3. 稀 释 样 本 通 常 在 送 检 的 样 本 中, 各 种 细 胞 相 互 重 叠 分 析 仪 无 法 在 此 情 况 下 准 确 地 计 算 血 细 胞 的 数 目 或 统 计 血 细 胞 的 体 积 分 布 因 此, 在 分 析 仪 计 数 或 统 计 体 积 分 布 之 前, 需 要

1. 概 述 本 分 析 仪 采 用 电 阻 抗 法 检 测 红 细 胞 白 细 胞 和 血 小 板 的 数 目 以 及 体 积 分 布, 采 用 比 色 法 测 量 血 红 蛋 白 浓 度 在 此 基 础 之 上, 分 析 仪 计 算 出 其 余 参 数 的 结 果 2. 吸 取 样 本 在 全 血 工 作 模 式 下, 操 作 者 可 直 接 将 全 血 样 本 送 至 分 析 仪 进 行 采 样 此 时, 分 析 仪 将 吸 取 17 μl 的 全 血 样 本 在 预 稀 释 工 作 模 式 下, 操 作 者 应 先 将 20 μl 的 末 梢 血 样 本 和 0.38 ml 的 稀 释 液 在 机 外 混 合, 形 成 稀 释 比 为 1:20 的 稀 释 样 本, 然 后 再 将 此 稀 释 样 本 送 至 分 析 仪 进 行 采 样 此 时, 分 析 仪 将 吸 入 146.34uL 的 该 稀 释 样 本

3. 稀 释 样 本 通 常 在 送 检 的 样 本 中, 各 种 细 胞 相 互 重 叠 分 析 仪 无 法 在 此 情 况 下 准 确 地 计 算 血 细 胞 的 数 目 或 统 计 血 细 胞 的 体 积 分 布 因 此, 在 分 析 仪 计 数 或 统 计 体 积 分 布 之 前, 需 要 先 对 样 本 进 行 稀 释 使 稀 释 后 的 血 细 胞 能 够 单 个 地 通 过 检 测 小 孔, 同 时 为 计 数 提 供 导 电 环 境, 完 成 细 胞 个 数 和 体 积 大 小 的 测 量 通 常 红 细 胞 比 白 细 胞 多 1000 倍, 计 量 白 细 胞 必 须 首 先 消 除 红 细 胞 对 它 的 干 扰, 红 细 胞 通 常 无 细 胞 核, 溶 血 剂 可 以 溶 解 红 细 胞 膜 从 而 消 除 白 细 胞 稀 释 液 中 的 红 细 胞 所 以, 在 计 数 前 应 将 溶 血 剂 加 到 白 细 胞 稀 释 样 本 中 以 消 除 红 细 胞 针 对 不 同 的 样 本, 分 析 仪 提 供 两 种 不 同 的 工 作 模 式 全 血 模 式 和 预 稀 释 模 式 3.1 全 血 模 式 全 血 样 本 9uL 去 除 8uL 吸 血 样 17uL 稀 释 底 液 1.15ml+1.2ml 样 本 稀 释 比 为 1:262.11 吸 34uL 二 次 样 本 稀 释 液 1.8mL 溶 血 剂 0.35ml 血 样 与 稀 释 液 混 合 0.8mL WBC 样 本 稀 释 比 为 1:302 RBC 样 本 稀 释 比 1:20000 图 3-1 全 血 模 式 稀 释 流 程 如 图 3-1 所 示, 在 全 血 模 式 下 吸 样 量 为 17 μl 时, 分 析 仪 吸 入 的 17 μl 的 全 血 样 本 去 掉 头 尾 段 后 剩 余 9 μl, 先 后 与 1.15mL 和 1.2mL 的 稀 释 液 混 合, 形 成 稀 释 比 约 为 1:262.11 的 稀 释 样 本 此 稀 释 样 本 将 被 分 成 两 部 分 使 用 : 其 中 34 μl 将 先 后 和 约 1.8 ml 的 稀 释 液 以 及 0.8mL 的 血 样 与 稀 释 液 的 混 合 液 混 合, 形 成 稀 释 比 约 为 1:20000 的 计 数 样 本, 用 于 计 算 红 细 胞 和 血 小 板 的 数 目, 并 生 成 相 应 的 分 布 直 方 图 ; 剩 余 的 样 本 将 与 0.35 ml 的 溶 血 剂 混 合, 形 成 稀 释 比 约 为 1:302 的 计 数 样 本, 用 于 测 量 血 红 蛋 白 的 浓 度 和 计 算 白 细 胞 的 数 目, 并 生 成 白 细 胞 分 布 直 方 图

