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锄邀倪
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1 摇南京农业大学学报摇 2011,34(4): 摇 Journal of Nanjing Agricultural University http: / / nauxb. njau. edu. cn 試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試张娜, 郑青松, 刘玲, 等. 产表面活性剂石油降解菌的筛选及发酵条件优化 [J]. 南京农业大学学报,2011,34(4): 产表面活性剂石油降解菌的筛选及发酵条件优化张娜, 郑青松, 刘玲, 刘兆普 *, 牛丹丹, 姚瑶, 王博 ( 南京农业大学资源与环境科学学院 / 江苏省海洋生物学重点实验室, 江苏南京 ) 摘要 : 从胜利油田受石油污染的土壤中筛选出能产生表面活性剂的石油降解菌, 对其进行初步鉴定, 并探讨了其降解原油的性能与生长条件经过富集培养平板筛选血平板筛选排油圈测定, 成功分离筛选出 1 株产生表面活性剂的石油降解菌株 X-1 经形态观察生理生化试验和 16S rdna 序列分析等鉴定其为芽孢杆菌属 (Bacillus sp. ), 培养 6 d 时原油降解率为 % 通过硅胶板薄层层析初步判定表面活性剂粗品中含有脂肽脂蛋白类物质菌株生长的最适温度为 32 益, 最适 ph 为 7. 0, 最适盐度为 2 g L -1 NaCl, 最佳碳源为淀粉, 最佳氮源为蛋白胨关键词 : 石油降解菌 ; 降解特性 ; 生物表面活性剂 ; 筛选 ; 优化中图分类号 :X172 摇摇摇摇文献标志码 :A 摇摇摇摇文章编号 : (2011) Isolation of oil 鄄 degrading bacteria with biosurfactant production and its fermentation condition optimization ZHANG Na,ZHENG Qing 鄄 song,liu Ling,LIU Zhao 鄄 pu *,NIU Dan 鄄 dan,yao Yao,WANG Bo ( College of Resources and Environmental Sciences / Key Laboratory of Marine Biology of Jiangsu Province, Nanjing Agricultural University,Nanjing ,China) Abstract:An oil 鄄 degrading bacteria with biosurfactant production was isolated from petroleum 鄄 contaminated soil of Shengli Oil Field in Shandong Province,and preliminary identification was conducted on it. We also studied its degradation characteristics and growth conditions. By enrichment cultivation,plate screening,blood plate screening and determination of oil discharge circle,we successfully isolated strain X 鄄 1. According to its morphological,physiological,biochemical features and 16S rdna sequence analysis,strain X 鄄 1 was identified as Bacillus sp. Its oil 鄄 degrading rate was % after incubating for six days. With preliminary judgement of silica gel thin layer chromatography,crude biosurfactant contains lipopeptid and lipoproteins. Its optimal conditions for growth were 32 益, ph 7. 