平 滑 肌 肌 动 蛋 白 检 测 试 剂 盒 ( 免 疫 组 化 ) 说 明 书 产 品 名 称 通 用 名 称 : 平 滑 肌 肌 动 蛋 白 检 测 试 剂 盒 ( 免 疫 组 化 ) 英 文 名 称 :Smooth Muscle Actin Detection KIT (Immunohistochemistry) 包 装 规 格 30 人 份 / 盒 ;60 人 份 / 盒 预 期 用 途 说 明 书 编 号 :40006a 产 品 编 号 :Kit-0006 用 于 福 尔 马 林 固 定 石 蜡 包 埋 的 人 体 组 织 切 片, 细 胞 中 平 滑 肌 肌 动 蛋 白 抗 原 的 定 性 检 测 阳 性 细 胞 中 抗 原 定 位 为 细 胞 质 检 验 原 理 利 用 免 疫 学 抗 原 抗 体 分 子 由 于 结 构 的 互 补 和 彼 此 亲 和 性 所 发 生 特 异 性 结 合 原 理, 并 通 过 氧 化 还 原 化 学 反 应 使 标 记 抗 体 的 酶 显 色 剂 显 色 来 确 定 组 织 细 胞 内 抗 原, 对 其 进 行 定 位 定 性 首 先 是 联 结 鼠 抗 人 平 滑 肌 肌 动 蛋 白 免 疫 组 化 单 克 隆 抗 体 和 组 织 上 的 平 滑 肌 肌 动 蛋 白 抗 原 ; 第 二 是 酶 标 羊 抗 小 鼠 / 兔 IgG 聚 合 物 识 别 已 经 连 接 上 的 平 滑 肌 肌 动 蛋 白 抗 体 ; 第 三, 加 入 底 物, 聚 合 物 上 的 辣 根 过 氧 化 物 酶 部 分 可 以 催 化 DAB 显 色 液 中 的 H 2 O 2 分 解, 使 联 苯 胺 氧 化 变 成 联 苯 亚 胺, 使 组 织 切 片 中 抗 原 位 点 上 出 现 黄 色 或 棕 黄 色 着 色 ; 最 后 对 样 本 进 行 复 染 和 封 片 通 过 显 微 镜 观 测 显 色 情 况, 推 断 组 织 切 片 上 平 滑 肌 肌 动 蛋 白 的 存 在 位 点 和 情 况 为 了 质 量 控 制, 提 供 福 尔 马 林 固 定 石 蜡 包 埋 的 人 类 子 宫 平 滑 肌 瘤 组 织 切 片 作 为 阳 性 对 照 本 试 剂 盒 采 用 抗 体 克 隆 为 :1A4 ; 细 胞 染 色 定 位 为 细 胞 质 ; 无 需 修 复 抗 原 主 要 组 成 成 份 试 剂 1: 内 源 性 过 氧 化 物 酶 阻 断 剂 3ml/ 瓶 ; 6ml/ 瓶 试 剂 2: 试 剂 3: 一 抗 : 鼠 抗 人 平 滑 肌 肌 动 蛋 白 免 疫 组 化 单 克 隆 抗 体 (IgG2a / kappa; 来 源 : 小 鼠 腹 水 ; 克 隆 号 :1A4) 二 抗 : 酶 标 羊 抗 小 鼠 / 兔 IgG 聚 合 物 ( 动 物 源 性 : 山 羊 IgG; 辣 根 过 氧 化 物 酶 ) 3ml/ 瓶 3ml/ 瓶 6ml/ 瓶 6ml/ 瓶 试 剂 4A: DAB 缓 冲 液 6ml/ 瓶 15ml/ 瓶 试 剂 4B: DAB 底 物 (20 ) 1ml/ 瓶 1ml/ 瓶 试 剂 4C: DAB 色 原 (20 ) 1ml/ 瓶 1ml/ 瓶 试 剂 5: 苏 木 素 体 细 胞 染 色 液 6ml/ 瓶 15ml/ 瓶 试 剂 6: 空 白 对 照 试 剂 ( 牛 血 清 白 蛋 白 ) 3ml/ 瓶 6ml/ 瓶 粉 剂 : PBS 磷 酸 盐 缓 冲 液 ( 粉 剂 ) 2000ml/ 包 5000ml/ 包 试 管 : DAB 显 色 液 配 制 管 1 支 1 支 质 