畜 牧 兽 医 学 报 表 达 传 染 性 支 气 管 炎 基 因 和 基 因 重 组 鸡 痘 病 毒 安 全 性 与 最 适 免 疫 剂 量 分 析 石 星 明 王 云 峰 王 玫 兰 德 松 任 刚 李 继 松 曾 伟 伟 孙 妍 刘 胜 旺 童 光 志 中 国 农 业 科 学 院 哈 尔 滨 兽 医 研 究 所 兽 医 生 物 技 术 国 家 重 点 实 验 室 禽 传 染 病 研 究 室 哈 尔 滨 中 国 农 业 科 学 院 上 海 兽 医 研 究 所 上 海 东 莞 出 入 境 检 验 检 疫 局 东 莞 摘 要 对 共 表 达 鸡 传 染 性 支 气 管 炎 病 毒 基 因 和 型 干 扰 素 基 因 的 重 组 鸡 痘 病 毒 冻 干 疫 苗 进 行 安 全 性 和 最 适 免 疫 剂 量 的 研 究 取 冻 干 疫 苗 加 生 理 盐 水 恢 复 至 冻 干 前 体 积 分 别 取 经 翅 内 侧 无 血 管 处 皮 下 接 种 周 龄 鸡 接 种 剂 量 为! " 接 种 后 # 出 现 局 部 反 应 # 局 部 肿 胀 达 到 最 大 接 种 鸡 无 其 它 全 身 反 应 精 神 食 欲 以 及 发 育 等 均 不 受 影 响 说 明 重 组 病 毒 对 实 验 鸡 是 安 全 的 将 重 组 疫 苗 用 生 理 盐 水 作 倍 比 稀 释 后 翅 内 侧 无 血 管 处 皮 下 接 种 $ 周 龄 鸡 接 种 剂 量 为!! $ " 免 疫 后 周 攻 击 传 染 性 支 气 管 炎 病 毒 %$ 株 结 果 表 明 在 接 种 剂 量 为!! $ " 的 剂 量 范 围 内 均 可 以 使 全 部 实 验 鸡 产 生 局 部 反 应 并 对 & 的 攻 击 形 成 保 护 降 低 免 疫 鸡 的 发 病 率 和 死 亡 率 发 病 保 护 率 达 到 ' 以 上! " 接 种 实 验 鸡 后 仅 有 的 鸡 出 现 局 部 反 应 对 & 攻 击 的 发 病 保 护 率 为 $' 与 对 照 组 差 异 不 显 著 以 上 结 果 说 明 疫 苗 接 种 后 的 局 部 反 应 与 重 组 疫 苗 的 免 疫 效 力 之 间 具 有 相 关 性 根 据 疫 苗 生 产 使 用 实 际 情 况 确 定 传 染 性 支 气 管 炎 重 组 鸡 痘 病 毒 疫 苗 的 最 适 免 疫 剂 量 为 " 关 键 词 传 染 性 支 气 管 炎 重 组 鸡 痘 病 毒 基 因 最 适 免 疫 剂 量 中 图 分 类 号 $ 文 献 标 识 码 文 章 编 号 $!"#$%&''%'%$$'&'#%&()&*%''&+#,&-.%/$!-0/%'1'&')%&$/&')%%.%/$'' %(+,(+, 2+13+, 43( 536/+, 7 +, 8(6/+, 9 3(3( " + ".3+,+, :; 2+,.(!"!# $%&''!' %''"#()*'! #%#% ("#!*% %'()*'!#%#% ( #+,'+,"-).##( */):.(63*3(3+60/+#203#/62#-.3613-3)2(/++# (+(2(2+3 #/636/1.330/(++1/)/*(263*366(+,,3+3/1(+130(/26/+0.((6(26+#,3+3 :.300(+36330./63++##()23#(..36)(+33#-/)#0.(03+6 33(+/02)3#(+.33+#/.3)(22+#3.3(+,.3#/63/1! "30.