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134 11, Vol. 32, No. 14 食 品 科 学 工 艺 技 术 刘 佳, 焦 士 蓉 *, 唐 远 谋, 唐 鹏 程, 冯 慧 ( 西 华 大 学 生 物 工 程 学 院, 四 川 成 都 639) : 对 苦 丁 茶 中 多 酚 的 提 取 及 抗 氧 化 活 性 进 行 研 究 通 过 单 因 素 和 响 应 面 试 验 可 知, 在 乙 醇 体 积 分 数 52% 料 液 比 1:24(g/mL) 提 取 时 间 62s 微 波 功 率 291W 条 件 下 可 获 得 最 高 的 提 取 量 115.4mg/g 苦 丁 茶 多 酚 提 取 液 对 DPPH 自 由 基 羟 自 由 基 超 氧 阴 离 子 自 由 基 的 半 清 除 质 量 浓 度 以 及 对 脂 质 过 氧 化 的 半 抑 制 质 量 浓 度 分 别 为 29.24 34.14 872.3 11.48mg/L 表 明 苦 丁 茶 多 酚 具 有 较 强 的 抗 氧 化 作 用 苦 丁 茶 ; 多 酚 ; 提 取 ; 响 应 面 分 析 法 ; 抗 氧 化 Extraction and Antioxidant Activity of Polyphenols from Kuding Tea LIU Jia,JIAO Shi-rong*,TANG Yuan-mou,TANG Peng-cheng,FENG Hui (School of Bioengineering, Xihua University, Chengdu 639, China) Abstract :The optimal conditions for the extraction of Kuding tea polyphenols for achieving maximum extraction yield were determined by response surface methodology to be ethanol concentration of 52%, material/liquid ratio of 1:24 (g/ml), microwave power of 291 W, and microwave treatment time of 62 s. The extraction rate of polyphenols was 114.82 mg/g under the optimal extraction conditions. The IC5 values of the obtained extract against DPPH, hydroxyl, superoxide anion ion free radicals and lipid peroxidation were 29.24, 34.14, 872.3 mg/l and 11.48 mg/l, respectively, suggesting that Kuding tea polyphenols have a remarkable antioxidant effect. Key words:kuding tea;polyphenols;extraction;response surface analysis;antioxidant 中 图 分 类 号 :TS272.2;TS272.5 文 献 标 识 码 :A 文 章 编 号 :2-663(11)14-134-5 苦 丁 茶 是 我 国 一 大 类 代 茶 植 物 或 代 茶 产 品 的 统 称 冬 青 属 苦 丁 茶 主 要 产 于 我 国 南 部 及 西 南 部 地 区, 是 民 间 传 统 的 药 用 植 物 据 文 献 报 道, 苦 丁 茶 有 防 治 心 脑 血 管 系 统 疾 病 降 低 血 压 降 脂 抗 氧 化 等 药 理 保 [1] [2] 健 作 用, 其 粗 提 物 均 有 不 同 程 度 的 抑 菌 作 用 由 苦 丁 茶 冬 青 叶 片 制 成 的 苦 丁 茶 是 民 间 常 用 中 草 药, 是 传 统 [3] 中 成 药 甘 和 茶 的 主 要 原 料 之 