waters.com 洞悉原料品质, 确保食品饮料安全优质 5 waters.com/food 212 Waters The Science of What's Possible

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1 食品安全应用文集

2 waters.com 洞悉原料品质, 确保食品饮料安全优质 5 waters.com/food 212 Waters The Science of What's Possible

3 [ 目录 ] 目录固相萃取 (SPE) 策略以及操作方法... 6 沃特世固相萃取和样品前处理产品介绍... 8 样品制备解决方案...1 氨基酸分析完整解决方案...11 色谱分离解决方案...12 食品中的兽药残留分析 使用 UPLC-MS/MS 检测肉制品中常见的 β- 受体激动剂的残留量...16 ACQUITY UPLC/Xevo TQ-S 同时测定猪尿液中的 21 种 β- 受体激动剂...18 牛奶中四环素 土霉素 金霉素 强力霉素残留分析...2 鱼肉中孔雀石绿的分析...21 蜂蜜中硝基呋喃及其代谢物残留分析...22 QuEChERS-UPLC-MS/MS 快速测定鸡肝中七种磺胺类药物残留...23 牛奶中六种青霉素类抗生素残留分析...25 蜂蜜中氯霉素的分析...26 牛奶中大环内酯类抗生素残留分析...27 蜂王浆中 18 种磺胺残留量的测定...28 蜂蜜中头孢唑啉 头孢匹林 头孢氨苄 头孢洛宁 头孢喹肟残留量的测定...3 环境水样中 16 种磺胺类抗生素和甲氧苄氨嘧啶残留分析...31 肉类和牛奶中的氨基糖苷类抗生素...33 使用 QuEChERS 方法检测膳食和牛奶中的阿维菌素类...35 鸡肉中的恩诺沙星 (BAYT RIL )...37 食用肌肉组织中多种兽药多残留测定...38 牛奶中兽药的多残留测定...4 牛奶中的青霉素 四环素和磺胺类药物...42 使用 QuEChERS 检测肉类和牛奶中的类固醇激素...43 农药和污染物 水果和婴儿食品中 42 种农药残留的同时定性和确证分析...45 使用 DisQuE 净化和 Xevo TQ-S 进行蔬菜中多种农药残留筛查分析...46 使用 QuEChERS-UPLC/MS/MS 分析婴幼儿食品中的多农残...47 使用 AOAC QuEChERS 方式结合 UPLC MS/MS 分析茶叶中的多农残...49 土豆中苯胺灵残留分析...5 蔬菜水果中氨基甲酸酯类农药多残留分析 ( 柱后衍生法 )...51 [ 3 ]

4 [ 目录 ] 蔬菜水果中农药多残留分析...52 对苯并咪唑类杀真菌剂多组分残留的检测...53 饮用水中草甘膦的分析...54 采用超灵敏 UPLC/MS/MS 对饮用水样品中的酸性除草剂进行定量分析...55 使用 QuEChERS 检测婴儿食品和婴儿配方奶粉中的双酚 A B 和 E...57 橙汁中的多菌灵和其它康唑类杀菌剂...59 饮用水中的敌草快和百草枯...62 使用 QuEChERS 检测牛肉中的有机磷农药...64 食品测试和质量控制 (QC) 婴幼儿乳粉中的核苷酸分析...66 牛磺酸牛乳和婴幼儿配方食品中氨基酸分析...67 UPLC 测定烟叶中的氨基酸含量...68 ACQUITY UPLC-ELSD 测定奶粉和牛奶中八种糖的含量...7 动物饲料水解产物中的氨基酸...71 啤酒生产中的氨基酸...72 强化食品中的脂溶性维生素...74 人参根粉提取物中的人参皂苷 RB 掺假菠萝汁中的橙皮甙...77 软饮料的快速分析...78 食品和膳食补充剂中的大豆异黄酮...79 婴儿配方奶粉中的维生素 A 和 E...81 水溶性维生素 咖啡因和食用色素...82 动物性食品中糖皮质激素类兴奋剂的测定...83 液相色谱 - 质谱联用测定乳及乳制品中 29 种性激素...85 水体中微囊藻毒素的分析...87 水和动物组织中辛烷磺酸 (PFOS) 分析...88 环境水样中痕量雄激素和孕激素残留分析...9 液质法测定饮用水中丙烯酰胺时应对水体基质干扰的办法...92 违禁添加物和生物毒素分析 使用液相色谱荧光检测器快速检测多环芳烃 (PAHs) 确保海产品的安全...94 婴幼儿配方奶粉和液态奶中三聚氰胺和三聚氰酸含量测定...96 苹果汁中棒曲霉素 ( 展青霉素 ) 的分析...98 火锅底料中的罂粟壳分析...99 沃特世食品中 18 种邻苯二甲酸盐 UPLC/MS/MS 分析解决方案 乳及乳制品中 L- 羟脯氨酸残留的测定 乳和乳制品中黄曲霉毒素 M1 的测定 (LC-MS) 使用 UPLC 和荧光检测器, 无需衍生反应的黄曲霉毒素快速分析 [ 4 ]

5 [ 目录 ] 饮料中 4- 甲基咪唑和 2- 甲基咪唑分析方法 烘烤和油炸食品中丙烯酰胺的分析 花生中黄曲霉素 B1,B2,G1,G2 的分析 辣椒产品中苏丹红的分析 应用文献索引 多农药残留分析 污染物分析 兽药残留分析 水分析 食品功能组分分析 生物毒素分析 POPs( 持久性污染物 ) 分析 [ 5 ]

6 固相萃取 (SPE) 策略以及操作方法 固相萃取 (SPE) 一般有三个策略 : 样品分离净化的具体步骤 1. 保留 - 清洗 - 洗脱策略 : 被测物首先在吸附剂上吸附, 随后用弱清洗剂除去基质干扰 最后, 被测物被强溶剂洗脱 被测物的洗脱体积小于上样体积, 这被称为样品富集 n 样品上样到固相提取吸附剂上, 被测物保留在吸附剂上 n 干扰基质被清洗 n 被测物被洗脱 2. 通过净化策略 : 被测物无保留的直接通过吸附剂, 而干扰基质保留在吸附剂上 运用该策略没有样品富集效果 n 样品直接通过吸附剂, 没有富集作用 n 干扰基质保留在吸附剂上 表格 1. SPE 小柱规格选择指南 LP= 大颗粒 (6 µm) 3. 基质分散策略 : n 吸附剂粉末加入样品后振摇 n 样品过滤和离心 n 上清液收集后分析 Step Elute 1 样品量小柱规格 ( 以 Oasis 为例 ) 1-1 ml 1 cc/3 mg 或者 3 cc/6 mg 1-1 ml 3 cc/6 mg 或者 6 cc/2 mg 1. 上样 2. 清洗 3. 洗脱 通过 Step Elute ml 6 cc/2 mg 或者 6 cc/5 mg (LP) 5-1 ml 6 cc/5 mg (LP) 或者 12 cc/1 g (LP) Step Elute 3 1. 样品的预处理 固体样品 ( 土壤, 组织, 等等 ) n 振摇, 超声或者索氏提取 - 用极性有机溶剂 ( 甲醇, 乙腈 ) 提取样品中的极性化合物 - 用非极性有机溶剂 ( 二氯甲烷, 丙酮 ) 提取样品中的非极性的化合物非水的液体 n 如果这个样品可溶于水, 用水稀释它后上样于反相模式 ( 或者混合模式 ) 的 SPE n 如果这个样品可溶于正己烷, 用正己烷稀释后上样于正相 SPE 废水 n 根据需要过滤或者离心 2. 平衡步骤 就反相吸附剂而言, 需要用有机溶剂 ( 例如甲醇, 乙腈, 异丙醇或四氢呋喃 ) 对吸附剂做预处理以得到重现的结果 如果没有这步, 水溶液不能完全进入吸附剂孔内和浸湿表面 因此, 只有一小部分表面面积可与分析物相互作用 相同原理, 对于硅胶基质吸附剂, 在整个流程中不能让吸附剂干涸是非常重要的 反相吸附剂的整个平衡步骤包括用有机溶剂活化吸附剂和用水或缓冲盐等平衡吸附剂 3. 上样步骤 当吸附剂不能保留被测物时, 这被称为穿透 如遇以下情况, 穿透会在上样步骤发生 : n 用高比例有机溶剂上样极性化合物 解决办法是在上样之前将样品用水稀释至含有机溶剂 <1 n 被测物和蛋白结合, 将穿透吸附剂 通过将样品酸化或碱化确保被测物不与蛋白结合 n 吸附剂因基质而过载 因此, 选择正确规格的吸附剂 ( 参阅表格 1 或表格 2) 是重要的 n 如果上样的流速太快 被测物和吸附剂之间没有足够的接触时间 观测并且调整真空, 以便你看见分离的小滴, 并非一连串液体 样品量小柱规格 ( 以 Spe-Pak 为例 ) 1-1 ml 3 cc/2 mg 或者 6 cc/5 mg 1-5 ml 3 cc/2 mg 或者 6 cc/5 mg (LP) 5-1 ml 6 cc/5 mg (LP) 或者 12 cc/1 g 表格 2. SPE 小柱规格选择指南 LP= 大颗粒 (6 µm) [ 6 ]

7 固相萃取 (SPE) 策略以及操作方法 4. 清洗步骤 清洗被保留在吸附剂上的比被测物保留弱的干扰杂质, 并且冲洗上样带来的干扰基质 理想的清洗溶剂能除去所有干扰物而对被测物的保留和回收没有影响 因此, 清洗溶剂必须强度适中, 介于上样和洗脱溶剂之间 5. 洗脱步骤 洗去干扰物后, 用强洗脱剂洗脱被测物 需要精确控制洗脱溶剂的量和流速以确保重现性的结果 ( 参见表格 3) 目标分析物性质 样品基质 活化 / 平衡步骤 反相模式正相模式离子交换模式 低至中等极性 / 疏水性 水性样品 1. 有机溶剂活化 2. 水平衡 中等至强极性 / 不带电荷非极性有机溶剂 非极性有机溶剂 清洗步骤水相缓冲溶液非极性溶剂 洗脱步骤 逐步提高极性有机溶剂的比例 逐步提高中等至强极性有机溶剂比例 带电荷 / 可离子化水性样品 / 离子强度低 低离子强度的缓冲溶液 低离子强度的缓冲溶液更强的缓冲溶液 - 离子强度更高或者通过调节 ph 值来中和电荷 表格 3. 不同 SPE 分离模式选择指南 沃特世 LC/MS 检验合格样品瓶业界唯一经 LC/MS 认证的样品瓶 沃特世公司深知高品质样品瓶对 LC/MS 分析的重要性, 因此我们专门为 MS 用户提供 LC/MS 检验合格样品瓶, 所有样品瓶都经过 MS 检验, 符合对离子总数和高质量范围离子簇的规格要求 所推出的产品比我们测试过的全球供应商的任何一种产品都更洁净 使用专业认证的样品瓶, 能够避免下面的问题对分析结果的影响 : n LC 图谱中的 鬼峰 以及 MS 图谱中无法解释的质量数峰 ; n 密封垫脱落 ; n 进样针损坏 去活玻璃样品瓶 (DV) 和内插管沃特世全部回收样品瓶沃特世最大回收样品瓶 在进行生物样品 药物 天然产物 杀虫剂或除草剂分析时, 可有效避免样品瓶对目标化合物的吸附作用 其表面改性是永久性的, 无有效期限制 专门设计用于侧取样口进样针设计, 以及沃特世 Alliance 269/2695HPLC 系统的出厂针头取样深度设置 此样品瓶具有最大的样品容量 ( 约 1mL) 和最小的残留体积 ( 约 9μL) 专门设计用于 ACQUITY UPLC 和 Alliance HT HPLC 系统的底部取样口进样针设计 此样品瓶具有最大的样品容量 ( 约 1.5mL) 和最小的残留体积 9mm 瓶盖也适合用于其他品牌的 HPLC 和 GC 系统 最新沃特世样品瓶选择软件 根据您的仪器系统和应用要求, 帮助您快捷迅速地选择最合适的样品瓶! 输入包括系统类型 样品体积 检测方法以及目标分析物是否对光敏感的信息, 软件会自动帮您选择出合适的样品瓶! 同时沃特世将会将最新的软件更新信息以及产品信息及时发给注册用户! 欲了解更多的沃特世专业认证样品瓶信息, 或者下载免费的样品瓶选择软件, 请登陆 [ 7 ]

8 沃特世固相萃取和样品前处理产品介绍 Oasis 产品系列 传统 C 18 固相萃取产品具有下述难以解决的问题, 包括硅羟基活性 ; 吸附剂害怕 干涸 ;ph 局限性以及极性分析物或代谢物的 不保留 问题等, 这些问题会造成分析结果重现性不好以及回收率差 Oasis 系列产品以其高洁净度 高重现性和稳定性以及独特的保留特性独树一帜, 确保用户开发出耐用的 SPE 方法 n 固相萃取著名品牌 n 小柱 96 孔板和 µelution 板多种产品形式 n 吸附剂为共聚物, 不怕 干涸, 重现性好 n 比传统 C 18 小柱载荷量高 3 倍, 解决了极性化合物保留的问题 Oasis 2x4 方法 - 最简便, 快捷, 干净的 SPE 方法开发策略 n 确定目标化合物的性质 ( 根据结构和 pka 值判断目标化合物是酸, 碱, 或中性?) n 根据目标化合物的性质选择四种 Oasis 吸附剂中的一种 MCX 碱性化合物 (pka2-1) 选择 MCX( 复合模式 : 强阳离子交换和反相保留机理 ) WCX 强碱性化合物 (pka>1, 如季铵盐 ) 选择 WCX( 复合模式 : 弱阳离子交换和反相保留机理 ) MAX 酸性化合物 (pka2-8) 选择 MAX( 复合模式 : 强阴离子交换和反相保留机理 ) WAX 强酸性化合物 (pka<1, 如磺酸 ) 选择 WAX( 复合模式 : 弱阴离子交换和反相保留机理 ) Oasis MCX Oasis MAX O N SO 3 O N N Oasis HLB pka <1 1 meq/g O N pka >18.25 meq/g Oasis WCX Oasis WAX O N pk a ~5.75 meq/g O OH O O H ph -14 O N N N H pka ~6.6 meq/g H N N H H [ 8 ]