(03+)/0) 30(/+33#.33#-6)3)/0)63)303.3),36.3.#-:.3(+/02)3# 0.(03+6./3#+/6(,+/1/.3#(60/1/6+#(+6((3(3+##33)/3+33.3 6360/+/)6:.3362)6(+#(03#..300(+366131/0.(03+:.300(+36#( 收 稿 日 期 $ 基 金 项 目 国 家 计 划 资 助 项 目 作 者 简 介 石 星 明 男 黑 龙 江 省 肇 东 市 人 助 理 研 究 员 主 要 从 事 家 禽 病 毒 载 体 疫 苗 的 研 究 ()*(+,(+,+#-.//0/0+ 通 讯 作 者 王 云 峰 研 究 员 ()-1+,.(00+
期 石 星 明 等 表 达 传 染 性 支 气 管 炎 基 因 和 基 因 重 组 鸡 痘 病 毒 安 全 性 与 最 适 免 疫 剂 量 分 析 )23#/!! $ "+#.3#-/)#0.(03+633(+/02)3#6/3.3+0.)3+,3#(.(+130(/26/+0.((6(26 %$6(+33613(+/02)(/+:.3362)6 6./3#..30.(03+6(+/02)3#(+.3#/63+,3/1! /! $ "0/2)#(+#203 )/0)30(/+/(#(-+#/)(-63#203#+#.3/30(/+363*033#'2.3(+/02)2/1! "0+(+#203)/0)30(/+()-+#.3/30(/+3 6$':.363362)6(+#(03#..3360/3)(/+333+.3)/0)30(/++#.3 31(0(3+0-+#.3)/0)30(/+0+31)30.331(0(3+0-/1.300(+300/#(+,/.310/1 00(+3/#20(/++#263.3/(2#/63/1.300(+36 " +&/(+130(/26/+0.((630/(++1/)/*(26,3+3/(2(2+3#/63 鸡 传 染 性 支 气 管 炎 +130(/26/+0.((6& 是 由 传 染 性 支 气 管 炎 病 毒 +130(/26/+0.((6( 26& 引 起 的 鸡 的 一 种 急 性 高 度 接 触 性 传 染 病 & 以 呼 吸 道 症 状 产 蛋 下 降 和 肾 脏 病 变 为 特 征 是 继 禽 流 感 新 城 疫 传 染 性 法 氏 囊 病 和 马 立 克 氏 病 四 大 禽 病 后 的 又 一 较 重 要 的 传 染 病 给 养 禽 业 造 成 了 严 重 的 损 失 目 前 国 内 外 普 遍 采 用 弱 毒 疫 苗 防 制 & 但 是 一 方 面 某 些 弱 毒 疫 苗 毒 力 极 易 返 强 易 成 为 潜 在 传 染 源 的 供 体 另 一 方 面 & 血 清 型 众 多 不 同 血 清 型 毒 株 之 间 易 发 生 重 组 第 三 尽 管 国 内 有 很 多 疫 苗 生 产 厂 家 提 供 了 多 种 疫 苗 但 应 用 得 比 较 普 遍 的 还 是 国 外 引 进 株 不 一 定 适 合 于 国 内 & 流 行 的 实 际 情 况 和 防 疫 需 求 重 组 禽 痘 病 毒 载 体 疫 苗 以 其 宿 主 特 异 性 强 和 重 组 概 率 小 并 能 真 实 表 达 外 源 基 因 等 特 点 为 & 新 型 疫 苗 的 研 制 提 供 了 一 个 可 能 的 途 径 $ 各 国 学 者 利 用 鸡 痘 病 毒 载 体 先 后 表 达 了 禽 流 感 病 