控 片 : 平 滑 肌 肌 动 蛋 白 阳 性 对 照 片 ( 子 宫 平 滑 肌 瘤 ) 2 片 / 盒 4 片 / 盒 本 包 装 仅 提 供 试 剂 盒 一 抗 组 分, 不 包 括 试 剂 1 试 剂 3 试 剂 4 试 剂 5 试 剂 6 粉 剂 试 管 质 控 片 组 分 不 同 批 号 试 剂 盒 各 组 成 成 份 在 有 效 期 内 可 互 换 使 用 试 剂 盒 未 提 供 试 剂 : 二 甲 苯 乙 醇 ( 无 水 95% 85%) 蒸 馏 水 中 性 树 胶 储 存 条 件 及 有 效 期 2-8 避 光 保 存, 不 得 冻 存 自 检 定 合 格 之 日 起 有 效 期 为 12 个 月 使 用 时, 采 取 单 支 试 剂 即 拿 即 用 的 原 则, 试 剂 盒 中 其 余 组 分 在 2-8 的 冰 柜 进 行 保 存 单 支 试 剂 在 每 次 使 用 后, 应 立 即 放 回 试 剂 盒 中 质 控 片 打 开 真 空 包 装 后 放 置 2-8 避 光 保 存 的 有 效 期 为 三 周 样 本 要 求 新 鲜 活 检 或 外 科 样 本 组 织, 中 性 福 尔 马 林 固 定, 固 定 时 间 8-24 小 时, 参 照 病 理 技 术 规 范 要 求 取 材 脱 水 石 蜡 包 埋 并 制 成 蜡 块 1
组 织 切 片 厚 度 为 3 5 μm 黏 附 在 聚 赖 氨 酸 玻 片 上, 轻 拍 切 片 架 并 用 吸 湿 纸 吸 取 组 织 切 片 中 的 水 滴, 再 放 入 56 60 C 恒 温 箱 中 加 热 一 个 小 时 后, 从 恒 温 箱 中 移 出 放 置 在 室 温 下 冷 却 如 果 切 片 在 室 温 下 (15 28 ) 保 存, 为 了 良 好 地 重 现 组 织 中 抗 原 分 布 情 况, 要 在 3 个 月 内 完 成 检 测 检 验 方 法 1 检 验 所 需 仪 器 设 备 : 移 液 器 免 疫 组 化 油 笔 计 时 器 孵 育 盒 染 色 架 盖 玻 片 光 学 显 微 镜 (40-200 ) 洗 瓶 2 溶 液 配 置 : 2.1 PBS 溶 液 : PBS 磷 酸 盐 缓 冲 液 ( 粉 剂 ) 需 在 使 用 时 用 适 量 ( 2000ml 或 5000ml) 蒸 馏 水 进 行 溶 解, 混 合 均 匀 后 使 用 2.2 DAB 显 色 液 : DAB 显 色 液 需 要 在 使 用 前 临 时 配 制, 配 制 时 如 出 现 少 许 沉 淀 可 过 滤 后 使 用, 并 不 影 响 染 色 效 果 和 质 量 配 制 方 法 : 在 配 备 的 小 试 管 中 依 次 滴 加 DAB 缓 冲 液 1ml,DAB 底 物 (20 ),DAB 色 原 (20 ) 各 1 滴 (50μl), 以 配 制 DAB 显 色 液 配 置 好 的 DAB 显 色 液 避 光 存 放,60 分 钟 内 有 效 3 试 验 温 度 条 件 :15-28 4 试 验 步 骤 : a) 脱 蜡 和 水 化 石 蜡 切 片 置 于 新 鲜 的 二 甲 苯 中, 浸 泡 15 分 钟 2 次 ; 去 除 多 余 的 液 体 后, 置 无 水 乙 醇 中, 浸 泡 3 分 钟 2 次 ; 去 除 多 余 的 液 体 后, 置 95% 乙 醇 中, 浸 泡 3 分 钟 ; 去 除 多 余 的 液 体 后, 置 85% 乙 醇 中, 浸 泡 3 分 钟 ; 自 来 水 冲 洗 1 分 钟 ; b) 阻 断 内 源 性 过 氧 化 物 酶 除 去 PBS 溶 液, 