9 沃特世固相萃取和样品前处理产品介绍 n 传统的 SPE 相 n 产品形式多样 n 存在各类参考文献和可借鉴的有效方法 n 通过经认证的 Sep-Pak 提取小柱可获得超低量的可萃取物 n 更小的干扰和更高的灵敏度 Sep-Pak 固相萃取小柱的便捷设计和功能克服了传统小柱液 - 固萃取的程序困难, 使固相萃取的巨大优势得以实现 智能的产品设计 合理 的产品管理和严格的质量测试保证了吸附剂和填充层的优质 可重复性 多功能性和使用便捷性 Sep-Pak 小柱分离模式选择指南 分离模式正相反相离子交换 吸附剂 Silica, Florisil, Alumina, Diol, NH 2, CN C, tc, C, Diol, PoraPak, RDX, NH, CN Accell Plus QMA, Accell Plus CM, NH 2 吸附剂极性 高 低 高 使用溶剂极性范围 低到中等极性 中等极性到高极性 高极性 样品上样溶剂 正己烷, 甲苯, 二氯甲烷 去离子水 水或者缓冲盐 洗脱溶剂 乙酸乙酯, 丙酮, 乙腈 甲醇, 乙腈, 二氯甲烷 缓冲盐, 高离子强度盐溶液 样品洗脱顺序 低极性物质先流出 高极性物质先流出 离子交换力弱的物质先流出 可改变溶剂强度洗脱被保留物质增加溶剂极性降低溶剂极性 增加离子强度或者增加 PH 值 ( 阴离子交换 ) [ 9 ]

10 样品制备解决方案 n 方法实施简便, 几乎不需任何培训即可上手 n 符合 AOAC 和 CEN 果蔬农药残留测定官方方法 n 成本效益高 n 以简单的试剂盒形式提供可靠的高质量产品 DisQuE 分散样品制备试剂盒 分散样品制备通常称为 QuEChERS, 是一种简单 直接的样品制备技术, 适用于多种食品和农产品中的多残留农药分析 沃特世的 DisQuE 分散样品制备试剂盒含有包装便利的离心管, 管内有预先称量的吸附剂和缓冲液, 专为配合 AOAC 和欧洲标准化委员会 (CEN) 官方方法使用而设计 DisQuE 分散样品制备技术是一种经充分验证的 可用于宽范围农药残留分析的高通量样品制备方法 过滤器 过滤步骤可以为分析系统组件提供即时的保护, 同时还能最大程度缩短停工时间 沃特世与 Pall Life Sciences 合作开发了通过合规性认证的过滤产品, 其设计和开发均符合法规要求和质量目标 认证样品瓶 样品瓶是样品制备的一个关键部分, 在使用时应确保其中不会引入不必要的污染和干扰物 沃特世提供了各种各样的认证样品瓶选择, 包括 TruView LCMS 认证样品瓶, 经测试可以最大程度提高 LC/UV/MS 和 LC/MS 的灵敏度并改善检测限 这些样品瓶不会对您的测试结果产生任何不利影响 ; 并且还能避免鬼峰 隔片移位和进样针的损坏 分析标准品和试剂 沃特世非常清楚优质的分析标准品和试剂对于确保分析仪器不断进步 工作流程取得成功的重要性 这正是沃特世提供高纯度 精确配制 可重现和可追溯至具体参数的标准品和试剂的原因 无论是系统性能标准品还是特定于应用的标准品, 您都可以依赖于领先的分析仪器创新者 沃特世 [ 1 ]

11 氨基酸分析完整解决方案 UPLC 氨基酸分析解决方案包括 : n Waters ACQUITY UPLC 系统和可变波长紫外检测器 n 全系统和应用级支持文档 n 特定应用的性能校验 n Connections INSIGHT 远程智能服务 n Empower 2 软件的预配置项目 方法和报告格式 n AccQ Tag Ultra 衍生化学品, 包括色谱柱 试剂和洗脱液 氨基酸分析 氨基酸组成是体现食品和饲料营养价值的关键部分 氨基酸的定性和定量分析是为了确定蛋白质的浓度并对其进行鉴定, 或根据特定商品的游离氨基酸含量, 确认天然产品的来源 在食品安全测试中, 氨基酸分析可确定加工食品是否缺乏蛋白质, 以及检测出掩盖了实际蛋白质含量的掺假食品 氨基甲酸酯分析试剂盒 该试剂盒内含有沃特世氨基甲酸酯色谱柱 Oasis HLB 小柱 样品瓶和参比标准品, 经优化可简 化分析过程, 并提高结果的可靠性 饮料分析试剂盒 该试剂盒用于分析含有乙酰磺胺酸钾 ( 安赛蜜 ) 糖精 咖啡因 苯甲酸盐 山梨酸酯和阿斯巴甜的软饮料配方, 经设计可提高实验室工作效率 改善数据质量 最大程度降低成本和增加产品一致性 可配合 HPLC 和 UPLC 系统使用 三聚氰胺分析套装这类分析套装以美国食品药品监督管理局 (US FDA) 实验室信息公告第 4422 号为基础, 提供了一种用于筛查食品 ( 包括婴儿配方奶粉和乳制品 ) 中三聚氰胺及其相关化合物的综合解决方案 提供有 HPLC 和 UPLC 两种方案可选 [ 11 ]

12 色谱分离解决方案 色谱柱选择指南 沃特世一直致力于材料科学研究, 凭借对 HPLC 和 HPLC 色谱柱填料的不懈钻研, 我们开发出了各种突破性的色谱柱技术 随着不同科学挑战的出现, 沃特世始终以创新的色谱柱技术来满足不断变化的市场需求 XSelect C 18 CSH 苯己基 CSH 氟苯基 选择性特征 : 通用型反相色谱柱, 为方法开发提供了杰出的 ph 稳定性并可实现快速的流动相再平衡 表面带电杂化颗粒 (CSH ) 技术可得到完美的峰形, 提高了碱性化合物加载量 键合 : 三官能化 C 18 配体, 完全封端, 与 CSH 颗粒键合 选择性特征 : 与通用型互补的选择性配体, 可提供与多环芳烃化合物之间的 π-π 相互作用, 并且在 ph 极值下能保持出色的重现性 CSH 技术可获得完美的峰形, 提高了碱性化合物加载量 键合 : 三官能化 C 6 苯基配体, 完全封端, 与 CSH 颗粒键合 选择性特征 : 通用型色谱柱, 拥有非常高的分离选择性, 尤其是在使用低 ph 值流动相时 CSH 技术可获得完美的峰形, 提高了碱性化合物加载量 键合 : 三官能化丙基氟苯基配体, 未封端, 与 CSH 颗粒键合 选择性特征 : 高性能 C 18 填料, 保留时间更长, 峰形完美, 在低 ph 值下耐酸水解 专为需要硅基 C 18 选择性的 UPLC 分离而设计 HSS C 18 HSS C 18 SB HSS T3 键合 : 高覆盖率三官能化 C 18, 完全封端, 与高强度硅胶 (HSS) HPLC 颗粒键合 选择性特征 : 独特的未封端 C 18 填料, 专为方法开发科学家而设计 在低 ph 值条件下使用时, 可表现出独特的碱选择性 (SB), 并且可在 UPLC 和 HPLC 之间进行转换 键合 : 三官能化键合 C 18 中等覆盖率, 未封端, 与 HSS HPLC 颗粒键合 选择性特征 : 水性流动相兼容 HPLC 色谱柱, 拥有杰出的保留性能 不仅具有对极性化合物的保留能力, 还可在 UPLC 和 HPLC 分离之间进行转换 键合 :T3(C 18 ) 键合和封端, 与 HSS HPLC 颗粒键合 XBridge C 18 Shield RP18 C 8 Phenyl HILIC 选择性特征 : 通用型色谱柱, 由于其在极限 ph 下的稳定性和对多种化合物的广泛适用性, 是方法开发的理想选择 键合 : 三官能化键合 C 18, 完全封端, 与亚乙基桥杂化 (BEH) 颗粒键合 选择性特征 : 与直链 C 18 相比具有互补选择性, 尤其是对于酚类分析物 与 1 水相组分兼容 键合 : 单官能化内嵌极性 C 18, 完全封端, 与亚乙基桥杂化颗粒键合 选择性特征 : 通用型色谱柱, 由于其在 ph 极值下的稳定性和对多种化合物的广泛适用性, 是方法开发的理想选择 键合 : 三官能化 C 8, 完全封端, 与 BEH 颗粒键合 选择性特征 : 出色的方法开发色谱柱, 可提供互补选择性, 尤其适合多环芳烃化合物 相对于其他苯基键合相, 具有独特的 ph 稳定性 键合 : 三官能化 C 6 苯基, 完全封端, 与 BEH 基质键合 选择性特征 : 对于强极性 碱性 水溶性分析物具有出色的保留性能 专用于使用高浓度有机溶剂流动相的 HILIC 分离, 并已经过测试 键合 : 未与 BEH 基质键合 [ 12 ]

13 色谱分离解决方案 XBridge( 续 ) Amide 选择性特征 : 稳定的 HILIC 固定相, 设计用于分离多种强极性化合物 尤其适用于在高温和高 ph 值下, 使用高浓度有机改性剂 分离碳水化合物 ( 糖类 ) 兼容所有现代检测器, 包括 MS ELSD 紫外和荧光检测器 键合 : 三官能化酰胺基, 与 BEH 颗粒键合 Atlantis T3 HILIC C 18 选择性特征 : 可保留极性化合物, 兼容 1 的水性流动相, 在低 ph 值条件下具有出色的稳定性 专为增强极性分析物保留性能而设计 键合 :T3 (C 18 ) 键合和封端, 与高纯度硅胶基质键合 选择性特征 : 对于强极性 碱性 水溶性分析物具有出色的保留性能 专用于使用高浓度有机溶剂流动相的 HILIC 分离, 并已经过测试 键合 : 未键合高纯度硅胶基质 选择性特征 : 可保留极性化合物 经设计可兼容 1 的水性流动相 键合 : 双官能化 C 18 键合, 完全封端, 与高纯度硅胶基质键合 SunFire C 18 C 8 选择性特征 : 通用型方法开发色谱柱 具有非常高的加载量, 尤其适用于低 ph 流动相中的碱性分析物, 是纯化和杂质分析的理想选择 键合 : 双官能化 C 18, 完全封端, 与高纯度硅胶基质键合 选择性特征 : 通用型方法开发色谱柱 具有非常高的加载容量, 尤其适用于低 ph 流动相中的碱性分析物 其疏水性较弱, 因此对大多数分析物的保留能力不及 C 18 键合 : 双官能化 C 8, 完全封端, 与高纯度硅胶基质键合 ACQUITY UPLC CSH C 18 CSH Phenyl-Hexyl CSH Fluoro-Phenyl 选择性特征 : 通用型反相色谱柱, 为方法开发提供了杰出的 ph 稳定性并可实现快速的流动相再平衡 表面带电杂化颗粒 (CSH) 技术可得到完美的峰形, 提高了碱性化合物加载量 键合 : 三官能化 C 18 配体, 完全封端, 与 CSH 颗粒基质键合 选择性特征 : 与通用型互补的选择性配体, 可提供与多环芳烃化合物之间的 π-π 相互作用, 并且在 ph 极值下能保持出色的重现 性 CSH 技术可获得完美的峰形, 提高了碱性化合物加载量 键合 : 三官能化 C 6 苯基配体, 完全封端, 与 CSH 颗粒基质键合 选择性特征 : 通用型色谱柱, 拥有非常高的分离选择性, 尤其是在使用低 ph 值流动相时 CSH 技术可获得完美的峰形, 提高了 碱性化合物加载量 键合 : 三官能化丙基氟苯基配体, 未封端, 与 CSH 颗粒基质键合 选择性特征 : 通用型色谱柱, 由于其在 ph 极值下的稳定性和对多种化合物的广泛适用性, 是方法开发的理想选择 BEH C 18 BEH Shield RP18 键合 : 三官能化 C 18, 完全封端, 与亚乙基桥杂化 (BEH) 基质键合 选择性特征 : 与直链 C 18 相比具有互补选择性, 尤其是对于酚类分析物 与 1 水相组分兼容 键合 : 单官能化内嵌极性 C 18, 完全封端, 与 BEH 基质键合 [ 13 ]