毒 的 血 凝 素 基 因 新 城 疫 病 毒 5 的 融 合 蛋 白 基 因 / 和 血 凝 素 神 经 氨 酸 酶 基 因 $ 马 立 克 氏 病 毒 45 的 基 因 传 染 性 法 氏 囊 病 毒 & 的 基 因 传 染 性 喉 气 管 炎 病 毒 : 基 因 等 这 些 重 组 病 毒 的 免 疫 保 护 性 试 验 展 示 了 令 人 鼓 舞 的 前 景 为 了 满 足 & 防 疫 的 实 际 需 要 选 择 & 国 内 流 行 株 %$ 作 为 研 究 对 象 克 隆 了 基 因 将 其 插 入 到 鸡 痘 病 毒 基 因 组 中 分 别 构 建 了 表 达 传 染 性 支 气 管 炎 病 毒 基 因 重 组 鸡 痘 病 毒 及 共 表 达 传 染 性 支 气 管 炎 病 毒 基 因 和 鸡 型 干 扰 素 基 因 重 组 鸡 痘 病 毒 初 步 的 动 物 试 验 证 明 这 株 重 组 病 毒 均 具 有 良 好 的 保 护 效 果 本 试 验 的 目 的 是 对 重 组 鸡 痘 病 毒 的 安 全 性 和 最 适 免 疫 剂 量 进 行 评 估 分 析 其 用 于 临 床 预 防 & 的 可 行 性 材 料 与 方 法 主 要 试 剂 015 聚 合 酶 45: 载 体 购 自 宝 生 物 工 程 大 连 有 限 公 司 淋 巴 细 胞 分 离 液 购 自 天 津 市 灏 洋 生 物 制 品 科 技 有 限 责 任 公 司 544 培 养 基 购 自 (0/ 公 司 新 生 牛 血 清 购 自 兰 州 民 海 生 物 公 司 传 染 性 支 气 管 炎 病 毒 抗 体 检 测 试 剂 盒 购 自 5%% 公 司 毒 种 和 疫 苗 共 表 达 传 染 性 支 气 管 炎 病 毒 基 因 和 鸡 型 干 扰 素 基 因 的 重 组 鸡 痘 病 毒 由 本 实 验 室 构 建 试 验 前 加 入 一 定 比 例 的 明 胶 蔗 糖 保 护 剂 制 成 冻 干 疫 苗 哈 尔 滨 维 科 生 物 技 术 开 发 公 司 试 生 产 批 号 为 重 组 病 毒 含 有 禽 痘 病 毒 早 晚 期 启 动 子 控 制 下 的 目 的 基 因 & %$ 株 系 分 离 自 新 疆 的 能 引 起 肾 脏 病 变 的 毒 株 对 鸡 胚 的 5 为 倍 稀 释 滴 鼻 接 种 羽, 鸡 胚 与, 鸡 攻 毒 时 作 分 离 传 染 性 支 气 管 炎 病 毒 所 用 的 日 龄 鸡 胚 和 白 色 来 航 鸡 由 中 国 农 业 科 学 院 哈 尔 滨 兽 医 研 究 所 实 验 动 物 中 心 提 供 试 验 期 间 实 验 鸡 饲 养 于 该 中 心 禽 病 感 染 室 的 负 压 隔 离 器 中 重 组 疫 苗 的 安 全 性 试 验 将 重 组 疫 苗 对 周 龄 的 鸡 进 行 翅 内 侧 皮 下 注 射 每 只 鸡 接 种 相 当 于! " 接 种 后 观 察 鸡 群 的 精 神 状 态 以 及 局 部 的 反 应 情 况 重 组 疫 苗 最 适 免 疫 剂 量 测 定 将 只 $ 周 龄 的 鸡 随 机 分 为 组 其 中 $ 组 分 别 免 疫!!! 和! $ " 羽 另 外 一 组 为 非 免 疫 对 照 组 试 验 期 间 分
