第 卷 第 期 质 谱 学 报 年 月!"#$%$&%%' $ $ ' #$ 二 维 液 相 色 谱 质 谱 法 研 究 犬 肾 小 管 上 皮 细 胞 脂 质 组 成 及 马 兜 铃 酸 对 其 影 响 聂 洪 港 刘 冉 冉 杨 悠 悠 刘 虎 威 白 玉 北 京 大 学 分 析 测 试 中 心 北 京 北 京 分 子 科 学 国 家 实 验 室 生 物 有 机 与 分 子 工 程 教 育 部 重 点 实 验 室 北 京 大 学 化 学 与 分 子 工 程 学 院 分 析 化 学 研 究 所 北 京 中 粮 营 养 健 康 研 究 院 营 养 健 康 与 食 品 安 全 北 京 市 重 点 实 验 室 北 京 ( 摘 要 采 用 在 线 正 反 相 二 维 液 相 色 谱 ) 质 谱 联 用 技 术 研 究 了 犬 肾 小 管 上 皮 细 胞 脂 质 组 成 及 马 兜 铃 酸 对 其 影 响 二 维 色 谱 的 第 一 维 用 于 分 离 不 同 种 类 脂 质 第 二 维 用 于 分 离 同 类 脂 质 的 不 同 分 子 进 而 利 用 高 分 辨 质 谱 对 脂 质 分 子 进 行 检 测 该 方 法 减 少 了 共 流 出 降 低 了 电 离 抑 制 提 高 了 灵 敏 度 与 准 确 性 借 助 精 确 质 荷 比 检 索 数 据 库 高 分 辨 二 级 质 谱 和 当 量 碳 数 与 保 留 时 间 规 律 等 方 法 检 测 了 犬 肾 小 管 上 皮 细 胞 中 类 脂 质 的 个 脂 质 分 子 选 取 种 外 源 性 脂 质 标 准 品 进 行 方 法 验 证 方 法 的 线 性 关 系 检 测 限 重 复 性 均 满 足 检 测 要 求 在 此 基 础 上 考 察 了 犬 肾 小 管 上 皮 细 胞 暴 露 于 马 兜 铃 酸 后 的 脂 质 变 化 情 况 对 改 变 含 量 倍 的 * 个 脂 质 分 子 进 行 了 鉴 定 该 实 验 结 果 可 为 马 兜 铃 酸 的 毒 理 病 理 研 究 和 相 关 疾 病 的 临 床 诊 断 提 供 丰 富 的 信 息 并 展 现 了 二 维 液 相 色 谱 ) 质 谱 法 在 脂 质 组 学 研 究 中 广 阔 的 应 用 前 景 关 键 词 二 维 液 相 色 谱 ) 质 谱 犬 肾 小 管 上 皮 细 胞 马 兜 铃 酸 脂 质 组 学 中 图 分 类 号 + * 文 献 标 志 码, 文 章 编 号 )(( ) () * 1 #!"!! # $%# &!#$ '!! %! % #% & #! # (' & % & ##)! %!% -.).. 2 3 4) 5,6 5 ) 2 3 ) $# 7, 5!"#$ % &" ' % &" ( % "' ) *" " *) ' " ' ) *" "!"#$ % &" ' % &"( + '),) ' -.,) / -,- ) + '0 ' % &" (' #% % "$ $ "#% % # #0%%$ # $% #.0# $ $ # #0 %%$% 收 稿 日 期 ) ) 修 回 日 期 ) ) * 基 金 项 目 国 家 自 然 科 学 基 金 项 目 * * * * ( 资 助 作 者 简 介 聂 洪 港 ( 男 汉 族 辽 宁 丹 东 人 博 士 从 事 色 谱 质 谱 仪 器 及 检 测 技 术 研 究 -) #".#$ / $0 通 信 作 者 白 玉 ( 女 汉 族 吉 林 九 台 人 副 教 授 从 事 生 物 分 离 与 检 测 研 究 -) # 1# / $0 网 络 出 版 时 间 ) ) * 网 络 出 版 地 址 " /#$ / %0$ # (( * "