在 油 笔 圈 定 的 待 测 组 织 区 域 内 加 100μl 内 源 性 过 氧 化 物 酶 阻 断 剂, 室 温 下 孵 育 10 分 钟 c) 加 平 滑 肌 肌 动 蛋 白 抗 体 或 空 白 对 照 试 剂 除 去 PBS 溶 液, 加 100μl 的 平 滑 肌 肌 动 蛋 白 抗 体 或 空 白 对 照 试 剂, 室 温 下 孵 育 60 分 钟 d) 加 酶 标 聚 合 物 除 去 PBS 溶 液, 加 100μl 酶 标 羊 抗 小 鼠 / 兔 IgG 聚 合 物, 室 温 下 孵 育 15 分 钟 e) 显 色 除 去 PBS 溶 液, 加 100-200μl 新 鲜 配 制 的 DAB 显 色 液, 孵 育 3-5 分 钟, 光 镜 观 察 染 色 结 果 一 般 不 超 过 10 分 钟 f) 复 染 自 来 水 冲 洗, 加 100-200μl 苏 木 素 体 细 胞 染 色 液 孵 育 10-30 秒 PBS 溶 液 或 自 来 水 冲 洗 返 蓝 注 意 : 依 据 作 用 的 苏 木 素 染 色 液 的 强 度 和 孵 育 时 间 的 长 短, 对 比 染 色 结 果 导 致 细 胞 核 呈 现 淡 蓝 到 深 蓝 颜 色 的 反 应, 而 过 染 或 是 不 足 染 色 都 有 可 能 危 及 正 确 结 果 的 判 断 g ) 脱 水 透 明 封 片 85% 乙 醇 中, 浸 泡 3 分 钟 ; 95% 乙 醇 中, 浸 泡 3 分 钟 ; 无 水 乙 醇, 浸 泡 3 分 钟 ; 二 甲 苯 透 明 ; 中 性 树 胶 和 盖 玻 片 封 片 2
5 结 果 判 断 : 免 疫 组 化 检 测 结 果 要 由 有 资 格 的 病 理 医 生 在 光 学 显 微 镜 下 对 染 色 后 切 片 进 行 观 察 并 进 行 判 断 5.1 免 疫 组 化 染 色 结 果 必 须 建 立 在 组 织 阳 性 对 照 试 剂 阴 性 对 照 实 验 成 立 的 基 础 上, 染 色 结 果 的 判 读 : 阳 性 (+)/ 阴 性 (-) 5.1.1 染 色 阳 性 结 果 是 指 组 织 切 片 中 特 定 细 胞 的 细 胞 质 上 见 有 棕 黄 色 着 色, 且 无 背 景 染 色 5.1.2 阴 性 染 色 结 果 是 组 织 内 预 期 细 胞 中 未 见 棕 黄 色 着 色 注 意 : 在 每 一 次 染 色 过 程 中, 必 须 使 用 阳 性 对 照 片 和 空 白 对 照 试 剂, 否 则 结 果 不 可 采 用 5.2 组 织 阳 性 对 照 和 试 剂 阴 性 对 照 实 验 成 立 的 基 础 上, 受 检 组 织 片 中 出 现 阳 性 染 色 表 示 组 织 切 片 上 存 有 平 滑 肌 肌 动 蛋 白 抗 原 5.3 组 织 阳 性 对 照 和 试 剂 阴 性 对 照 实 验 成 立 的 基 础 上, 受 检 组 织 片 中 出 现 阴 性 染 色 表 示 组 织 切 片 上 存 有 平 滑 肌 肌 动 蛋 白 抗 原 可 能 性 低 5.4 如 果 组 织 阳 性 对 照 和 试 剂 阴 性 对 照 实 验 均 为 阴 性 结 果, 表 明 试 剂 失 效 或 实 验 操 作 错 误, 应 重 新 实 验 过 程 与 结 果 质 控 阳 性 对 照 : 阳 性 对 照 可 作 为 正 确 组 织 准 备 和 适 当 染 色 技 术 的 指 示 每 次 染 色 都 要 包 含 同 一 测 试 条 件 下 的 阳 性 对 照 片 进 行 比 较 已 知 的 阳 性 组 织 对 