$ 畜 牧 兽 医 学 报 $ 卷 别 饲 养 在 禽 病 感 染 室 的 个 负 压 隔 离 器 中 所 有 免 疫 鸡 在 免 疫 接 种 后 周 用 & %$ 株 病 毒 进 行 滴 鼻 攻 击 攻 击 病 毒 后 每 天 观 察 鸡 群 状 态 记 录 发 病 与 死 亡 情 况 发 病 鸡 的 判 定 标 准 呼 吸 困 难 甩 头 羽 毛 倒 立 精 神 沉 郁 $ 部 分 鸡 出 现 腹 泻 症 状. 抗 体 的 检 测 免 疫 后 每 周 采 血 分 离 血 清 采 用 5%% 公 司 的 & 检 测 试 剂 盒 提 供 的 检 测 方 法 检 测 血 清 抗 体 滴 度 检 测 前 将 待 测 样 品 作! 稀 释 当 值 大 于 时 即 可 判 为 阳 性 攻 毒 后 动 物 排 毒 情 况 检 测 分 别 在 攻 毒 后 的 和 # 从 各 组 鸡 中 随 机 选 取 $ 只 采 集 试 验 鸡 的 喉 拭 子 进 行 病 毒 分 离 判 定 阳 性 率 体 质 量 检 测 所 有 鸡 分 别 在 免 疫 前 免 疫 后 # 攻 毒 前 和 攻 毒 后 # 称 量 体 质 量 应 用 统 计 学 软 件 对 其 进 行 统 计 学 分 析 结 果 重 组 鸡 痘 病 毒 疫 苗 的 安 全 性 试 验 重 组 鸡 痘 病 毒 疫 苗 在 免 疫 接 种 后 # 所 有 实 验 鸡 的 接 种 部 位 均 出 现 不 同 程 度 肿 胀 # 肿 胀 的 厚 度 达 到 最 大 此 后 肿 胀 开 始 消 退 在 整 个 观 察 期 间 未 见 接 种 部 位 出 现 结 痂 现 象 接 种 后 $# 所 有 的 实 验 鸡 注 射 局 部 均 恢 复 正 常 所 有 实 验 鸡 均 未 出 现 其 它 全 身 反 应 精 神 食 欲 不 受 影 响 结 果 表 明 即 使 采 用 原 倍 重 组 疫 苗 注 射 也 未 引 起 实 验 鸡 发 病 重 组 疫 苗 是 安 全 的 不 同 剂 量 重 组 病 毒 接 种 组 局 部 反 应 接 种 重 组 疫 苗 后!! $ " 鸡 剂 量 组 实 验 鸡 接 种 局 部 均 出 现 肿 胀 反 应! " 鸡 剂 量 组 仅 有 的 实 验 鸡 出 现 局 部 反 应 局 部 肿 胀 的 变 化 情 况 与 大 剂 量 接 种 试 验 中 所 观 察 到 的 现 象 类 似 除 此 之 外 所 有 的 试 验 均 未 见 其 它 异 常 表 现 不 同 免 疫 组 抗. 抗 体 的 变 化 从 图 的 结 果 可 以 看 出 重 组 疫 苗 免 疫 鸡 后 周 就 可 以 检 测 到 & 抗 体 此 后 抗 体 水 平 稳 步 上 升 在 受 到 & 强 毒 攻 击 之 后 抗 体 水 平 进 一 步 提 高 $ 个 不 同 剂 量 的 免 疫 组 之 间!! $ " 免 疫 组 间 $+ 值 比 较 接 近 高 于! " 免 疫 组 根 据 图 的 抗 体 检 测 结 果 判 断 重 组 疫 苗 的 最 适 免 疫 剂 量 为!! $ " 在 临 床 免 疫 实 践 中 对 于 活 疫 苗 而 言 一 般 按 照 最 小 免 疫 剂 量 的 倍 确 定 为 临 床 免 疫 剂 量 即 本 重 组 疫 苗 的 临 床 免 疫 剂 量 为! " 图 中 表 示 用 & %$ 株 强 毒 攻 击 的 时 间 6./.3(3/10- %$6(+ 图 不 同 剂 量 的 重 组 鸡 痘 病 毒 基 因 工 程 疫 苗 免 疫 后 抗. 