靶 向 药 物 相 关 产 品 介 绍
靶 向 药 物 相 关 产 品 EGFR 基 因 29 种 突 变 检 测 试 剂 盒 KRAS 基 因 7 种 热 点 突 变 检 测 试 剂 盒 BRAF 基 因 V600E 检 测 试 剂 盒 PIK3CA 5 种 突 变 检 测 试 剂 盒 ALK-EML4 融 合 基 因 检 测 试 剂 盒 JAK2 基 因 V617F 突 变 检 测 试 剂 盒 C-KIT 基 因 D816V 突 变 检 测 试 剂 盒 PDGFRA 基 因 D842V 突 变 检 测 试 剂 盒 BCR-ABL 基 因 T315I 突 变 检 测 试 剂 盒 RET 基 因 重 排 检 测 试 剂 盒 RET 基 因 M918T 突 变 检 测 试 剂 盒 MEK1 基 因 3 种 突 变 检 测 试 剂 盒 C-MET 基 因 扩 增 检 测 试 剂 盒
与 靶 疗 相 关 的 基 因 EML4-ALK 基 因 BCR-ABL 基 因 EGFR 基 因 PI3K 基 因 Jak-2 基 因 C-Kit 基 因 EGFR K-ras 基 因 PDGFRA 基 因 B-raf 基 因 MEK1 基 因 Ret 基 因
一 EGFR 基 因 29 种 突 变 EGFR 基 因 突 变 主 要 发 生 于 18-21 外 显 子 上 的 29 种 突 变 其 一 是 药 物 敏 感 性 相 关 突 变, 其 二 是 药 物 耐 药 性 相 关 突 变
以 EGFR 信 号 通 路 为 靶 点 的 药 物 EGFR 靶 向 药 物 小 分 子 酪 氨 酸 激 酶 抑 制 剂 (TKI TKI) 吉 非 替 尼 (Gefitinib Gefitinib, 也 称 为 易 瑞 沙 /Iressa Iressa,, 阿 斯 利 康 ) 厄 罗 替 尼 (Erlotinib Erlotinib,, 也 称 为 特 罗 凯 /Tarceva Tarceva,, 罗 氏 制 药 ) 埃 克 替 尼 (Conmana Conmana, 凯 美 纳, 浙 江 贝 达 ) 单 克 隆 抗 体 (mab mab) 西 妥 昔 单 抗 (Cetuximab Cetuximab,, 也 称 为 爱 必 妥 /Erbitux Erbitux,, 默 克 公 司 ) 帕 尼 单 抗 (Panitumumab Panitumumab,, 也 称 为 维 克 替 比 /Vectibix Vectibix,, 安 进 公 司 ) 相 关 疾 病 非 小 细 胞 肺 癌 (NSCLC NSCLC) 相 关 疾 病 上 述 药 物 通 过 不 同 途 径 阻 断 EGFR 介 导 的 细 胞 内 信 号 通 路, 从 而 抑 制 肿 瘤 生 长 转 移 和 血 管 生 成, 并 促 进 肿 瘤 细 胞 凋 亡
爱 必 妥 帕 尼 单 抗 易 瑞 沙 特 罗 凯 凯 美 纳 TKIs
EGFR29 种 产 品 的 排 布
EGFR 基 因 的 29 中 突 变 位 点
二 KRAS 基 因 7 种 热 点 突 变 KRAS 基 因 突 变 位 点 第 二 外 显 子 的 12 和 13 密 码 子 (95% 95%) 相 关 靶 向 药 物 爱 必 妥 帕 尼 单 抗 相 关 疾 病 结 肠 癌 肺 癌 和 胰 腺 癌
Gifitinib Erlotinib Lapatinib EGFR 信 号 通 路 Trastumab Cetuximab Panitumumab TKIs NATURE REVIEWS CANCER, 2009, 9: 489-499. The epidermal growth factor receptor signalling pathway
12Asp 12Asp 12Asp 12Asp FAM FAM FAM FAM/HEX HEX HEX HEX 12Ala 12Ala 12Ala 12Ala FAM FAM FAM FAM/HEX HEX HEX HEX 12Val 12Val 12Val 12Val FAM FAM FAM FAM/HEX HEX HEX HEX 12Ser 12Ser 12Ser 12Ser FAM FAM FAM FAM/HEX HEX HEX HEX 12Arg 12Arg 12Arg 12Arg FAM FAM FAM FAM/HEX HEX HEX HEX 12Cys 12Cys 12Cys 12Cys FAM FAM FAM FAM/HEX HEX HEX HEX 12Asp 12Asp 12Asp 12Asp FAM FAM FAM FAM/HEX HEX HEX HEX Ctrl Ctrl Ctrl Ctrl FAM FAM FAM FAM
