西 北 植 物 学 报 文 章 编 号 砀 山 酥 梨 及 其 褐 色 果 皮 芽 变!"# 基 因 克 隆 与 表 达 分 析 程 召 阳 孙 虹 丽 衡 伟 贾 兵 刘 莉 叶 振 风 朱 立 武 安 徽 农 业 大 学 园 艺 学 院 合 肥 摘 要 为 研 究 砀 山 酥 梨 及 其 褐 皮 芽 变 木 葡 聚 糖 转 葡 糖 苷 酶 基 因 表 达 水 平 差 异 该 实 验 利 用 "! $ 技 术 克 隆 了 梨 基 因 采 用 实 时 荧 光 定 量 " 技 术 分 析 了 梨 树 叶 片 果 皮 和 果 肉 等 不 同 组 织 及 花 后 不 同 时 期 果 皮 中 基 因 表 达 差 异 结 果 表 明 梨 - 和 - 开 放 阅 读 框 分 别 为 0 和 0 分 别 编 码 和 个 氨 基 酸 氨 基 酸 序 列 聚 类 分 析 显 示 与 苹 果 以 及 与 苹 果 的 亲 缘 关 系 最 近 半 定 量 " 分 析 显 示 花 后 + 和 基 因 在 砀 山 酥 梨 和 锈 酥 不 同 组 织 中 均 有 表 达 且 在 叶 片 中 表 达 量 很 低 在 果 皮 果 肉 中 表 达 相 对 较 强 其 中 叶 片 中 表 达 量 低 于 而 果 肉 和 果 皮 中 的 表 达 均 明 显 高 于 荧 光 定 量 " 分 析 发 现 在 砀 山 酥 梨 和 锈 酥 果 皮 中 和 基 因 不 同 时 期 的 表 达 量 变 化 趋 势 不 同 与 砀 山 酥 梨 相 比 果 皮 颜 色 发 生 变 化 花 后 + 之 后 锈 酥 果 皮 中 表 达 量 骤 减 而 果 皮 颜 色 发 生 变 化 花 后 + 之 前 表 达 量 均 显 著 降 低 由 此 推 测 和 基 因 参 与 了 锈 酥 果 皮 褐 色 形 成 的 调 节 其 表 达 水 平 差 异 可 能 是 改 变 锈 酥 表 皮 细 胞 结 构 的 重 要 原 因 之 一 关 键 词 梨 褐 皮 芽 变 木 葡 聚 糖 转 葡 糖 苷 酶 基 因 实 时 荧 光 定 量 " 中 图 分 类 号 1 文 献 标 志 码!!"#!" $%& &'#$%& #! &'!&!&& $& (& # '$!34 4 5$ 6 4 ) #' 67)')7! )! 7)')7&' 7 (6 & && & + 6 7 ;076;('') & + 7& '(('& &&)' &+ 7) %)& ))0 &7 "+ '+! 67& % 6(7&0 +&%0' 6& 6! +"! $ '' 67 '& ;076 ' &6 ;&70&+&7 &70&+ ;&70&+ 6 7 &+&(&6 76)''%! 3 7 + 7%+(7 &' %)& &77 7& 7 0 " " " 7 )' + & & )% 7 6- &&' 76 73'(6 7%& 3&+ & )% 7 6-3 &+& 0 7 &+67&%"6 0&+07 0'( +77 0 +0 '(0 0 +6&%&+ 7 &% &+ ') 7&&'( ()6&%&+ + &7) )76&+ 0 &70'& &+& '77 '&0 &+&00' 0'&7 0'( 7 收 稿 日 期 修 改 稿 收 到 日 期 基 金 项 目 国 家 现 代 农 业 产 业 技 术 体 系 建 设 专 项!"# 国 家 自 然 科 学 基 金 作 者 简 介 程 召 阳 女 在 读 硕 士 研 究 生 主 要 从 事 果 树 分 子 生 物 学 研 究 $%& '& (&% 通 信 作 者 朱 立 武 教 授 研 究 生 导 师 主 要 从 事 果 树 种 质 资 源 与 遗 传 育 种 研 究 $%& ')' )& &)+)