抗 体 变 化 %12/$'%*& /0&'%')%)3'/ %$'%4%&'+%%/'&&/)&*% ''"))%' 不 同 免 疫 组 攻 毒 后 鸡 的 死 亡 和 发 病 情 况 表 的 试 验 结 果 表 明 当 免 疫 剂 量! " 时 免 疫 鸡 对 & 强 毒 攻 击 的 发 病 保 护 率 均 可 达 到 ' 以 上 彼 此 之 间 差 异 不 显 著 但 与 非 免 疫 对 照 相 比 差 异 显 著 或 极 显 著 而! " 免 疫 组 对 & 强 毒 攻 击 的 保 护 率 仅 有 $' 与 非 免 疫 对 照 相 比 差 异 不 显 著 攻 毒 后 排 毒 检 测 表 结 果 表 明 免 疫 鸡 攻 击 & 后 排 毒 情 况 的 检 测 结 果 与 发 病 保 护 结 果 和 血 清 抗 体 的 检 测 结 果 具 有 相 同 的 趋 势 即!! $ " 这 个 免 疫 剂 量 组 的 排 毒 情 况 要 轻 于! " 免 疫 剂 量 组 攻 毒 前 后 实 验 鸡 体 质 量 变 化 所 有 免 疫 组 和 非 免 疫 对 照 组 实 验 鸡 的 体 质 量 在 攻 毒 前 和 攻 毒 后 都 没 有 显 著 差 异 这 说 明 当 重 组 鸡 痘 病 毒 接 种 试 验 鸡 后 表 达 的 鸡 发 挥 了 调 节 作 用 减 轻 了 鸡 痘 病 毒 载 体 对 接 种 鸡 体 质 量 增 加 的 抑 制 作 用 讨 论 前 面 的 试 验 已 经 证 实 将 传 染 性 支 气 管 炎 病 毒 基 因 和 鸡 型 干 扰 素 基 因 插 入 鸡 痘 病 毒
期 石 星 明 等 表 达 传 染 性 支 气 管 炎 基 因 和 基 因 重 组 鸡 痘 病 毒 安 全 性 与 最 适 免 疫 剂 量 分 析 表 /,. 不 同 剂 量 免 疫 组.56 株 攻 击 后 的 发 病 情 况 2*#,/&)%&'/%&&%/'&1/&$0/56/%')#'1 免 疫 剂 量 发 病 数 总 数 发 病 保 护 率 ' 死 亡 数 总 数 死 亡 保 护 率 ' 5/63/1(2+((/+ 4/(#(-:/)(# /30(/+3 4/)(-:/)(# 53./30(/+3 " " " " $ $ </+/) $ 和 分 别 表 示 各 剂 量 组 与 对 照 组 之 间 发 病 率 的 差 异 情 况 相 同 者 表 示 差 异 不 显 著 不 同 者 表 示 差 异 显 著 表 示 与 </+/) 组 相 比 差 异 极 显 著 +# 6./.3#(133+/(#(-/1(2+3,/26+#0/+/).363)33#/+/3#(133+03)33)#(1 133+)33#/+/3#(136(,+(1(0+)-#/+/33-6(,+(1(0+#(133+03 表 /,. 不 同 剂 量 免 疫 组.56 株 攻 击 后 排 毒 情 况 2*#.%/$%&#%&'/$#&%/'&1/&$0/56/%')#'1 免 疫 剂 量 5/63/1(2+((/+ #-6130.)3+,3 #-6130.)3+,3 #-6130.)3+,3 #-6130.)3+,3 " $ $ $ $ " $ $ $ $ " $ $ $ $ " $ $ $ $ </+/) $ $$ $ $ 基 因 组 中 不 会 影 响 病 毒 的 复 制 重 组 病 毒 能 在 < 细 胞 中 稳 定 地 传 代 通 过 次 的 继 代 基 因 和 基 因 核 苷 酸 序 列 均 没 有 发 生 变 化 是 一 个 良 好 的 重 组 疫 苗 候 选 毒 株 通 过 本 试 验 证 明 使 用 原 倍 的 重 组 病 毒 大 剂 量 接 种 实 验 鸡 除 了 