爱 必 妥 帕 尼 单 抗 对 KRAS 野 生 型 转 移 性 结 直 肠 癌 疗 效 明 显 美 国 国 家 癌 症 综 合 治 疗 联 盟 (NCCN NCCN) 结 直 肠 癌 临 床 实 践 指 南 明 确 指 出 : (1) 所 有 转 移 性 结 直 肠 癌 患 者 都 应 检 测 KRAS 基 因 状 态 ; (2) 只 有 KRAS 野 生 型 患 者 才 建 议 接 受 EGFR 抑 制 剂 治 疗
CRYSTAL 研 究 CRYSTAL( 爱 必 妥 联 合 伊 立 替 康 作 为 转 移 性 结 直 肠 癌 一 线 治 疗 的 研 究 ) 研 究 结 果 结 果 表 明, 爱 必 妥 联 合 FOLFOX4 对 肿 瘤 组 织 KRAS 基 因 野 生 型 转 移 性 结 直 肠 癌 患 者 效 果 明 显 比 KRAS 突 变 型 患 者 好
KRAS 产 品 的 排 布 管 号 检 测 试 剂 体 积 荧 光 信 号 1 12-2-A 45μl 2 12-2-C 45μl 3 12-2-T 45μl 4 12-1-A 45μl 5 12-1-C 45μl 6 12-1-T 45μl 7 13-2-A 45μl 8 外 控 45μl FAM,HEX FAM, HEX FAM, HEX FAM, HEX FAM, HEX FAM, HEX FAM, HEX FAM
三 BRAF 基 因 V600E BRAF 基 因 突 变 位 点 靶 向 药 物 相 关 靶 向 药 物 外 显 子 15-T1799 1799A- 导 致 缬 氨 酸 突 变 为 谷 氨 酸 氮 烯 咪 胺 ( 达 卡 巴 嗪,Dacarbazine Dacarbazine) ) 已 上 市 ; Yervoy ( 易 普 利 姆 玛,ipilimumab) 已 上 市 ; Vemurafenib(RG7204 RG7204 PLX4032 PLX4032), 罗 氏 和 Plexxiko 合 作, 已 上 市 爱 必 妥 帕 尼 单 抗 相 关 疾 病 恶 性 黑 色 素 瘤 ( 恶 性 黑 色 素 瘤 (70% 70%) 肺 癌 甲 状 腺 癌 肝 癌 及 胰 腺 癌
四 PIK3CA 基 因 5 种 突 变 PIK3CA 基 因 突 变 位 点 靶 向 药 物 相 关 疾 病 外 显 子 9 20 表 附 后 多 种 肿 瘤
拜 耳 药 物 名 称 研 究 阶 段 作 用 机 制 BAY806946 Ⅰ 期 临 床 mtor P13K 双 重 通 道 Exelixis 赛 诺 菲 XY765 Ⅰ 期 临 床 mtor P13K 双 重 通 道 基 因 泰 克 罗 氏 葛 兰 素 史 克 诺 华 诺 华 辉 瑞 辉 瑞 Semafore GDC0980 Ⅰ 期 临 床 mtor P13K 双 重 通 道 GSK2126458 Ⅰ 期 临 床 mtor P13K 双 重 通 道 BGZ235 Ⅰ Ⅱ 期 临 床 mtor P13K 双 重 通 道 BGT226 Ⅰ Ⅱ 期 临 床 mtor P13K 双 重 通 道 PF04691502 Ⅰ 期 临 床 mtor P13K 双 重 通 道 PKI1587 Ⅰ 期 临 床 mtor P13K 双 重 通 道 SF1126 Ⅰ 期 临 床 mtor P13K 双 重 通 道 Exelixis 赛 诺 菲 XL147 Ⅰ Ⅱ 期 临 床 P13K 基 因 泰 克 罗 氏 GDC0941 Ⅰ 期 临 床 P13K 诺 华 BKM120 Ⅰ Ⅱ 期 临 床 P13K Oncothyreon PX866 Ⅰ Ⅱ 期 临 床 P13K Zenyaku Kogyo ZSTK474 Ⅰ 期 临 床 P13K 诺 华 BYL719 Ⅰ 期 临 床 P13Kα 安 进 AMG319 Ⅰ 期 临 床 P13Kδ Calistoga 制 药 GAL101 Ⅰ Ⅱ 期 临 床 P13Kδ 基 因 泰 克 罗 氏 GDC0032 Ⅰ 期 临 床 未 知 的 P13K
