中国实验动物学会团体标准 实验动物树鼩病理学诊断规范 编制说明 ( 一 ) 工作简况 : 包括任务来源 起草单位, 协作单位 主要起草人及其所做工作等 ; 任务来源 : 任务来自国家科技部资助的以下三个国家科技支撑项目 : (1) 野生动物人工种群的生物净化及相关疾病动物模型的建立与评价 (2009

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1 中国实验动物学会团体标准 实验动物树鼩病理学诊断规范 编制说明 联系人 : 孙晓梅联系电话 : 编制单位 : 中国医学科学院医学生物学研究所中国人民解放军总医院昆明理工大学 时 间 :2016 年 10 月 24 日

2 中国实验动物学会团体标准 实验动物树鼩病理学诊断规范 编制说明 ( 一 ) 工作简况 : 包括任务来源 起草单位, 协作单位 主要起草人及其所做工作等 ; 任务来源 : 任务来自国家科技部资助的以下三个国家科技支撑项目 : (1) 野生动物人工种群的生物净化及相关疾病动物模型的建立与评价 (2009BAI83B02); (2) 实验动物新品种的种群建立与质量标准化研究 (2011BAI15B01); (3) 实验用树鼩的标准化研究和人类重大疾病树鼩模型创建与应用集成示范 (2014BAI101B01) 本部分的编制为这些课题的研究成果之一 起草单位 : 中国医学科学院医学生物学研究所 中国人民解放军总医院 昆明理工大学 主要起草人 : 匡德宣 陈华 代解杰 夏雪山 赵玉琼 孙晓梅 罕园园 ( 二 ) 主要工作过程 ; 本标准前后在 3 个国家科技支撑计划资助下逐步形成的 2009 年, 为完成 野生动物人工种群的生物净化及相关疾病动物模型的建立与评价 (2009BAI83B02) 中的任务内容, 在收集 整理相关文献和大量研究的基础上, 开始编制树鼩微生物感染谱的调查和质量控制标准及检测方法标准 ( 研究稿 ); 2011 年, 实验动物新品种的种群建立与质量标准化研究 (2011BAI15B01) 项目的实施, 进一步开展树鼩质量标准和技术规范研究, 制定树鼩微生物学质量标准和相关条件控制标准 2014 年, 在 实验用树鼩的标准化研究和人类重大疾病树鼩模型创建与应用集成示范 (2014BAI101B01) 项目中得到了持续研究和完善 形成了本标准研究稿, 即标准雏形 2015 年,6 月 10 日, 起草单位向全国实验动物标准化委员会提交了 国家标准制修订计划项目提案表,6 月 17 日, 在全国实验动物标准化技术委员会举办的工作会议上获得通过, 进行了备案

3 2015 年 11 月 11 日, 起草单位在项目中期检查会上将本标准申报稿通过会议和通讯方式, 向来自国内实验动物领域的 18 位知名专家征求了意见, 起草小组对照反馈意见进行修改 补充和完善 2016 年上半年, 起草小组又反复进行了多次修改和完善, 形成了目前的本标准征求意见稿 ( 三 ) 标准编写背景 ; 树鼩 (Tree shrews, Tupaia belangeri chinensis) 作为我国正在开发的具有自主知识产权的实验动物新品种, 由于其亲缘关系与灵长类最接近, 在生理解剖 生化代谢 神经发育 病毒感染特性 心理应激模式等方面, 与灵长类甚至人类之间都存在高度的相似性, 同时, 由于其具有体型小 繁殖周期短 易于实验操作 饲养成本低, 比高等灵长类动物更适合大规模应用等独特优势, 作为非人灵长类动物模型的补充 目前已经被用于若干重要疾病如乙型肝炎 (HBV) 丙型肝炎 (HCV) 手足口等病毒感染, 以及自发性肿瘤 代谢性疾病 抑郁症等动物模型的创建 随着树鼩相关研究的深入及其作为非人灵长类动物模型的替代作用得到越来越广泛的认可, 树鼩必将在未来作为实验动物模型被用于越来越多人类重大疾病的研究中, 各研究单位目前都急需行业标准和国家标准的技术支撑 同时, 实验树鼩作为我国具有自主知识产权的新品种, 其标准的制定将在很大程度上提高国内实验动物模型的研究水平, 从而提高我国在实验动物领域的国际地位 实验动物的健康状况直接影响其生产和应用, 而实验动物病理监测是实验动物质量监督检验不可缺少的重要环节, 其目的首先是对传染性动物疫情进行监控, 保证实验动物的健康, 为实验动物的饲养繁殖 生长发育及疾病的预防和治疗提供可靠的依据 ; 其次为研究疾病的病因 转归和比较医学提供依据 ; 影响动物健康的因素众多, 除了病原微生物和寄生虫外, 动物生存环境中的化学物质, 饲料 垫料和空气中的有害物质, 甚至噪声和光照都可能引发动物健康问题 病理学检查是判断动物健康状况的重要手段, 病理学研究以肉眼和光学显微镜为观察基础, 能结合全身所见症状及各项检测指标进行综合分析和判断, 是目前对实验动物质量进行综合评估的最好方法 近年来, 人们发现实验动物的病理变化至关重要, 尤其是病理形态学的改变, 对实验动物的应用产生重要影响