0 and 2 g L -1 NaCl,the starch was the best carbon source,whereas the peptone was the best nitrogen source. Key words:oil 鄄 degrading bacterium;degradation characteristics;biosurfactant;screening;optimization 随着石油工业的发展, 在采油炼油运输与利用过程中, 石油废弃物对土壤污染是不可避免的 [1] 我国每年产落地油约 700 万 t, 单井落地原油污染面积平均可达 0. 5 ~ 2. 1 m 2, 落地泥浆大约 20 m 2, 一次井喷造成的原油覆盖面积达 ~ m 2[2] 而且石油的某些成分有致癌致突变致畸等作用, 并可能通过食物链在动植物及人体内富集, 成为重点污染物 [3] 有关石油污染治理已成为国内外研究的热点之一 [4] 目前用于石油污染土壤治理的方法主要包括 : 物理修复法化学修复法和生物修复法 [5] 其中生物修复法以其投资低效益高便于应用发展潜力大等优点而受到普遍重视 [6] 近 30 年来国外有关石油污染生物修复的研究不断增加, 尤其是 2000 年以后, 其研究方向更为多元化 [7] 微生物是组成生态系统的重要成员, 在污染物去除中发挥着重要作用, 是生物修复中的主力 [6], 寻求高效石油降解菌是提高石油烃生物降解率的重要途径 [5] 但石油烃的疏水性往往会限制生物修复中生物对石油的降解, 因为微生物会分泌细胞代谢物即生物表面活性剂 [8], 它是微生物在一定条件下代谢分泌产生的具有一定表面活性, 集亲水基和疏水基结构于一分子的两亲性化合物 [9] 生物表面活性剂可促进油的乳化, 进而极大地提高油的分散程度, 增加菌株和油珠的接触机会, 促进微生物对石油烃的吸收降解因此, 筛选既能分泌生物表面活性剂又能降解石油烃的微生物就成了国内外石油污染修复中的重点目前有关研究主要集中在高效石油降解菌的筛选与收稿日期 : 基金项目 : 国家公益性行业 ( 农业 ) 科研专项 ( ) 作者简介 : 张娜, 硕士研究生 * 通讯作者 : 刘兆普, 博导, 主要从事近海资源与生态研究,E 鄄 mail:sea@ njau. edu. cn

2 134 南摇京摇农摇业摇大摇学摇学摇报第 34 卷构建以及添加营养物质等方面 [10], 而筛选和应用产生物表面活性剂的石油降解菌并对其生长条件进行优化, 进而对石油污染土壤修复等方面的研究较为鲜见本研究从胜利油田土壤 ( 明显受石油污染 ) 中筛选出能产生物表面活性剂的石油降解菌, 对其进行初步鉴定, 并探讨了它降解原油的性能和发酵条件, 为新型生物表面活性剂的开发和工业化生产奠定基础 1 摇材料与方法 1. 1 摇土样土样为采自山东省东营市胜利油田孤东油井二区长期受石油污染的表层土壤 1. 2 摇培养基细菌富集培养基 : 酵母膏 g,(nh 4 ) 2 SO g, 葡萄糖 2 g,kcl 1. 1 g,k 2 H 3H 2 O 1. 5 g,nacl 1. 1 g,kh g,mgso 4 7H 2 O 0. 5 g, 蒸馏水 1 L, 微量元素液 5 ml,ph 为 7. 0 ~ 7. 5, 经滋 m 滤器过滤除菌的原油 5 g 微量元素溶液配方 (1 L):ZnSO g,cacl g,cuso g,mgso g, FeSO g 分离培养基为细菌富集培养基中去除葡萄糖, 再加入 20 g 琼脂粉无机盐培养基 :KH g,( NH 4 ) 2 SO g,k 2 H 3H 2 O 0. 5 g,mgso 4 7H 2 O 0. 3 g, 蒸馏水 1 L, 微量元素溶液 0. 01% ( 体积分数 ),ph 7. 0 ~ 7. 2 微量元素溶液配方 (1 L):ZnSO 4 7H 2 O 0. 2 g, FeSO 4 7H 2 O 0. 5 g,cacl g,mnso 4 H 2 O g 牛肉膏蛋白胨培养基 : 牛肉膏 3 g, 蛋白胨 10 g,nacl 5 g, 琼脂 20 g, 蒸馏水 1 L,pH 7. 0 ~ 7. 2 发酵培养基 : 葡萄糖 50 g, 蛋白胨 6 g,kh g,k 2 H 2 g,mgso g,cacl g, 蒸馏水 1 L,pH 7. 0 LB 培养基 : 蛋白胨 10 g, 酵母膏 5 g,nacl 10 g, 蒸馏水 1 L,pH 7. 0 血琼脂培养基购于南京丁贝生物科技有限公司 1. 