人 类 PIK3CA 基 因 5 种 热 点 突 变 突 变 名 称 氨 基 酸 变 化 碱 基 变 化 Cosmic ID 公 司 命 名 H1047R H1047L E542K E545K E545D 组 氨 酸 到 精 氨 酸 组 氨 酸 到 亮 氨 酸 谷 氨 酸 到 赖 氨 酸 谷 氨 酸 到 赖 氨 酸 谷 氨 酸 到 天 冬 氨 酸 CAT>C T>CGT 775 PI-M-1 CAT>C T>CTT 776 PI-M-2 GAA> AA>AAA 760 PI-M-3 GAG> AG>AAG 763 PI-M-4 GAG>GA >GAT 765 PI-M-5
五 EML4-ALK 融 合 基 因 ( 相 关 蛋 EML4 ) 白 样 棘 皮 动 物 微 管 4 10Mb 瘤 激 酶 ( 间 变 性 淋 巴 ALK ) 2 号 染 色 体 p21 2 号 染 色 体 p23
EML4-ALK 融 合 基 因 EML4-ALK 融 合 基 因 靶 向 药 物 克 唑 替 尼 -PF-02341066 PF-02341066(Crizotinib Crizotinib) 辉 瑞 公 司 ( Pfizer) 2011 年 8 月 获 FDA 批 准 上 市 相 关 疾 病 非 小 细 胞 肺 癌
公 司 命 名 通 用 命 名 EML4 拼 接 外 显 子 ALK 拼 接 外 显 子 COSMIC ID EML4-ALK-M1 EML4-ALK variant 1 13 20 463 EML4-ALK-M2 EML4-ALK variant 3a/b 6a/b 20 474/493 EML4-ALK-M3 EML4-ALK variant 2 20 20 465 EML4-ALK-M4 EML4-ALK variant 4 15 20 475 EML4-ALK-M5 EML4-ALK variant 4 14 20 491 EML4-ALK-M6 EML4-ALK variant 5 18 20 488 EML4-ALK-M7 EML4-ALK variant 5a 2 20 480 EML4-ALK-M8 / 17 20 733 EML4-ALK-M9 EML4-ALK variant 5b 2 20 480
六 JAK2 基 因 V617F 突 变 ( 缬 氨 酸 )V617F V617F( 苯 丙 氨 酸 )
JAK2 基 因 突 变 检 测 可 用 于 骨 髓 增 殖 性 疾 病 (MPD MPD) 的 诊 断 MPD 主 要 包 括 : 真 性 红 细 胞 增 多 症 (PV PV 90% 90%) 原 发 性 血 小 板 增 多 症 (ET ET 50% 50%) 原 发 性 骨 髓 纤 维 化 (IMF IMF)
JAK2 靶 向 药 物 : ruxolitinib ( 诺 华 ) ruxolitinib 不 仅 是 第 一 个 用 于 治 疗 骨 髓 纤 维 化 的 药 物, 而 且 是 目 前 国 际 第 一 个 被 证 实 可 以 阻 断 JAK1 和 JAK2 激 酶 的 抑 制 剂 药 物, 已 获 FDA 批 准 上 市
七 C-KIT 基 因 八 PDGFRA 基 因 九 BCR-ABL 基 因 基 因 名 称 突 变 位 点 相 关 疾 病 靶 向 药 物 C-KIT ( 天 冬 氨 酸 ) D816V( ( 缬 氨 酸 ) 耐 药 性 突 变 外 显 子 9 11 敏 感 性 突 变 胃 肠 间 质 瘤 (GIST GIST) PDGFRA ( 天 冬 氨 酸 ) D842V( ( 缬 氨 酸 ) 耐 药 性 突 变 多 种 肿 瘤 格 列 卫 BCR-ABL ( 苏 氨 酸 ) T315I( ( 异 亮 氨 酸 ) 耐 药 性 突 变 白 血 病
十 RET 基 因 重 排 RET 基 因 在 甲 状 腺 乳 头 状 癌 中 发 生 基 因 重 排 的 方 式 主 要 有 三 种 : 与 同 一 染 色 体 的 H4 及 ELEI 基 因 重 排 后 产 生 了 Ret/PTCl 和 Ret/PTC3 型 癌 基 因, 而 Ret 原 癌 基 因 与 17 号 染 色 体 的 RIa 基 因 重 排 后 产 生 了 Ret/PTC2 型 癌 基 因
十 一 MEK1 基 因 突 变 人 类 MEK1 基 因 3 种 体 细 胞 突 变 突 变 名 称 氨 基 酸 变 化 碱 基 变 化 公 司 命 名 Q56P 谷 氨 酰 胺 到 脯 氨 酸 CAG>C G>CCG MEK1-M-1 K57N 赖 氨 酸 到 天 冬 酰 胺 AAG>AA >AAT MEK1-M-2 D67N 天 冬 氨 酸 到 天 冬 酰 胺 GAC> AC>AAC MEK1-M-3 突 变 位 点 靶 向 药 物 相 关 疾 病 MEK1 基 因 Q56P K57N 敏 感 性 突 变 D67N 耐 药 性 突 变 AZD6244 即 将 上 市 多 种 肿 瘤
