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灶勇宓
7 years ago
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1 第卷第期年月西安交通大学学报医学版!" #$# # %&'&! 中医药研究甜牛大力和苦牛大力对免疫抑制小鼠免疫调节作用的比较研究谢婵黄慧学邓日健刘华钢梁秋云广西医科大学药学院广西南宁广西中医药大学药学院广西南宁广西南宁市嘉元中药材专业合作社广西南宁 $ 摘要目的比较甜牛大力和苦牛大力对免疫抑制小鼠的免疫调节作用方法昆明种 %& 小鼠随机分为正常对照组环磷酰胺 ' 组模型组左旋咪唑 & 组阳性对照组与高中低剂量的甜牛大力 (& #)*+, 组及苦牛大力 (& ',- )*!) 组连续灌胃给药次并于第. 天除正常对照组外均腹腔注射 ) '.- 造成小鼠免疫抑制模型测定并比较各组小鼠体质量增量免疫器官指数白细胞 /0' 数目迟发型超敏反应 1 程度及巨噬细胞吞噬功能的差异结果与模型组比较一定剂量的甜牛大力和苦牛大力均可明显提高模型小鼠的 /0'! 或! 数目促进模型小鼠的 1 程度! 增加模型小鼠的单核巨噬细胞的吞噬功能! 或! 不同程度提高模型小鼠的体质量脾脏指数及胸腺指数! 或! 其中甜牛大力高中剂量组在提高胸腺指数和 1 程度方面稍优于苦牛大力对应剂量组! 或! 而在其余指标上甜牛大力与苦牛大力的作用差异无统计学意义! 结论甜牛大力和苦牛大力对 ' 免疫抑制小鼠均具有一定的免疫功能增强作用其中甜牛大力提高细胞免疫能力稍强于苦牛大力关键词甜牛大力苦牛大力免疫调节功能环磷酰胺免疫抑制中图分类号 ( 文献标志码! "# $$ # ',! 23 ")4"# 1 23 ()4 ),! ",4,! 23 5)"4 "! '*6# #*78,9-, 3",! )&# ),6!):#9+) 2,!!)! '*6# #*78,9-, 3",! )!):#9+) *7')!#+#&# ))!#2,!!)! ;), ",! #9,6&# ))!#89*7#++)*!,6'** #9,):#+2,!!)! $')!, %&'%# #! $ # "! " #& ( # ) " " "" # " *!$! $ # "! " + & # )" # ) " '$ #" ## "&! # ),# " ) "." - " # ".# &#-" ) )) -"# /0-#- #### - # """ 1 # )" ""#"& " ) /0-)# #"!&!&"" 1!& ) #" ""!$ # "! &# # " ". " )"!&!&& ". "" 1! $ # " + ) # "!!&!&&" #! $ # " " 收稿日期. 修回日期通讯作者梁秋云 & &# 优先出版 )))&#+ & +# "&& &$& &&$!" # "!