一, 含 有 丰 富 的 黄 [4-5] 酮 多 酚 三 萜 类 皂 甙 及 金 属 元 素, 所 含 的 各 种 成 [6] 分 的 药 理 作 用 及 保 健 功 能 日 益 引 起 人 们 的 关 注, 具 有 [7] 广 阔 的 开 发 应 用 前 景 本 实 验 采 用 响 应 面 法, 以 苦 丁 茶 冬 青 树 ( Ilex Kudincha C.J.Tseng) 叶 片 中 的 多 酚 含 量 作 为 响 应 值, 对 苦 丁 茶 多 酚 的 提 取 工 艺 进 行 探 讨, 旨 在 得 到 最 优 工 艺 条 件, 并 通 过 几 个 方 面 研 究 苦 丁 茶 多 酚 的 抗 氧 化 性 能, 为 苦 丁 茶 保 健 成 分 的 开 发 利 用 提 供 一 定 参 考 1 材 料 与 方 法 1.1 材 料 试 剂 与 仪 器 苦 丁 茶 ( 市 售 ) 粉 碎 过 目 筛 ; 福 林 - 酚 试 剂 北 京 奥 博 星 生 物 技 术 有 限 责 任 公 司 ;DPPH 自 由 基 美 国 Sigma 公 司 ;2- 硫 代 巴 比 妥 酸 上 海 科 丰 化 学 试 剂 有 限 公 司 ; 其 他 常 见 试 剂 ( 分 析 纯 ) 成 都 科 龙 化 工 试 剂 厂 TB-214 型 电 子 天 平 美 国 丹 佛 仪 器 设 备 厂 ;HH-S 型 数 显 恒 温 水 浴 锅 金 坛 市 金 城 国 胜 实 验 仪 器 厂 ;UV- 2 型 紫 外 可 见 分 光 光 度 计 ( 配 有 玻 璃 比 色 皿 ) 上 海 尤 尼 柯 仪 器 有 限 公 司 ;MP17C-KE 家 用 微 波 炉 美 的 集 团 1.2 方 法 1.2.1 多 酚 提 取 方 法 称 取 苦 丁 茶 粉 样 品 2g, 采 用 不 同 的 提 取 溶 剂, 分 别 探 究 提 取 时 间 料 液 比 微 波 功 率 因 素 对 多 酚 得 率 的 影 响 收 稿 日 期 :1-9-19 基 金 项 目 : 四 川 省 教 育 厅 自 然 科 学 重 点 项 目 (9ZA158); 西 华 大 学 8 校 人 才 培 养 与 引 进 科 研 项 目 (R1) 作 者 简 介 : 刘 佳 (1987 ), 女, 硕 士 研 究 生, 研 究 方 向 为 食 品 营 养 与 安 全 E-mail:liujia135688645@163.com * 通 信 作 者 : 焦 士 蓉 (1968 ), 女, 教 授, 博 士, 研 究 方 向 为 食 品 生 物 技 术 E-mail:jsrong4@163.com

工 艺 技 术 食 品 科 学 11, Vol. 32, No. 14 135 1.2.2 多 酚 提 取 量 测 定 [7-8] 采 用 福 林 - 酚 比 色 法, 以 没 食 子 酸 为 标 准 品, 标 准 曲 线 y=.81x +.286,R 2 =.9999, 计 算 公 式 为 : C v n p= m 1 3 式 中 :p 为 总 多 酚 类 物 质 提 取 量 /(mg/g);c 为 从 回 归 方 程 计 算 得 到 样 品 中 多 酚 类 物 质 质 量 浓 度 /(μg/ml); v 为 苦 丁 茶 溶 液 的 体 积 /ml;n 为 稀 释 倍 数 ;m 为 茶 粉 质 量 /g 1.2.3 抗 氧 化 活 性 的 测 定 1.2.3.1 对 DPPH 自 由 基 的 清 除 按 照 文 献 [9] 的 方 法 并 做 适 当 修 正 : 称 取 2,2- 二 苯 代 苦 味 酰 基 (2,2-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH) 标 准 品 mg, 无 水 乙 醇 定 容 至 5mL, 得 质 量 浓 度.4mg/mL 溶 液 取 此 溶 液 3mL, 加 入 不 同 质 量 浓 度 样 品 液 1mL, 室 温 反 应 3min, 于 517nm 波 长 处 测 定 吸 光 度, 空 白 组 以 1mL 无 水 乙 醇 代 替 样 品 液, 并 按 下 式 计 算 清 除 率 : A 试 样 DPPH 自 由 基 清 除 率 (E)/%=(1 - ) 1.2.3.2 