14 色谱分离解决方案 ACQUITY UPLC( 续 ) 选择性特征 : 通用型色谱柱, 由于其在 ph 极值下的稳定性和对多种化合物的广泛适用性, 是方法开发的理想选择 BEH C 8 键合 : 三官能化 C 8, 完全封端, 与 BEH 基质键合 选择性特征 : 出色的方法开发色谱柱, 可提供互补选择性, 尤其适合多环芳烃化合物 对于苯基键合相具有独特的 ph 稳定性 BEH 苯基水平 键合 : 三官能化 C 6 苯基, 完全封端, 与 BEH 基质键合 选择性特征 : 对于强极性 碱性 水溶性分析物具有出色的保留性能 专用于使用高浓度有机溶剂流动相的 HILIC 分离, 并已经 BEH HILIC 过测试 键合 : 未与基质键合 选择性特征 : 超性能 C 18 填料, 保留时间更长, 峰形完美, 在低 ph 值下耐酸水解 专为需要硅基 C 18 选择性的 UPLC 分离而设计 BEH HSS C 18 键合 : 高覆盖率三官能化 C 18, 完全封端, 与高强度硅胶 (HSS) UPLC 颗粒基质键合 BEH Amide HSS C 18 HSS C 18 SB HSS T3 选择性特征 : 稳定的 HILIC 固定相, 设计用于分离多种强极性化合物 尤其适用于在高温和高 ph 值下, 使用高浓度有机改性剂分离碳水化合物 ( 糖类 ) 兼容所有现代检测器, 包括 MS ELSD 紫外和荧光检测器 键合 : 三官能化酰胺, 与 BEH 基质键合 选择性特征 : 超性能 C 18 填料, 保留时间更长, 峰形完美, 在低 ph 值下耐酸水解 专为需要硅基 C 18 选择性的 UPLC 分离而设计 键合 : 高覆盖率三官能化 C 18, 完全封端, 与 HSS UPLC 颗粒基质键合 选择性特征 : 独特的未封端 C 18 填料, 专为方法开发科学家而设计 在低 ph 值条件下使用时, 可表现出独特的碱选择性 (SB) 键合 : 中等覆盖率三官能化键合 C 18, 未封端, 与 HSS UPLC 颗粒基质键合 选择性特征 : 水性流动相兼容 UPLC 色谱柱, 拥有杰出的保留性能 不仅具有对极性化合物的保留能力, 还可充分发挥 UPLC 的效率与性能 键合 :T3 (C 18 ) 键合和封端, 与 HSS UPLC 颗粒基质键合 食品测试专用色谱柱 除了整个 UPLC 和 HPLC 色谱柱填料产品系列, 沃特世还提供了已针对特定食品测试分析进行优化的色谱柱 这类色谱柱是发酵分析 有机酸 酒精和碳水化合物 甘油三酸酯和胆固醇分析以及脂肪酸分析的理想之选 保护柱 VanGuard 预柱 Sentry 保护柱和 Guard-pak 柱芯可通过清除样品中的污染物, 延长色谱柱的使用寿命, 为您带来更高的重现性和性能 它们采用了与沃特世分析柱相同的高性能固定相 [ 14 ]

15 食品中的兽药残留分析 对动物使用兽药是为了预防或治疗疾病 帮助疾病或损伤的恢复 还可以促进动物的生长 肉类 牛 奶或其它供人类摄入的产品中存在这些药物或其代谢物将对人类健康构成严重的威胁 例如 氯霉素的残留可在易感个体中导致再生障碍性贫血 此外 对于长时间摄入低水平抗生素后 出现抗生素耐药性也存在着担忧 本章中的部分应用涉及分析在特定食品中禁止存在的抗生素 其 它一些药物尽管允许使用 但必须符合停药期规定 以确保食品的安全性 本章还将介绍一些用于 促进生长的化合物以及不同种类兽药的多残留分析 [ 15 ]

16 使用 UPLC-MS/MS 检测肉制品中常见的 β- 受体激动剂的残留量 简介 与当前所采用的 GB/T LC 法相比, 采用本 UPLC-MS/MS 法时, 样品制备步骤更为简单 运行时间可减少 73( 本法运行一次仅需 7 分钟, 而目前的 GB 法运行时间为 26 分钟 ) 溶剂使用量更少 相当于节省了 1,925 小时的仪器运行时间 样品制备 A B C 图 1. 1A) 盐酸克伦特罗 1B) 莱克多巴胺 1C) 沙丁胺醇 图 2 说明了样品制备步骤 将 5. g 肉样品 5 µl 内标物 (5 ng/ml) 和 1 ml 醋酸钠 - 醋酸缓冲液 (ph=5.2) 混合 加入 1 µl ß- 葡萄糖醛酸酶 / 酰基硫酸酯酶 (3 µ/ml), 置于 37 C 中水解过夜 搅匀 3 分钟 超声波处理 3 分钟 离心 1 分钟 (15, rpm), 收集上清液 利用 1 ml.1 M 高氯酸溶液对余下部分再萃取一次 合并两次所得的上清液, 并利用 Oasis MCX 色谱柱纯化 : 以 6 ml 甲醇 6 ml 水平衡色谱柱, 上样后, 先以 6 ml 水 后以 6 ml 甲醇冲洗, 随后以 5 的氨甲醇溶液洗脱 利用氮气将所获得的流出液吹干, 然后将残质重新溶解到 1 ml.1 甲酸水溶液中, 再利用.22 µm 过滤膜将其过滤 质谱条件 质谱系统 : Xevo TQ-S MS 电离模式 : ESI+ 毛细管电压 : 3.5 kv 锥孔电压 : 3 V 离子源温度 : 15 C 脱溶剂温度 : 55 C 脱溶剂气体流速 : 9 L/H 碰撞气体流速 :.19 ml/min 化合物名称 母离子 (m/z) 盐酸克伦特罗 D9- 盐酸克伦特罗 莱克多巴胺 32.1 D5- 莱克多巴胺 37.1 沙丁胺醇 D3- 沙丁胺醇 243. 子离子 (m/z) 锥孔电压 (V) 表 1. 分析 β- 受体激动剂及其稳定同位素内标物的 MRM 参数 碰撞能量 (ev ) 图 2. 样品制备步骤一览 色谱条件 液相色谱系统 : ACQUITY UPLC 运行时间 : 7. min 色谱柱 : ACQUITY UPLC HSS T3, 1.8 μm, 2.1 x 1 mm 柱温 : 3 C 进样器温度 : 1 C 进样量 : 5 μl 流速 :.4 ml/min 结果 盐酸克伦特罗 莱克多巴胺 流动相 A: 含.1(v/v) 甲酸的水溶液 B: 含.1(v/v) 甲酸的乙腈溶液梯度 时间 流速 A B 梯度线型 初值 初值 沙丁胺醇 图 3. 对 β- 受体激动剂的肉加标样品进行 UPLC-MS/MS 分析时所得到的色谱图实例 (β- 受体激动剂的加标浓度为 1 ng/ml, 相当于每 kg 肉样中含有.2 µg/kg) [ 16 ]

17 使用 UPLC-MS/MS 检测肉制品中常见的 β- 受体激动剂的残留量 盐酸克伦特罗 莱克多巴胺 沙丁胺醇 图 4. 肉样品的 UPLC-MS/MS 色谱图 在样品中仅检测到盐酸克伦特罗 检测到盐酸克伦特罗样品的含量为 1.9 μg/kg 加标量 盐酸克伦特罗莱克多巴胺沙丁胺醇 回收率 相对标准偏差 回收率 相对标准偏差 回收率 相对标准偏差.1 µg/kg µg/kg µg/kg 参考文献 1. Illegal use of beta-adrenergic agonists: European Community, J. Anim. Sci.1998, 76: ill after eating tainted pig organs, China Daily, February 23, Chinese Ministry of Agriculture Bulletin 176, February 9th, Chinese Ministry of Agriculture Bulletin 235, December 24th, Determination of beta-agonists residues in foodstuff of animal origin, liquid chromatography with tandem-mass spectrometric method, China National standard GB/T Controlling Contamination in UltraPerformance LC/MS and HPLC/MS Systems, Waters Literature EN, Rev. F. 表 2. 三种浓度下的回收率 盐酸克伦特罗 莱克多巴胺 沙丁胺醇 图 5. 比较了在进行 β- 受体激动剂混标分析时, 不同进样次数的 UPLC-MS/ MS 色谱图 三种 β- 受体激动剂的浓度均为 1. ng/ml 每两个色谱图分别是在第 1,6 次进样及第 5,5 次进样时, 由同一根 ACQUITY UPLC 色谱柱上采集的数据 ( 如色谱图中所示 ) 订购信息 描述 部件号 Oasis MCX, 6cc/15mg ACQUITY UPLC HSS T3, 2.1 x 1 mm, 1.8 µm ACQUITY UPLC HSS T3 VanGuard Pre-column, 2.1 x 1 mm, 1.8 µm LC/MS 认证样品瓶 CV [ 17 ]

18 ACQUITY UPLC/Xevo TQ-S同时测定猪尿液中的21种β-受体激动剂 1: 2 2 ml 样品预处理 样品制备参照GB/T 动源性食品中多种β-受体激动剂残留 量的测定 进行 1. 量取2. ml猪尿液样品 加入8 ml.2 M的pH为5.2的乙酸钠缓冲液 充分混匀 2. 加入5 µl β-glucuronidase/aryl sulfatase混匀 于37 C水浴水解过夜 3. 水解液振荡15 min 在5 r/min条件下离心分离1 min后 取4 ml上 2 ml Initial : ml 5 NH4 OH-MeOH : 清液中添加1 µl 1 ng/ml的内标溶液混匀, 加入5 ml.1 M高氯酸 µl 混合均匀 并调节溶液pH值到1±.3 以5 r/min条件下离心分离 min后 移取上清液并用1 M的氢氧化钠溶液调节pH值到 加入1 ml饱和氯化钠溶液和1 ml异丙醇-乙酸乙酯(6:4)混合溶液 质谱条件 离心分离后取有机相 在4 C水浴下用氮气将其吹干 MS系统 Xevo TQ-S 离子模式 ESI+ 6. 样品净化(如下图所示) 使用Oasis MCX(3 cc/6 mg)小柱 毛细管电压 3.5 kv 7. 净化后的洗脱液用氮气吹干 用流动相溶解定容至1. ml 源温度 15 C 雾化气温度 5 C 雾化气流速 MS/MS 9 L/hr 5. 提取残渣中加入5 ml.2 M乙酸钠缓冲液(pH 5.2) 超声混匀溶解残 渣 过.22 μm滤膜 待进样分析 PICs 固相萃取净化过程Oasis MCX(3 cc/6 mg) Xevo TQ-S.5ug/L 2 L/hr 锥孔气流速 样品制备 21 MRM 结果 活化/平衡 2 ml甲醇 2 ml水 24: MRM of 2 Channels ES+ TIC (Salmeterol) E _18 上样 清洗1 2 ml水 2甲酸水溶液2 ml甲醇 I 负压下抽干 洗脱 2 ml 5NH4OH-MeOH 1 Oasis MCX ACQUITY BEH C μm, 2.1 x 特征离子 流动相 / A.1甲酸水 B 乙腈 流速.4 ml/min 进样体积 5 µl 2 ml : 2 ml A 流速 B 曲线 # '! # 1: 2 ml 2 2 ml 基质中克伦特罗子离子扫描图 [ 18 ] Time P 3cc/6mg 色谱柱 1 mm 时间 种β-受体激动剂总离子流图 4 C水浴用氮气吹干溶剂后加入2 µl 含.1甲酸的甲醇水溶液(5:95) 超声混匀 色谱条件 2.5 '!!!!#!!' \ i

19 : 2 ml 5 NH4 OH-MeOH # ' 2 µl 4.1! # ' ACQUITY UPLC/Xevo TQ-S同时测定猪尿液中的21种β-受体激动剂!!!!#! \ i!' 5:95 特征离子 特征离子 21 Xevo TQ-S MS/MS.5ug/L PICs MRM 基质中莱克多巴胺子离子扫描图 21 基质中沙丁胺醇子离子扫描图 MRM 21-24: MRM of 2 Channels ES+ TIC (Salmeterol) E _18 Q-S IntelliStart Quanpedia Time PICs - MRM 21 - MS/MS hannels ES+ (Salmeterol) 1.73E5 15 IntelliStart Quanpedia Time PICs MS/MS 15 订购信息 [ 19 ] 描述 部件号 Oasis MCX, 3cc/6mg ACQUITY UPLC BEH C18, 2.1 x 1 mm, 1.7 µm VanGuard Pre-column, ACQUITY UPLC BEH C18, 2.1 x 1 mm, 1.7 µm LC/MS认证样品瓶 6751CV

20 牛奶中四环素 土霉素 金霉素 强力霉素残留分析 样品制备 1. 取 1.5 ml 牛奶样品, 加入 6 ml ph 4 McIivaine 缓冲液 *, 涡旋混匀 2. 8 rpm 离心 1 分钟 3. 取上清液, 用 1 M NaOH 溶液将 ph 调节至 11 * McIivaine 缓冲液的配制 : 将 1 ml.1 mol/l 柠檬酸溶液与 625 ml.2 mol/l 磷酸氢二钠溶液混合, 必要时用 NaOH 或 HCl 调节 ph 值 =4.±.5 分析物 MRM 锥孔电压 (V) 碰撞能量 (ev ) 土霉素 461> 四环素 445> 金霉素 479> 强力霉素 445> 结果 固相萃取过程 (Oasis MAX 1cc/3mg) 活化 / 平衡 A.1 ml 甲醇 B.1 ml 水 上样 所有上清液 清洗 1.5 ml5 氨水 清洗 2.5mL1 甲醇 色谱条件 仪器 : 沃特世 ACQUITY UPLC 系统 色谱柱 : ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1x5 mm, 1.7 μm, 流动相 A: 25 mm 草酸水溶液 流动相 B: 乙腈 流速 :.4 ml/min 梯度 ( 线性梯度 ): 时间 (min) A B 质谱条件 洗脱.5 ml 45:55 乙腈 /75 mm 草酸洗脱液用流动相 A 稀释 3 倍, 过.2 μm 滤膜后进行 LC/MS/MS 分析 仪器 : 沃特世 ACQUITY TQD 检测器 电离模式 : ESI + 总离子流图 添加不同浓度水平的回收率数据 (n=6) 2 μg/l 添加水平 8 μg/l 添加水平 化合物 回收率 (RSD) 回收率 (RSD) 土霉素 88(8.3) 83(8.6) 四环素 87(13) 84(3.2) 金霉素 65(13) 62(4.9) 强力霉素 93(5.2) 88(5.6) 订购信息 描述 部件号 Oasis MAX, 1 cc/3 mg ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 5 mm, 1.7 µm VanGuard Pre-column, ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 5 mm, 1.7 µm, 3 pcs/pack LC/MS 认证样品瓶 CV [ 2 ]