照 只 能 用 于 监 控 步 骤 的 正 确 执 行 和 试 剂 的 测 试, 并 不 用 于 帮 助 叙 述 病 人 样 本 的 明 确 诊 断 如 果 阳 性 组 织 对 照 不 能 显 示 适 当 的 阳 性 染 色, 此 批 实 验 测 试 样 本 的 结 果 应 认 为 是 无 效 的 空 白 对 照 : 每 次 染 色 都 要 包 含 同 一 测 试 条 件 下 的 空 白 对 照 试 剂 进 行 对 比 空 白 对 照 试 剂 来 代 替 抗 体 对 组 织 切 片 进 行 染 色, 用 来 判 断 非 特 异 性 着 色, 并 对 抗 原 部 位 特 异 性 染 色 提 供 更 好 的 解 释 空 白 对 照 试 剂 的 孵 育 时 间 必 须 与 抗 体 一 致 阳 性 对 照 片 为 福 尔 马 林 固 定 石 蜡 包 埋 的 组 织 切 片, 试 剂 盒 对 阳 性 对 照 片 的 前 期 处 理 不 能 进 行 质 控 不 过 阳 性 对 照 片 是 严 格 按 照 病 理 操 作 规 范 进 行 前 期 处 理, 且 实 验 证 实 该 阳 性 对 照 片 抗 原 保 存 良 好 可 以 进 行 免 疫 组 化 实 验, 作 为 阳 性 对 照 片 使 用 参 考 值 ( 参 考 范 围 ) 本 试 剂 盒 为 定 性 检 测 使 用, 无 定 量 参 考 值 镜 下 观 察 的 结 果 参 考 如 下 : 阴 性 : 组 织 内 预 期 细 胞 中 未 见 棕 黄 色 着 色 阳 性 : 组 织 切 片 中 特 定 细 胞 的 细 胞 质 上 见 有 棕 黄 色 着 色 检 验 结 果 的 解 释 1 抗 原 修 复 孵 育 时 间 温 度 的 修 改 或 应 用 其 他 方 法 均 有 可 能 得 出 错 误 结 果 2 在 每 一 次 染 色 过 程 中, 必 须 使 用 阳 性 对 照 片 和 空 白 对 照 试 剂, 否 则 结 果 不 可 采 用 3 当 在 室 温 下 保 存 时, 样 本 应 该 在 组 织 封 存 到 载 玻 片 上 3 个 月 内 染 色 否 则 可 能 由 于 时 间 长 久, 组 织 中 抗 原 的 退 变 产 生 假 阴 性 结 果 4 如 果 阳 性 组 织 对 照 不 能 显 示 适 当 的 阳 性 染 色, 则 说 明 操 作 错 误, 此 批 实 验 测 试 样 本 的 结 果 应 认 为 是 无 效 的 检 验 方 法 的 局 限 性 免 疫 组 化 用 于 病 理 诊 断 是 一 个 多 步 的 诊 断 过 程, 需 要 有 正 确 试 剂 的 选 择 组 织 的 选 择 固 定 和 处 理, 切 片 的 准 备 及 染 色 结 果 解 释 的 专 业 培 训 染 色 前 组 织 的 处 理 过 程 能 直 接 影 响 染 色 效 果 不 恰 当 的 固 定 冰 冻 熔 化 清 洗 烘 干 切 片 或 被 其 他 组 织 或 液 体 污 染 都 可 能 造 成 假 阳 性, 抗 体 定 位 不 准 确 或 假 阴 性 结 果 异 常 的 结 果 出 现 有 可 能 是 由 于 固 定 和 包 埋 方 法 的 不 同, 或 组 织 内 部 的 不 规 则 福 尔 马 林 固 定 石 蜡 包 埋 子 宫 平 滑 肌 瘤 组 织 切 片, 平 滑 肌 肌 动 蛋 白 试 剂 盒 染 色, 细 胞 质 阳 性 3