3 摇产表面活性剂的石油降解菌的分离与筛选摇菌株的分离及筛选摇将 10 g 原油污染土样加入到 90 ml 无菌水 ( 加玻璃珠 ) 中,200 r min 益振荡培养 1 h, 静置 30 min 后, 吸取 10 ml 上清液置于细菌富集培养基中, 在 200 r min 益条件下摇床培养 5 d 待培养液混浊后, 吸取 5 ml 培养液再转接到细菌富集培养基中, 培养条件保持不变, 连续转接培养 7 次将第 7 次摇床培养得到的液体稀释 10 倍 100 倍倍倍倍倍后, 分别取 0. 1 ml 涂布于分离培养基中,28 益培养 2 d, 待长出菌落后挑取不同形态和颜色的单菌落分别再划线接种于含 5 g L -1 原油的分离培养基中, 连续转接培养 3 次, 得到的单菌落即为石油降解菌挑取单菌落, 经过反复分离纯化, 用血平板筛选具有表面活性剂生产能力的菌株 [11] 摇表面活性剂的排油活性及表面张力测定摇取一直径约 25 cm 的培养皿, 加入 50 ml 蒸馏水, 水面上加入 20 滋 L 正烷烃形成油膜在油膜中心滴入 10 滋 L 发酵液, 中心油膜被挤向周围形成一圆圈, 圆圈的直径与表面活性剂含量和活性成正比 [12], 选择直径大于 3 cm 的菌株作下一步研究 [13] 采用环法 JYW-200 型自动表界面张力仪测定其表面张力 1. 4 摇生长曲线测定 [14] 用浊度法测定菌株的生长曲线将菌株接种于液体 LB 培养基, 每隔 2 h 分别取接菌和不接菌培养基测定其 D 600 值, 绘制生长曲线 1. 5 摇菌种鉴定摇生理生化鉴定摇对筛选出的细菌进行形态学观察和生理生化实验鉴定 [15], 初步鉴定到属摇降解菌株的 16S rdna 的鉴定摇细菌总 DNA 的提取方法及 PCR 操作参照文献 [16] 以总 DNA 为模板, 引物为 16S rdna 的专一性引物 F:5 忆鄄 AGAGTTTGATCCTGGCTCAG 鄄 3 忆和 R:5 忆鄄 GGT TACCTTGTTACGACTT 鄄 3 忆, 目的片段大小为 bp 左右用 Taq DNA 聚合酶进行 PCR 扩增用 T 4 DNA 连接酶将纯化后的 PCR 产物连接于 pmd19-t 载体上, 转化入大肠杆菌 DH5 琢菌株,DNA 测序将测得的 16S rdna 序列在 GenBank 进行 BLAST 比对, 对获得的同源序列进行序列分析, 用 DS Gene 软件进行系统发育分析并构建系统进化树

摇第4 期张娜,等:产表面活性剂石油降解菌的筛选及发酵条件优化 135 1. 6摇生物表面活性剂的提取及菌株降解率的测定菌株接种到发酵培养基中,于 28 益下振荡培养 3 d 离心(12 000 r min -1,20 min) 去菌体,用盐酸将上清液 ph 值调至 2.

7摇试验菌株发酵条件的优化 1) 耐温性摇将菌株接种于无机盐培养基中,分别于 15 20 25 28 32 37 益下培养 3 d 后用紫外分光光度计于 600 nm 处测量其 D 值,同时各取少量菌液稀释涂平板,通过平板计数确定其生长的最佳温度 2) 耐酸性摇将菌株接种于 ph 值为 5. 5 6. 0 6. 5 7. 0 7. 5 8. 0 8.

8摇试验菌株营养条件的优化分别以葡萄糖蔗糖乳糖石蜡淀粉为碳源,以蛋白胨为氮源,28 益培养 3 d 后于 600 nm 处测 D 值;分别以尿素硫酸铵硝酸铵氯化铵蛋白胨为氮源,以葡萄糖为碳源,28 益培养 3 d 后于 600 nm 处测 D 值 2摇结果与分析 2.

3 摇第4 期张娜,等:产表面活性剂石油降解菌的筛选及发酵条件优化摇生物表面活性剂的提取及菌株降解率的测定菌株接种到发酵培养基中,于 28 益下振荡培养 3 d 离心( r min -1,20 min) 去菌体,用盐酸将上清液 ph 值调至 2. 0,得到絮状沉淀,4 益静置过夜,再离心收集沉淀,经减压蒸干后即为粗品将筛选得到的菌株接至牛肉膏蛋白胨固体培养基上活化,28 益培养 16 h,挑取菌株转入新鲜的 100 ml 细菌富集培养基中,28 益 200 r min -1 的条件下振荡培养 6 d,采用重量法 [17] 测定原油的降解率 1. 7摇试验菌株发酵条件的优化 1) 耐温性摇将菌株接种于无机盐培养基中,分别于益下培养 3 d 后用紫外分光光度计于 600 nm 处测量其 D 值,同时各取少量菌液稀释涂平板,通过平板计数确定其生长的最佳温度 2) 耐酸性摇将菌株接种于 ph 值为的无机盐培养基中,28 益培养 3 d 后于 600 nm 处测 D 值,同时各取少量菌液稀释涂平板,通过平板计数确定其生长的最佳酸度 3) 耐盐性摇将菌株接种于含 g L -1 NaCl 的无机盐培养基中,28 益培养 3 d 后于 600 nm 处测 D 值,同时各取少量菌液稀释涂平板,通过平板计数确定其生长的最佳盐度 1. 