期 程 召 阳 等 砀 山 酥 梨 及 其 褐 色 果 皮 芽 变 基 因 克 隆 与 表 达 分 析 )' 6 %)& & "+ % 7& + &&+ &+ ;07+ ' &6 ;&70&+ &7 &70 6 &&)' &+ 7) %)&))0 &7&! 3) ;076 7 ' 7 ' & &+ 7;&70&+&7 &70%0&7 + 7 '& '' 6 ;07 7 ' 7 ' & ) 77;&70&+&7 &70 ; 076&+ ++ 6 7 7 +' 6+(&%&;&70 6 &&)' &+ 7) 67) %)&))0 &7 ;076+7 & + &70'(&6 76 ;&70)77)! 37 & ;076+7 & + 6 7! 3;&70 6))0 &7 %0&7 & 6 &&)' 0 &7 &0 )'& + & ;076&+%&( ' + 6 7%& 67) ;&70 0 &767) &++ 6 7 ;076)'+6 %0 7&7 & (7) )76 ;&70' ))0 &7&' 7 + (0 &77) 67) %)&" " 梨 为 蔷 薇 科 " && 梨 属 果 树 果 实 肉 质 酥 脆 汁 多 味 美 梨 果 皮 色 泽 主 要 分 为 绿 皮 黄 绿 色 红 皮 和 褐 皮 种 类 型 在 果 实 经 济 性 状 中 果 皮 色 泽 成 为 消 费 者 首 选 的 指 标 研 究 认 为 在 一 定 的 外 部 条 件 刺 激 下 果 实 表 皮 细 胞 老 化 坏 死 果 肉 细 胞 增 大 不 一 致 使 气 孔 保 卫 细 胞 破 裂 后 形 成 的 空 洞 内 产 生 次 生 保 护 组 织 导 致 细 胞 壁 增 厚 外 层 细 胞 破 损 进 而 形 成 果 点 造 成 果 皮 木 栓 化 随 着 木 栓 化 的 积 累 就 形 成 了 果 皮 褐 色 其 次 果 实 扩 大 时 期 环 境 高 湿 以 及 如 农 药 套 袋 等 栽 培 措 施 也 会 造 成 褐 色 形 成 目 前 关 于 梨 果 皮 褐 色 形 成 的 分 子 机 制 鲜 有 报 道 砀 山 酥 梨 原 产 安 徽 省 砀 山 县 为 中 国 梨 的 主 栽 品 种 约 占 中 国 梨 栽 培 总 面 积 的 种 质 资 源 调 查 时 发 现 株 年 生 砀 山 酥 梨 发 生 了 变 异 成 熟 时 正 常 枝 条 上 砀 山 酥 梨 果 皮 为 黄 绿 色 而 变 异 品 系 枝 条 上 果 实 为 褐 色 暂 命 名 为 锈 酥 经! 4 分 子 标 记 初 步 研 究 确 定 为 遗 传 性 变 异 利 用 抑 制 消 减 杂 交 )007 )7& (7 + &## 构 建 了 砀 山 酥 梨 和 锈 酥 果 皮 正 反 向 文 库 筛 选 出 木 葡 聚 糖 基 因 家 族 多 个 基 因 甜 瓜 鳄 梨 柿 子 中 研 究 表 明 木 葡 聚 糖 在 细 胞 壁 中 的 降 解 与 果 实 质 地 改 变 具 有 密 切 联 系 近 年 来 木 葡 聚 糖 转 葡 糖 基 酶 $ 越 来 越 受 到 人 们 的 关 注 从 赤 豆 茎 和 旱 金 莲 种 子 中 提 纯 的 木 葡 聚 糖 内 切 水 解 酶 既 具 有 水 解 酶 的 活 性 又 具 有 转 糖 基 活 性 认 为 $ 能 使 木 葡 聚 糖 解 聚 本 研 究 克 隆 了 个 基 因 分 析 基 因 在 砀 山 酥 梨 及 其 褐 皮 芽 变 锈 酥 不 同 