在 接 种 的 局 部 出 现 肿 胀 之 外 实 验 鸡 没 有 出 现 异 常 表 现 证 明 重 组 病 毒 对 周 龄 的 雏 鸡 也 十 分 安 全 在 临 床 上 鸡 痘 疫 苗 的 正 常 接 种 时 间 一 般 都 选 择 在 周 龄 以 后 所 以 按 照 鸡 痘 疫 苗 的 免 疫 程 序 实 施 重 组 鸡 痘 病 毒 基 因 工 程 疫 苗 的 免 疫 接 种 在 生 产 实 践 中 应 该 是 可 行 的 本 试 验 的 结 果 表 明 重 组 病 毒 对 实 验 鸡 翅 内 侧 皮 下 接 种 能 产 生 良 好 的 免 疫 力 在 接 种 剂 量 为!! $ " 鸡 的 范 围 内 可 以 使 全 部 实 验 鸡 产 生 局 部 反 应 当 接 种 剂 量 为! " 鸡 时 可 以 使 部 分 实 验 鸡 产 生 局 部 反 应 但 仍 有 一 定 的 免 疫 力 攻 毒 试 验 结 果 进 一 步 证 明 当 接 种 剂 量 为!! $ " 时 可 以 使 免 疫 鸡 产 生 比 较 可 靠 的 免 疫 力 对 & %$ 株 攻 击 的 发 病 保 护 率 达 $ 到 ' 以 上 王 云 峰 等 在 评 价 表 达 传 染 性 喉 气 管 炎 病 毒 基 因 重 组 鸡 痘 病 毒 疫 苗 的 最 小 免 疫 剂 量 时 发 现 当 接 种 剂 量 为! " 时 可 以 使 免 疫 鸡 产 生 可 靠 免 疫 力 抵 抗 传 染 性 喉 气 管 炎 病 毒 株 强 毒 和 鸡 痘 病 毒 株 的 攻 击 而 在 免 疫 剂 量 为! " 时 仅 能 对 传 染 性 喉 气 管 炎 强 毒 株 的 攻 击 产 生 可 靠 保 护 对 鸡 痘 病 毒 强 毒 株 只 能 产 生 部 分 保 护 这 与 本 试 验 中 所 得 到 的 结 论 是 一 致 的 王 云 峰 在 评 价 共 表 达 传 染 性 喉 气 管 炎 病 毒 基 因 和 新 城 疫 病 毒 / 基 因 重 组 鸡 痘 病 毒,& 的 最 小 反 应 剂 量 时 认 为 在! " 以 上 的 剂 量 范 围 内 不 同 剂 量 的 免 疫 组 之 间 对 : 株 和 5 $ 株 攻 击 的 保 护 率 之 间 没 有 显 著 差 异 存 在 一 个 剂 量 范 围 综 合 上 述 情 况 可 以 认 为 采 用 鸡 痘 病 毒 作 为 载 体 研 制 基 因 工 程 活 载 体 疫 苗 的 时 候 要 注 意 在 特 定 的 剂 量 范 围 内 疫 苗 的 保 护 效 果 不 会 因 为 免 疫 剂 量 的 提 高 而 逐 步 提 高 所 以 在 临 床 实 践 中 确 定 一 个 合 适 的 免 疫 剂 量 就 显 得 尤 其 重 要 就 本 试 验 而 言 因 为 在!! " 之 间 是 一 个 倍 关 系 的 跨 度 所 获 得 的 最 小 免 疫 剂 量 的 数 据 可 能 并 没 有 真 实 地 反 映 该 疫 苗 的 实 际 情 况 需 要 在 将