4 由于病理学诊断的复杂性和难于标准化, 至今实验动物的国家标准还没有病理学诊断标准 以往实验动物国家标准主要关注传染性疾病对动物质量的影响, 建立 实验动物树鼩病理学诊断规范, 可以更加全面地判断动物的健康状态, 完善实验用树鼩的质量控制标准体系 目前, 国内提出的实验树鼩标准仅有由云南省技术监督局颁布的 实验树鼩云南地方标准 - 实验树鼩(DB53/T ) 和 实验树鼩(DB53/T ), 这两者均不包括该标准, 因此, 目前除 DB11/T 实验用小型猪第 4 部分 : 病理学诊断规范 标准外, 尚无实验树鼩病理学诊断规范的相关标准 ( 四 ) 标准编制原则 ; 本标准的制定原则是基于我们实验结果的总结 提炼, 充分参考了国内外有关实验树鼩研究成果, 广泛采纳有关专家合理建议, 立足各项指标既符合实验树鼩实际情况, 又具有科学性和可操作性 在确定本标准的各项指标时, 严格遵循国家科委颁发的 实验动物管理条例 和国家科委与国家技术监督局联合颁发的 实验动物质量管理办法 本标准的编制遵循 科学性 实用性 统一性 规范性 的原则, 有利于云南省实验树鼩资源的有效利用, 提升我国实验动物标准化水平, 拓展使用范围 ( 五 ) 确定标准主要内容 ( 如技术指标 参数 公式 性能要求 试验方法 检验规则等 ) 的论据 ( 包括试验 统计数据 ), 修订标准时, 应增列新旧标准水平的对比 ; 1 定义 (1) 实验树鼩 Laboratory Tree Shrew 经人工饲育, 对其携带的病原微生物和寄生虫实行控制, 遗传背景明确或者来源清楚, 用于科学研究 教学 生产和检定以及其他科学实验的树鼩 (2) 临床病理学 Clinical pathology 用化学 微生物学 血液学和分子生物学的方法对体液 ( 血液和尿液 ) 和组织等进行实验室分析, 从而对疾病进行诊断的医学学科 (3) 解剖病理学 Anatomical pathology 通过肉眼 显微镜 化学的 免疫学的和分子的方法对整体 器官和组织的