21 鱼肉中孔雀石绿的分析 样品制备 1. 精称 1. ±.1 g 水产品, 放入 3 ml 旋口塑料离心管中 2. 加入 5 μl TMPD 溶液 (1 mg/ml) 3. 加入标准样品溶液 ( 孔雀石绿 MG, 无色孔雀石绿 LMG,.1 μg/ml) 及 氘代内标, 并放置 1 min 4. 加入 McIlvaines 缓冲液 (ph 2.6)/ 甲醇 (5:5v/v) 溶液 1 ml; 匀浆 45 s 5. 离心 5 rpm, 2 min, 提取上清液, 移入试管中 6. 重复步骤 4,5, 将两次上清液合并, 该提取液即为 SPE 上样液 ( 体积约 2 ml)* 固相萃取过程 (Oasis MCX 3 cc/6 mg) 活化 / 平衡 A.2 ml 甲醇 B.2 ml 水 C.2 ml McIlvaines 缓冲液 (ph 2.6) 色谱条件 仪器 : 沃特世 Alliance 2695 系统,2487 双波长紫外 检测器 色谱柱 : SunFire C 18, 4.6 x 15 mm, 5 μm 自填 PbO 2 氧化小柱 : 4.6 x 2 mm(pbo 2 : 硅藻土 =3:1), 两端覆以 2 μm 的不锈钢筛板 氧化小柱连接在色谱柱 与检测器之间 流动相 A: 125 mm 乙酸铵, 用乙酸调 ph 4.5 流动相 B: 乙腈 流速 : 2 ml/min 梯度 : 时间 (min) A B 检测波长 : 619 nm 进样量 : 5 µl 上样 加入提取液 *, 约 2 ml 清洗 A. 2 ml.1 M HCl 酸化 B. 纯水清洗两次, 每次 2.5 ml C. 2 ml 5 甲醇 / 水 D. 3 ml 正己烷, 真空抽干 ABS 洗脱 5 ml 5 乙酸乙酯 :45 甲醇 :5 氨水 (v/v/v) 5 C, 氮气吹扫至干 用 5 乙腈 / 水定容 (1 μl) 纳米 缓冲液的配制 : McIlvaines 缓冲液 (ph 2.6): 1. 溶液 A:.1 M 柠檬酸单水合物 g 柠檬酸单水化合物溶解在 5 ml 水中 2. 溶液 B:.2 M 磷酸氢二钠二水合物 g 磷酸氢二钠二水合物溶解在 5 ml 水中 3. 用溶液 B 将 5 ml 溶液 A 调至 ph 2.6 ABS 纳米 提取溶剂的配制 : 25 ml McIlvaines 缓冲液 (ph 2.6) 与 25 ml 甲醇混匀 经氧化后 MG-LMG 的紫外光谱图 鱼肉中孔雀石绿 (MG), 无色孔雀石绿 (LMG) 的回收率为 5-8, 精密度良好 订购信息描述部件号 Oasis MCX 6 cc/15 mg SunFire C 18, 4.6 x 15 mm, 5 μm SunFire C 18, 4.6 x 15 mm, 5 μm 保护柱 2 pcs/pack Sentry Guard Holder WAT4691 全回收样品瓶 675CV [ 21 ]

22 蜂蜜中硝基呋喃及其代谢物残留分析 样品制备 2 g 蜂蜜样品用 5 ml.12 M 盐酸稀释 固相萃取过程小柱 I(Oasis HLB 3 cc/6 mg) 活化 / 平衡 A. 2 ml 甲醇 B. 2 ml 水 通过 * 2 g 经处理的蜂蜜样品 质谱条件 仪器 : 沃特世 Quattro micro API 电离模式 : ESl + 分析物 MRM 锥孔电压 (V) 碰撞能量 (ev ) AMOZ 335.> Aminohydantion AH 28.9> Semicarbizide SC 248.9> AOZ 236.> 清洗 * 2 ml 水 定量收集前两步流出液 * 1. 收集两步流出液于 15 ml 试管中 2. 加入 3 μl 5 mm 2-nitrobenzaldehyde 的 DMSO 溶液衍生化, 样品在 37 C 下水解衍生 18 小时 3. 冷却至室温, 加入 6 ml.1m K 2 HPO 4 调节 ph 值到 7 4. 上小柱流程 II 小柱 II(Oasis HLB 3 cc/ 6 mg) 活化 / 平衡 A. 1 ml 甲醇 B. 1 ml 水 上样制备的样品溶液, ph 7 清洗 A. 2 ml 水 B. 2 ml 含 3 甲醇水溶液 四种化合物的 MRM 图谱 吹干 2 min 洗脱 3 ml 含 2 甲酸的 MTBE/ 甲醇溶液 (9:1) 吹干再定容至 2 µl 流动相 色谱条件 仪器 : 沃特世 ACQUITY UPLC 系统 色谱柱 : ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 1 mm, 1.7 µm 流动相 : 7 2 mm 甲酸铵水溶液 (ph 4.) 和 3 乙腈, 等度洗脱 流速 :.8 ml/min 温度 : 3 C 进样体积 : 2 µl 订购信息 描述 Oasis HLB, 3 cc/6 mg 部件号 WAT94226 ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1x1 mm,1.7 µm VanGuard Pre-column, ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 5 mm, 1.7 µm LC/MS 认证样品瓶 CV [ 22 ]

23 QuEChERS-UPLC-MS/MS 快速测定鸡肝中七种磺胺类药物残留 样品预处理 取适量新鲜或冷冻的空白或供试鸡肝组织, 经均质器绞碎并使之均匀化 样品制备 称取鸡肝组织试样 5 g, 加入 DisQuE 萃取管中, 加入内标工作液 1 μl 和乙腈 2 ml, 涡旋使之充分混合, 振荡提取 3 min,4 C 下 1 r/min 离心 5 min, 移取上清液 1 ml 至 DisQuE 净化管中, 振荡 2 min,1 r/min 离心 5 min, 取上清液 5 ml,5 C 下氮气流吹干, 加入 2 ml.1 甲酸水溶液 - 甲醇 (1:9) 溶解残渣,.45 μm 滤膜过滤至进样瓶中 UPLC-MS/MS 测定 结果 七种磺胺类药物的标准溶液色谱图见图 1, 空白鸡肝的色谱图见图 2, 空白鸡肝阳性添加 (1 μg/kg) 的色谱图见图 3, 由图可知, 七种磺胺类药物分离良好, 空白鸡肝中不含有干扰测定物质 色谱条件 色谱柱 : 流动相 A: 流动相 B: 梯度洗脱 : 流速 : 柱温 : 进样量 : ACQUITY UPLC BEH C 18, 1.7μm, 2.1 x 1 mm.1 甲酸水溶液.1 甲酸甲醇溶液 ~1 min, 1 B~6 B 1~1.2 min,6 B~1 B 1.2~14 min,1 B~1 B.2 ml/min 25 C 1 μl 图 1. 七种磺胺类药物的标准溶液色谱图 (62.5 ng/ml) 质谱条件 电喷雾离子化, 正离子扫描喷雾电压 : 35 V 离子传输管温度 : 35 C 鞘气流速 : 1 L/min 辅助气流速 : 5 L/min 选择性离子监测见表 1 药物名称 保留时间 (min) 磺胺嘧啶 4.2 磺胺二甲基嘧啶 6. 磺胺甲氧嗪 6.5 磺胺甲恶唑 7.2 磺胺间甲氧嘧啶 磺胺二甲氧嘧啶 磺胺喹恶啉 9.6 定性 定量离子 (m/z) 碰撞能量 (ev) 251>156* > >186* > >156* > >156* > >156* > >156* > >156* 24 31>18 3 磺胺二甲氧嘧啶 -D >162* 25 表 1. 五种磺胺类药物的色谱保留时间和定量离子参数 注 :* 表示定量离子 [ 23 ] 图 2. 空白鸡肝的色谱图

24 QuEChERS-UPLC-MS/MS 快速测定鸡肝中七种磺胺类药物残留 基质效应 高中低浓度的基质效应结果见表 3, 基质效应在 9~11 之间, 说明经 DisQuE 净化管净化后, 基本上没有基质效应 图 3. 空白鸡肝阳性添加 (1 µg/kg) 的色谱图 线性范围 七种磺胺类药物在 2~2 μg/kg 范围内线性关系良好, 最低定量限 在 2 μg/kg, 各药物的回归方程及相关系数见表 2 药物名称 标准曲线方程 相关系数 (R 2 ) 磺胺嘧啶 y=.69x 磺胺二甲基嘧啶 y=.152x 磺胺间甲氧嘧啶 y=.83x 磺胺甲恶唑 y=.51x 磺胺甲氧嗪 y=.65x 磺胺二甲氧嘧啶 y=.322x 磺胺喹恶啉 y=.16x 表 2. 猪肉中五种磺胺类药物的标准曲线 添加浓度 (µg/kg) 药物名称 精密度 () 回收率 () 基质批内批间效应绝对相对 (RSD) (RSD) () 磺胺嘧啶 磺胺二甲基嘧啶 磺胺间甲氧嘧啶 磺胺甲恶唑 磺胺甲氧嗪 磺胺二甲氧嘧啶 磺胺喹恶啉 磺胺嘧啶 磺胺二甲基嘧啶 磺胺间甲氧嘧啶 磺胺甲恶唑 磺胺甲氧嗪 磺胺二甲氧嘧啶 磺胺喹恶啉 磺胺嘧啶 磺胺二甲基嘧啶 磺胺间甲氧嘧啶 磺胺甲恶唑 磺胺甲氧嗪 磺胺二甲氧嘧啶 磺胺喹恶啉 表 3. 七种磺胺类药物的精密度 回收率和基质效应测定结果 参考资料 耿士伟 1, 曲斌 1 *, 姜加华 1, 贡玉清 1 2, 温海燕 1. 江苏省畜产品质量检验测试中心 2. 沃特世科技 ( 上海 ) 有限公司 订购信息 描述 部件号 DisQuE 5 ml 提取管 (4 g 硫酸镁 1 g 氯化钠 1 g 无水柠檬酸钠.5 g 柠檬酸二钠盐倍半水合物 ) DisQuE 15 ml 净化管 (9 mg 无水硫酸镁 15 mg PSA 15 mg C 18 ) ACQUITY UPLC BEH C 18, 1.7 μm, 2.1 x 1 mm VVanGuard Pre-column, ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 5 mm, 1.7 μm, 3 pcs/pack LC/MS 认证样品瓶 6751CV [ 24 ]

25 牛奶中六种青霉素类抗生素残留分析 样品制备 1. 吸取 5 ml 牛奶样品于 5 ml 离心管中, 摇匀, 加入 5 ml 乙腈, 涡流混合 6 s, 再加入 1 ml 乙腈涡流,18 r/min 离心 5 min, 取 1 ml 上清液, 氮气吹干 2. 加入 3 ml 磷酸缓冲盐 (PH 4.5), 涡流 15 s 固相萃取过程 Oasis HLB 固相萃取柱 :6 mg/3 cc 活化 / 平衡 A.3 ml 甲醇 B. 3 ml 水 上样 加入制备样品 (1-2 ml/min 流速 ), 抽干 结果与谱图 组分名称 原样中测得量 (ng) 加标后测得量 (ng) 6 种青霉素类抗生素回收率测定结果 标准加入量 (ng) 回收率 () 青霉素 G 青霉素 V 苯唑西林 氯唑西林 奈夫西林 双氯唑西林 洗脱 : 8 ml 7 乙腈水溶液 收集洗脱液定容至 1mL 经.3 µm 滤膜过滤后上机分析 色谱条件 图 1. 空白牛奶样品图 系统 : Alliance 2695 系统 色谱柱 : Atlantis T3, 2.1x15 mm, 5 µm 柱温 : 3 C 流动相 A:.1 甲酸水溶液 流动相 B:.1 甲酸乙腈溶液 流速 :.2 ml/min 进样量 : 1 µl 梯度 : 时间 (min) 水 ( 含.1 甲酸 )() 结果 乙腈 ( 含.1 甲酸 )() 梯度变化曲线 图 2. 牛奶加标样品图 (2 ng/ml) 质谱条件 系统 : 离子源 : Quattro Ultima 电喷雾离子源 订购信息 扫描方式 : ESI + 检测方式 : 多反应监测 描述 Oasis HLB, 3 cc/6 mg 部件号 WAT94226 Atlantis T3, 2.1 x 15 mm, 5 µm VanGuard Pre-column, Atlantis T3, 2.1 x 1 mm, 2 pcs/pack Sentry Guard Holder WAT97958 LC/MS 认证样品瓶 6751CV [ 25 ]

26 蜂蜜中氯霉素的分析 样品制备 1. 精称 5 g 蜂蜜,( 添加内标 D 5 -CAP) 溶解在 5 ml 水中 2. 加入 15 ml 乙酸乙酯提取, 离心 3. 转移上清液至另一试管中,5 C 氮气吹干 4. 用 1 ml 甲醇再定容, 用 2 ml 水稀释 固相萃取过程 (Oasis HLB 6 cc/2 mg) 分析物 MRM 锥孔电压 (V) 碰撞能量 (ev) 氯霉素 (CAP) 甲枫氯霉素 (TAP) 氟苯尼考 (FP) 内标 D 5 -CAP 活化 / 平衡 A. 5 ml 甲醇 B. 5 ml 水 结果 上样 2 ml 样品 ( 速度 :2 滴 / 秒 ) 清洗 5 ml 水 洗脱 2 x 2.5 ml 甲醇 在 5 C 氮气吹干 用 9:1 水 / 甲醇 (5 μl) 再定容 CAP, TAP, FP 2 μg/kg 的叠加图谱 色谱条件 仪器 : 沃特世 Alliance 2695 系统 色谱柱 : Symmetry C 8, 2.1 x 5 mm, 3.5 μm 色谱柱温度 : 3 C 保护柱 : Symmetry Sentry C 8, 2.1 x 1 mm, 3.5 μm 流动相 A: 水 流动相 B: 甲醇 流速 :.3 ml/min 进样量 : 2 μl 梯度 : 时间 (min) A B 分析物 平均回收率 () RSD (n = 5) 氯霉素 甲枫氯霉素 氟苯尼考 CAP, TAP, FP.3 ug/kg 的回收率 质谱条件 仪器 : 沃特世 Quattro micro API 电离模式 : ESI - 多反应监测 (MRM) 订购信息描述 Oasis HLB, 6 cc/2 mg Symmetry C 8, 2.1 x 5 mm, 3.5 µm Symmetry Sentry 保护柱 C 8, 2.1 x 1 mm, 3.5 µm, 2/pk Sentry Guard Holder 全部回收样品瓶 部件号 WAT1622 WAT2624 WAT16128 WAT CV [ 26 ]