组 织 和 时 期 果 皮 中 的 表 达 差 异 探 讨 基 因 是 否 参 与 了 锈 酥 果 皮 形 态 的 建 成 为 揭 示 锈 酥 果 皮 褐 色 的 形 成 机 理 奠 定 基 础 材 料 和 方 法 ) ) 试 验 材 料 年 于 安 徽 省 砀 山 县 梨 园 分 别 采 集 砀 山 酥 梨 和 锈 酥 花 后 不 同 时 期 和 + 的 果 皮 叶 片 以 及 花 后 + 的 果 肉 样 品 液 氮 处 理 后 保 存 备 用 ) 方 法 )$$) 梨 样 品 总 #+ 提 取 及 + 合 成 用 #&7#0 '&"! - "! 提 取 试 剂 盒 对 各 样 品 总 "! 进 行 提 取 = # 为 引 物 合 成!7 %& 公 司 的 4> "7 7& 7 0& 反 转 录 酶 合 成! 保 存 备 用 )$$!"# 基 因 克 隆 及 生 物 信 息 学 分 析 分 别 根 据 在 ## 文 库 中 得 到 的 个 $ 差 异 表 达 基 因 核 苷 酸 序 列 设 计 特 异 引 物 进 行 " 扩 增 表 利 用 = 端 上 游 引 物 分 别 于 ' 和 进 行 巢 式 " 获 得 基 因 = 端 序 列 根 据 = 端 特 异 性 引 物 进 行 " 扩 增 得 到 = 端 序 列 取 4 " 产 物? 琼 脂 糖 凝 胶 进 行 电 泳 回 收 目 的 条 带 回 收 目 的 片 段 连 接 到 0 $ 载 体 转 化 后 挑 白 色 单 菌 落 进 行 菌 落 " 检 测 对 含 有 目 的 片 段 的 单 菌 落 用 液 体 43@!%0 摇 菌 后 对 菌 液 进 行 测 序 将 得 到 的 = 端 与 = 端 序 列 进 行 拼 接 获 得 全 长 序 列 然 后 在 3 中 利 用 3'& 对 核 苷 酸 序 列 进 行 比 对 利 用!! 和 3$+ 软 件 进 行 分 析 利 用 3 " + 7 确 定 基 因 的 开 放 读 码 框 利 用 3 的 3'& 寻 找 保 守 区 预 测 蛋 白 所 属 家 族 使 用 7 0&7&% 网 站 0 ; 0&(7 07 0&7&% 进 行 基 因 编 码 蛋 白 的 理 化 性 质 预 测 用 3$+ 软 件 对 预 测 氨 基 酸 序 列 进 行 同 源 性 分 析 氨 基 酸 聚 类 分 析 采
西 北 植 物 学 报 卷 表 ) 试 验 中 采 用 的 引 物 &' 7 % 7) + )+( 名 称 &% ="! $ 引 物 ="! $07 % 7 = 端 扩 增 引 物 = +07 % 7 半 定 量 " " 引 物 # %)& & " "07 % 7 荧 光 定 量 " 引 物 " &' % " 07 % 7 半 定 量 内 参 引 物 # %)& & 7&'7 '07 % 7 荧 光 定 量 " 内 参 引 物 " &' % " 7&'7 '07 % 7 引 物 名 称 7 % 7&% 引 物 序 列 7 % 7)== $=!!!!! $=!!!!!!!!!! $=!!!!!!!!!! $=!!! '!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! = #!!!!!!!!! $ =!!!!!!! $ ="!!! $ =!!!!! $ ="!!!!! $3 4!!! $3 4"!!! $3 4!!!!! $3 4"!!! $5!!!!!!!!! $5 "!!!!!!!! $5!!!! $5 "! 3 4!!!!! 3 4"!!!!!! 5!!! 5 "!!!!!!!! 