对 羟 自 由 基 的 清 除 [1] 按 照 金 鸣 等 的 比 色 法,.75mmoL/L 的 邻 二 氮 菲 溶 液 1mL, 加 入 ph7.4 的 磷 酸 缓 冲 溶 液 (PBS)2mL 和 蒸 馏 水 1mL, 充 分 混 匀 后, 加 入.75mmol/L 硫 酸 亚 铁 溶 液 1mL, 然 后 再 加 入.1% 过 氧 化 氢 1mL, 于 37 保 持 min, 在 波 长 536nm 处 测 吸 光 度 Ap; 用 1mL 乙 醇 代 替 1mL 过 氧 化 氢, 测 得 吸 光 度 A b,1ml 不 同 质 量 浓 度 的 样 液 代 替 蒸 馏 水, 测 得 吸 光 度 A s 以 下 式 计 算 苦 丁 茶 多 酚 对 OH 自 由 基 的 清 除 率 (H/%): AS - Ap H/%= Ab - Ap 1.2.3.3 对 O _ 2 的 清 除 参 照 文 献 [11] 方 法,5mmol/L ph8.2 的 Tris-HCl 缓 冲 液 4.5mL 于 试 管 中, 置 于 25 水 浴 预 热 min, 然 后 加 入 不 同 浓 度 的 样 品.1mL,2.5mmol/L 的 邻 苯 三 酚 溶 液.4mL, 混 匀 后,25 水 浴 反 应 4min, 用 8mol/L 盐 酸 两 滴 终 止 反 应 在 (299 ± 1)nm 处 测 吸 光 度 空 白 组 以.1mL 蒸 馏 水 代 替 待 测 样 液 按 照 下 式 计 算 苦 丁 茶 多 酚 对 O _ 2 清 除 率 ( S ) -(A 样 品 - A 背 景 ) S/%= 1.2.3.4 对 脂 质 过 氧 化 的 抑 制 参 考 文 献 [12] 的 方 法 并 做 适 当 改 进, 小 鼠 处 死 后 取 肝 洗 净, 剪 碎, 用 生 理 盐 水 制 成 3% 的 匀 浆 取 匀 浆.6mL, 加 入 不 同 浓 度 样 液.34mL,.24% 过 氧 化 氢.2mL,.3mmol/L 硫 酸 亚 铁 溶 液.2mL, 于 37 水 浴 保 温 min 后, 加 入 2mL % 三 氯 乙 酸 及 2mL.67% TBA 溶 液,9 保 温 15min, 用 水 冷 却 至 室 温,4r/min 离 心 min, 取 上 清 液, 在 532nm 波 长 处 测 得 吸 光 度, 以 水 代 替 TBA 的 平 行 试 验 管 调 零, 以 蒸 馏 水 代 替 料 液 的 反 应 管 为 空 白 管, 抑 制 率 ( I /%) 计 算 公 式 为 : -(A 样 品 - A 背 景 ) I/%= 2 结 果 与 分 析 2.1 提 取 溶 剂 的 筛 选 图 1 溶 剂 对 苦 丁 茶 多 酚 提 取 的 影 响 Fig.1 Effect of solvents on extraction rate of polyphenols from Kuding tea 按 照 1.2.1 节 方 法, 在 提 取 时 间 s 料 液 比 1: 微 波 功 率 291W 条 件 下 进 行 试 验, 结 果 见 图 1 由 图 1 可 知, 提 取 溶 剂 为 丙 酮 时, 苦 丁 茶 多 酚 提 取 量 最 高, 乙 醇 次 之 ; 由 于 丙 酮 的 毒 性 以 及 溶 剂 价 格 较 高 的 因 素, 选 取 乙 醇 作 为 提 取 溶 剂 2.2 单 因 素 试 验 2.2.1 乙 醇 体 积 分 数 对 苦 丁 茶 多 酚 提 取 的 影 响 4 1 4 水 乙 醇 丙 酮 乙 酸 乙 酯 溶 剂 1 3 5 7 9 乙 醇 体 积 分 数 /% 图 2 乙 醇 体 积 分 数 对 苦 丁 茶 多 酚 提 取 的 影 响 Fig.2 Effect of ethanol concentration on extraction rate of polyphenols

