West Cornhusker HighwayLincolnNebraska 68521USA 011-946-7512 398 A 15 200050 02l-22160211 021-22160288 38

C C 1510202550/ C 2 3 2 2m12 1 21 28 18 39