27 牛奶中大环内酯类抗生素残留分析 样品制备 1. 取 5mL 牛奶样品放入 5mL 离心管中, 加入 15mL 乙腈, 摇晃,32 rpm 离心处理 15min 2. 将上清液转移到另一个 5 ml 离心管中, 加入 2 ml 正己烷, 摇晃 15 min,32 rpm 离心处理 15 分钟 3. 弃去正己烷层, 将乙腈 / 牛奶的上清液蒸发至体积为 3 ml, 加入 15 ml.1m 的磷酸盐缓冲溶液 (ph 8.) 固相萃取过程 Oasis HLB 6 cc/15 mg 活化 A.1 ml 甲醇 B.1 ml 水 C.1 ml 2 氯化钠溶液 D.2 ml.1 M 磷酸盐缓冲溶液 (ph 8.) 上样 5 ml 经均质处理的牛奶 清洗 1 5 ml 水 清洗 2 5 ml 4 甲醇水溶液 抽干小柱 5 min 在线 SPE 和色谱分离条件 : 上样泵 A 路 : 1 水 上样泵 B 路 : 1 甲醇 上样流速 : 4 ml/min 清洗 : 2 甲醇 / 乙腈 (3/7,v/v)+.5 甲酸 再平衡泵 A: 5/5 甲醇 / 丙酮 再平衡泵 B: 8/2 乙酸乙酯 / 丙酮 再平衡泵 C: 8/2 正己烷 / 丙酮 流速 : 4 ml/min 流动相 A:.1 甲酸 / 水 流动相 B:.1 甲酸 / 甲醇, 梯度分析 电离模式 : 电喷雾正离子 (ESI + ), 多反应监测 (MRM) 六种大环内酯类抗生素的 MRM 参数如下 : 化合物 母离子 (m/z) 子离子 (m/z) 红霉素 克拉霉素 罗红霉素 阿奇霉素 乙酰螺旋霉素 替考米星 ppb 添加水平的牛奶样品 LC/MS/MS 图谱 (MRM) 洗脱 5 ml 95 甲醇水溶液 氮气吹至近干, 用 1 ml 流动相 A 溶解 用.45 μm PVDF 滤膜过滤, 进行 LC/MS 分析 在线 SPE 方法 : 1. 取 1 ml 牛奶样品放入 5 ml 离心管中, 加入 2 μl 浓氨水, 再加入 2 ml 乙腈 min,35 rpm 离心处理 15 分钟 3. 取 2 ml 上清液放入 2 ml 样品瓶中, 加入 18 ml 水, 取 5 ml 进样分析 仪器条件 仪器 : 在线 SPE 柱 : 色谱柱 : 沃特世 Aqua-Analysis 在线 SPE-LC/MS/MS 水分析系统 Oasis HLB 2.1 x 2 mm, 25 μm XBridge C 18, 2.1 x 5 mm, 3.5 μm 订购信息描述部件号 Oasis HLB, 6 cc/ 15 mg XBridge C 18, 2.1 x 5 mm, 3.5 μm Oasis HLB, 2.1 x 2 mm, 25 μm LC/MS 认证样品瓶 6751CV [ 27 ]

28 蜂王浆中 18 种磺胺残留量的测定 样品制备 1. 准确称取 2 g( 精确到.1 g) 测试样品于 5 ml 离心管内, 加入 2 µl 内标工作溶液, 然后加入 2 ml 水, 快速混匀 1 min, 震荡提取 1 min 2. 加入.5 ml 5 三氯乙酸溶液, 快速摇动 3 s,3 r/min 离心 5 min 3. 移取上清液至三角瓶中, 再向残渣中加入 15 ml 水, 待净化 色谱条件 固相萃取过程 Oasis MCX 固相萃取柱 :6 cc/15 mg 活化 / 平衡 A.5 ml 甲醇 B.1 ml 水 上样 加入制备样品 清洗 A.5 ml 2 甲酸 B.5 ml 甲醇 洗脱 5 ml 5 氨水甲醇溶液 5 C 氮气吹干溶剂 加乙腈.1 mol/l 乙酸胺溶液 1. ml 过.2 µm 滤膜后, 上机 色谱柱 : Atlantis T3, 15 x 2.1 mm, 3 µm 柱温 : 流动相 A: 流动相 B: 流动相 C: 流速 : 35 C 乙腈.1 甲酸水溶液 甲醇.2 ml/min 进样量 : 2 µl 梯度 : 时间 (min) A B C 种磺胺的定性离子对和定量离子对 化合物中文名称 磺胺嘧啶 磺胺噻唑 磺胺吡啶 磺胺甲基嘧啶 磺胺间甲氧嘧啶 磺胺甲噻二唑 磺胺二甲嘧啶 磺胺甲氧哒嗪 磺胺对甲氧嘧啶 磺胺氯哒嗪 化合物英文名称 sulfadiazine sulfathiazine sulfapyridine sulfamethoxypyridazine sulfamonomethoxine sulfamethizole sulfamethazine sulfamethoxypyridazine sulfameter sulfachloropyridazine 磺胺甲基异唑 sulfamethoxazole 磺胺邻二甲氧嘧啶 sulfadoxine 磺胺二甲异唑 sulfisoxazole 磺胺苯酰 磺胺氯吡嗪 磺胺苯吡唑 磺胺间二甲氧嘧啶 sulfabenzamide sulfachloropyrazine sulfaphenazole sulfadimethoxine 磺胺喹啉 sulfaquinoxaline 定性离子对 (m/z) 251/ / / /17 25/156 25/ / / / / / /17 279/ /24 281/ / / / / /18 254/ / / /18 268/ / / /18 285/ /18 315/ /16 311/ /218 31/156 31/28 定量离子对 (m/z) 251/ /156 25/ / / / / / / / / / / / / / /156 31/156 质谱条件 离子源 : 扫描方式 : 检测方式 : 电喷雾离子源 正离子扫描 多反应监测 (MRM) [ 28 ]

29 蜂王浆中 18 种磺胺残留量的测定 18 种磺胺添加浓度及其平均回收率实验数据 磺胺嘧啶 磺胺噻唑 磺胺吡啶 化合物名称添加浓度 /(µg/kg) 平均回收率 磺胺甲基嘧啶 磺胺间甲氧嘧啶 磺胺甲噻二唑 磺胺二甲嘧啶 磺胺甲氧哒嗪 磺胺对甲氧嘧啶 磺胺氯哒嗪 磺胺甲基异 唑 磺胺邻二甲氧嘧啶 磺胺二甲异 磺胺苯酰 唑 磺胺氯吡嗪 磺胺苯吡唑 磺胺间二甲氧嘧啶 磺胺喹 订购信息 描述 啉 部件号 Oasis MCX, 6 cc/15 mg Atlantis T3, 2.1 x 15 mm, 3 µm VanGuard Pre-column, Atlantis T3, 2.1 x 1 mm, 2 pcs/pack Sentry Guard Holder 全部回收样品瓶 WAT CV [ 29 ]

30 蜂蜜中头孢唑啉 头孢匹林 头孢氨苄 头孢洛宁 头孢喹肟残留量的测定 样品制备准确称取 5 g( 精确到.1 g) 测试样品于 15 ml 三角瓶中, 加入 25 ml.15 mol/l 磷酸二氢钠缓冲溶液, 混匀, 用氢氧化钠溶液, 调节 PH= 8.5 色谱条件 固相萃取过程 Oasis HLB 固相萃取柱 :6 cc/5 mg 活化 / 平衡 A.5 ml 甲醇 B.5 ml 水 C.1 ml 磷酸二氢钠 上样 加入 25 ml 样品制备液 清洗 A.5 ml 磷酸二氢钠 B.2 ml 水 洗脱 2 ml 乙腈 4 C 氮气吹干溶剂 2 ml 水溶解残渣, 摇匀 过.2 µm 滤膜, 上机 色谱柱 : XBridge C 18, 2.1x15 mm, 3.5 µm 柱温 : 流动相 A: 流动相 B: 流速 : 3 C.1 甲酸水溶液 乙腈溶液.2 ml/min 进样量 : 2 µl 梯度 : 时间 (min) 流速 (µl/min) 水 / 含.1 乙酸乙醚 / 种头孢菌素的定性离子对和定量离子对 化合物中文名称 头孢唑啉 头孢匹林 头孢氨苄 头孢洛宁 头孢喹肟 化合物英文名称 cefazolin cephapirin cephalexin cefalonium cefquinome 定性离子对 (m/z) 456/ / / / / / / / / /396 定量离子对 (m/z) 456/ / / / /134 5 种头孢菌素添加浓度及其平均回收率实验数据 头孢唑啉 头孢匹林 头孢氨苄 头孢洛宁 头孢喹肟 化合物名称添加浓度 /(µg/kg) 平均回收率 质谱条件 离子源 : 扫描方式 : 检测方式 : 电喷雾离子源 正离子扫描 多反应监测 (MRM) 订购信息 描述 部件号 Oasis HLB, 6 cc/5 mg XBridge C 18, 2.1 x 15 mm, 3.5 µm VanGuard Pre-column, XBridge C 18, 2.1 x 1 mm, 3.5 µm, 2 pcs/pack LC/MS 认证样品瓶 CV [ 3 ]

31 环境水样中 16 种磺胺类抗生素和甲氧苄氨嘧啶残留分析 固相萃取过程固相萃取柱 1 (Oasis HLB 6 cc/5 mg) 活化 / 平衡 A.6 ml 二氯甲烷 B.6 ml 甲醇 C.12 ml 5 mm 的 Na 2 EDTA 水溶液 上样.25 至 1 L 水样 ( 预先用玻璃纤维过滤除去悬浮颗粒杂质 ), 流速 5-1 ml/min 清洗 1 ml 水 通氮气将小柱吹干 洗脱 6 ml 二氯甲烷 / 甲醇 2/1 (v/v) 氮气流吹干, 用.2 ml 氯仿溶解, 加入 1.8 ml 正己烷用于第二步固相萃取 固相萃取过程固相萃取柱 2 (Sep-Pak Silica 3 cc/5 mg) 活化 / 平衡 4 ml 正己烷 上样 2 ml 第一步固相萃取得到的溶液 清洗 A.3 ml 正己烷 B.3 ml 正己烷 / 乙酸乙酯 9/1 (v/v) C.3 ml 正己烷 / 乙酸乙酯 3/2 (v/v) 洗脱 A.3 ml 甲醇 / 丙酮 1/1 (v/v) B.3 ml 丙酮 氮气流吹干, 用.5 ml 甲醇将残渣重新溶解, 经.2 μm 滤膜过滤后进行 LC/MS/MS 分析 色谱条件 仪器 : 色谱柱 : 流动相 A: 流动相 B: 沃特世 ACQUITY UPLC 系统 ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1x1 mm, 1.7 μm.1 甲酸水溶液 甲醇, 含.1 甲酸 梯度 : 时间 (min) A B 曲线 流速 : 柱温 : 进样量 : 质谱条件 仪器 : ml/min 4 C 5 μl 电离源 : ESI + 毛细管电压 : 离子源温度 : 脱溶剂气温度 : 锥孔气流速 : 脱溶剂气流量 : 沃特世 ACQUITY TQD 检测器 3. kv 12 C 4 C 5 L/h 9 L/h 16 种磺胺类抗生素和甲氧苄氨嘧啶的 MRM 参数 : 化合物 SCP SDM SDMD SDZ SIA SIM SME SMO SMP SMR MRM 285> >27 311> >92 279> > > >92 268> > > > > >18 268> >18 281> >18 265> >11 [ 31 ]

32 环境水样中 16 种磺胺类抗生素和甲氧苄氨嘧啶残留分析 16 种磺胺类抗生素和甲氧苄氨嘧啶的 MRM 参数 ( 续 ): 化合物 SMT SMX MRM 271> >92 254> >92 SNT 336> >198 SPD 25>156 25>184 SQX 31>156 31>18 STZ 256> >18 TMP 291>23 291> C 6 -SMA 285>186 结果 河水样品的 UPLC /MS/MS MRM 图谱 :(a) 经过 SPE 净化 ;(b) 没有经过 SPE 净化 其它详细信息请参考原文 订购信息 描述 部件号 Oasis HLB, 6 cc/5 mg Sep-Pak Silica, 3 cc/5 mg WAT281 ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 5 mm,1.7 µm VanGuard Pre-column, ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 5 mm, 1.7 µm, 3 pcs/pack LC/MS 认证样品瓶 CV [ 32 ]