8摇试验菌株营养条件的优化分别以葡萄糖蔗糖乳糖石蜡淀粉为碳源,以蛋白胨为氮源,28 益培养 3 d 后于 600 nm 处测 D 值;分别以尿素硫酸铵硝酸铵氯化铵蛋白胨为氮源,以葡萄糖为碳源,28 益培养 3 d 后于 600 nm 处测 D 值 2摇结果与分析 2. 1摇产表面活性剂的石油降解菌及其生长曲线经过富集培养平板初筛血平板筛选,从石油污染土壤中得到 3 株能产生表面活性剂的石油降解菌, 即 X-1 X-2 X-3,其排油圈直径大于 3 cm 的仅有菌株 X-1,经测定其表面张力为 mn m -1 由图 1 可知,菌株 X-1 在 0 ~ 4 h 生长期间为迟滞期,4 ~ 9 h 达到对数生长期,9 ~ 11 h 为稳定期,11 h 后开始进入衰亡期 2. 2摇菌种鉴定菌株 X-1 的生理生化鉴定结果如下:菌落呈乳白色,圆形,不透明,边缘不光滑,表面凸起,光滑湿润( 图图 1摇菌株 X-1 的生长曲线 Fig. 1摇 Growth curve of strain X鄄1 2-A) ;透射电镜( 型号为日立 H-7650,工作电压 80 kv) 观察发现,菌体呈杆状( 图 2 -B) ;菌株产生芽孢 (图 2-C) ;革兰氏染色试验硫化氢试验甲基红试验葡萄糖发酵试验和油脂水解试验呈现阳性结果;檬酸盐利用试验 V. P 试验脂酶试验和明胶液化试验呈现阴性结果图 2摇 X-1 菌株的菌落形态( A) 透射电镜照片( B) 和芽孢染色照片( C) Fig. 2摇 Shape of colony morphology( A),transmission electron micrograph( B) and spore staining( C) of strain X鄄1 以 X-1 菌株的总 DNA 为模板,用通用引物进行 PCR 扩增,PCR 反应完成后,电泳检测产物,图 3 是菌株 X-1 16S rdna 扩增片段琼脂糖凝胶电泳图由图 3 可见,PCR 产物为 1 条单带,大约 1. 5 kb 左右将测得的 16S rdna 序列在 GenBank 中进行 BLAST 比对,结果显示同源性在 99% 以上的菌绝大多数是芽孢

136 南摇京摇农摇业摇大摇学摇学摇报第 34 卷杆菌如图 4 系统发育树所示, 与 X-1 最近缘的菌株是 Bacillus cereus(gu826149), 核苷酸序列同源性为 100% X-1 菌株的 16S rdna 序列已收录在 GenBank 中, 序列登录号为 HQ400407 图 3 摇菌株 X-1 16S rdna 扩增片段的琼脂糖凝胶电泳 Fig.

4 136 南摇京摇农摇业摇大摇学摇学摇报第 34 卷杆菌如图 4 系统发育树所示, 与 X-1 最近缘的菌株是 Bacillus cereus(gu826149), 核苷酸序列同源性为 100% X-1 菌株的 16S rdna 序列已收录在 GenBank 中, 序列登录号为 HQ 图 3 摇菌株 X-1 16S rdna 扩增片段的琼脂糖凝胶电泳 Fig. 3 摇 The agarose gel electrophoresis 摇 of 16S rdna of strain X 鄄 1 M:DNA Marker DL2000;1-6:PCR products 图 4 摇菌株 X-1 在 Bacillus 中的系统发育地位 Fig. 4 摇 Phylogenetic position of strain X 鄄 1 in Bacillus 2. 3 摇生物表面活性剂和菌株降解率以葡萄糖为碳源, 在 28 益将 X-1 培养 3 d, 离心后, 取上清液用 HCl 调 ph 值为 2, 放置冰箱 (4 益 ) 过夜产生白色沉淀的经硅胶板薄层层析后, 茚三酮显色为红色, 初步判定粗品中含有脂肽脂蛋白类生物表面活性物质将分离得到的菌株分别接入以原油为唯一碳源的无机盐培养基中培养, 进行降解能力的初步研究, 以不接菌的添加原油的培养基为对照结果表明 :X-1 降解率最高为 % 2. 4 摇试验菌株生长条件由图 5-A 可见, 随着温度升高 D 600 值显著上升,32 益达到最大值, 而进一步提高温度, 即 37 益处理下,D 值又显著下降, 与 25 益处理值相近在 ph7. 0 时,D 值最大 ( 图 5-B), 可见菌株的最适生长 ph 值为 7. 