用 $! 软 件 构 建 基 因 进 化 树 )$$!"# 基 因 在 梨 不 同 组 织 中 的 特 异 表 达 以 砀 山 酥 梨 和 锈 酥 花 后 + 的 果 皮 果 肉 和 叶 片 的 反 转 录! 为 模 版 利 用 设 计 的 特 异 半 定 量 引 物 表 在 模 板 为 同 一 浓 度 的 基 础 上 以 梨! 基 因 为 内 标 分 析 基 因 在 不 同 组 织 中 特 异 表 达 性 )$$-!"# 基 因 实 时 荧 光 定 量 表 达 以 砀 山 酥 梨 和 锈 酥 不 同 时 期 果 皮! 为 模 板 利 用 #$$ 荧 光 定 量 " 仪 进 行 定 量 分 析 参 考 #53"7 % ;$;"# &-&"& 大 连 宝 生 物 操 作 说 明 进 行 每 个 样 品 次 重 复 以 梨! 基 因 作 为 内 参 设 计 荧 光 特 异 引 物 表 采 用 公 式 计 算 基 因 相 对 表 达 量 并 运 用 ### 软 件 进 行 差 异 显 著 性 分 析 结 果 与 分 析 $)!"# 和!"#- 基 因 + 克 隆 和 序 列 分 析 根 据 获 得 的 和 基 因 = 端 和 = 端 序 列 进 行 拼 接 分 别 获 得 个 基 因 全 长 序 列 将 和 基 因 与 3&A 中 已 知 基 因 进 行 比 对 结 果 表 明 与 苹 果 $ 和 草 莓 核 苷 酸 序 列 相 似 性 分 别 为? 和? 与 苹 果 $ 和 草 莓 核 苷 酸 序 列 相 似 性 分 别 为? 和? 因 此 推 测 本 实 验 所 得 基 因 为 梨 基 因 分 别 命 名 为 3&A 登 录 号 - 和 3&A 登 录 号 - 通 过 $!#5 在 线 分 析 表 明! 序 列 全 长 0 编 码 个 氨 基 酸 等 电 点 相 对 分 子 质 量 为 A)! 序 列 全 长 0 编 码 个 氨 基 酸 等 电 点 相 对 分 子 质 量 为 A) $!"# 和!"#- 聚 类 分 析 及 多 序 列 比 对 将 砂 梨 $ %&'" 苹 果 "'B& " 和 拟 南 芥! "&$ 等 已 知 基 因 氨 基 酸 序 列 与 本 试 验 获 得 的 梨 基 因 编 码 氨 基 酸 序 列 进 行 聚 类 分 析 结 果 图 表 明 与
#! 期!!!!!!!!! 程召阳!等$(砀山酥梨)及其褐色果皮芽变!"#$% 基因克隆与表达分析 苹果" &4 + f' 4#&'#$%) % 亲 缘 关 系 最 近' 与苹果 的亲缘关系最近! 其次为!"#$%$ &'#$%) 杂交 栽 培 玫 瑰 " ; 4#;"#$%欧 美 山 杨 "!6+ + # ' -+ 4f!6+ + -+ '! #$% 利用 KQP 的 Q 0 V[ 寻 找 保 守 区!结 果 表 明 [6X 是由一个多基因家族编码 的蛋 白质!属于糖基 水解酶 #+ 超家族 LJ#+ )[6X' 它 们 的 共 同 之 处 在!%(# 于绝大多数植物 的 [6X 都 含 有 一 个 非 常 保 守 序 列 模块$ 6)+ R\P Z\6\RL"图!#!这 一 保 守 区 在 不 同 物种或成员间有一些变化!说明了该基因的多样性' B6 D!1345D 和 1345E 基因在不同组织中的表达 图 % 显示!花后 #"C!!"#$%% 和!"#$%$ 基 因在(砀 山 酥 梨 )和 (锈 酥 )不 同 组 织 中 均 有 表 达!!"#$%%在 叶 片 中 表 达 量 很 低!在 果 皮 果 肉 中 表 图 #! 梨与其他物种中 [6X 蛋白的系统进化树 标尺为氨基酸 #"c 的置换概率 \ #!D;@?