33 肉类和牛奶中的氨基糖苷类抗生素 简介 氨基糖苷类抗生素在兽医学中常被用于治疗产肉和产奶动物 由于人类会摄入这些产品, 因此需要一种行之有效的方法来检测这些抗生素的残留量 人们已经开发了一种从牛肉和牛奶中快速简便地提取这类化合物的方法 经证实, 牛奶的定量限 (LOQ) 为 1 ppb, 而肉组织的 LOQ 为 5 ppb 样品制备 提取缓冲液 (1 mm NH 4 OOCH 3 /.4 mm Na 2 EDTA/1 NaCl/2 TCA): 将.77 g 醋酸铵 (NH 4 OOCH 3 ) 加入 1 L 容量瓶中 加入大约 9 ml 试剂水以溶解醋酸铵 用 1 N HCl 或 1 N NaOH 将 ph 值调节至 4. 加入.15 g 乙二胺四乙酸二钠 (Na 2 EDTA.2H 2 O) 5 g 氯化钠 (NaCl) 和 2 g 三氯乙酸 (TCA) 充分混合至溶解, 并用试剂水定容 初步提取 向一支 5 ml 离心管中加入 2 g 牛肉组织匀浆或 1 ml 牛奶 加入 2 ml 提取缓冲液, 涡旋混合 1 秒, 然后充分振荡 1 分钟 在 4 RPM 下离心样品 5 分钟, 收集上清液 根据需要, 使用稀释的 HCl 或 NaOH 将上清液的 ph 值调节至 6.5±.5 SPE 净化 在本研究中, 使用了 Oasis HLB 96 孔板 (3 mg) 如有必要可以使用 1 cc/3 mg 的小柱 HLB 96 孔板或 1 cc/3mg 小柱活化 / 平衡 A.1.5 ml 甲醇 B.1.5 ml 水流速为 1 ml/min 或更小上样组织样品 1 ml, 牛奶 1.5 m 清洗.5 ml 1:5:85 甲酸 / 异丙醇 / 水洗脱液加 1.5 μl HFBA 进 UPLC/MS/MS 分析 LC 条件 系统 : ACQUITY UPLC 色谱柱 : ACQUITY HSS PFP, 1.7 μm, 2.1 x 1 mm 进样体积 : 3 μl 柱温 : 35 C 流动相 A: 2 mm HFBA 水溶液 流动相 B: 2 mm HFBA 乙腈溶液 流速 :.5 ml/min 梯度 : 初始条件为 2 的流动相 B, 在 7 min 内以线性 梯度增加至 8, 保持 8 min, 在 8.1 min 时返回 到 2 保持并重新平衡系统 1 min MS 条件 MS 系统 : 模式 : 毛细管 : 提取器 : 源温度 : 锥孔气 : 脱溶剂气温度 : 脱溶剂气 : 碰撞气 : 氨基糖苷类 链霉素 双氢链霉素 庆大霉素 C1a 庆大霉素 C1 庆大霉素 C2C2a 新霉素 ACQUITY TQD 电喷雾正离子 (ES+) 3. kv 3. V 13 C 2 L/h 45 C 9 L/h 氩气,.2 ml/min MRM > > > > > > > > > > > > 本研究使用的锥孔和碰撞参数以及 MRM 通道 锥孔电压 (V) 碰撞能量 (ev) [ 33 ]

34 肉类和牛奶中的氨基糖苷类抗生素 结果 氨基糖苷类 回收率 RSD 回收率 RSD n=6 n=6 1 ppb 2 ppb 链霉素 双氢链霉素 Gentamicin C1a 庆大霉素 C 庆大霉素 C2C2a 新霉素 加标至牛奶中的氨基糖苷类的回收率数据总结 氨基糖苷类 回收率 RSD 回收率 RSD n=6 n=6 5 ppb 16 ppb 链霉素 双氢链霉素 庆大霉素 C1a 庆大霉素 C 庆大霉素 C2C2a 新霉素 : MRM of 3 Channels ES > (Neomycin) e min 2: MRM of 7 Channels ES > (Gentamincin_C1) 2.29e min 2: MRM of 7 Channels ES > 16.1 (Gentamincin_C2a,C2) 2.9e min 2: MRM of 7 Channels ES > (Gentamincin_C1a) 4.49e min : MRM of 4 Channels ES > (Dihydrostreptomycin) 6.74e min 1: MRM of 4 Channels ES > (Streptomycin) 1.6e min 加标浓度为 1 µg/kg (ppb) 的牛奶所获得的 UPLC/MS/MS 色谱图 加标至牛奶中的氨基糖苷类的回收率数据总结 订购信息描述部件号 ACQUITY HSS PFP, 1.7 μm, 2.1 x 1 mm Oasis HLB 96 孔板, 3 mg WAT58951 Atlantis dc 18, 5 μm, 2.1 x 1 mm Sentry 2.1 mm 保护柱套 WAT97958 Qsert 样品瓶,LCGC 认证组合包 C 参考资料 : 沃特世应用资料 EN 212 年沃特世公司 Waters Oasis ACQUITY UPLC 和 ACQUITY 是沃特世公司的注册商标 [ 34 ]

35 使用 QuEChERS 方法检测膳食和牛奶中的阿维菌素类 简介 由于牛奶和肉类等食品具有复杂的基质, 因此要对其中的阿维菌素进行灵敏地检测会有一定的挑战性 利用 QuEChERS 方法制备样品可实现高通量和高灵敏度的食品分析 虽然 QuEChERS 通常被用于水果和蔬菜中的农药多残留分析, 但它也可以用于分析家畜产品中的兽药 本应用资料使用 QuEChERS 方法和 LC-MS/MS 技术制备并分析牛奶和碎牛肉中 ppb 水平的阿维菌素 样品制备 初步提取 (QuEChERS): 向一根 5 ml 离心管中加入 1 ml 全脂牛奶 ( 经巴氏灭菌 ), 或加入 8 g 碎牛肉 (8 瘦肉 ) 和 2 ml 水 加入 1 ml 乙腈, 用力振荡离心管 1 分钟 加入欧洲标准委员会 (CEN) QuEChERS 用 DisQuE TM 盐包的内容物 ( 部件号 : ), 用力振荡 1 分钟 在 4 rpm 下离心 15 分钟, 取 1 ml 上清液 ( 最上层 ) 用于 d-spe 纯化 d-spe 净化 将 1 ml 上清液转移至一支 2 ml 的 d-spe 净化管中, 管内含有 15 mg 硫酸镁和 5 mg C 18 吸附剂, 用力振荡 1 分钟 在 12 RPM 下离心 5 分钟, 取.5 ml 样品用于 LC-MS/MS 分析 LC 条件 系统 : ACQUITY UPLC 色谱柱 : XSelect CSH TM C 18 XP, 2.5 μm, mm 部件号 : 进样体积 : 5 µl 温度 : 5 C 流动相 A: 5 mm 醋酸铵水溶液 流动相 B: 5 mm 醋酸铵甲醇溶液 流速 :.4 ml/min 梯度 : 初始条件为 7 的流动相 B, 在 5 min 内以线性梯 度增加至 97, 保持 8 min, 在 8.1 min 时返回到 7 保持并重新平衡系统 1 min 样品瓶 : 最大回收样品瓶 部件号 : 667CV MS 条件 MS 系统 : Xevo TQ-S 电离模式 : 电喷雾正离子 (ESI+) 结果 平均回收率 (RSD) n=5 浓度范围 (ppb) 碎牛肉 全脂牛奶 浓度水平 低水平 高水平 低水平 高水平 低水平 高水平 Abamectin (3.6) 88(3.6) 86(14.) 89(3.7) Ivermectin (17.7) 85(3.1) 84(5.3) 83(14.8) Doramectin (4.8) 85(4.2) 11(11.7) 9(5.) Epinomectin (2.9) 91(1.5) 94(3.9) 93(3.) Moxidectin 1 1 9(4.2) 87(1.8) 1(2.4) 9(5.6) 表 1. 碎牛肉和全脂牛奶样品中的阿凡曼菌素回收率 _ : MRM of 1 Channel ES _75 3: MRM of 1 Channel ES _ TIC (Abamectin) 1 TIC (Ivermectin) e3 9.93e3 5: MRM of 1 Channel ES TIC (Dramectin) 3.42e4 (a) (b) (c) min min min _67 2: MRM of 1 Channel ES _67 1 TIC (Abamectin) e3 3: MRM of 1 Channel ES+ TIC (Ivermectin) 9.93e _ : MRM of 1 Channel ES+ TIC (Dramectin) 3.42e min min min _75 4: MRM of 1 Channel ES _ TIC (Epinomectin) e5 (d) (e) : MRM of 1 Channel ES+ TIC (Moxidectin) 4.85e min min _67 4: MRM of 1 Channel ES _67 1 TIC (Epinomectin) e5 1: MRM of 1 Channel ES+ TIC (Moxidectin) 4.85e min min 图 1. 从碎牛肉样品获得的阿维菌素 LC-MS/MS 色谱图 ; 上面的谱线是低水平加标样品, 下面的谱线是碎牛肉空白样 (a) 阿维菌素 (b) 伊维菌素 (c) 多拉菌素 (d) 依普菌素 (e) 莫昔克丁 [ 35 ]

36 使用 QuEChERS 方法检测膳食和牛奶中的阿维菌素类 _ : MRM of 1 Channel ES+ TIC (Abamectin) 5.45e3 3: MRM of 1 Channel ES _ _ TIC (Ivermectin) 1.28e4 5: MRM of 1 Channel ES+ TIC (Dramectin) 7.4e4 (a) (b) (c) min min min _19 1 2: MRM of 1 Channel ES+ TIC (Abamectin) 5.45e _19 3: MRM of 1 Channel ES _19 TIC (Ivermectin) e4 5: MRM of 1 Channel ES+ TIC (Dramectin) 7.4e min min min _ min min _19 4: MRM of 1 Channel ES _19 1 TIC (Epinomectin) e _28 1 (d) 4: MRM of 1 Channel ES TIC (Epinomectin) 1.76e5 (e) : MRM of 1 Channel ES+ TIC (Moxidectin) 7.3e4 1: MRM of 1 Channel ES+ TIC (Moxidectin) 7.3e min min 图 2. 从全脂牛奶样品获得的阿维菌素 LC-MS/MS 色谱图 ; 上面的谱线是低水平加标样品, 下面的谱线是全脂牛奶空白样 (a) 阿维菌素 (b) 伊维菌素 (c) 多拉菌素 (d) 依普菌素 (e) 莫昔克丁 (d) eprinomectin (e) moxidectin 订购信息 描述 部件号 XSelect CSH C 18 XP 色谱柱, 2.5 μm, 2.1 x 1 mm CEN QuEChERS DisQuE 试剂袋 DisQuE 5 ml 离心管 最大回收样品瓶 667CV 参考资料 : 沃特世应用资料 72444EN 213 年沃特世公司 Waters ACQUITY UPLC XSelect 和 Xevo 是沃特世公司的注册商标 DisQuE 是沃特世公司的商标 [ 36 ]

37 鸡肉中的恩诺沙星 (BAYTRIL) 前处理 1. 用 3 ml 乙醇 / 乙酸 (99:1,v/v) 对 1.5 g 匀浆样品进行提取, 并在 4 rpm 下离心 5 分钟 2. 取 1 ml 上清液, 用于 SPE 净化和富集 3. 对于肌肉样品, 在进行 SPE 之前用 5 ml 水稀释 1 ml 上清液 ; 肝脏样 品则无需稀释 固相萃取过程小柱 I:Oasis MCX, 6 cc/15 mg 活化 / 平衡 : A. 3 ml 甲醇 B. 3 ml 水 C. 3 ml 乙醇 进样体积 : 1 µl 柱温 : MS 条件 MS 系统 : 电离模式 : MRM 方法参数 分析物 恩诺沙星 环丙沙星 3 C Waters Quattro micro API 电喷雾正离子 (ESI+) 多重反应监测 MRM 通道 上样 : 1 ml 样品 清洗 : A.3 ml 1 乙酸 / 乙醇 B. 3 ml 水 C. 3 ml 甲醇 结果 比较样品制备前后加标鸡肌肉样品的结果, 测得平均回收率为 75 加标浓度为 2 μg/kg 的六份重复样品的精度为 12 环丙沙星 小柱 II:Sep-Pak Accell QMA 3 cc/5 mg 活化 / 平衡 : 3 ml 5 氨的甲醇溶液 将 Sep-Pak Accell QMA 小柱连接至 MCX 小柱的出口 从 MCX 小柱洗脱至 Sep-Pak Accell QMA 小柱中 (6 cc 小柱位于顶部 ) 恩诺沙星 洗脱 *: 3 ml(5:95,v/v) 氨的甲醇溶液 取下 Oasis MCX 小柱 清洗 : 3 ml 乙醇 洗脱 : 3 ml 乙醇的甲酸溶液 (98:2,v/v) 图 1. 加标 (2 ng/kg) 鸡肌肉的典型 UPLC /MS/MS 色谱图 蒸发溶剂并复溶于 15 μl 乙腈水溶液 (15:85,v/v) 中 * 注 : 分析物从小柱 I 中洗脱后, 通过阴离子交换保留在小柱 II 上 因此, 来自小柱 I 的洗脱液成为了小柱 II 的上样 UPLC 条件 系统 : ACQUITY UPLC 色谱柱 : ACQUITY UPLC BEH C 18, 1.7 μm,1 x 5 mm 流速 :.12 ml/min 流动相 A: 1 甲酸水溶液 流动相 B: 乙腈 梯度 : 时间 (min) A B 订购信息 描述 部件号 Oasis MCX, 6 cc/15 mg, 6 µm, 3/ 盒 Sep-Pak Accell Plus QMA, 3 cc/5 mg, 5/ 盒 WAT285 ACQUITY UPLC BEH C 18, 1.7 µm, 1 x 5 mm ACQUITY UPLC BEH C 18, 1.7 μm, 1 x 5 mm,3/ 包 Qsert 样品瓶 参考资料 : 沃特世应用 WA 年沃特世公司 Waters Oasis Sep-Pak ACQUITY UPLC 和 UPLC 是沃特世公司的注册商标 Quattro micro 和 Accell 是 沃特世公司的商标 其他所有商标均归各自的拥有者所有 [ 37 ]