136 11, Vol. 32, No. 14 食 品 科 学 工 艺 技 术 按 照 2.1 节 方 法, 改 变 乙 醇 体 积 分 数 进 行 试 验, 结 果 见 图 2 由 图 2 可 知, 当 乙 醇 体 积 分 数 为 5% 时, 苦 丁 茶 多 酚 的 提 取 量 最 高, 故 乙 醇 体 积 分 数 选 取 5% 2.2.2 料 液 比 对 苦 丁 茶 多 酚 提 取 的 影 响 1 4 1:1 1:15 1: 1:25 1:3 料 液 比 (g/ml) 图 3 料 液 比 对 苦 丁 茶 多 酚 提 取 的 影 响 Fig.3 Effect of material/liquid ratio on extraction rate of polyphenols 乙 醇 体 积 分 数 为 5%, 其 他 条 件 同 2.2.1 节, 改 变 料 液 比 进 行 试 验, 结 果 如 图 3 由 图 3 可 知, 当 料 液 比 1: (g/ml) 时 苦 丁 茶 多 酚 提 取 量 最 高, 故 选 取 料 液 比 1:(g/mL) 2.2.3 提 取 时 间 对 苦 丁 茶 多 酚 提 取 的 影 响 11 15 9 85 4 提 取 时 间 /s 图 4 提 取 时 间 对 苦 丁 茶 多 酚 提 取 的 影 响 Fig.4 Effect of extraction time on extraction rate of polyphenols from Kuding tea 料 液 比 1:, 其 他 条 件 同 2.2.2 节, 改 变 提 取 时 间 进 行 试 验, 结 果 见 图 4 由 图 4 可 知, 当 提 取 时 间 为 s 时, 苦 丁 茶 多 酚 提 取 量 最 大, 时 间 过 长 多 酚 提 取 量 反 而 降 低, 可 能 是 因 为 时 间 过 长 导 致 部 分 多 酚 类 物 质 被 氧 化 或 分 解, 故 提 取 时 间 选 取 s 2.2.4 微 波 功 率 对 苦 丁 茶 多 酚 提 取 的 影 响 11 15 9 85 119 291 385 539 微 波 功 率 /W 图 5 微 波 功 率 对 苦 丁 茶 多 酚 提 取 的 影 响 Fig.5 Effect of microwave power on extraction rate of polyphenols 选 取 提 取 时 间 s, 其 他 条 件 同 2.2.3 节, 改 变 微 波 功 率, 结 果 见 图 5 由 图 5 可 知, 微 波 功 率 为 291W 时, 苦 丁 茶 多 酚 提 取 最 高, 但 随 着 微 波 功 率 的 增 大 多 酚 提 取 量 迅 速 降 低, 可 能 是 因 为 功 率 过 大 加 速 了 多 酚 类 物 质 的 氧 化 分 解 或 使 溶 剂 大 量 挥 发, 故 选 取 提 取 功 率 为 291W 2.3 响 应 曲 面 法 结 果 与 分 析 [13-14] 响 应 曲 面 由 法 常 用 于 优 化 最 佳 测 试 条 件 由 单 因 素 试 验 结 果 可 知, 乙 醇 体 积 分 数 料 液 比 提 取 时 间 3 个 因 素 对 苦 丁 茶 多 酚 提 取 率 的 影 响 较 大, 故 选 取 这 3 个 因 素 做 Box-Behnken 设 计, 并 且 以 苦 丁 茶 多 酚 提 取 量 作 为 响 应 值, 设 计 及 结 果 见 表 1 表 1 Box-Behnken 设 计 试 验 因 素 水 平 及 编 码 Table 1 Factors and levels in Box-Behnken design 变 量 代 码 编 码 水 平 未 编 码 编 码 - 1 +1 乙 醇 体 积 分 数 /% X1 A 4 5 液 料 比 (ml/g) X2 B 15 25 提 取 时 间 /s X3 C 5 7 注 :A=(X1-5)/1;B=(X2 - )/5;C=(X3 - )/1 表 2 Box-Behnken 试 验 设 计 及 结 果 Table 2 Results of Box-Behnken design tests 试 验 号 A B C 1-1 - 1. 2 1-1 99.36 3-1 1 98.55 4 1 1 19.15 5-1 - 1 14.36 6 1-1 14.85 7-1 1.65 8 1 1. 9-1 - 1 11.45 1 1-1 11.4 11-1 1 96.24 12 1 1 114.63 13 112.2 14 113.83 15 113. 