过 度 或 不 足 的 复 染 都 可 能 影 响 结 果 的 正 确 解 释 任 何 阳 性 染 色 或 阳 性 染 色 缺 失 的 临 床 解 释 都 必 须 参 考 其 临 床 描 述 细 胞 形 态 学 和 其 他 组 织 病 理 学 背 景 任 何 染 色 或 其 缺 失 的 临 床 解 释 都 必 须 以 形 态 学 上 的 研 究 和 正 确 的 对 照 以 及 其 他 诊 断 试 验 作 为 补 充 这 是 一 个 合 格 病 理 医 生 的 责 任, 他 要 熟 悉 抗 体 试 剂 和 方 法, 这 样 才 能 正 确 的 解 释 所 染 色 的 样 本 染 色 试 验 必 须 由 一 家 认 证 过 的 实 验 室 进 行, 且 要 在 一 个 对 染 色 切 片 的 评 分 有 责 任 心 并 能 保 证 有 阳 性 对 照 试 验 同 时 进 行 的 病 理 医 生 的 领 导 下 进 行 而 测 试 结 果 及 诊 断 价 值 也 应 由 病 理 医 生 结 合 临 床 及 其 他 检 查 结 果 加 以 综 合 分 析 和 判 断 试 剂 可 能 会 在 先 前 未 测 试 过 的 组 织 上 呈 现 预 料 不 到 的 反 应 就 算 在 测 试 过 的 组 织 群 中 出 现 预 料 不 到 反 应 的 可 能 性 也 不 能 完 全 消 除, 这 是 由 于 肿 瘤 或 其 他 病 态 的 组 织 中 抗 原 表 达 在 生 物 学 上 具 有 的 可 变 性 假 阳 性 的 结 果 可 能 会 由 于 蛋 白 或 底 物 反 应 产 物 的 非 免 疫 学 结 合 造 成 的 它 们 也 可 能 会 由 红 血 球 和 细 胞 色 素 C 造 成 的 产 品 性 能 指 标 敏 感 度 用 平 滑 肌 肌 动 蛋 白 弱 阳 性 对 照 片 ( 子 宫 平 滑 肌 瘤 ) 进 行 检 测, 三 份 平 滑 肌 肌 动 蛋 白 弱 阳 性 对 照 片 ( 子 宫 平 滑 肌 瘤 ) 中 平 滑 肌 细 胞 细 胞 质 上 观 察 到 浅 黄 色 着 色, 且 颜 色 无 明 显 差 异 特 异 性 用 平 滑 肌 肌 动 蛋 白 阳 性 对 照 片 ( 子 宫 平 滑 肌 瘤 ) 进 行 检 测, 三 份 平 滑 肌 肌 动 蛋 白 阳 性 对 照 片 ( 子 宫 平 滑 肌 瘤 ) 中 平 滑 肌 细 胞 细 胞 质 上 观 察 到 黄 色 或 棕 黄 色 着 色 ; 纤 维 间 质 细 胞 等 非 平 滑 肌 细 胞 上 未 观 察 到 任 何 黄 色 或 棕 黄 色 着 色 用 空 白 对 照 试 剂 取 代 鼠 抗 人 平 滑 肌 肌 动 蛋 白 免 疫 组 化 单 克 隆 抗 体 配 合 平 滑 肌 肌 动 蛋 白 阳 性 对 照 片 ( 子 宫 平 滑 肌 瘤 ) 进 行 检 测, 三 份 平 滑 肌 肌 动 蛋 白 阳 性 对 照 片 ( 子 宫 平 滑 肌 瘤 ) 中 平 滑 肌 细 胞 细 胞 质 上 应 显 示 阴 性 结 果 批 内 差 在 同 一 批 次 的 产 品 随 机 抽 取 20 盒 样 本 采 用 阳 性 质 控 品 进 行 检 测, 然 后 在 上 述 20 盒 的 样 本 随 机 抽 取 一 盒, 对 相 同 质 控 品 连 续 检 测 20 次, 检 测 结 果 均 为 阳 性 批 间 差 随 机 抽 取 3 批 试 剂 盒 的 样 本, 每 批 试 剂 盒 抽 样 数 3 盒, 对 每 份 样 本 采 用 阳 性 内 部 质 控 物 进 行 检 测, 检 测 结 果 均 为 阳 性 注 意 事 项 1 本 品 仅 用 于 体 外 诊 断, 不 做 其 它 用 途 2 需 专 业 人 员 使 用 3 其 中 鼠 抗 人 平 