38 食用肌肉组织中多种兽药多残留测定 简介 目前, 针对组织样品中多种兽药残留的 LC/MS/MS 检测, 已经开发出优化 的样品制备和分析方案 本研究选择了三种肌肉组织样品 ( 猪肉 鸡肉和三文鱼 ) 来证实该方法的适用性 用酸化乙腈 / 水溶剂处理样品, 以沉淀蛋白质并提取目标兽药 然后使用 Sep-Pak C 18 小柱或 96 孔板进行简单的 SPE 纯化 蒸发并复溶后, 通过 LC/MS/MS 分析样品 从主要的兽药种类中选择具有代表性的化合物, 包括四环素 氟喹诺酮 磺胺类 大环内酯 B- 内酰胺 NSAID 类固醇和 B- 肾上腺素药物 样品制备初步提取 / 沉淀 在一支 5 ml 离心管中加入 5 g 组织匀浆样品 加入 1 ml.2 甲酸的 8:2 乙腈 / 水溶液 漩涡混合 3 秒, 置于摇床上 3 分钟 在 12 rpm 下离心 5 分钟 在提取 / 沉淀步骤中, 大多数目标化合物都表现出良好的回收率, 但同时还提取出了大量的脂肪 SPE 净化 取 1 ml 上清液 ( 来自步骤 1), 使用 Sep-Pak C 18 小柱或样品板进行 SPE 净化 ( 有关 SPE 的详细信息, 请参见图 1) 该步骤可以除去脂肪和非极性干扰物 固相萃取过程 (Sep-Pak C 18, 1 cc/1 mg) 活化 : 1 ml 8:2 乙腈 / 水 安装收集管 通过 / 收集 : 1 ml 蛋白沉淀后样品 LC 条件 系统 : ACQUITY UPLC 色谱柱 : 流动相 A: 流动相 B: 进样体积 : 进样模式 : 柱温 : 弱清洗液 : 强清洗液 : 密封清洗液 : ACQUITY UPLC CSH C 18, 1.7 μm, 2.1 x 1 mm.1 甲酸水溶液.1 甲酸的乙腈溶液 7 μl 部分定量环进样 3 C 1:9 乙腈 / 水 (6 μl) 5:3:4 水 / 乙腈 /IPA(2 µl) 1:9 乙腈 / 水 梯度 : 时间 流速 溶剂 A 溶剂 B 曲线 (min) (ml/min) () () MS 条件 检测器 : 电离模式 : 源温度 : 脱溶剂气温度 : 脱溶剂气流速 : 锥孔气流速 : 碰撞气流速 : 数据管理 : 初始 初始 Xevo TQ 电喷雾正离子 ( 仅氯霉素采用负离子模式 ) 15 C 5 C 1, L/h 3 L/h.15 ml/min Masslynx 4.1 版 安装收集容器 冲洗 / 收集 :.5 ml 8:2 乙腈 / 水 加入.25 ml 甲酸铵的 5:5 乙腈 / 甲醇溶液, 对样品进行缓冲, 以保护对酸敏感的分析物冲洗 / 收集.5 ml 8:2 乙腈 / 水 图 1. SPE 纯化方案 [ 38 ]

39 食用肌肉组织中兽药的多残留测定 结果 化合物 加标浓度 (ng/g) 猪肉回收率 (RSD) n=5 鸡肉回收率 (RSD) n=6 三文鱼回收率 (RSD) n=6 卡巴氧 1. 9 (36) 17 (14) 21 (13) 氯霉素 (2) 51 (2) 89 (2) 金霉素 (11) 49 (6) 54 (7) 环丙沙星 (21) 61 (8) 88 (2) 地塞米松 1. 7 (7) 61 (8) 91 (4) 恩诺沙星 (4) 62 (9) 9 (2) 红霉素 (9) 33 (4) 43 (8) 林可霉素 (17) 59 (1) 83 (8) 苯唑西林 (4) 48 (6) 55 (4) 土霉素 (8) 5 (1) 6 (5) 1 1 S/N:RMS= S/N:RMS= min : MRM of 1 Channels ES > (Erthromycin) 4.85e : MRM of 1 Channels ES > (Erthromycin) 4.55e3 青霉素 (7) 45 (8) 54 (9) 保泰松 (16) 44 (1) 38 (8) 图 2. 红霉素加标浓度为 1 ng/g 的猪肉的典型 LC-MS/MS 色谱图 ( 上方的图为主要 MRM 通道 ) 莱克多巴胺 (7) 62 (11) 88 (3) 沙丁胺醇 (14) 66 (12) 78 (7) 磺胺甲基嘧啶 (5) 59 (7) 82 (3) 磺胺二甲嘧啶 (5) 6 (8) 84 (3) 磺胺 (21) 65 (21) 74 (11) 四环素 (1) 53 (8) 69 (2) 泰乐霉素 (11) 36 (12) 63 (14) 表 1. 从三种加标组织样品获得的回收率数据 订购信息 描述 部件号 ACQUITY UPLC CSH C 18, 1.7 µm, mm Sep-Pak C 18 小柱, 1 cc, 1 mg LCMS 认证样品瓶 WAT CV 参考资料 : 沃特世应用资料 EN 213 年沃特世公司 Waters ACQUITY UPLC Xevo Masslynx 和 Sep-Pak 是沃特世公司的注册商标 CSH 是沃特世公 司的商标 [ 39 ]

40 牛奶中兽药的多残留测定 简介 目前, 针对牛奶样品中多种兽药残留开发了经过优化的样品制备和分析方案的 LC/MS 检测方法 首先将样品用等体积的乙腈进行初步沉淀和提取 然后用酸化乙腈处理提取过程中的上清液, 以沉淀残留的蛋白质, 然后使用 Sep-Pak C 18 小柱进行简单的 SPE 纯化, 洗脱液蒸干并复溶后, 通过 LC/MS 分析样品 待测物质为主要的兽药种类中有代表性的化合物, 包括四环素 氟喹诺酮 磺胺类 大环内酯 β- 内酰胺 非甾体抗炎药 类固醇和 β- 肾上腺素药物 样品制备方案初步提取 / 沉淀 ( 步骤 1): 转移 : 向一支 15 ml 离心管中加入 2 ml 样品 活化 :1 ml 8:2 乙腈 / 水 上样通过 / 收集 :1 ml 蛋白沉淀后的样品 清洗 / 收集 :.5 ml 8:2 乙腈 / 水 放置收集管 加入.25 ml 含有 2 mm 甲酸铵的 5:5 乙腈 / 甲醇, 缓冲样品并保护酸不稳定的待测物 蒸干 / 复溶 :.2 ml 25:75 乙腈 / 缓冲液 (25mM 甲酸铵缓冲液,PH 4.5) 图 1. SPE 纯化方案 加入 :2 ml 乙腈 (ACN) 并漩涡混合 3 秒 离心 :8 x g,4 分钟 1 1 在该步骤中, 大多数目标化合物都得到了很好的提取, 但同时还提取出了大量蛋白质和一些脂肪, 这些物质可能会干扰 LC/MS 分析 残留蛋白质沉淀 ( 步骤 2): 转移 : 向第二支离心管中加入 2 ml 上清液 ( 来自步骤 1) 加入 :3 ml 酸化乙腈 (.2 甲酸 ) 离心 :3 秒 2 2 该步骤可以有效沉淀残留蛋白质 LC 条件 系统 : ACQUITY UPLC 色谱柱 : ACQUITY UPLC CSH C 18, 1.7 µm, 2.1 x 1 mm 流动相 A:.1 甲酸水溶液 流动相 B:.1 甲酸乙腈溶液 进样体积 : 7 μl 进样模式 : 部分定量环进样 柱温 : 3 C 弱洗针液 : 1:9 乙腈 / 水 (6 μl) 强洗针液 : 5:3:2 水 / 乙腈 / 异丙醇 (2 µl) 密封清洗液 : 1:9 乙腈 / 水 梯度 : 时间 流速 组成 曲线 (min) (ml/min) A B 初始 SPE 净化 ( 步骤 3): 取 1 ml 上清液 ( 来自步骤 2), 使用 Sep-Pak C 18 小柱进行 SPE 纯化 ( 有关 SPE 的详细信息, 请参见图 1) 3 3 该步骤可以除去脂肪和非极性干扰物 MS 条件 MS 系统 : 源温度 : 脱溶剂气温度 : 脱溶剂气流速 : 锥孔气流速 : 碰撞气流速 : 数据管理 : ACQUITY TQD 15 C 5 C 1 L/H 3 L/h.15 ml/min Masslynx 4.1 版 [ 4 ]

41 牛奶中兽药的多残留测定 结果 化合物 加标浓度 (ng/g) 回收率 (RSD) (n=3) 抑制 * 卡巴氧 (27) -43 环丙沙星 (2) 32 氯霉素 (16) 1 金霉素 (2) 7 地塞米松 (6) MRL 2 stage PPT 3 VET8june211_4 Sm (Mn, 2x2) min VET8june211_4 Sm (Mn, 2x2) : MRM of 8 Channels ES >158.1 (erythromycin) 3.71e4 4: MRM of 8 Channels ES >576.3 (erythromycin) 1.11e4 恩诺沙星 (11) 26 红霉素 (1) 5 林可霉素 (9) 25 苯唑西林 (12) min 土霉素 (16) -9 青霉素 G (8) -8 保泰松 (18) 2 图 2. 红霉素加标浓度为 6.7 ng/g 的牛奶样品的典型 LC-MS/MS 色谱图 ( 上方的图为主要 MRM 通道 ) 莱克多巴胺 (14) 沙丁胺醇 (3) 96 磺胺甲基嘧啶 (4) -16 磺胺二甲嘧啶 (6) -74 磺胺 (3) 6 四环素 (18) -21 表 1. 回收率和基质效应 * 负数表示基质增强 订购信息 描述 部件号 ACQUITY UPLC CSH C 18, 1.7 µm, mm Sep-Pak C 18 小柱, 1 cc, 1 mg LCMS 认证样品瓶 WAT CV 参考资料 : 沃特世应用资料 72489EN 213 年沃特世公司 Waters ACQUITY ACQUITY UPLC Masslynx 和 Sep-Pak 是沃特世公司的注册商标 CSH 是沃特世 公司的商标 [ 41 ]

42 牛奶中的青霉素 四环素和磺胺类药物 简介 许多国际组织都十分关注抗生素和抗菌药物的滥用问题 本方法可用于监测牛奶中的抗菌药物 结果 前处理 首先用 3 ml 乙腈提取牛奶 (1 ml)( 振荡 1 分钟 ) 离心样品, 收集上清液 在 45 C 的水浴中, 用温和的氮气流将乙腈提取液 ( 提取液 1) 蒸发 3 至刚好 1 ml 以下 ( 该步骤将提取青霉素以及部分磺胺类药物 ) 然后用 3 ml ph 5 琥珀酸盐 /EDTA 缓冲液提取牛奶固体颗粒 离心样品并收集上清液 ( 提取液 2, 该步骤将提取四环素和剩余的磺胺类药物 ) 将 提取液 2 与蒸发后的提取液 1 混合, 加水使体积变成 1 ml 然后使用 Oasis HLB 小柱处理混合后的提取液 固相萃取过程 Oasis HLB 1 cc/3 mg LC 条件 色谱柱 : 流速 : 流动相 A: 流动相 B: 活化 / 平衡 : 1 ml 甲醇,1 ml 水 上样 : 来自样品前处理步骤 清洗 :.5 ml 5 甲醇 / 水 洗脱 : 含有 6 mm 醋酸的 6:4 甲醇 / 水 ACQUITY UPLC BEH Shield RP18, 1.7 µm, 2.1 x 1 mm 4 ml/min.1 甲酸水溶液 乙腈 梯度 : 时间 (min) A B 初始 min 1 ppb 加标牛奶 化合物 MRM 通道 回收率 土霉素 四环素 金霉素 磺胺嘧啶 磺胺噻唑 磺胺吡啶 磺胺甲基嘧啶 磺胺二甲嘧啶 磺胺甲氧哒嗪 磺胺氯哒嗪 磺胺甲恶唑 磺胺二甲氧嘧啶 青霉素 G 苯唑西林 氯唑西林 MRM 方法参数和回收率数据 订购信息描述部件号 Oasis HLB,1 cc/3 mg,1/ 盒 WAT94225 ACQUITY UPLC BEH Shield RP18, 1.7 µm, 2.1 x 1 mm LCMS 认证样品瓶 6751CV 211 年沃特世公司 Waters Oasis 和 ACQUITY UPLC 是沃特世公司的商标 [ 42 ]

43 使用 QuEChERS 检测肉类和牛奶中的类固醇激素 简介 在食品分析中, 利用 QuEChERS 方法制备样品可实现高通量和高灵敏度 虽然 QuEChERS 通常被用于水果和蔬菜中的多农药残留分析, 然而本应用使用 QuEChERS 方法和 UPLC /MS/MS 技术制备并分析牛奶和碎牛肉中 ppb 水平的类固醇激素 样品初步提取 (QuEChERS): 向一支 5 ml 离心管中加入 1 ml 全脂牛奶 ( 经巴氏灭菌 ) 或 1 g 碎牛肉 (85 瘦肉 ) 加入 1 ml 乙腈, 用力振荡离心管 1 分钟 加入符合欧洲委员会 (CEN)QuEChERS 标准方法的 DisQuE TM 袋装盐 ( 部件号 : ), 用力振荡 1 分钟 在 4 rpm 下离心 3 分钟, 取 1 ml 上清液 ( 最上层 ) 用于 d-spe 纯化 d-spe 净化 将 1 ml 上清液转移至一支 2 ml 的 d-spe 纯化试管中, 试管内含有 15 mg 硫酸镁 5 mg PSA 吸附剂和 5 mg C 18 吸附剂 ( 部件号 :186483), 用力振荡 1 分钟 在 4 rpm 下离心 3 分钟, 取.5 ml 样品用于 UPLC/MS/MS 分析 LC 条件 系统 : ACQUITY UPLC 色谱柱 : ACQUITY BEH C 18, 1.7 µm, mm 进样体积 : 3 µl 柱温 : 4 C 流动相 A: 水 流动相 B: 甲醇 流速 :.4 ml/min 梯度 : 初始条件为 3 的流动相 B, 在 5 min 内以线性梯度 增加至 97, 保持 8 min, 在 8.1 min 时返回到 3 保 持并重新平衡系统 1 min MS 条件 系统 : Xevo TQ-S 电离模式 : 电喷雾正离子 (ESI+) 结果 平均回收率 (RSD) n=5 浓度范围 (ppb) 碎牛肉 全脂牛奶 浓度水平 低水平 高水平 低水平 高水平 低水平 高水平 睾睾酮 (2.5) 89(2.2) 89(5.4) 95(1.1) 孕酮 (1.9) 92(3.7) 94(1.4) 95(.8) 地塞米松 (4.3) 91(3.2) 9(3.9) 91(4.4) 表 1. 碎牛肉和全脂牛奶样品中的类固醇激素回收率 _ MRM of 3 Channels ES > e min _ MRM of 3 Channels ES > e7 (a) (b) (c) _ MRM of 3 Channels ES > min min 2.16e _39 MRM of 3 Channels ES > e _39 MRM of 3 Channels ES > e _39 MRM of 3 Channels ES > e min min min 图 1. 碎牛肉样品中类固醇 UPLC/MS/MS 色谱图 ; 上面的图谱是低水平加标样品, 下面的图谱是碎牛肉空白样 (a) 睾酮 (b) 孕酮 (c) 地塞米松 _ MRM of 3 Channels ES > _ e min MRM of 3 Channels ES > e min _ MRM of 3 Channels ES > e min MRM of 3 Channels ES > e min _67 (a) (b) (c) _ MRM of 3 Channels ES > e min _43 MRM of 3 Channels ES > e min 图 2. 牛奶样品中类固醇 UPLC/MS/MS 色谱图 ; 上面的图谱是低水平加标样品, 下面的图谱是牛奶空白样 (a) 睾酮 (b) 孕酮 (c) 地塞米松 订购信息 描述 部件号 ACQUITY BEH C 18, 1.7 µm, 2.1 x 1 mm 色谱柱 CEN QuEChERS DisQuE 试剂袋 DisQuE 2 ml d-spe 纯化管 (15 mg MgSO 4, 5 mg PSA, 5 mg C 18 ) DisQuE 5 ml 离心管 最大回收样品瓶 667CV 参考资料 : 沃特世应用资料 EN 213 年沃特世公司 Waters ACQUITY ACQUITY UPLC UPLC 和 Xevo 是沃特世公司的注册商标 DisQuE 是沃特世公司的商标 [ 43 ]