3.2 预 稀 释 模 式 末 梢 血 样 本 20uL 稀 释 液 0.38mL 稀 释 比 为 1:20 的 样 本 稀 释 液 1.4mL 取 146.34uL 血 样 与 稀 释 液 混 合 0.95mL 稀 释 比 为 1:321.17 的 样 本 取 37.39uL 稀 释 液 1.8mL 溶 血 剂 0.35ml 血 样 与 稀 释 液 混 合 0.8mL 稀 释 比 为 1:369.77 的 白 细 胞 计 数 样 本 稀 释 比 为 1:22333.07 的 红 细 胞 / 血 小 板 计 数 样 本 图 3-2 预 稀 释 模 式 稀 释 流 程 如 上 图 所 示, 在 预 稀 释 模 式 下, 先 将 20 μl 的 末 梢 血 和 0.38 ml 的 稀 释 液 混 合 ( 机 外 稀 释 ), 形 成 约 为 1:20 的 稀 释 样 本 分 析 仪 吸 入 146.34uL 的 该 稀 释 样 本, 与 机 内 稀 释 液 组 成 0.95mL 的 混 合 液, 再 加 入 到 1.4 ml 稀 释 液 中, 形 成 稀 释 比 约 为 1:321.17 的 稀 释 样 本 此 稀 释 样 本 将 被 分 成 两 部 分 使 用 : 其 中 37.39 μl 将 先 和 约 1.8 ml 的 稀 释 液 混 合, 然 后 同 0.8mL 的 血 样 与 稀 释 液 的 混 合 液 混 合, 形 成 稀 释 比 约 为 1: 22333.07 的 计 数 样 本, 用 于 计 算 红 细 胞 和 血 小 板 的 数 目, 并 生 成 相 应 的 分 布 直 方 图 ; 剩 余 的 稀 释 样 本 将 与 0.35 ml 的 溶 血 剂 混 合, 形 成 稀 释 比 约 为 1:369.77 的 计 数 样 本, 用 于 测 量 血 红 蛋 白 的 浓 度 和 计 算 白 细 胞 的 数 目, 并 生 成 白 细 胞 分 布 直 方 图

4. 白 细 胞 / 血 红 蛋 白 测 量 4.1 体 积 计 量 原 理 对 计 数 期 间 流 过 小 孔 的 样 本 量 进 行 精 确 地 控 制 是 获 得 准 确 的 计 数 结 果 的 前 提 在 本 分 析 仪 中, 对 此 样 本 量 的 控 制 由 体 积 计 量 单 元 完 成 白 细 胞 体 积 计 量 单 元 包 括 体 积 计 量 管 和 两 个 光 电 传 感 器 计 量 管 确 保 在 每 个 计 数 周 期 对 流 过 检 测 小 孔 的 稀 释 后 样 本 量 进 行 测 量 样 本 量 由 两 个 光 电 传 感 器 之 间 的 液 量 决 定 冲 洗 液 使 稀 释 后 样 本 在 计 量 管 中 形 成 液 面, 当 液 面 经 过 计 量 管 上 部 的 时, 产 生 一 个 电 信 号, 计 数 开 始 ; 当 液 面 到 达 下 部 的 时, 再 产 生 一 个 电 信 号, 计 数 结 束, 如 图 3-3 所 示 如 果 在 这 个 过 程 中, 液 路 中 有 气 泡 或 其 他 不 正 常 的 流 动 情 况, 仪 器 将 产 生 气 泡 或 堵 孔 报 警, 处 理 方 法 请 参 照 第 11 章 故 障 处 理 的 相 关 内 容 1 计 数 开 始, 排 空 计 量 管 2 计 数 过 程 中, 液 面 由 上 向 下 落 3 液 面 经 过, 计 数 开 始 4 液 面 经 过, 计 数 结 束 图 3-3 计 数 过 程 中 的 体 积 计 量 4.2 测 量 原 理 白 细 胞 计 数 原 理 本 分 析 仪 利 用 电 阻 抗 法 对 白 细 胞 进 行 计 数 当 吸 取 的 定 量 样 本 被 定 量 的 导 电 溶 液 所 稀 释 之 后, 就 被 送 到 分 析 仪 的 检 测 单 元 检 测 单 元 有 一 个 小 的 开 口, 叫 做 检 测 小 孔 小 孔 两 侧 有 一 对 正 负 电 极, 连 接 恒 流 电 源 由 于 细 胞 具 有 不 良 导 体 的 特 性, 稀 释 样 本 中 的 细 胞 在