0 盐质量浓度高于 20 g L -1 会严重抑制菌株生长, 适当的盐度会促进菌株的生长, 从图 5-C 可看出菌株的最适生长盐度为 2 g L -1 NaCl, 超过 40 g L -1 NaCl 时生长接近停滞图 5 摇不同温度 (A) ph 值 (B) 和盐质量浓度 (C) 对菌株 X-1 生长的影响 Fig. 5 摇 Effect of different values of temperature(a),ph(b)and NaCl concentration(c)on the growth of strain X 鄄摇试验菌株营养条件不同碳源对菌株 X-1 生长的促进效应从大到小依次为 : 淀粉蔗糖葡萄糖乳糖石蜡以尿素硫酸铵硝酸铵和氯化铵为氮源, 其 D 600 均很低, 并且相互之间无显著差异, 表明菌株 X-1 不能依靠无机氮为唯一氮源生长, 但能依靠有机氮为唯一氮源生长 3 摇讨论本研究从石油重度污染的胜利油田土壤中分离筛选出 1 株能以石油为唯一碳源和能源生长的菌株 X-1, 已有研究表明, 能够降解石油烃的细菌有假单胞菌属 ( Pseudomonas) 不动杆菌属 ( Acinetobacter) 芽孢杆菌属 (Bacillus) 葡萄球菌属 (Staphylococcus) 微球菌属 ( Micrococcus) 等 [18] 在石油污染环境中筛选出的可以产生物表面活性剂的微生物主要是假单胞菌 (Rhizobium sp. ) 和芽孢杆菌 ( Bacillus sp. ) [19] 本研究分离筛选到的菌株, 经过生理生化特性和 16S rdna 分子鉴定, 属于后者, 且能产生表面活性剂李 [5] 春荣等测得外源细菌外源真菌混合外源菌和土著微生物培养 50 d 时对石油的生物降解率分别为 [19] 71 郾 54% 60 郾 13% % 和 % 佘跃惠等筛选出的短杆状属芽孢杆菌 XD51 XD52 和 XD53 对

5 摇第 4 期张娜, 等 : 产表面活性剂石油降解菌的筛选及发酵条件优化 137 大庆 5 个原油样的 7 d 的降解率均达 50% 以上, 但是上述研究中的降解菌是否产生表面活性剂均没有报道本研究表明, 菌株 X-1 在含 0. 5% ( 体积分数 ) 原油的基础培养基中生长 6 d 降解原油达 % 相对而言, 该菌株石油降解率偏低, 需要进一步的诱变筛选以提高其降解率, 但本研究指出其能产生表面活性剂, 生物表面活性剂可以促进石油的增溶性, 降低表面张力, 促进微生物的吸收, 有利于石油的降解, 用于石油污染土壤治理的潜力可能较大 [20] 生物表面活性剂的应用取决于能否分离到性能良好的产生菌 [13] 本研究结果表明, 菌株 X-1 所产表面活性剂粗品含有脂肽脂蛋白类物质等, 这与枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis) 产生脂肽类表面活性剂相符合 [21], 该类生物表面活性剂是迄今文献已报告的效果最好 [21] 的生物表面活性剂之一张翠竹等从大港炼油厂污水中分离到的地衣芽孢杆菌产生的也是脂肽类生物表面活性剂不同培养基也会导致细菌产生不同的表面活性剂 [13] 生物表面活性剂的合成和分泌需要一定的环境条件, 培养基的碳和氮浓度 ph 值培养温度等都对生物表面活性剂的合成有显著的影响 [22] 发酵条 [23] 件优化有利于提高菌株产生物表面活性剂的能力李大平等分离到的 LHG1 菌株生长的最适 ph 范围 [13] 为 6 ~ 8, 最适温度范围为 25 ~ 40 益郑金秀等筛选的菌株最适生长 ph 值为 5. 5 ~ 8. 0, 最适温度为 20 ~ 45 益, 盐度高于 65 g L -1 就会严重抑制其生长而本研究中菌株 X-1 的最适生长条件为 :ph 7. 0, 温度 32 益, 盐度 2 g L -1 NaCl, 最佳碳源为淀粉, 最佳氮源为蛋白胨该菌株也和其他降解菌株一样, 具有较好的耐温性耐酸性和耐盐性, 因而具有了较广的应用范围但是该菌株的石油降解机制表面活性剂的成分鉴定和功效等均有待于进一步的分析参考文献 : [1] 摇李玉瑛, 李冰. 柴油污染土壤生物修复对土壤酶活性的影响 [J]. 生态环境学报,2009,18(5): [2] 钱晓勇, 刘国庆, 宗凯, 等. 1 株生物表面活性剂产生菌筛选及其条件优化 [J]. 安徽农业科学,2009,37(13): [3] 王景华, 魏从如, 刘凤奎. 油田开发环境影响评价文集 [M]. 北京 : 中国环境科学出版社,1989:45-60 [4] Parasehiv 鄄 Ionescu A,Jutten C,Aminian K,et al. Source separation in strong noisy mixtures:a study of wavelet de 鄄 noising pre 鄄 processing[ J]. IEEE International Conference on Acoustic,Speech and Signal Processing,2002,2: [5] 李春荣, 王文科, 曹玉清, 等. 