公 司 名 称 药 物 名 称 研 究 阶 段 作 用 机 制 阿 斯 利 康 AZD6244 Phase III MEK1 葛 兰 素 史 克 公 司 GSK1120212 Phase I MEK1 葛 兰 素 史 克 公 司 GSK2118436 Phase II MEK1 默 沙 东 雪 兰 诺 MSC1936369B Phase I MEK1 基 因 泰 克 GDC-0973 Phase I MEK1
十 二 c-met 基 因 c-met 是 一 种 原 癌 基 因, 定 位 于 人 第 7 号 染 色 体 7q31 区, 大 小 约 为 110kb, 包 括 21 个 外 显 子 c-met 基 因 扩 增 能 活 化 EGFR 信 号 转 导 通 路 下 游 的 ERBB3/PI3K/AKT 信 号 途 径, 促 进 肿 瘤 细 胞 生 长, 抑 制 其 凋 亡, 引 发 肿 瘤 细 胞 对 EGFR-TKIs 类 药 物 的 耐 药 性, 是 非 小 细 胞 肺 癌 (NSCLC) 对 吉 非 替 尼 厄 洛 替 尼 等 分 子 靶 向 药 物 产 生 继 发 耐 药 的 重 要 机 制 之 一, 也 与 NSCLC 的 预 后 不 良 相 关 分 子 靶 向 新 药 Crizotinib 对 c-met 基 因 扩 增 的 肺 癌 细 胞 具 有 显 著 的 抗 肿 瘤 活 性
内 容 什 么 是 EGFR 突 变 检 测 为 什 么 做 EGFR 突 变 检 测 如 何 做 EGFR 突 变 检 测 检 测 流 程 影 响 因 素 检 测 方 法
一 什 么 是 EGFR 突 变 检 测 EGFR 基 因 所 在 DNA 碱 基 序 列 发 生 变 异 进 行 检 测 检 测 对 象 基 因 突 变 (Gene mutation) 拷 贝 数 改 变 (Copy Number Variation, CNV) 基 因 重 排 (Gene rearrangement) 检 测 技 术 DNA sequencing, ARMS FISH 基 因 表 达 (mrna/rna expression) 反 转 录 + 荧 光 定 量 PCR(RT-qPCR) 蛋 白 ( 质 ) 表 达 (Protein expression) 免 疫 组 织 化 学 (IHC)
EGFR 基 因 突 变 主 要 发 生 于 18-21 外 显 子 上 的 29 种 突 变 其 一 是 药 物 敏 感 性 相 关 突 变, 其 二 是 药 物 耐 药 性 相 关 突 变
二 为 什 么 做 EGFR 突 变 检 测
EGFR 突 变 阴 性 EGFR 突 变 阳 性
三 如 何 做 EGFR 突 变 检 测
用 于 EGFR 突 变 检 测 的 标 本 新 鲜 肿 瘤 组 织 目 前 最 可 靠 的 标 本 肿 瘤 组 织 病 理 蜡 块 肿 瘤 组 织 石 蜡 切 片 :5 微 米 切 片 不 少 于 6 片 血 浆 血 清 不 得 使 用 肝 素 抗 凝 胸 水 ( 晚 期 腺 癌 突 变 率 50%)
样 本 因 素 的 影 响 肿 瘤 组 织 特 点 遗 传 异 质 性 正 常 细 胞 混 杂 对 检 测 方 法 敏 感 度 有 较 高 要 求
DNA 提 取 及 质 控 推 荐 用 QIAGEN 或 同 类 试 剂 盒 提 取 DNA 紫 外 分 光 光 度 计 : 适 合 新 鲜 组 织 DNA 质 控 测 定 总 量 (OD260) 及 DNA 纯 度 (OD260/280) qpcr:ffpe 来 源 DNA 的 最 可 靠 质 控 方 法 检 测 可 扩 增 的 DNA 片 断 评 估 是 否 存 在 PCR 抑 制 剂
艾 德 特 异 双 扩 增 技 术
ARMS 法 操 作 流 程 及 数 据 解 读
小 结 : 如 何 成 功 开 展 EGFR 突 变 检 测 了 解 你 的 标 本 -- 新 鲜 / 冰 冻 组 织 >FFPE 组 织 -- 手 术 标 本 > 小 活 检 标 本 选 择 合 适 的 方 法 -- ARMS 是 目 前 较 敏 感 快 速 方 法, 且 容 易 开 展 -- 测 序 是 传 统 的 方 法, 但 敏 感 度 有 限, 过 程 复 杂, 不 易 普 及 组 织 标 本 及 DNA 质 控 是 关 键
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