恒 定 负 压 的 作 用 下 通 过 检 测 小 孔 的 时 候, 电 极 间 的 直 流 电 阻 就 会 发 生 变 化, 从 而 在 电 极 两 端 形 成 一 个 同 细 胞 体 积 大 小 成 比 例 的 脉 冲 变 化 当 细 胞 连 续 地 通 过 小 孔, 就 在 电 极 两 端 产 生 一 连 串 的 电 脉 冲 脉 冲 的 个 数 与 通 过 小 孔 的 细 胞 数 相 当, 脉 冲 的 幅 度 与 细 胞 的 体 积 成 正 比 将 采 集 到 的 电 脉 冲 放 大 后 与 正 常 白 细 胞 体 积 范 围 所 对 应 的 通 道 电 压 范 围 相 比 较, 计 算 出 电 脉 冲 幅 度 落 在 白 细 胞 通 道 内 的 电 脉 冲 个 数 由 此, 所 有 采 集 到 的 电 脉 冲 根 据 不 同 的 通 道 电 压 范 围 进 行 了 分 类, 落 在 白 细 胞 通 道 内 的 电 脉 冲 个 数 就 是 白 细 胞 的 个 数 依 据 脉 冲 电 压 范 围 划 分 的 每 一 个 通 道 内 的 细 胞 个 数 决 定 了 细 胞 的 体 积 分 布 图 3-4 计 数 原 理 图 血 红 蛋 白 浓 度 测 量 原 理 血 红 蛋 白 浓 度 应 用 比 色 法 测 量 在 白 细 胞 计 数 池 中, 被 稀 释 的 样 本 加 入 溶 血 剂 后, 红 细 胞 膜 溶 解, 释 放 出 血 红 蛋 白, 后 者 与 溶 血 剂 结 合 后 形 成 血 红 蛋 白 复 合 物, 在 白 细 胞 计 数 池 的 一 侧 用 中 心 波 长 为 530~535nm 的 LED 单 色 发 光 管 照 射 血 红 蛋 白 复 合 物 溶 液, 在 另 一 侧 通 过 光 电 管 接 受 透 射 光, 光 强 信 号 先 转 换 为 电 流 信 号, 再 转 换 为 电 压 信 号 后 放 大, 通 过 与 白 细 胞 计 数 池 中 加 入 样 本 之 前 ( 计 数 池 中 只 有 稀 释 液 ) 测 得 的 本 底 透 射 光 强 产 生 的 电 压 比 较, 得 到 样 本 的 血 红 蛋 白 浓 度 (HGB), 单 位 为 g/l 此 测 量 和 计 算 过 程 由 分 析 仪 自 动 完 成, 结 果 将 显 示 在 样 本 分 析 界 面 的 分 析 结 果 区