石油污染物的微生物降解研究 [J]. 生态环境,2008,17(1): [6] 刘君寒, 王兆守, 何健, 等. 一株氯氰菊酯降解菌的分离和鉴定 [J]. 南京农业大学学报,2007,30(3):68-72 [7] 黄艺, 礼晓, 蔡佳亮. 石油污染生物修复研究进展 [J]. 生态环境学报,2009,18(1): [8] Barathi S,Vasudevab N. Utilization of petroleum hydrocarbons by Pseudomonas fluorescens isolated from a petroleum 鄄 contaminated soil[j]. Envi 鄄 ronment International,2001,26(5 / 6): [9] Youssef N H,Duncan K E,Nagle D P,et al. Comparison of methods to detect biosurfactant production by diverse microorganisms[ J]. Journal of Microbiological Methods,2004,56: [10] Gogoi B K,Dutta N N,Goswami P,et al. A case study of bioremediation of petroleum 鄄 hydrocarbon contaminated soil at a crude oil spill site[j]. Advances in Environmental Research,2003,7: [11] 丁立孝, 何国庆, 刘晔, 等. 脂肽生物表面活性剂产生菌的筛选 [J]. 农业生物技术学报,2004,12(3): [12] Mulligan C N, Cooper D G, Neufeld R J. Selection of microbes producing biosurfactants in media without hydrocarbons [ J]. Journal of Fermentation Technology,1984,62: [13] 郑金秀, 彭祺, 张甲耀, 等. 产表面活性剂的石油降解菌降解特性研究 [J]. 环境科学与技术,2007,30(1):5-7 [14] 李庆忠, 张忠智, 王洪君, 等. 一株代谢煤油兼性厌氧菌的筛选鉴定和特性 [J]. 微生物学通报,2002,29(3):28-32 [15] 东秀珠, 蔡妙英. 常见细菌系统鉴定手册 [M]. 北京 : 科学出版社,2001: [16] 黄秀梨. 微生物学试验指导 [M]. 7 版. 北京 : 高等教育出版社,2003:19-39 [17] 国家环保局编写组. 水和废水监测分析方法 [M]. 4 版. 北京 : 中国环境科学出版社,2002 [18] 宋志文, 夏文香, 曹军. 海洋石油污染物的微生物降解与生物修复 [J]. 生态学杂志,2004,23(3): [19] 佘跃惠, 夏晶晶, 黄金凤, 等. 大庆油田聚驱后油藏驱油本源菌研究 [J]. 油田化学,2009,26(1): [20] Abalos A,Vinas M,Sabate J,et al. Enhanced biodegradation of Casablanca crude oil by a microbal consortium in presence of a rhamnolipid produced by Pseudomonas aeruginosa AT10[ J]. Biodegradation,2004,15(4): [21] 张翠竹, 张心平, 梁凤来, 等. 一株地衣芽孢杆菌产生的生物表面活性剂 [J]. 南开大学学报,2000,33(4):41-45 [22] Ilori M O,Amobi C J,Odocha A C. Factors affecting biosurfactant production by oil degrading Aeromonas sp. isolated from a tropical environment [ J]. Chemosphere,2005,61(7): [23] 李大平, 李福德. LHG1 菌株的分离和降解环己烷的研究 [J]. 应用与环境生物学报,1999,5(Suppl): 责任编辑 : 范雪梅

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