2 $ 西安交通大学学报医学版第卷 # "!!&& 0! $ # "! # #"#" "#"! $ #! ### & '! $ #! ###" 牛大力 (& #)*+, 为豆科美丽崖豆藤 ',- 的干燥根又称为牛牯大力山莲藕大力薯等其性平味甘归肺肾经具有补虚润肺强筋活络等功效常用于治疗肾虚气虚腰膝酸痛风湿痹痛慢性肝炎等病症因其根味甜故习称甜牛大力商品中的苦味牛大力 (&',- )*!) 又叫大力牛是豆科绿花崖豆藤 " 0#! 的干燥根根味苦习称苦牛大力研究发现甜牛大力含有维生素不饱和脂肪酸生物碱香豆素类多 $4 糖类三萜类及植物甾醇等多种活性成分具有调节免疫作用而对于苦牛大力的免疫功效未见国内外文献报道但民间却常将两者混用本实验通过用环磷酰胺 ' 造成小鼠免疫抑制模型研究甜牛大力和苦牛大力对小鼠免疫功能的影响观察两者在免疫调节方面的差异旨在为牛大力的开发应用提供可靠的实验依据 ( 材料与方法 ( ( 实验动物健康昆明 %& 小鼠体质量雌雄各半 8 级广西医科大学实验动物中心提供合格证号 ' % 桂 $4 ( ) 药物试剂及仪器牛大力广西南宁市嘉元中药材专业合作社提供经广西中医药研究所赖茂祥研究员鉴定为豆科崖豆藤属植物美丽崖豆藤 ',- 和绿花崖豆藤 " 0#! 的干燥根印度墨汁北京博奥拓达科技有限公司批号. 盐酸左旋咪唑片 #:,-)+*6# & 桂林南药股份有限公司批号注射用 ' 江苏恒瑞医药股份有限公司批号 $ 鸡红细胞 '(0' 取新鲜鸡血按常规方法制备 '(0' 悬液 #9,&,86"+.$ 酶标仪 &*6#"6,91#4 :)#+ 公司倒置显微镜 6 - "+ 公司 ( * 实验药物的制备取干燥苦甜牛大力生药饮片适量粉碎至 $ 目以 - 乙醇为提取溶剂按料液比. 于. 水浴中浸提次过滤合并滤液浓缩成含生药量为 - 的药液备用 ( + 实验分组及处理 %& 小鼠随机分成组每组只各组小鼠按实验设计每天灌胃次连续即正常对照组生理盐水 - ' 组生理盐水 -& 组阳性对照组 - 及苦牛大力高中低剂量组和甜牛大力高中低剂量组同时再分别于实验第. 天正常对照组腹腔注射 ) 生理盐水 - 其余各组 ) 等体积 '.- 建立小鼠免疫低下模型 (, 白细胞计数各组 %& 小鼠末次给药 -)! 经内眦静脉丛取血立即加入. 白细胞稀释液中混匀待红细胞完全破坏液体变成棕褐色后滴入血球计数板于低倍镜下计数白细胞总数个白细胞数个 2$<<< 其中 2 为 $ 个大方格内白细胞总数 (-. 采用足跖增厚法观察迟发型变态反应 / 于实验第天 = '(0' 悬液 - 腹腔注射各小鼠进行致敏致敏后第 $ 天右后足跖部皮下注射 = '(0'$ 后用游标卡尺分别测量双侧足跖厚度测量次取均值以左右足跖厚度的差值来表示 1 的程度足跖肿胀度 -- 右侧足跖厚度 > 左侧足跖厚度 1 ( 0 单核巨噬细胞功能及免疫器官指数的测定末次给药 -)! 于小鼠内眦静脉丛注射稀释倍印度墨汁 - 分别于注射后 -)! 和 -)! 从小鼠内眦静脉丛取血立即置于含有 - 2, ' 溶液的试管中摇匀于酶标仪!- 处测定吸光度值分别脱颈椎处死并解剖各组小鼠取肝脏和脾脏滤纸吸干脏器表面血污称重计算廓清指数 % 和吞噬指数并计算脾脏指数和胸腺指数廓清指数 6 >6 > 吞噬指数体质量肝质量? 脾质量 <% 脏器指数 - 脏器质量小鼠体质量 ( 1 统计学分析应用 8 软件进行分析计量资料以均数标准差表示符合正态分布和方差齐性的数据两组间比较采用 1 #,+4 )!)7),!1)7#9#!# 检验非正态或方差不齐的数据采用 %9"+,64/,6)+ 检验以! 为差异有统计学意义!" # "!

3 期谢婵黄慧学邓日健等甜牛大力和苦牛大力对免疫抑制小鼠免疫调节作用的比较研究 $ ) 结果 )-( 各组小鼠 & 及 / 的变化与正常对照组比较 ' 组小鼠 /0' 数显著下降! 1 程度显著降低! 表明小鼠免疫低下模型造模成功与 ' 组比较苦牛大力甜牛大力高剂量和中剂量组均能提高免疫抑制小鼠的 /0' 总数! 或! 苦牛大力甜牛大力低剂量组的作用均不明显苦牛大力甜牛大力各剂量组均能增加免疫抑制小鼠的 1 程度! 其中甜牛大力高中剂量组致敏作用较苦牛大力相应剂量组明显两者之间差异有统计学意义! 或! 表提示苦甜牛大力均具有一定增强细胞免疫的作用表 ( 苦牛大力及甜牛大力对小鼠 & 及 / 的影响,7#+*7(& ',- )*!),! (& #)*+,*! /0',! 1*7#-)# 组别 /0'< 1-- 正常对照组. $ ' 组 $ & 阳性对照组 $.. 苦牛大力组.. $ $$ $$ 甜牛大力组 $. $ $.. 与正常对照组比较!! 与 ' 组比较!! 与相应剂量的苦牛大力组比较!! ) ) 苦牛大力及甜牛大力对小鼠单核 4 巨噬细胞免疫功能的影响与正常对照组比较 ' 组吞噬率吞噬指数显著降低! 苦牛大力甜牛大力各剂量组小鼠吞噬率有明显提高! 或! 但仍低于正常对照组苦牛大力甜牛大力对应剂量组之间差异无统计学意义! 与 ' 组比较甜牛大力可显著增加巨噬细胞的吞噬指数! 并呈现一定的剂量依赖性表这提示苦牛大力甜牛大力对单核 4 巨噬细胞吞噬功能的调节作用可能不同但两者均对 ' 免疫抑制小鼠单核 4 巨噬细胞系统的吞噬功能有一定的激活作用 ) * 苦牛大力及甜牛大力对小鼠免疫器官的影响与 ' 组比较苦牛大力甜牛大力组均能不同程度拮抗 ' 造成的胸腺萎缩! 或! 提高脾脏指数! 或! 甜牛大力高中剂量组对胸腺的保护作用稍强与苦牛大力对应剂量组比较差异有统计学意义! 或! 与正常对照组比较 ' 组小鼠体毛干枯精神倦怠乏力进食和饮水减少生存质量下降经苦牛大力甜牛大力治疗后的各组小鼠进食和饮水增多体毛较有光泽活动度增加身体状况均有不同程度的改善同时小鼠体质量增加但与 ' 组比较差异无统计学意义! 表表 ) 苦牛大力及甜牛大力对小鼠单核巨噬细胞免疫功能的影响,7#+*7(& ',- )*!),! (& #)*+,*!#, * ) 7"!)*!*7-*!*!"6#,9-,9*, #+*7#-)# 组别 % 值指数正常对照组 $$ ' 组 $ $ & 阳性对照组. 苦牛大力 $. 甜牛大力 $ $ $ 与正常对照组比较!! 与 ' 组比较!! 表 * 苦牛大力及甜牛大力对小鼠体质量及免疫器官的影响,7#+*7(& ',- )*!),! (& #)*+,*!* #),! )--"!#*9,!)! #*7#-)# 组别给药前后体质量增量胸腺指数 - 脾脏指数 - 正常对照组 $ ' 组 $ $$ $. & 阳性对照组. 苦牛大力.$ $.. $. 甜牛大力... $. $$ $. $$ $ $ 与正常对照组比较!! 与 ' 组比较!! 与相应剂量的苦牛大力组比较!! * 讨论 ' 是一种较强的烷化剂广泛应用于临床化!" # "!