利 用 Design Expert 软 件 对 上 述 结 果 进 行 分 析, 得 到 多 酚 含 量 (Y) 对 乙 醇 体 积 分 数 (A) 料 液 比 (B) 提 取 时 间 (C) 的 二 次 多 项 回 归 方 程 : Y=113.22+2.5A+3.92B-2.87C+1.56AB+1.2AC+ 4.7BC - 9.64A 2-3.6B 2-2.31C 2 试 验 所 选 用 模 型 P 值 为.19, 极 显 著 (P <.5), 决 定 系 数 R 2 =.9741, 说 明 响 应 值 的 变 化 有 97.41% 来 源 于 所 选 变 量, 该 方 程 的 拟 合 情 况 好

工 艺 技 术 食 品 科 学 11, Vol. 32, No. 14 137 响 应 面 图 形 是 响 应 值 对 各 试 验 因 素 X 1 X 2 X 3 所 构 成 的 三 维 空 间 的 曲 面 图, 从 响 应 面 分 析 图 上 形 象 地 看 出 最 佳 参 数 及 各 参 数 之 间 的 相 互 作 用 当 特 征 值 均 为 正 值 时, 响 应 面 分 析 图 为 山 谷 形 曲 面, 有 极 小 值 存 在 ; 当 特 征 值 为 负 值 时, 为 山 丘 曲 面, 有 极 大 值 存 在 ; 当 特 征 值 有 正 有 负 时, 为 马 鞍 形 曲 面, 无 极 值 存 在 115 11 15 1..5. -.5 -.5..51. -1. -1. 115. 11.25 15.5.75 96. B : 料 液 比 a. 乙 醇 体 积 分 数 与 料 液 比 1..5.-.5 115. 19.75 14.5 99.25 94. C : 提 取 时 间 -1. b. 料 液 比 与 提 取 时 间 1..5. -.5-1. C : 提 取 时 间 A : 乙 醇 体 积 分 数 -.5..51. -1. B : 料 液 比 -.5..51. -1. A : 乙 醇 体 积 分 数 c. 乙 醇 体 积 分 数 与 提 取 时 间 固 定 水 平 : 均 为 零 水 平 图 6 各 两 因 素 交 互 作 用 对 多 酚 提 取 量 的 响 应 面 图 Fig.6 Response surface plot for the effect of cross-interaction between ethanol conceration, material-liquid ratio and extraction time on the extraction rate of polyphenols 由 图 6A 可 知, 乙 醇 体 积 分 数 对 苦 丁 茶 多 酚 提 取 量 影 响 比 较 大, 表 现 为 曲 线 较 陡, 料 液 比 对 苦 丁 茶 多 酚 提 取 量 影 响 不 是 很 大, 表 现 为 曲 线 较 为 平 缓 当 乙 醇 体 积 分 数 在 水 平, 即 5% 时, 多 酚 提 取 量 最 大, 说 明 过 高 过 或 过 低 的 乙 醇 体 积 分 数 均 不 适 合 苦 丁 茶 多 酚 的 提 取 由 图 6B 可 知, 料 液 比 对 苦 丁 茶 多 酚 提 取 量 影 响 比 较 小, 而 提 取 时 间 对 苦 丁 茶 多 酚 提 取 影 响 较 大, 且 较 短 的 时 间 更 有 利 于 提 取 图 6C 进 一 步 说 明 乙 醇 体 积 分 数 对 苦 丁 茶 多 酚 提 取 量 影 响 比 较 大, 曲 线 较 陡 2.4 验 证 实 验 通 过 辅 助 软 件 Design Expert 优 化 提 取 条 件 得 到 多 酚 提 取 量 最 高 的 超 过 114.mg/g 的 5 组 数 据, 分 析 这 5 组 数 据, 得 到 苦 丁 茶 多 酚 含 量 超 过 114.mg/g 的 各 参 数 的 范 围 为 乙 醇 体 积 分 数 51%~53% 料 液 比 1:23~1:25 (g/ml) 提 取 时 间 ~64s 经 以 上 分 析, 再 综 合 实 验 的 好 操 作 性, 选 取 乙 醇 体 积 分 数 52% 料 液 比 1:24 提 取 时 间 62s, 进 行 验 证 实 