( 质 谱 学 报 第 卷 $%$ $01 0% # $ "#% %0$ $0 "$ # ) "%$ #8 #0 ". " 92!0#0#:#0 $ % $ #$% $%$ $01%$0 " 0 "1# # # $:$ %$0) "%$#8 #0 ". " 492! 492! "$$ # %$8 $ $ # #0 $ $%#%0$ $ #$01 1 " "$ "#$. "0 "$0$. $$ ) % ## "$ ) "#% :#0 )$ # $ % $ #$%#$ ) "%$0 $:$ %$0) "%$ )0# $%# ;#8 #0 ". " 2! 8 0 $ # $))#." %%% $ $ + )&'% % $ %0$:$ $0 "$ # #0 ##. &0#); 1 #$/#0$ &;! $%0 "$#:$% #. # "$ # #0 ".$%#&;! $% $ $0 # " #% "# #0;# $ $ # #0 %%$%# &;! $% $ $%$ $0# "$ # % 0# $%# "$ )0# $%##8 #0 " ). "% % $ 0# #0 $ % $ #$% $ $ "$ %$ $0# "$%$ 00# $) %# $01 %%% $ $ 0$ $ #% " "$#% $%%#$ $ % $ $ $0 $0 "#$ "$0$ $ #%$%# #:# %# :$0,# #0%# &;! $% $ $#0$ ##$0 # ""#." %%: $% $% $0 1,.#$ * $ %% + )&' "$1 0 $ % $ #$% $ $ # $01.$ $0 &'&' $ "#$ "$ $ $ # # $0 1 0 $# #0 $ $% $ $#0$ ##$0 # " 1: $0 "$ $ $ # # $1%$0 "$ $ # 1$ $$ "$$8 #:$ 1 1$ -!0 "$ $ $ # # $ "$ $% $0 $ %%$% $ $ #$0 $# # #0$ ## # %#. "$#$0 1%$ # " %% $ $ $%% " * "$1%#% "$ $0# $0$$ $ ) %# # $0.$ %# #0% $ #$% # #0 %%$% $ $#0$ ##$01 $ %%$% 0$ %%% $ 0 "$ $ $ # # $ $.$ %# #0% 0 0% 0# $ $ %%$%# 0#., $ #7&9 296 96 ' "#.% 9-0 9-29- 9' 29! 9! '&0 $ $%$$ $0 1$%$ ) $0# #:$ #% "$$: # "#% $ "0 "$#$ $. $%%# $ #) #$ %0 < (( ) (( "$# # 0$ $ # )*.20 "$ $ #:$% 0) 00$:# # $/ $ (=) =0 $ $ # # $ =) = $ $ % #% #:$% #. $ "$# #0 ".$%# &;! $%0%$0 # " #% "# #0 &;! $% $% $ " ##.*> * $% $ $ 0 %$ $0# 0%$0. < 0. <, % $% $ $0$ $ $01 "$; 2!&' $ "0 "$0%$0. 0. $ $ $ $ #?$ $0 $0 $ % % $ # $ ; #. "$%$8 $ $$1/% $ %#?$ $0 $ $:$ " $$ #?$ #%0%#.## :$ # #0% %1%$ :$0&'0 % $% $ $$ $01 &%%) $ # #:$, %#%% $0 $01 &%% 9 #$ 9 $%%#% $ "." %$ #. " $%"0 $ $ % "$% $ $%$ $0#% $ #1# /$ % "%$1% $ 0) ".$ $/ $ % ).$ "0/: $$%% " *7 "$1:$) $ #$0 " * ".$0 # #0% $ #$% $ $ # $0% "$# $ #%# "$0%$0. $ $) # $% "%$# "$. "$ $% % 0 #1 $ "$% 0 "$ $ # 0 #.# $ "#% % #% "# #0%0 $:$$0 " "#% )0# $%# #8 #0 ". " 8 0 $ # $))#." %%% $ $ $ "0 % )