本 底 透 过 光 强 HGB 常 数 Log10 样 本 透 过 光 强 4.3 白 细 胞 参 数 白 细 胞 数 目 分 析 仪 通 过 直 接 测 量 白 细 胞 对 应 的 电 脉 冲 个 数 获 取 白 细 胞 数 目 (WBC), 单 位 为 10 9 / L 在 某 些 情 况 下, 样 本 中 存 在 有 核 红 细 胞, 溶 血 剂 无 法 溶 解 其 细 胞 核 膜 此 时, 这 些 细 胞 核 也 会 被 当 作 白 细 胞 进 行 计 数 因 此, 如 果 在 显 微 镜 下 发 现 血 液 中 存 在 有 核 红 细 胞 时, 操 作 者 需 按 以 下 公 式 对 白 细 胞 数 目 进 行 修 正 : 100 WBC' =WBC 100+ NRBC 其 中,WBC 是 修 正 后 的 白 细 胞 数 目,WBC 是 分 析 仪 显 示 的 白 细 胞 数 目, NRBC 是 通 过 涂 片 测 得 的 每 100 个 白 细 胞 中 的 有 核 红 细 胞 个 数 白 细 胞 三 分 群 白 细 胞 中 包 含 了 多 种 类 型 的 细 胞, 可 根 据 其 体 积 大 小 对 其 进 行 划 分 每 种 类 型 的 细 胞 体 积 根 据 加 入 的 稀 释 液 溶 血 剂 和 溶 血 时 间 的 不 同 会 发 生 变 化 通 过 一 定 的 试 剂 作 用 可 以 实 现 白 细 胞 的 三 分 群, 按 体 积 由 小 到 大 分 为 : 淋 巴 细 胞, 中 间 细 胞 ( 包 括 单 核 细 胞 嗜 酸 性 粒 细 胞 嗜 碱 性 粒 细 胞 ) 和 中 性 粒 细 胞 分 析 仪 根 据 白 细 胞 分 布 直 方 图, 按 以 下 公 式 计 算 出 淋 巴 细 胞 百 分 比 (Lymph%) 中 间 细 胞 百 分 比 (Mid%) 和 中 性 粒 细 胞 百 分 比 (Gran%), 以 上 三 个 参 数 单 位 均 为 % Lymph% PL 100 PL PM PG Mid% Gran% PM 100 PL PM PG PG 100 PL PM PG 其 中,PL 是 淋 巴 细 胞 区 域 内 的 细 胞 数,PM 为 中 间 细 胞 区 域 内 的 细 胞 数,PG 为 中 性 粒 细 胞 区 域 内 的 细 胞 数, 以 上 三 个 参 数 单 位 均 为 10 9 /L 分 析 仪 根 据 以 上 公 式 得 到 的 各 子 群 细 胞 所 占 的 百 分 比, 自 动 按 以 下 公 式 计 算 出 淋 巴 细 胞 数 目 (Lymph#) 中 间 细 胞 数 目 (Mid#) 和 中 性 粒 细 胞 数 目 (Gran#), 以 上 三 个 参 数 单 位 均 为 10 9 /L

Lymph% WBC Lymph# 100 Mid% WBC Mid# 100 Gran% WBC Gran# 100 其 中, Lymph% Mid% 和 Gran% 的 单 位 均 为 %,WBC 单 位 为 10 9 /L 白 细 胞 分 布 直 方 图 本 分 析 仪 在 给 出 白 细 胞 计 数 结 果 的 同 时 提 供 白 细 胞 体 积 分 布 图 形 直 方 图 的 横 坐 标 为 白 细 胞 体 积 ( 单 位 :fl), 纵 坐 标 为 白 细 胞 相 对 数 量 ( 单 位 :10 9 /L) 每 一 次 计 数 后, 可 在 样 本 分 析 界 面 的 分 析 结 果 区 查 看 白 细 胞 分 布 直 方 图, 也 可 进 入 回 顾 界 面 以 回 顾 方 式 查 看 白 细 胞 分 布 直 方 图 WBC n 10 9 / L 4.4 血 红 蛋 白 浓 度 参 数 血 红 蛋 白 浓 度 (HGB), 单 位 为 g/l 本 底 透 过 光 强 HGB 常 数 Log10 样 本 透 过 光 强 3-8