4 $$ 西安交通大学学报医学版第卷疗已有大量研究表明 ' 可抑制动物的体液和细胞免疫应答造成动物的免疫抑制小鼠腹腔注射 ' 后能否形成免疫低下模型与 ' 的给药剂量和给药时间关系密切 ' 的给药剂量过低不仅不能对机体起免疫抑制作用反而可能会提高机体的免疫功能此外免疫细胞在免疫应答和免疫调节过程中都需要被充分激活随着给药时间的后移可能会使抑制作用减弱本研究采用.- ' 腹腔注射正常小鼠可引起较为严重的免疫抑制胸腺是淋巴细胞分化成熟的中枢免疫器官脾脏则是体内最大的外周免疫器官在免疫激活过程中免疫细胞的大量增殖和分化成熟会导致两者的质量增加故观察其质量的改变可以直观地反映小鼠免疫功能的变化有研究报道 ' 可引起脾脏萎缩实验中 ' 组脾指数明显升高提示可能由于 ' 停用后引起代偿性脾脏增生而胸腺指数降低则可能是胸腺淋巴细胞较脾淋巴细胞更易于凋亡此外胸腺淋巴细胞的凋亡也可直接或间接地促进脾淋巴细胞 4 的增殖本研究结果显示苦牛大力甜牛大力在一定剂量范围内可增加免疫抑制小鼠的体质量和免疫器官质量提示苦牛大力甜牛大力对免疫低下小鼠免疫器官具有一定的保护和恢复作用骨髓是人和哺乳动物的造血器官和中枢免疫器官外周白细胞是机体抵御外界微生物的重要组成部分其寿命短暂需骨髓干细胞源源不断分化补 $ 充本研究结果显示高中剂量的苦牛大力甜牛大力组均可显著拮抗 ' 导致的骨髓抑制状态明显增加免疫低下小鼠白细胞数量细胞免疫是以细胞为主的免疫应答 1 即是以细胞介导的超敏反应机体细胞免疫功能强弱常用足趾增厚法检验苦牛大力甜牛大力各剂量组可显著促进免疫低下小鼠的 1 程度其中高中剂量甜牛大力组致敏作用较苦牛大力相应剂量组明显提示二者在免疫调节方面具有相似作用单核 4 巨噬细胞系统 -*!*!"6#,9, * ) + +#-&8 是机体非特异性免疫系统的重要组成部分巨噬细胞在免疫应答过程中可活化并通过产生反应性氧中间物和反应性氮中间物而杀伤微生物从而发挥抗肿瘤抗感染功能印度墨汁作为颗粒状异物静脉注射进入血循环能迅速被单核吞噬细胞清除故测定单核吞噬细胞的吞噬能力可以反映 &8 吞噬功能的强弱本研究结果显示苦牛大力甜牛大力均可增加巨噬细胞的吞噬功能其中甜牛大力组呈现一定的剂量依赖性而苦牛大力组并没体现出明显的量效关系提示两者对单核 4 巨噬细胞吞噬功能的调节作用可能不同本实验通过检测以上免疫学指标综合评价与比较苦牛大力甜牛大力的免疫调节功能结果表明甜牛大力在提高细胞免疫功能方面的作用稍强于苦牛大力而在其余指标上甜牛大力与苦牛大力的作用差异无统计学意义提示苦牛大力同样可作为一种免疫增强剂应用于肿瘤患者手术放疗及化疗的后期恢复此外本实验发现造模一段时间后雄性小鼠对比雌性小鼠生理状态较差体毛脱落严重且睾丸有不同程度萎缩而甜牛大力与苦牛大力处理组的雄性小鼠生理状态有较大改善睾丸萎缩程度较 ' 免疫抑制小鼠轻有研究报道 ' 可对雄性小鼠生殖系统造成影响因此后期可以设计小鼠精子畸形试验小鼠睾丸染色体畸变试验等进一步观察牛大力是否能拮抗 ' 的生殖毒性苦牛大力甜牛大力的干预并不能完全阻断 ' 不良反应的发生其提高免疫力的详细机制还有待进一步的研究参考文献国家中医药管理局中华本草编委会 & 中华本草! & 上海上海科学技术出版社 & 广东省食品药品监督管理局 & 广东省中药材标准第一册 $ & 广东广东科技出版社 $$& 王春华王英王国才等 & 牛大力的化学成分研究 & 中草药.& $ 陈德力弓宝刘洋洋等 & 牛大力根脂溶性成分的!$ 分析 & 陕西中医 $. & 韦玉燕巫繁菁曾海生等 & 牛大力研究概况 & 广西科学院学报..& 韦翠萍刘丹丹唐立海等 & 牛大力对小鼠免疫功能的影响 & 广州中医药大学学报 $& 赵英虎高莉赵恒寿等 & 阿司匹林对环磷酰胺模型小鼠免疫功能的影响 & 中国抗生素杂志.$$&. 陈霆李枫棣邓巍等 & 小鼠内眦静脉丛注射与尾静脉注射比较 & 中国比较医学杂志 $$ &!2 232$ 43(5!4'215 ($ &1 ## ) " "# #"&2# $ $& 赵弋清罗霞陈东辉等 & 不同剂量环磷酰胺诱导正常小鼠免疫抑制的对比研究 & 免疫学杂志 $& 王晓丹杨洪武袁雪芬等 & 海参粉对小鼠机体免疫功能影响 & 中国公共卫生 $$ $$& ( %40414*5$ % * 6! 5 1' &4" # # "# " "# #+$ # " "" #&' & *4'473$2' *&. # 1." 1. 1$? 1.? # " #"- $#,## # " &7 $.$.& 下转第 $ 页!" # "!