第 期 聂 洪 港 等 二 维 液 相 色 谱 ) 质 谱 法 研 究 犬 肾 小 管 上 皮 细 胞 脂 质 组 成 及 马 兜 铃 酸 对 其 影 响 ( #%#. # #0 # % $%$ " "! # )0# $%##8 #0 ". " %%% $ $ &0#); 1 #$/#0$ &;! $% #% "# #0# #0 # % 马 兜 铃 酸 #% "# #0,, 是 从 马 兜 铃 属 植 物 中 提 取 出 的 一 系 列 硝 基 苯 蒽 环 类 羧 酸 主 要 成 分 是 马 兜 铃 酸 和 马 兜 铃 酸 其 结 构 示 于 图 古 人 用 马 兜 铃 属 植 物 治 疗 蛇 咬 伤 现 代 医 学 则 利 用,, 的 抗 炎 性 能 治 疗 关 ) 节 炎 痛 风 风 湿 以 及 脓 疮 等 但 有 研 究 证 明,, 是 造 成 马 兜 铃 酸 肾 病 的 原 因 该 病 是 长 期 摄 入 马 兜 铃 属 植 物 后 发 生 的 一 种 快 速 进 行 性 ) 纤 维 化 间 质 肾 炎 其 病 理 表 现 有 肾 脏 体 积 缩 小 部 分 两 侧 肾 脏 不 对 称 外 形 不 规 整 常 伴 有 * 肾 小 管 萎 缩 和 肾 小 管 消 失 等 该 病 变 以 皮 质 浅 层 受 累 最 为 明 显 越 往 皮 质 深 层 病 变 越 轻 探 求 马 兜 铃 酸 肾 病 的 药 理 毒 理 和 作 用 机 制 一 直 是 该 领 域 的 研 究 热 点 代 谢 组 学 在 相 关 研 究 ) 中 发 挥 了 重 要 作 用 图 * 马 兜 铃 酸 和 马 兜 铃 酸 的 结 构 式 +, -* &! #%' %'!# #% & #% & + 脂 质 组 学 是 代 谢 组 学 最 为 活 跃 的 分 支 之 一 它 通 过 系 统 全 面 地 分 析 生 物 体 中 脂 质 分 子 的 种 属 代 谢 情 况 以 及 与 其 他 分 子 的 相 互 作 用 揭 示 其 在 生 命 活 动 中 对 膜 的 构 建 信 号 传 导 调 控 转 录 和 翻 译 等 过 程 的 影 响 阐 明 脂 质 及 其 代 谢 与 细 胞 器 官 和 机 体 的 生 理 病 理 之 间 的 () 关 系 色 谱 质 谱 及 相 关 联 用 技 术 是 脂 质 ) 组 学 研 究 最 主 要 的 分 析 技 术 其 中 在 线 正 反 相 二 维 液 相 色 谱 ) 质 谱 联 用 技 术 可 实 现 在 一 次 进 样 中 先 分 离 不 同 种 类 脂 质 再 分 离 鉴 定 同 类 脂 质 中 的 不 同 分 子 可 最 大 限 度 地 减 少 共 流 出 降 低 电 离 抑 制 增 加 低 丰 度 脂 质 分 子 信 息 减 少 假 阳 性 的 检 测 结 果 提 升 脂 质 分 子 鉴 定 的 准 确 性 和 信 息 量 已 被 应 用 于 多 种 样 品 的 脂 ) ( 质 组 学 研 究 本 工 作 拟 采 用 二 维 液 相 色 谱 ) 质 谱 联 用 方 法 检 测 肾 小 管 上 皮 &0#); 1 #$/#0) $ &;! 细 胞 中 磷 脂 脂 肪 酸 鞘 脂 等 脂 质 成 分 并 将 该 细 胞 暴 露 于,, 中 考 察 上 述 脂 质 化 合 物 含 量 的 变 化 情 况 以 期 从 脂 质 组 学 角 度 为,, 的 肾 毒 理 学 研 究 和 马 兜 铃 酸 肾 病 的 临 床 诊 断 提 供 依 据 * 实 验 部 分 *.* 主 要 仪 器 与 装 置 自 建 二 维 液 相 色 谱 系 统 第 一 维 采 用 美 国,.