=1 V V U? TV ;CCA C7 1? C0 0? T[6X 1H U1C? V ; UC T T U 1 V0H 0 = ]A1 X;0 G U7 10#"c ;1= 0? T7 1? C 图!!#$% 基因的氨基酸序列比对 DG[6X%" +("(!## DG[6X$" +("(!!#白梨&`C[XJ) %" 3Z"%!!- ##`C[6X) " KD-""#!&"(! ##苹果& 4G[XJ#" 3QQ&+!(+ ##玫瑰& DV V[6X" 3QR-%+ ##欧美山杨& DH[6X" 33"!&!%#砂梨& 3C[6X" 33"(%&&#美味猕猴桃& D )D=[6X" 3\X(!""&#银腺杨&框内为该基因的保守氨基酸 \!!`A V 0 V? T7 1? C;?7??=@? T#$% =1 = H ]A1 =171 DG[6X%" +("(!##! DG[6X$" +("(!!#!)+" 01' &`C[XJ) %" 3Z"%!!- ##!`C[6X) " KD-""#!&"(! ## &4 +f' 4& 4G[XJ#" 3QQ&+!(+ ## ; 4f" " 1 414& DV V[6X" 3QR-%+ ##!6+ + -+ 4f!6+ + -+ '& DH[6X" 33"!&!%#!)+6) 7 4& 3C[6X" 33"(%&&# 3 1 ' 4' 4& D )D=[6X" 3\X(!""&#!6+ +4 "4f!6+ + 41'+ 4&?10 U WC7 1? C0? TV ; 0=1 10 CV ;G?Y
西 北 植 物 学 报 卷 达 相 对 较 强 叶 片 中 表 达 低 于 而 果 肉 和 果 皮 中 的 表 达 均 明 显 高 于 $-!"# 基 因 在 梨 果 皮 中 不 同 时 期 相 对 表 达 量 在 砀 山 酥 梨 不 同 时 期 果 皮 中 表 达 量 变 化 为 先 增 后 减 趋 势 花 后 + 增 加 迅 速 且 + 时 达 到 峰 值 其 表 达 量 约 为 花 后 + 的 图 砀 山 酥 梨 和 锈 酥 花 后 + 和 基 因 在 不 同 组 织 中 的 表 达 & 砀 山 酥 梨 叶 片 果 肉 和 果 皮 +6 锈 酥 叶 片 果 肉 和 果 皮 $;076&+ + 6 7 )6 &&)' &+ )) 0 &7& +&(&6 76)''% & &&)' ' &6&7 &70&+ ;&70 +6 ))' &6&7 &70&+ ;&70 倍 而 在 锈 酥 果 皮 中 表 达 量 随 果 实 发 育 呈 缓 慢 增 加 趋 势 表 达 峰 值 出 现 在 花 后 + 约 为 最 低 表 达 量 花 后 + 的 倍 图! 与 表 达 变 化 趋 势 不 同 在 砀 山 酥 梨 果 皮 中 表 达 量 呈 先 高 后 低 趋 势 峰 值 出 现 在 花 后 + + 缓 慢 下 降 + 急 剧 降 低 最 高 表 达 量 花 后 + 为 最 低 表 达 量 花 后 + 的 倍 在 锈 酥 果 皮 颜 色 开 始 变 褐 花 后 + 之 前 的 个 时 期 ++ 和 + 表 达 量 增 加 迅 速 花 后 + 达 到 峰 值 + 急 剧 降 低 最 高 最 低 表 达 量 相 差 倍 图 3 花 后 ++ 和 + 砀 山 酥 梨 果 皮 中 表 达 量 均 明 显 高 于 其 褐 皮 芽 变 锈 酥 砀 山 酥 梨 和 锈 酥 果 皮 中 在 花 后 + 之 前 的 表 达 量 远 高 于 花 后 + 之 后 的 表 达 量 讨 论 本 试 