5 形态进行检查而对疾病做出诊断的医学学科 2 血液常规指标缩略语 RBC: 红细胞,PLT: 血小板,WBC: 白细胞,LYM: 淋巴细胞,MON: 单核细胞,GRAN: 中性粒细胞,PCT: 血小板比积,HCT: 红细胞比积,MCHC: 平均红细胞血红蛋白浓度,MCH: 平均红细胞血红蛋白含量,MPV: 平均血小板体积,HGB: 血红蛋白 3 血液生化指标缩略语 TP: 总蛋白,ALB: 白蛋白,T-BIL: 总胆红素,ALT: 丙氨酸氨基转移酶, AST: 天门冬氨酸氨基转移酶,GLU: 血糖,BUN: 尿素氮,CRE: 肌酐,T-CHO: 总胆固醇,TG: 甘油三脂 4 检测指标的确定外观检查 : 考虑到监督检查工作的可行性, 外观检查内容的设定以尽可能简捷为原则, 检测指标主要为目测项目 血常规检查和血液生化指标检查 : 主要参考了药物安全性评价的国际规范, 由于检测项目的多少所需检测经费差别较大, 考虑到监督检查工作中标准的可行性和经济性, 选择对健康状况最有代表性的 12 项血常规指标和 11 项血清生化指标 大体解剖 : 由于采取尽可能不处死动物的原则, 因而需要解剖的动物数量较少, 因此, 确定大体解剖检查内容尽可能全面, 这样有利于全面了解动物的健康状态 组织病理学 : 考虑到检查成本和时间限制, 依据树鼩病理学研究的实践经验, 组织病理学检查项目选择了最主要的脏器和大体解剖发现异常的器官和组织 5 血液化验指标正常值范围的设定生理指标正常值范围的设定需要大样本的检查结果并与临床情况相结合 本课题所选择研究的动物数量有限, 因此, 血液化验指标正常值范围的设定主要依赖统计学的方法, 将所获得的检测指标数据做正态分布统计, 以 95% 可信限范围作为正常值范围 由于研究样本数量不够大, 即便经过统计学的处理, 作为生理指标正常值范围的设定仍然难免存在偏差, 因此, 还参考了已发表文献中的数据, 对以上 95% 可信限范围进行了修正 这样获得的血液化验指标正常值范围还需要

6 实践的检验, 并在不断丰富数据资料的基础上做进一步的修订 6 对病理学专业人员的要求在病理诊断标准的执行过程中, 病理学专业人员对诊断结果的判定至关重要, 因此, 本标准要求由具有病理学专业资质的人员来签署报告, 同时, 增加了同行复核的要求 此外, 随着实验动物病理诊断标准的不断建立和完善, 需要加强有关病理学专业人员的交流与培训, 逐步开展认证工作, 不断提高实验动物的病理学诊断水平, 增强诊断的准确性和可靠性 7 确定本标准内容的主要论据本标准是在收集 整理国内外相关组织 地方和行业有关实验树鼩质量控制标准, 以及迄今为止国内外研究机构所有发表的以树鼩作为实验材料开展组织病理学研究基础上制定的 确定本标准的主要论据是以下论文 : (1) 匡德宣, 孙晓梅, 江勤芳, 仝品芬, 陆彩霞, 高家红, 代解杰. 树鼩的动物福利措施探讨 [J]. 中国比较医学杂志,2013,23(4): (2) 匡德宣, 王文广, 孙晓梅, 黄晓云, 陆彩霞, 罕园园, 仝品芬, 代解杰. 驯养繁殖树鼩主要消化腺的组织学观察 [J]. 实验动物与比较医学, (1): (3) 江勤芳, 匡德宣, 仝品芬, 等. 树鼩规模化繁殖及繁殖群的建立 [J]. 实验动物科学,2011,28(6): (4) 匡德宣, 孙晓梅, 王文广, 陆彩霞, 罕园园, 仝品芬, 代解杰. 树鼩乳腺导管内乳头状瘤一例 [J]. 亚洲兽医病例研究,2015, 4, (5) 匡德宣, 孙晓梅, 陆彩霞, 王文广, 仝品芬, 殷安国, 李晓飞, 代解杰. 实验树鼩主要内分泌器官的组织学观察 [J]. 中国比较医学杂志,2014,24(6): ( 六 ) 主要试验 ( 或验证 ) 的分析 综述报告, 技术经济论证, 预期的经济效果 ; 1 病变诊断依靠病理学专业人员病理学是一门经验医学, 树鼩可能出现的病理改变多种多样, 给出一个统一的病变判定标准难以实现, 病理标准的制定主要规范可能影响病变判定的技术方法, 同时明确判定规则, 对病变的诊断仍然依赖于病理学专业人员的经验和判断 2 尽可能不处死动物由于树鼩是珍贵资源, 而且培育成本也远高于啮齿类动物, 因此, 本标准参考了北京市地方标准 - DB11/T 实验用小型猪第 4 部分 : 病理学诊