#$ 公 司 的 液 相 色 谱 仪 配 有 四 元 泵 在 线 脱 气 机 自 动 进 样 器 柱 温 箱 第 二 维 采 用 美 国,.#$ 公 司 的 液 相 色 谱 仪 配 有 二 元 泵 和 在 线 脱 气 机 两 维 色 谱 之 间 的 接 口 包 括 美 国 ;-@ $ " A ' #$ $ 公 司 的 两 位 六 通 阀 英 国 -0 0% 公 司 的 -& 真 空 泵 和 自 制 的 电 热 水 浴 锅,.#$ * 四 极 杆 飞 行 时 间 质 谱 仪 美 国,.#$ 公 司 产 品 配 有 喷 射 流 离 子 聚 焦 技 术 电 喷 雾 离 子 源 仪 器 控 制 及 数 据 采 集 由 美 国,.#$ 公 司 &%% $ ;, 8 #%# #7 完 成 定 性 定 量 及 统 计 学 分 析 分 别 由 美 国,.#$ 公 司 &%% $ # #:$, %#%7 &%% $ # #:$, %#% 7 和 &%%9 #$ 9 $%%# 完 成 *./ 主 要 材 料 与 试 剂 马 兜 铃 酸 标 准 品 由 中 国 药 品 生 物 制 品 检 定 所 提 供 磷 脂 标 准 品 %) )"$ 0$) ))" 0 ). $ )) "% ")%)B) BB)"$ 0$ ). $ $ # 7&9 ) C)"$ 0$ $ )%). $ )) "% ") B) ). $ %0# % 296 )0# #% )%). $ )) "%) ") B) ). $ %0# % 96 )00$ )"$ 0$ % "#.)) $#$) ) "% "$ " #$' "#.% 9-
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第 期 聂 洪 港 等 二 维 液 相 色 谱 ) 质 谱 法 研 究 犬 肾 小 管 上 皮 细 胞 脂 质 组 成 及 马 兜 铃 酸 对 其 影 响 ( 酰 乙 醇 胺 29- 磷 脂 酰 丝 氨 酸 9' 降 解 磷 脂 酰 丝 氨 酸 29' 磷 脂 酰 胆 碱 9! 降 解 磷 脂 酰 胆 碱 29! 鞘 磷 脂 '& 和 心 磷 脂!2 将 第 一 维 色 谱 分 为 * 段 第 段 含, 第 段 含 9 96296 第 段 含 9-!2 第 段 含 29 29-9'29' 第 * 段 含 9!29!'& 分 别 转 移 至 第 二 维 反 相 色 谱 进 行 进 一 步 的 分 离 结 果 示 于 图 表 * 二 维 液 相 色 谱 梯 度 洗 脱 程 序!*! % #%&!%! # (' & % & 第 一 维 液 相 色 谱 接 口 第 二 维 液 相 色 谱 保 留 时 间 # 流 速 2 #, = 7 = 阀 位 置 保 留 时 间 # 流 速 2 #, = 7 = ( * * ( ( * * ( * * * * * (* * * ** * * ( * ( * * ( ( ( (* ( * ** * ( * * *
( 质 谱 学 报 第 卷 图 / " 细 胞 脂 质 的 一 维 和 二 维 液 相 色 谱 基 峰 色 谱 图, -/* / #!! & % " 将 下 面 种 方 式 相 结 合 对 脂 质 化 合 物 进 行 定 性 根 据 精 确 质 量 数 检 索 脂 质 数 据 库 推 测 分 子 式 根 据 脂 质 二 级 质 谱 特 征 碎 片 )( 离 子 解 析 脂 质 分 子 结 构 根 据 文 献 报 道 ) ( 及 本 实 验 室 前 期 工 作 经 验 除, 外 其 余 类 脂 质 化 合 物 在 丰 度 满 足 二 级 质 谱 分 析 的 前 提 下 均 可 得 到 具 有 特 征 性 的 二 级 离 子 适 用 于 脂 类 化 合 物 的 结 构 解 析 主 要 脂 质 化 合 物 的 离 子 碎 片 列 于 表 根 据 同 类 脂 质 分 子 中 支 链 的 当 量 碳 数 与 其 保 留 时 