验 从 梨 果 皮 中 克 隆 了 细 胞 壁 代 谢 关 键 基 因 个 基 因 和 均 包 含 糖 苷 水 解 酶 家 族 的 保 守 序 列 $ 4 $ 4 属 于 糖 苷 水 解 酶 家 族 的 亚 族 同 时 该 保 守 序 列 也 是 木 葡 聚 糖 转 移 的 保 守 序 列 即 都 具 有 转 糖 基 的 作 用 因 此 对 于 锈 酥 果 皮 细 胞 壁 中 的 木 葡 聚 糖 多 聚 体 可 能 具 有 裂 解 作 用 在 锈 酥 表 皮 细 胞 发 育 过 程 中 发 挥 一 定 的 作 用 陈 昆 松 等 在 用 外 源 乙 烯 处 理 诱 导 猕 猴 桃 软 化 过 程 中 发 现 $ 酶 活 性 快 速 增 加 促 进 了 细 胞 壁 的 膨 胀 疏 松 4) 等 在 香 蕉 果 实 软 化 过 程 中 发 现! 与 香 蕉 果 肉 软 化 相 关 并 且 与 果 皮 硬 度 密 切 相 关 &(&%& 等 认 为 桃 果 实 中 % 图! 和 3 基 因 在 砀 山 酥 梨 和 锈 酥 果 皮 中 不 同 时 期 的 表 达 不 同 小 写 字 母 表 示 差 异 达 到 显 著 水 平 " '& ;076!&+ 3 ;&70 6 &&)' &+ ))0 &7&+ 6 7 & 6 7 ' 7 & ' 7 +&6& + 6 7 &'' $ 只 在 果 实 发 育 初 期 表 达 推 测 %$ 基 因 表 达 在 果 实 发 育 初 期 可 能 是 必 须 的 而 在 后 期 则 不 是 必 须 的 本 试 验 半 定 量 " 分 析 表 明 花 后 + 梨 果 成 熟 期 在 砀 山 酥 梨 和 锈 酥 叶 片 果 肉 果 皮 中 的 表 达 具 有 组 织 差 异 性 均 在 果 肉 中 表 达 丰 度 最 高 在 叶 片 中 基 本 不 表 达 在 果 肉 果 皮 中 表 达 丰 度 较 高 说 明 均 参 与 个 品 种 果 实 成 熟 过 程 对 于 果 实 成 熟 具 有 一 定 促 进 作 用 在 叶 片 中 表 达 高 于 果 皮 在 果 皮 中 表 达 较 低 推 测 该 基 因 不 参 与 果 皮 成 熟 过 程 马 克 元 等 研 究 表 明 鸭 梨 果 面 锈 斑 发 育 始 于 盛 花 后 + 直 到 果 实 采 收 阶 段 本 研 究 在 砀
期 程 召 阳 等 砀 山 酥 梨 及 其 褐 色 果 皮 芽 变 基 因 克 隆 与 表 达 分 析 山 酥 梨 花 后 + 果 皮 中 基 因 表 达 丰 度 急 剧 增 加 而 锈 酥 果 皮 中 表 达 变 化 不 明 显 此 结 果 与 衡 伟 等 观 察 到 的 砀 山 酥 梨 果 实 表 皮 细 胞 结 构 排 列 松 散 细 胞 间 隙 大 而 锈 酥 表 皮 木 栓 化 细 胞 明 显 较 多 的 结 果 一 致 推 测 基 因 与 果 皮 细 胞 木 栓 化 关 系 密 切 7 % 和 - 观 察 到 苹 果 在 早 期 对 果 锈 最 敏 感 的 时 期 尤 其 是 在 花 后 周 马 克 元 等 研 究 表 明 花 后 + 鸭 梨 果 梗 端 气 孔 保 卫 细 胞 最 先 开 始 破 裂 皮 孔 开 始 发 育 整 个 果 实 皮 孔 的 发 育 可 持 续 到 花 后 + 本 试 验 在 花 后 + 即 锈 酥 果 皮 色 泽 变 化 之 前 基 因 在 锈 酥 果 皮 中 表 达 丰 度 均 较 砀 山 酥 梨 高 推 测 基 因 可 能 对 果 面 皮 孔 及 表 皮 细 胞 的 发 育 起 着 很 大 的 促 进 