滑 肌 肌 动 蛋 白 免 疫 组 化 单 克 隆 抗 体 酶 标 羊 抗 小 鼠 / 兔 IgG 聚 合 物 阳 性 对 照 片 均 来 自 生 物 资 源, 对 其 处 理 应 符 合 相 关 要 求 4 应 用 适 当 的 防 护 措 施, 以 避 免 试 剂 同 皮 肤 和 眼 睛 接 触 5 此 试 剂 盒 是 否 应 用 于 非 福 尔 马 林 固 定 组 织 还 未 得 到 证 实 6 不 要 用 其 它 生 产 商 试 剂 盒 内 试 剂 或 阳 性 对 照 片 来 代 替 本 试 剂 盒 内 试 剂 或 阳 性 对 照 片 7 试 剂 含 有 叠 氮 钠 作 为 防 腐 剂, 叠 氮 钠 可 以 和 铅 铜 反 应 而 形 成 易 爆 炸 的 金 属 叠 氮 化 合 物 为 防 止 金 属 叠 氮 化 合 物 的 形 成, 应 用 大 量 的 水 冲 洗 以 免 其 堆 积 8 据 有 关 研 究 试 剂 盒 中 的 DAB 有 致 癌 潜 在 可 能, 在 使 用 过 程 中 要 严 格 执 行 规 范 的 实 验 操 作 方 法 显 色 前 带 好 手 套, 穿 好 工 作 服, 整 个 实 验 过 程 要 求 仔 细 迅 速, 尽 量 减 少 DAB 接 触 时 间, 工 作 人 员 与 实 验 台 保 持 一 定 的 距 离 DAB 显 色 完 后, 及 时 将 所 使 用 的 手 套 移 液 器 枪 头 等 一 次 性 处 理 污 染 物 包 装 好 放 置 于 容 器 内, 用 硫 酸 加 以 处 理 若 在 试 验 过 程 中 不 小 心 将 DAB 溅 到 或 者 沾 到 皮 肤, 立 即 用 流 动 的 水 进 行 持 续 冲 洗 参 考 文 献 1 郑 晓 刚, 孟 奎, 吴 波, 周 晓 军. 肾 上 皮 样 血 管 平 滑 肌 脂 肪 瘤 的 临 床 病 理 和 免 疫 组 化 特 征 [J]. 医 学 研 究 生 学 报,2004,17(02):151-156. 2 王 淑 琴, 黄 风 昌, 李 红 芬, 纪 小 龙. 免 疫 组 化 在 常 规 病 理 诊 断 中 的 应 用 [J]. 中 国 试 验 诊 断 学,1998,2(6):315-316. 4
3 智 俐, 贾 军 乐. 免 疫 组 化 技 术 中 抗 原 修 复 的 应 用 [J]. 包 头 医 学 院 学,2006,22(02):204-205. 4 唐 伟 国 主 编. 医 学 检 验 诊 断 试 剂 的 制 备 与 应 用 [M]. 上 海 : 上 海 科 学 技 术 文 献 出 版 社,1996.12-14. 5 许 良 中, 杨 文 涛. 免 疫 组 织 化 学 反 应 结 果 的 判 断 标 准 [J]. 中 国 癌 症 杂 志,1996,6(04):290-231. 生 产 企 业 福 州 迈 新 生 物 技 术 开 发 有 限 公 司 地 址 : 福 州 市 工 业 路 北 段 550 号 洪 山 科 技 园 2 号 楼 四 层 邮 编 :350002 电 话 :0591-83732741 传 真 :0591-87641987 网 址 :www.maxim.com.cn 医 疗 器 械 生 产 企 业 许 可 证 编 号 闽 食 药 管 械 生 产 许 第 20100169 号 医 疗 器 械 注 册 证 书 编 号 国 食 药 监 械 ( 准 ) 字 2011 第 3400674 号 产 品 标 准 编 号 YZB/ 国 1972-2011 说 明 书 批 准 及 修 改 日 期 2011 年 6 月 8 日 5