间 的 关 系 对 于 大 多 数 含 量 相 对 较 高 的 非 脂 肪 酸 类 脂 质 化 合 物 可 以 采 用 精 确 质 荷 比 化 合 物 特 征 碎 裂 途 径 和 保 留 时 间 共 同 定 性 而 低 丰 度 的 脂 质 分 子 和 脂 肪 酸 类 化 合 物 通 常 因 为 无 法 得 到 稳 定 可 靠 的 二 级 质 谱 信 息 则 需 通 过 精 确 质 荷 比 和 保 留 时 间 进 行 定 性 下 面 将 分 别 介 绍 首 先 将 一 级 质 谱 检 测 得 到 的 准 分 子 离 子 质 荷 比 输 入 2 9 ;&,9' 网 站 " # #0) %. % %2&'; %$ " %% #% " 的 在 线 数 据 库 '$ " "$2&'; # #0% # ".#:$ %% 1: $ 进 行 搜 索 数 据 库 软 件 会 列 出 可 能 的 脂 类 化 合 物 ) + &' 在 有 参 比 离 子 校 正 的 情 况 下 质 量 误 差 可 控 制 在 以 下 而 在 没 有 参 比 离 子 进 行 校 正 的 二 级 质 谱 中 质 量 误 差 可 达 * 以 下 与 理 论 计 算 值 相 比 相 对 质 量 误 差 在 * 以 上 则 认 为 未 能 达 到 定 性 要 求 因 此 本 实 验 设 定 的 质 量 窗 口 是 * 例 如 在 第 段 检 测 到 某 一 分 析 物 离 子 的 质 荷 比 为 * 将 这 一 数 值 输 入 在 线 数 据 库 进 行 检 索 因 为 在 第 段 流 出 的 脂 质 分 子 属 于 9- 类 化 合 物 而 在 数 据 库 检 索 结 果 中 既 符 合 9- 类 脂 质 又 符 合 质 量 偏 差 小 于 * 的 只 有! + 9 E 9- 理 论 质 量 数 为 *( 所 以 基 本 可 以 确 定 该 脂 质 是 两 脂 肪 酸 支 链 上 含 有 个 碳 原 子 和 个 不 饱 和 双 键 的 9- 分 子 丢 失 一 个 形 成 的 准 分 子 离 子 同 时 可 确 定 这 一 化 合 物 的 分 子 式 若 要 确 定 脂 肪 酸 链 的 具 体 信 息 还 需 要 对 该 化 合 物 的 二 级 质 谱 进 行 解 析 在 结 构 分 析 的 过 程 中 采 用.$ $0 &'&' 模 式 选 取 母 离 子 1 * 以 的 碎 裂 能 量
第 期 聂 洪 港 等 二 维 液 相 色 谱 ) 质 谱 法 研 究 犬 肾 小 管 上 皮 细 胞 脂 质 组 成 及 马 兜 铃 酸 对 其 影 响 (* 表 / 主 要 脂 质 化 合 物 的 离 子 碎 片!/,! %# #!# 脂 质 种 类 母 离 子 脂 质 种 类 特 征 碎 片 分 子 种 属 特 征 碎 片 9 &E E &E E4 B!! +E E4B!! + E 4 B!++ E &E E4 B!++ E4B!++ E E &E E4 B!++ E E 或 &E E4 B!! +E E &E E4 B!! +E4B!++ E E &E E4 B!++ E &E E4 B!++! E4B!++!! E &E E4 B!! + E &E E4 B!++ E4B!++ E &E E4 B!! +E4B!++ E 96 &E E &E E4 B!++ E4B!! +E E 4 B!++ E &E E4 B!++ E4B!++E!!! E &E E4 B!++ E E &E E4 B!++ E4B!++ E &E E4 B!! +E E &E E4 B!++ E4B!! + E &E E4 B!++ E &E E4 B!! +E4B!! + E &E E4 B!! + E 9! &!++ E &E E! E!!! E4 B!! +E4B!++ E 4 B!++ E &E! E4 B!! + E &E! E4 B!