畜 牧 兽 医 学 报 $ 卷 来 的 研 究 中 进 一 步 细 化 剂 量 间 隔 以 获 得 更 加 精 确 的 试 验 结 果 按 照 本 试 验 中 获 得 的 数 据 可 以 初 步 认 为 共 表 达 传 染 性 支 气 管 炎 病 毒 基 因 和 鸡 型 干 扰 素 基 因 重 组 鸡 痘 病 毒 基 因 工 程 疫 苗 的 最 小 免 疫 剂 量 为! " 考 虑 到 实 际 生 产 中 往 往 将 疫 苗 的 免 疫 剂 量 加 倍 的 做 法 可 以 确 定 重 组 疫 苗 的 最 适 免 疫 剂 量 为! " 参 考 文 献 &7<:8:.33)-.(6/-/1(+130(/26/+ 0.((68 $$ ;:58;7& 4" 423- /1.3363+03/1+3(+130(/26/+0.((6(26 #36(,+3#$&8 4;5 &8 =6/)(/++# 0.03((/+/1(+130(/26/+0.((6(2663/-3 5 8# $$ $97 >::7 7 3)/ 30(/++#6-+3,(6-30/(++1/)/*0 0(+363*366(+,,3+361/ 43?6#(6363(26 8 $ ;;75 730/(++1/)/*(26 00(+36,(+626)(+(2)3+ 43?6#(6363 (26,3+363@23+03+)-6(6+#0/(6/+/10 0(+331(00-(+630(1(0./,3+133+#/#20(/+ 0.(03+68# >7< >74 8 ; &3) 730/(++1/)/*(260/3*366(+,0.(03+-3 (+313/++# 306)3#(6363(26 +#,3+36(+1)23+03/1/+/30(331(00-+#.2 /)36/+63/10.(03+1/)/(+,(+////6.0.#(+(6(/+/130/(++(26 8 $ :;99843)/30 (/+/10.(03+61/(+130(/26)-+,/0.3((6(. 30/(++1/)/*(263*366(+,,)-0//3(+ & /1(+130(/26)-+,/0.3((6 (26 8 %$$ =;< " >98 3)/30(/+ /10.(03+6,(+6.(,.)-)3.) +# (+(+1)23+(2636 (.30/(++1/)/* (26 0/3*366(+,.3,,)2(+(+ +# +32(+(#63,3+36 8 % 智 海 东 王 云 峰 张 晶 等 传 染 性 喉 气 管 炎 新 城 疫 鸡 痘 重 组 病 毒 免 疫 效 力 的 研 究 8 畜 牧 兽 医 学 报 田 占 成 孙 永 科 王 云 峰 等 表 达 传 染 性 支 气 管 炎 病 毒 基 因 重 组 鸡 痘 病 毒 的 构 建 8 中 国 预 防 兽 医 学 报 $$$ 田 占 成 孙 永 科 王 云 峰 等 表 达 鸡 传 染 性 支 气 管 炎 病 毒 基 因 重 组 鸡 痘 病 毒 对 鸡 的 免 疫 保 护 作 用 8 畜 牧 兽 医 学 报 孙 永 科 田 占 成 王 云 峰 等 鸡 传 染 型 支 气 管 炎 病 毒 基 因 和 鸡 型 干 扰 素 基 因 在 重 组 鸡 痘 病 毒 中 的 表 达 8 畜 牧 兽 医 学 报 " >; % +3,3+/-3/1+3././,3+(0(+130(/26 /+0.((6 (26 0(02)3# (+ 00(+3#+# +/+00(+3#1)/06(+ <.(+ 8 (+./)$ $ 王 云 峰 智 海 东 王 玫 等 表 达 传 染 性 喉 气 管 炎 病 毒,& 基 因 重 组 鸡 痘 病 毒 疫 苗 的 安 全 性 试 验 与 最 小 免 疫 剂 量 测 定 8 中 国 预 防 兽 医 学 报 $$$$$ 王 云 峰 表 达 多 种 外 源 基 因 的 鸡 痘 病 毒 载 体 疫 苗 构 建 及 免 疫 学 评 价 5 北 京 中 国 农 业 科 学 院 研 究 生 院