作 用 即 基 因 于 花 后 + 在 锈 酥 中 表 达 量 较 低 使 得 表 皮 细 胞 排 列 致 密 导 致 内 外 层 表 皮 细 胞 生 长 不 一 致 引 起 表 皮 细 胞 木 栓 化 而 破 裂 进 而 引 发 形 成 褐 色 的 周 皮 层 参 考 文 献 张 玉 星 果 树 栽 培 学 各 论 北 方 本 第 版 北 京 中 国 农 业 出 版 社 $ 5 滕 元 文 # $ 5 5 沈 玉 英 周 先 章 +)+6& 7 67) ;&70 &+0 &7&+ 7&( 6 ') " &( 中 国 南 方 果 树 - #!" 3!#4$#"' 7&+7) &7 &&% ' 630 &7 )&"'&%!"& &'&"' & - $ -!!43#!" ") &+%77& A 6'+ ')&00' 67) % &'(+'+) 7 '!@ &00'& )&"'&%!" & %& +&' "' ) 潘 海 发 矿 质 营 养 水 平 对 砀 山 酥 梨 营 养 生 长 和 果 实 品 质 的 影 响 合 肥 安 徽 农 业 大 学 4 朱 立 武! 5 王 艳 芳!3 贾 兵 "' #)+( 0 &77%0'&%7)7&&&7 &! ) 7 (! 4'( )&"'&%( 果 树 学 报 $ 4 4! "' 6 7 &'( ;07+ 7 '& + 6 7%& 67) ;&70 &%)& 6 && )' 0 &7 "+ + 7%+()007 )7& (7 +& $") " #$-!$4 -!4!3!> "' %0 7&')6'&'+ & %'( 7&0 +'(7 0 % ' 67) '"&'))0 = $$ 3$" + 6& 6%&7 ;0 '(& &7 + +)7&&+ """"67) 7 0 && % 67 '6 ;')'& &'& "'" " 1 " #$-!$4 -!4!3!> "' %0 7&')6'&'+ & %'( 7&0 +'(7 0 % ' 67) '"&'))0 "5# # " "$ - - "'('') & + 7& '(('& & &'' (% & (67 %0'& & "')&"'!3! -!#!-!#! # )7 6& 6;('') & (+7 '&+ 7&6 7& 67 %'&' 6& )A& 0 (' '" ' &' 1 $ "##!33!"! 6&% ' '& 6& 6 '((' (+7 '& & + &%&+)% '&7 & "')&"' $ "##! 3! '& 6& 6 '((' (+7 '& & + &%&+)% '&7 &"')&"'1 $ "##!30+&) & + '& 6& 6 '((' (+7 '&&"')&"' $ -# 陈 昆 松 4 李 方!# 4 张 上 隆 ;07 0& 7 6;('') & + 7& '(('& 67) 7 0 6!"!"& " "" 植 物 学 报 -) 4!-!"- 3 5"' ' &+ ;07 &&'(6& $! 0'&+0)'0 6&&&67) 7 0 &+ 6!"& " ""-!5!! #!!!"'& '' 6%"!6 70)&'&'7 '& + +)70 &67) +' 0% "+&' " )! -5 马 克 元 $ 程 福 厚 5 傅 玉 瑚 +' 0% 667) + &+7) 5&0 &7!"+& ' " " 园 艺 学 报 ) $ 衡 伟!3 贾 兵 5$ 叶 振 风!&'(6 ;&707) )7 &&)' &+ 7) %)& "( 中 国 果 树 $" $ #7) 7) &00' &&6 +(&7) 7 ')&"'&% +&' "'