++ E &E E4 B!++ E 9- &E E &E E4 B!! +E4B!++E!! +! E 4 B!++ E &E E4 B!++ E4B!++ E &E E4 B!++ E &E E4 B!++ E4B!! + E &E E4 B!! + E &E E4 B!! +E4B!! + E 9' &E E &E E E4 B!! +E4B!++ E 4 B!++ E &E E E4 B!! +E4B!! + E &E E E4 B!++ E &E E E4 B!! + E!2 &E E &E E4B!++E4B!++E!!! 9+!! +! 4 B!++ E E4 B!! +E4B!++ E &E E4B!++E4B!++E!!! 9+!! +! E4 B!! +E4B!! + E &E E4B!++E4B!++ E!!! 9+!! +! E 4 B!++ E &E E4 B!++E4B!++E!!! 9+ E4B!++ E 4B!++ E &E E4 B!++E4B!++E!!! 9+ E4B!++ E4B!! + E &E E4 B!++E4B!++E!!! 9+ E 4B!! +E4B!! + E '&0 &!++ E &E! E4 B!! + E 4 B!++ E &E!!! E &E E! E &E! E
( 质 谱 学 报 第 卷 对 母 离 子 进 行 碎 裂 采 集 碎 片 离 子 信 息 得 到 其 二 级 质 谱 图 示 于 图 图 中 1 ( 和 1 离 子 分 别 是 和 脂 肪 酸 根 的 离 子 1 ( 和 1 ( 离 子 分 别 对 应 于 9- 负 离 子 以 烯 酮 和 脂 肪 酸 的 形 式 中 性 丢 失 一 个 脂 肪 酰 基 侧 链 后 形 成 的 离 子 1 ( 和 1 离 子 是 所 有 9- 分 子 的 特 征 碎 片 离 子 1 ( 代 表 9- 准 分 子 离 子 的 两 个 脂 肪 酰 基 侧 链 其 中 一 个 以 脂 肪 酸 的 形 式 另 一 个 以 烯 酮 的 形 式 全 部 中 性 丢 失 后 产 生 的 特 征 离 子 1 离 子 则 是 乙 醇 胺 磷 酸 负 离 子 这 些 碎 片 离 子 的 信 息 与 文 献 )( 报 道 一 致 因 此 可 推 断 出 这 一 分 子 的 两 个 脂 肪 酰 基 的 组 成 是 和 脂 质 分 子 可 确 定 为 9- 大 部 分 脂 质 分 子 的 碎 裂 机 理 已 被 详 细 研 究 过 根 据 这 些 脂 质 分 子 的 特 征 碎 裂 路 径 和 产 生 的 特 征 离 子 可 以 对 产 生 稳 定 可 靠 二 级 质 谱 的 高 丰 度 化 合 物 进 行 定 性 分 析 由 于 脂 肪 酸 类 化 合 物 和 其 他 丰 度 相 对 较 低 的 脂 质 化 合 物 很 难 得 到 稳 定 的 二 级 质 谱 信 息 因 此 本 实 验 采 用 在 数 据 库 中 搜 索 检 测 到 的 准 分 子 离 子 质 荷 比 以 确 定 其 可 能 的 分 子 信 息 并 结 合 保 留 时 间 进 行 辅 助 定 性 实 验 发 现 同 类 脂 质 分 子 在 反 相 色 谱 分 离 中 的 保 留 时 间 与 其 支 链 的 当 量 碳 数 相 关 支 链 上 含 有 相 同 碳 原 子 个 数 的 同 类 脂 质 分 子 随 着 支 链 上 碳 碳 双 键 个 数 的 增 加 疏 水 性 减 弱 在 反 相 色 谱 柱 上 的 保 留 时 间 缩 短 这 与 文 献 发 现 的 规 律 一 致 利 用 这 个 规 律 可 以 对 无 法 得 到 二 级 质 谱 信 息 的 脂 类 化 合 物 进 行 辅 助 定 性 这 比 仅 使 用 精 确 的 准 分 子 离 子 质 量 对 化 合 物 定 性 更 加 准 确 通 过 上 述 种 方 式 对 &;! 