7 断规范, 设立临床病理学和解剖病理学两阶段结果判定, 其目的在于通过外观和血液化验结果就能够明确判定动物是否符合标准时, 就不再处死动物进行解剖病理学检查, 这样既节约了检测成本, 也使合格的动物还能够继续用于实验研究 3 注重标准执行的可行性实验动物的健康状况受多种因素影响, 判断动物健康与否的检测内容也多种多样, 例如, 目前人类健康体检的手段就包括 : 血液化验 尿液化验 粪便化验 各种影像学检查 (X 线透视或照相 B 超 CT MRI PET 等 ) 功能学手段( 心电图 动态心电图 肌电图 脑电图等 ) 甚至心理咨询等等 树鼩健康状况的检查充分考虑到标准执行的可行性, 同时作为实验动物质量控制标准还应考虑到标准的执行成本 因此, 本标准内容仅设定了外观检查 血液化验检查和解剖病理学检查, 指标的设定充分考虑了对动物健康状况的代表性和经济性 ( 七 ) 采用国际标准和国外先进标准的程度, 以及与国际 国外同类标准水平的对比情况, 或与测试的国外样品 样机的有关数据对比情况 ; 树鼩作为具有我国自主知识产权的实验动物新品种, 目前还没有相关病理学诊断标准报道, 无国际或国外先进标准参照和借鉴 在制订本标准时本着立足国内 面向国际的原则, 尽可能采用国际上认可的原则和方法, 同时又符合目前国情, 注重可操作性 ( 八 ) 与有关的现行法律 法规和强制性标准的关系 ; 目前, 在实验树鼩环境及设施质量控制方面迄今无国家层面的相关标准, 本标准的制定以符合 实验动物管理条例 ( 国家科委,1988 年 ) 为前提, 在编制体例上尽可能与现行实验动物国家标准 (GB GB ) 相一致 ( 九 ) 重大分歧意见的处理经过和依据 ; 在本标准的制定过程中, 先后召开了多次的专家研讨会和咨询论证会, 并在全国范围内进行了广泛的征求意见, 无重大意见分歧 ( 十 ) 标准作为强制性标准或推荐性标准的建议 ; 实验用树鼩病理学诊断规范为首次制定, 需要在实践过程中不断改进和完善, 例如, 血常规指标的红细胞指数, 随着人工培育代数的进展, 红细胞指数呈下降的趋势, 正常参考值的设定存在时效性 因此, 建议作为推荐性标准

8 ( 十一 ) 贯彻标准的要求和措施建议 ( 包括组织措施 技术措施 过渡办法等内容 ); 由于树鼩是珍贵资源, 而且培育成本也远高于啮齿类动物, 因此, 本标准结合树鼩的生物学特性, 设立相应的技术参数指标, 同时还考虑到我国目前实验用树鼩现有水平和发展趋势, 最终设立相应的技术指标, 基本上代表了我国实验用树鼩的环境和设施控制要求和水平 建议本标准由全国实验动物标准化技术委员会组织宣传和培训, 贯彻实施 ( 十二 ) 废止现行有关标准的建议 ; 暂无 ( 十三 ) 其他应予说明的事项 本标准在编写格式上符合 GB/T 的规定 本部分的制定引用了以下文件 DB53/T 实验动物病理学检测第 1 部分 : 实验动物处死方法 DB53/T 实验动物病理学检测第 2 部分 : 病理剖检方法 DB53/T 实验动物病理学检测第 4 部分 : 病理检测技术规程 DB11/T 实验用小型猪第 4 部分 : 病理学诊断规范

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