验 根 据 回 归 方 程, 计 算 其 预 测 值 为 114.4832mg/g 进 行 3 次 平 行 实 验, 得 到 平 均 结 果 为 115.4mg/g, 相 对 误 差 为.8%, 证 明 响 应 面 优 化 苦 丁 茶 多 酚 的 提 取 工 艺 可 行 2.5 抗 氧 化 活 性 测 定 2.5.1 对 DPPH 自 由 基 的 清 除 y=1.858x + 18.249 R 2 =.93 4 4 图 7 苦 丁 茶 多 酚 对 DPPH 自 由 基 清 除 作 用 Fig.7 Scavenging rate of polyphenols from Kuming tea on DPPH free radicals 如 图 7 所 示, 由 回 归 方 程 得 苦 丁 茶 多 酚 对 DPPH 自 由 基 的 半 清 除 质 量 浓 度 EC5=29.24mg/L 2.5.2 对 羟 自 由 基 的 清 除 y=.918x - 18.66 R 2 =.9 4 25 5 75 125 15 图 8 苦 丁 茶 多 酚 对 羟 自 由 基 的 清 除 作 用 Fig.8 Scavenging rate of polyphenols from Kuming tea on hydroxyl free radicals 由 图 8 回 归 方 程 可 得, 苦 丁 茶 多 酚 对 OH 自 由 基 的 半 清 除 质 量 浓 度 HC5=34.14mg/L 2.5.3 对 O 2 的 清 除

138 11, Vol. 32, No. 14 食 品 科 学 工 艺 技 术 y=.447x+1.62 R 2 =.99 4 5 75 125 15 291W 时 提 取 苦 丁 茶 多 酚 含 量 达 到 115.4mg/g 3.3 由 抗 氧 化 实 验 可 知, 苦 丁 茶 多 酚 对 DPPH 自 由 基 羟 自 由 基 O 2 的 清 除 能 力 以 及 对 脂 质 过 氧 化 的 抑 制 能 力 都 随 苦 丁 茶 多 酚 浓 度 呈 线 性 增 加, 其 对 DPPH 自 由 基 羟 自 由 基 O 2 的 半 清 除 质 量 浓 度 分 别 为 29.24 34.14 872.3mg/L, 对 脂 质 过 氧 化 的 半 抑 制 质 量 浓 度 为 11.48mg/L 图 9 苦 丁 茶 多 酚 对 O 2 的 清 除 作 用 Fig.9 Scavenging rate of polyphenols from Kuming tea on superoxide anion ion free radicals 由 图 9 回 归 方 程 计 算 可 得, 苦 丁 茶 多 酚 对 O 2 的 半 清 除 质 量 浓 度 SC5=872.3mg/L 2.5.4 对 脂 质 过 氧 化 的 抑 制 4 图 1 苦 丁 茶 多 酚 对 脂 质 过 氧 化 的 抑 制 作 用 Fig.1 Inhibition rate of polyphenols from Kuming tea on lipid peroxidation 由 图 1 回 归 方 程 计 算 可 得, 苦 丁 茶 多 酚 对 脂 质 过 氧 化 的 半 抑 制 质 量 浓 度 IC5=11.48mg/L 3 结 论 y=3.6743x+7.8238 R 2 =.997 5 1 15 3.1 通 过 单 因 素 试 验, 确 定 了 苦 丁 茶 多 酚 提 取 的 最 佳 工 艺 条 件 为 乙 醇 体 积 分 数 5% 料 液 比 1:(g/mL) 提 取 时 间 s 微 波 功 率 291W 3.2 通 过 Box-Behnken 响 应 曲 面 法 优 化, 确 定 苦 丁 茶 多 酚 提 取 的 最 佳 试 验 条 件 为 乙 醇 体 积 分 数 52% 料 液 比 1:24(g/mL) 提 取 时 间 62s 以 该 优 化 条 件 在 微 波 功 率 参 考 文 献 : [1] 刘 宗 岸. 冬 青 属 苦 丁 茶 的 保 健 功 效 及 利 [J]. 