细 胞 脂 质 提 取 物 的 二 维 液 相 色 谱 ) 质 谱 结 果 进 行 分 析 在 类 脂 质 中 共 检 测 到 个 脂 质 分 子 结 果 列 于 表 其 中 9! 和 9- 是 检 出 脂 质 分 子 个 数 最 多 的 两 类 脂 质 化 合 物 占 总 个 数 的 = 其 他 类 脂 质 分 子 仅 占 总 个 数 的 = 图 0 负 离 子 模 式 下 母 离 子. 1 的 二 级 质 谱 图, -0! ##! %'! '#. 1 表 0 二 维 液 相 色 谱 质 谱 检 测 得 到 的 " 细 胞 中 主 要 脂 质 的 数 量!0#!!# ' %#! & # "!%!!/ ) 脂 质 种 类 9 96 9! 9-9' 29 296 29! 29-29'!2 '&, 总 数 脂 质 分 子 个 数 ( * ( ** * /./ 方 法 验 证 从 类 脂 质 中 各 选 取 个 外 源 性 脂 质 标 准 品 使 其 保 留 时 间 较 均 匀 地 分 布 于 第 一 维 色 谱 中 * 段 中 每 段 含 有 个 脂 质 标 准 品 第 段 含, 和 $ #7&9 第 段 含 296 和 96 第
第 期 聂 洪 港 等 二 维 液 相 色 谱 ) 质 谱 法 研 究 犬 肾 小 管 上 皮 细 胞 脂 质 组 成 及 马 兜 铃 酸 对 其 影 响 ( 段 含 9- 和 ' "#.% 9-0 第 段 含 29- 和 9' 第 * 段 含 '& 0 29! 和 9! 采 用 这 个 脂 质 标 准 品 按 节 方 法 配 制 个 浓 度 水 平 的 验 证 样 品 每 个 浓 度 水 平 连 续 检 测 次 且 每 个 浓 度 水 平 之 间 插 入 一 次 空 白 溶 剂 的 分 析 计 算 时 对 测 试 标 准 品 的 萃 取 离 子 色 谱 峰 进 行 积 分 得 到 该 化 合 物 相 应 浓 度 的 峰 面 积 将 每 个 浓 度 水 平 测 得 的 次 峰 面 积 取 平 均 值 与 相 应 的 浓 度 建 立 线 性 方 程 计 算 得 到 的 个 脂 质 标 准 品 的 线 性 方 程 线 性 范 围 线 性 回 归 系 数 0 检 测 限 2+; 相 对 标 准 偏 差 4'; 等 列 于 表 可 知 种 验 证 标 准 品 的 线 性 回 归 系 数 均 大 于 (( 表 明 种 标 准 品 在 相 应 的 范 围 内 质 谱 信 号 响 应 和 浓 度 具 有 良 好 的 线 性 关 系 除 9' 的 2+; 为 *.2 外 其 余 种 脂 质 标 准 的 2+; 都 达 到.2 峰 面 积 和 保 留 时 间 的 相 对 标 准 偏 差 分 别 小 于 = 和 =< 这 说 明 本 方 法 可 满 足 定 量 比 较 分 析 的 需 要 适 用 于 脂 质 组 学 的 相 关 研 究 表 1** 种 标 准 品 的 方 法 验 证 结 果!1!%&2 %!#' %# %&**#% # 区 段 标 准 品 保 留 时 间 # 线 性 方 程 线 性 范 围.2 回 归 系 数 0 检 测 限.2 相 对 标 准 偏 差 = 峰 面 积 保 留 时 间, < * (( * $ #7&9 <* ( (( 296 ( < * E (( 96 <( E * (( ' "#.