5. 红 细 胞 / 血 小 板 测 量 5.1 体 积 计 量 原 理 对 计 数 期 间 流 过 小 孔 的 样 本 量 进 行 精 确 地 控 制 是 获 得 准 确 的 计 数 结 果 的 前 提 在 本 分 析 仪 中, 对 此 样 本 量 的 控 制 由 体 积 计 量 单 元 完 成 白 细 胞 体 积 计 量 单 元 包 括 体 积 计 量 管 和 两 个 光 电 传 感 器 计 量 管 确 保 在 每 个 计 数 周 期 对 流 过 检 测 小 孔 的 稀 释 后 样 本 量 进 行 测 量 样 本 量 由 两 个 光 电 传 感 器 之 间 的 液 量 决 定 冲 洗 液 使 稀 释 后 样 本 在 计 量 管 中 形 成 液 面, 当 液 面 经 过 计 量 管 上 部 的 时, 产 生 一 个 电 信 号, 计 数 开 始 ; 当 液 面 到 达 下 部 的 时, 再 产 生 一 个 电 信 号, 计 数 结 束, 如 图 3-5 所 示 如 果 在 这 个 过 程 中, 液 路 中 有 气 泡 或 其 他 不 正 常 的 流 动 情 况, 仪 器 将 产 生 气 泡 或 堵 孔 报 警, 处 理 方 法 请 参 照 第 11 章 故 障 处 理 的 相 关 内 容 1 计 数 开 始, 排 空 计 量 管 2 计 数 过 程 中, 液 面 由 上 向 下 落 3 液 面 经 过, 计 数 开 始 4 液 面 经 过, 计 数 结 束 图 3-5 计 数 过 程 中 的 体 积 计 量 5.2 阻 抗 法 原 理 本 分 析 仪 利 用 电 阻 抗 法 对 红 细 胞 / 血 小 板 进 行 计 数 当 吸 取 的 定 量 样 本 被 定 量 的 导 电 溶 液 所 稀 释 之 后, 就 被 送 到 分 析 仪 的 检 测 单 元 检 测 单 元 有 一 个 小 的 开 口, 叫 做 检 测 小 孔 小 孔 两 侧 有 一 对 正 负 电 极, 连 接 恒 流 电 源 由 于 细 胞 具 有 不 良 导 体 的 特 性, 稀 释 样 本 中 的 细 胞 在 恒 定 负 压 的 作 用 下 通 过 检 测 小 孔 的 时 候, 电 极 间 的 直 流 电 阻 就 会 发 生 变 化, 从 而 在

电 极 两 端 形 成 一 个 同 细 胞 体 积 大 小 成 比 例 的 脉 冲 变 化 当 细 胞 连 续 地 通 过 小 孔, 就 在 电 极 两 端 产 生 一 连 串 的 电 脉 冲 脉 冲 的 个 数 与 通 过 小 孔 的 细 胞 数 相 当, 脉 冲 的 幅 度 与 细 胞 的 体 积 成 正 比 将 采 集 到 的 电 脉 冲 放 大 后 与 正 常 的 红 细 胞 / 血 小 板 体 积 范 围 所 对 应 的 通 道 电 压 阈 值 相 比 较, 计 算 出 电 脉 冲 幅 度 落 在 红 细 胞 / 血 小 板 通 道 内 的 电 脉 冲 个 数 由 此, 所 有 采 集 到 的 电 脉 冲 根 据 不 同 的 通 道 电 压 阈 值 进 行 了 分 类, 落 在 红 细 胞 / 血 小 板 通 道 内 的 电 脉 冲 个 数 就 是 红 细 胞 / 血 小 板 的 个 数 依 据 脉 冲 电 压 范 围 划 分 的 每 一 个 通 道 内 的 细 胞 个 数 决 定 了 细 胞 的 体 积 分 布 图 3-6 计 数 原 理 图 5.3 红 细 胞 参 数 红 细 胞 数 目 10 12 /L 分 析 仪 通 过 直 接 测 量 红 细 胞 对 应 的 电 脉 冲 个 数 获 取 红 细 胞 数 目 (RBC), 单 位 为 RBC n 10 12 / L 平 均 红 细 胞 体 积 根 据 红 细 胞 分 布 直 方 图, 计 算 出 平 均 红 细 胞 体 积 (MCV), 单 位 为 fl 红 细 胞 压 积 平 均 红 细 胞 血 红 蛋 白 含 量 平 均 红 细 胞 血 红 蛋 白 浓 度 按 以 下 公 式 计 算 出 红 细 胞 压 积 (HCT), 单 位 为 %; 平 均 红 细 胞 血 红 蛋 白 含 量 (MCH), 单 位 为 pg; 平 均 红 细 胞 血 红 蛋 白 浓 度 (MCHC), 单 位 为 g/l