5 期宋敏李清林孙定平等种椎动脉型颈椎病大鼠模型的建立与评价 $ 0 $ 12%$(3 21 * 3 5&5# " 2"#!"$ & # +"- ## &'# 吴学元张党锋刘洪亮等 & 椎动脉型颈椎病外科治疗效果的观 & 察 & 西安交通大学学报医学版 & $ 5$4 0 **4'4! 2$ 5 &'"#+ 曹碧茵施建蓉童瑶等 & 心理应激动物模型的研制及其应用 " # #)--)" & 中国行为医学科学 $ & &4# 1..& 王玮文邵枫林文娟 & 不同时程应激对大鼠行为免疫和交感神. $ 5$42$$ **4!0 **4'4! &5 " 经系统反应的影响 & 心理学报.& "#)--)" 李宁唐启盛侯秀娟等 & 广泛性焦虑大鼠前额叶皮质和海马磁 ")"- "& 共振波谱的研究 & 波谱学杂志.& $.& $ 柴居堂宋敏董万涛等 & 椎动脉型颈椎病动物模型国内研究进 $ 53!5' 5' &1 " 展及评价 & 中国中医骨伤科杂志 & -- # # & 编辑邱芬上接第 $ 页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编辑卓选鹏上接第 $$ 页吴小南杨雪帆朱萍萍等 & 慈菇多糖对免疫功能低下小鼠免疫 $5* 3 105*53 5'& 1" 1 调节作用! & 中国公共卫生 & ### # ' (4!$ *4 05 ( $ &7 # # " - +"& 4$$ ""##""#" #. #..$& &*-5$$ & 富校轶李博群张时莹等 & 超滤大豆蛋白肽对小鼠免疫功能的编辑国荣影响 & 食品工业科技. $&!" # "!

中草药

中草药致谢李沛赵继敏郑智敏江亚楠等病理生理学教研室老师在实验中给予的指导和帮助狄建彬顾振纶赵笑东钱培刚蒋小岗郭次仪中草药中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 8 期 10 年 8 月 1324 LDL C 非常明显升高 (

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