% ( < ( E ( (( * 9-0 9- <(* E * (( * * 29- ( < ( E * * (( * 9' ( <(( E (( * * 29! * * < (( 9! <* * E (( '&0 * < (( ( 注 为 萃 取 离 子 峰 的 峰 面 积 为 标 准 品 浓 度.2 标 准 品 浓 度.2< 萃 取 离 子 色 谱 图 的 峰 面 积 /.0 马 兜 铃 酸 对 " 细 胞 中 脂 质 含 量 的 影 响 采 用 &%%9 #$ 9 $%%# 软 件 对 给 药 组 和 对 照 组 各 份 细 胞 脂 质 提 取 物 的 二 维 液 相 色 谱 ) 质 谱 结 果 进 行 统 计 学 分 析 主 成 分 分 析 9!, 结 果 示 于 图 可 见 个 样 品 被 分 成 组 该 软 件 给 出 了 区 分 这 组 数 据 做 出 主 要 贡 献 的 化 合 物 列 表 通 过 对 这 些 化 合 物 设 定 阈 值 即 峰 面 积 的 绝 对 倍 数 变 化 大 于 且 / 值 小 于 * 共 找 到 组 中 峰 面 积 存 在 显 著 差 异 的 * 个 脂 质 分 子 结 果 列 于 表 * 采 用 四 极 杆 飞 行 时 间 质 谱 对 上 述 * 个 离 子 进 行 二 级 碎 裂 由 碎 片 离 子 推 测 可 能 的 碎 裂 路 径 进 一 步 确 认 其 可 能 的 分 子 组 成 与 结 构 信 息 以 29-+) 为 例 其 二 级 质 谱 图 和 碎 裂 路 径 示 于 图 * 图 1 用 处 理 的 " 细 胞 和 对 照 组 数 据 的 主 成 分 分 析 图, -1!#' %##! %& % " '#
( 质 谱 学 报 第 卷 表 用 处 理 后 " 细 胞 中 含 量 变 化 的 脂 质 化 合 物! &! #!!# "! ##! %& 脂 质 分 子 保 留 时 间 # 1 变 化 规 律 变 化 倍 数,, * 296 ( *** 296 ( * 296 ( ( * 296 * ( * 296+) * (* 29 ( * 29- * ( ( 29- ( * * 29- ( ( * 29-+) ( 29-+) ( 9!+) ( * 9!+) * *( ** ( 图 34* 5* 的 二 级 质 谱 图 和 碎 裂 路 径, -! ##! %'! % %& #3 4* 5*
第 期 聂 洪 港 等 二 维 液 相 色 谱 ) 质 谱 法 研 究 犬 肾 小 管 上 皮 细 胞 脂 质 组 成 及 马 兜 铃 酸 对 其 影 响 (( * 个 脂 质 分 子 的 含 量 在 给 药 组 中 有 明 显 变 化 这 可 能 同,, 与 &;! 细 胞 的 ;, 形 成 加 合 物 其 转 录 成 的 蛋 白 对 脂 质 合 成 的 调 控 能 力 降 低 有 关 也 可 能 是,, 直 接 与 相 关 蛋 白 作 用 改 变 其 活 性 致 使 脂 质 合 成 不 受 控 脂 质 的 大 量 合 成 占 用 了 过 多 的 能 量 造 成 了 细 胞 凋 亡 或 超 量 的 脂 质 影 响 了 细 胞 的 正 常 代 谢 使 其 凋 亡 上 述 推 断 仍 需 进 一 步 研 究 的 验 证 给 药 前 后 含 量 发 生 明 显 变 化 的 脂 质 分 子 可 能 会 由 细 胞 渗 入 尿 液 使 其 在 尿 液 中 的 含 量 增 加 这 有 望 为 临 床 诊 断 马 兜 铃 酸 肾 病 提 供 一 种 无 损 检 测 的 方 法 1 总 结 与 展 望 本 工 作 采 用 二 维 液 相 色 谱 ) 质 谱 法 分 析 了 &;! 细 胞 中 类 脂 质 共 种 分 子 种 属 并 比 较 了 这 些 脂 质 在 &;! 暴 露 于,, 前 后 含 量 的 变 化 为 毒 理 学 研 究 和 潜 在 临 床 诊 断 方 法 提 供 了 技 术 手 段 二 维 液 相 色 谱 ) 质 谱 法 在 生 物 脂 质 轮 廓 分 析 尤 其 是 低 丰 度 脂 质 分 析 中 具 有 灵 敏 度 高 定 性 准 确 信 息 丰 富 等 特 点 有 望 在 脂 质 组 学 研 究 中 发 挥 更 加 重 要 的 作 用 参 考 文 献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