热 带 农 业 科 技,9, 32 (2): 26-28. [2] LV Ping, HUANG Qiang. Study on in vitro bacteriostasis of the different extract from Ilex Kudingcha C.J.Tseng[J]. Agricultural Science & Technlogy, 9, 1(6): 125-127. [3] 王 新, 陆 慧 宁, 林 少 琨. 苦 丁 茶 冬 青 叶 化 学 成 分 及 药 理 作 用 研 究 进 展 [J]. 天 然 产 物 研 究 与 开 发, 5, 17(3): 366-37. [4] 程 春 萍. 苦 丁 茶 的 化 学 成 分 [J]. 内 蒙 古 石 油 化 工, 9, (2): 23-24. [5] AN Ming, WANG Ouqing, CHEN Zili, et al. Triterpenoid glycosides from Ilex Kudingcha[J]. Phytochemistry, 1996, 43(2): 443-445. [6] 刘 丽 香, LAURA T, 梁 兴 飞, 等. Folin-Ciocalteu- 比 色 法 测 定 苦 丁 茶 中 多 酚 含 量 [J]. 茶 叶 科 学, 8, 28(2): 11-16. [7] 张 文 芹, 许 文 清, 孙 怡, 等. 苦 丁 茶 冬 青 与 大 叶 冬 青 苦 丁 茶 提 取 物 体 外 抗 氧 化 活 性 比 较 研 究 [J]. 食 品 科 学, 1, 31(23): 22-26. [8] 唐 远 谋, 李 明 元, 徐 坤, 等. 啤 酒 花 多 酚 的 提 取 及 对 DPPH 自 由 基 的 清 除 作 用 [J]. 西 华 大 学 学 报 : 自 然 科 学 版, 1, 29(4): 15-19. [9] LIU Lixiang, SUN Yi, LAURA T, et al. Determination of polyphenolic content and antioxidant activity of Kudingcha made from Ilex Kudingcha C.J.Tseng[J]. Food Chemistry, 9, 112(1): 35-41. [1] SHARIFIFAR F, MOSHAFI M H, MANSOURI S H, et al. In vitro valuation of antibacterial and antioxidant activities of the essential oil and ethanol extract of endemic Zataria multiflora Boiss[J]. Food Control, 7, 18(7): -5. [11] 金 鸣, 蔡 亚 欣, 李 金 荣, 等. 邻 二 氮 菲 -Fe 2+ 氧 化 法 检 测 H2O2/Fe 2+ 产 生 的 羟 自 由 基 [J]. 生 物 化 学 与 生 物 物 理 学 进 展, 1996, 23(6): 553-555. [12] 刘 丽 香, 梁 兴 飞, 孙 怡, 等. 苦 丁 茶 提 取 物 多 酚 含 量 与 抗 氧 化 活 性 的 测 定 [J]. 茶 叶 科 学, 8, 28(4): 289-293. [13] 何 冰, 陈 小 夏. 茶 多 酚 清 楚 氧 自 由 基 及 抑 制 脑 脂 质 过 氧 化 反 应 的 体 外 试 验 [J]. 中 国 药 理 学 通 报, 1998, 14(3): 27-272. [14] SUN Yi, WU Wenqing, ZHANG Wenqin et al. Optimizing the extraction of phenolic antiodants from Kudingcha made from Ilex Kudingcha C.J.Tseng by using response surface methodology[j]. Separation and Purification Technology, 11, 78(3):311-3. [15] 沈 汪 洋, 金 征 宇. 微 波 辅 助 提 取 咖 啡 豆 残 渣 中 多 酚 [J]. 食 品 科 学, 1, 31(): 79-82.