HCT RBC MCV 10 HGB MCH RBC HGB MCHC 100 HCT 其 中,RBC 单 位 为 10 12 /L,MCV 单 位 为 fl,hgb 单 位 为 g/l 红 细 胞 分 布 宽 度 变 异 系 数 红 细 胞 分 布 宽 度 变 异 系 数 (RDW-CV) 由 红 细 胞 分 布 直 方 图 得 到 它 是 用 百 分 比 表 示 体 积 分 布 的 变 异 系 数 红 细 胞 分 布 宽 度 标 准 差 红 细 胞 分 布 宽 度 标 准 差 (RDW-SD) 是 相 对 红 细 胞 分 布 直 方 图 峰 值 20% 处 的 直 方 图 宽 度, 单 位 为 fl, 如 图 3-7 所 示 图 3-7 示 意 图 红 细 胞 分 布 直 方 图 本 分 析 仪 在 给 出 红 细 胞 计 数 结 果 的 同 时 提 供 红 细 胞 体 积 分 布 图 形, 这 种 可 以 表 示 出 细 胞 群 体 分 布 情 况 的 图 形 称 为 红 细 胞 分 布 直 方 图 直 方 图 的 横 坐 标 为 红 细 胞 体 积 ( 单 位 :fl), 纵 坐 标 为 红 细 胞 相 对 数 量 ( 单 位 :10 12 /L) 每 一 次 计 数 后, 可 在 样 本 分 析 界 面 的 分 析 结 果 区 查 看 红 细 胞 分 布 直 方 图, 也 可 进 入 回 顾 界 面 以 回 顾 方 式 查 看 红 细 胞 分 布 直 方 图 5.4 血 小 板 参 数 血 小 板 数 目 为 10 9 / L 分 析 仪 通 过 直 接 测 量 红 细 胞 对 应 的 电 脉 冲 个 数 获 取 血 小 板 数 目 (PLT), 单 位

PLT n 10 9 / L 平 均 血 小 板 体 积 根 据 血 小 板 分 布 直 方 图, 计 算 出 平 均 血 小 板 体 积 (MPV), 单 位 为 fl 血 小 板 分 布 宽 度 准 差 (10 GSD) 血 小 板 分 布 宽 度 (PDW) 由 血 小 板 分 布 直 方 图 得 到, 为 血 小 板 体 积 分 布 的 几 何 标 血 小 板 压 积 分 析 仪 通 过 以 下 公 式 计 算 血 小 板 压 积 (PCT), 单 位 为 % 其 中,PLT 单 位 为 10 9 /L,MPV 单 位 为 fl PLT MPV PCT 10000 大 血 小 板 比 率 根 据 血 小 板 分 布 直 方 图, 计 算 出 大 血 小 板 比 率, 单 位 为 % 血 小 板 分 布 直 方 图 本 分 析 仪 在 给 出 血 小 板 计 数 结 果 的 同 时 提 供 血 小 板 体 积 分 布 图 形, 这 种 可 以 表 示 出 细 胞 群 体 分 布 情 况 的 图 形 称 为 血 小 板 分 布 直 方 图 直 方 图 的 横 坐 标 为 血 小 板 体 积 ( 单 位 :fl), 纵 坐 标 为 血 小 板 相 对 数 量 ( 单 位 :10 9 / L) 每 一 次 计 数 后, 可 在 样 本 分 析 界 面 的 分 析 结 果 区 查 看 血 小 板 分 布 直 方 图, 也 可 进 入 回 顾 界 面 以 回 顾 方 式 查 看 血 小 板 分 布 直 方 图