44 农药和污染物 食品中存在的各种污染物 例如农药 除草剂 非法添加的染料 霉菌毒素和三聚氰胺 都是监管单 位 公共卫生机构和广大民众所担心的问题 本章中包含的方法涉及 样品前处理 样品制备 仪器方法和结果 这些方法达到甚至超过了政府机构所要求的检测和定量水平 本章还包括采用QuEChERS和其它官方方法的多残留农药分析应用 此外 还提供了关于多种不同样品 的QuEChERS*应用方法 以举例说明可满足以下要求 不同的前处理要求 例如 在提取步骤之前浸泡干燥样品 d-spe吸附剂是一种选择 例如 用于去除脂肪 * 关于该方法的更多详细信息 请参见我们网站上的沃特世QuEChERS白皮书(文献编号723643en) [ 44[ ]44 ]

45 水果和婴儿食品中 42 种农药残留的同时定性和确证分析 样品制备 / 固相萃取过程 1. 添加 15 g 样品到离心管 I 中 2. 加入 15 ml 1 的醋酸乙腈溶液 3. 提取前基质加标 4. 摇动 1 min, 大于 4 rpm 转速离心 1 min 5. 转移 1 ml 乙腈提取液到 2 ml 离心管 II 中 6. 摇晃 3 s, 大于 4 rpm 转速离心 1 min 7. 转移 25 μl 提取液到自动进样瓶中 8. 提取后基质加标 9. 根据需要可以用适当的缓冲盐或溶液稀释 色谱条件 仪器 : 沃特世 ACQUITY UPLC 系统 色谱柱 : ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1x1 mm, 1.7 μm 柱温 : 4 C 样品温度 : 4 C 流速 :.45 ml/min 流动相 A: 98/2 水 / 甲醇 ( 体积比 ) 含.1 甲酸 流动相 B: 甲醇 +.1 甲酸 梯度 : 时间 (min) A B 结果 min 色谱图 1 分钟内分离 42 种农残的分析 弱洗针溶液 : 强洗针溶液 : 总运行时间 : 进样量 : 98/2 水 / 甲醇 ( 体积比 ) 含.1 甲酸甲醇 +.1 甲酸 1 min 2 μl, 满环进样 三种基质的回收率数据 质谱条件 仪器 : 沃特世 ACQUITY TQ 检测器 电离模式 : ES + 毛细管电压 : 1 kv 脱溶剂气 : 氮气,8 L/Hr, 4 C 锥孔气 : 氮气,5 L/Hr 离子源温度 : 12 C 检测方式 : 多反应监测 (MRM) 碰撞气 : 氩气 3.5 x 1-3 mbar 使用沃特世 MassLynx V.4.1 软件采集数据, 使用 TargetLynx TM 应用软件 处理数据 订购信息描述部件号 DisQuE 基质分散样品制备产品 (1 pcs/pack) ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 1 mm, 1.7 μm VanGuard Pre-column, ACQUITY UPLC BEH C 18, x 5 mm, 1.7 µm, 3 pcs/pack LC/MS 认证样品瓶 6751CV [ 45 ]

46 使用 DisQuE 净化和 Xevo TQ-S 进行蔬菜中多种农药残留筛查分析 样品前处理 使用 Waters DisQuE Kit 多农残分析前处理方案对蔬菜样品进行净化, 快速高效 样品提取样品匀浆后, 转移 15 g 匀浆后样品至 5 ml 离心管中, 在离心管中加入 15 ml1 乙酸乙腈, 加入内标, 震荡离心管 1 min, 在大于 15 rcf 转速下离心 1 min 净化转移 2 ml 上清液至离心管 2, 震荡 3 s, 在大于 15 rcf 转速下离心 1 min,lc / MC / MS 分析用流动相, 稀释提取液进样分析 ACQUITY UPLC I-Class 超高效液相色谱分离条件 色谱柱 : ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 1 mm, 1.7 μm 流动相 A: 甲醇 流动相 B: 5 mm 乙酸铵水溶液 柱温 : 4 C 进样量 : 3 μl 运行时间 : 12 min 质谱条件 系统 : Xevo TQ-S 电离模式 : ESI± 电喷雾电压 : 3. kv 脱溶剂气温度 : 5 C 离子源温度 : 15 C 脱溶剂气流速 : 1 L/hr 采集方法 : MRM 农残筛查库 名称 电离模式 名称 电离模式 乙酰甲胺磷 + 氰戊菊脂 + 啶虫脒 + 氟虫腈 - 涕灭威 + 氟氰菊脂 + 涕灭威砜 + 氟胺氰菊脂 + 锑灭威 + 吡虫啉 + 阿维菌素 + 异菌脲 + 联苯菊脂 + 水胺硫磷 + 甲奈威 + 甲基异硫磷 + 多菌灵 + 马拉硫磷 + 克百威 + 甲胺磷 + 3- 羟基克百威 + 灭多威 + 灭幼脲 - 氧化乐果 + 百菌灵 + 对硫磷 + 毒死蜱 + 甲基对硫磷 + 氟氯氰菊脂 + 甲拌磷 + 氯氟氰菊脂 + 伏杀硫磷 + 氟氰菊脂 + 亚胺硫磷 + 溴氰菊脂 + 辛硫磷 + 二嗪磷 + 腐霉利 + 敌敌畏 + 丙溴磷 + 苯醚甲环唑 + 哒螨灵 + 除虫脲 - 嘧霉胺 + 乐果 + 三唑酮 + 杀螟硫磷 + 三唑磷 + 甲氰菊脂 + 表 种农药残留列表 结果 本实验使用 DisQuE Kit 前处理方法, 并用 Xevo TQ-S 的多农残筛查方法库, 结合 ACQUITY UPLC I-CLASS 超高效液相色谱分离系统对不同蔬菜中 49 种农药残留进行了快速筛查分析 其中 Xevo TQ-S 的 PICs( 子离子确认扫描 ) 数据采集功能, 在得到每种农残 MRM 定量色谱峰的同时得到其子离子扫描质谱图, 将样品的 PICs 质谱图与 TargetLynx TM 库中标准 PICs 参比质谱图进行匹配, 对阳性样品进行定性确认 订购信息 描述 部件号 DisQuE 分散固相萃取试剂盒 (5 ml 离心管 :1.5 g 乙酸钠 6 g 硫酸镁 ml 离心管 :15 mg 硫酸镁 5 mgpsa) ACQUITY UPLC BEH C μm, 2.1 x1 mm VanGuard Pre-column, ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 5 mm, 1.7 µm, 3 pcs/pack LC/MS 认证样品瓶 6751CV 图 1. 黄瓜样品中嘧霉胺的 PCIs 图与库中标准图的匹配结果 [ 46 ]

47 使用 QuEChERS-UPLC/MS/MS 分析婴幼儿食品中的多农残 简介 应用 QuEChERS 这种简便的萃取技术加上 UPLC/MS/MS 分析以水果和肉制品为基质的婴儿食品中的农残 这种方法超越了欧洲以致全世界法规的需求 结果 萃取步骤 1. 把 15 g 经过离心的样品加入到 5 ml DisQuE TM 萃取管中, 管中包括 1.5 g 醋酸钠和 6 g 硫酸镁 2. 加入 15 ml1 的醋酸乙腈 3. 加入样品处理前的内标物 4. 振摇 1 分钟然后离心 (>15 rcf)1 分钟 5. 将 25 µl 的萃取液转移到 2 ml DisQuE 萃取管中, 管中包含 5 mg PSA 和 15 mg 硫酸镁 6. 振摇 3 秒然后离心 (>15 rcf)1 分钟 7. 将 25 µl 的萃取液转移到自动进样的样品瓶中 8. 加入萃取后的内标物 9. 加入适当的缓冲溶液和溶剂稀释 LC 条件 LC 系统 : Waters ACQUITY UPLC System 色谱柱 : ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 5 mm, 1.7 µm 柱温 : 4 C 样品温度 : 4 C 流速 :.7 ml/min 流动相 A: 水 +.1 甲酸 流动相 B: 甲醇 +.1 甲酸 梯度 : 时间 (min) A B 色谱峰序号 农药名称 Omethoate 氧乐果 oxydemeton- S-methyl 亚砜磷 Demeton- S-methyl sulfone 磺吸磷 Dimethoate 乐果 Fensulfothionoxon 丰索磷氧 RT MRM 通道 驻留时间 (s) 锥孔电压 (V) 碰撞能量 (ev ) Fensulfothionoxon-sulfone 丰索磷氧化砜 总运行时间 : 进样体积 : MS 条件 MS 系统 : 离子化模式 : 8 分钟 5 µl, 满环进样 Waters Xevo TQ MS 正离子 (ESI+) 多反应监测 Demeton-Smethyl 甲基内吸磷 Disulfoton sulfoxide 乙拌磷亚砜 Disulfoton sulfone 乙拌磷砜 Fensulfothion 丰索磷 Xevo TQ MS MRM 方法参数 [ 47 ]

48 使用 QuEChERS-UPLC/MS/MS 分析婴幼儿食品中的多农残 接上表 11 Fensulfothion sulfone 丰索磷砜 terbufos sulfone 特丁磷砜 terbufos sulfoxide 特丁磷亚砜 Ethoprophos 灭线磷 Disulfoton 乙拌磷 Cadusafos 硫线磷 ( 杀线磷 克线丹 ) Terbufos 特丁硫磷 Xevo TQ MS MRM 方法参数 订购信息描述部件号 DisQuE 基质分散样品制备产品 (1 pcs/pack) ACQUITY UPLC BEH C μm, 2.1x5 mm LC/MS 认证样品瓶 6751CV [ 48 ]

49 使用 AOAC QuEChERS 方式结合 UPLC MS/MS 分析茶叶中的多农残 样品制备 1. 称量空烧杯的皮重 2. 称取 1 g 茶叶, 置烧杯中 3. 向烧杯中加入 6 ml8 ~ 85 C 的热水 煮沸 2 分钟 4. 称取烧杯 水和茶叶的总重量 5. 计算因蒸发损失的水的量 向烧杯中加水, 补充损失的水 6. 将样品搅匀, 直至质地均一 萃取操作 1. 将 15 g 搅匀的样品转移至 5 ml 的空试管中 2. 加入内标物和标准品的混合物 3. 在 5 ml DisQuE 萃取管 1 中加入 15 ml 1 乙酸 / 乙腈溶液 4. 将 DisQuE 萃取管 1 中的所有物质转移到含有样品和溶剂的 5 ml 试管中 ( 步骤 1 的 ) 5. 剧烈摇匀 1 分钟后, 然后离心 ( 大于 15 rcf)5 分钟 6. 吸取 1mL 上清液, 移至干净的试管 2 中 7. 摇匀 3 秒, 然后离心 ( 大于 16 rcf)5 分钟 8. 吸取 1 ml 的上清液, 移至进样瓶中 9. 加入萃取后的内标 1. 如有必要, 使用相应的缓冲液或溶剂稀释 结果 试验条件液相色谱条件 液相色谱系统 : 沃特世 ACQUITY UPLC 系统 色谱柱 : ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 1 mm, 1.7 μm 柱温 : 4 C 样品温度 : 4 C 流速 :.3 ml/min 流动相 A: 水 +.1 甲酸 流动相 B: 甲醇 +.1 甲酸 梯度 : 时间 流速 A B 进样量 : 15 L, 部分进样环进样 质谱条件 仪器 : 电离 : 采集 : 沃特世 ACQUITY TQD 检测器正离子电喷雾 (ESI+) 多反应监测 (MRM) 通过 UPLC-MS/MS 方法检测到的茶叶中的农药 订购信息描述部件号 DisQuE 基质分散样品制备产品 (1 pcs/pack) ACQUITY UPLC BEH C μm, 2.1x1 mm LCMS 认证样品瓶 6749CV [ 49 ]

50 土豆中苯胺灵残留的分析 样品制备 结果 1. 在 5 ml 离心管中加入 15 g 磨碎的马铃薯 ; 2. 加入 15 ml 含 1 乙酸的乙腈溶液,1.5 g 无水乙酸钠和 6 g 无水硫 1 空白 酸镁 ; 3. 剧烈摇动离心管 1 min; 4. >15 rcf 离心 1 min, 取上清液用于固相萃取净化 固相萃取过程 Sep-Pak Light NH 2 1 加标 1 ppm 2.15 将 5 ml 上清液转移到另一根离心管中, 加入.5 mg 无水硫酸镁 涡旋, 使粉末沉降下来 取 2 ml 上清液, 通过 Sep-Pak Light NH 2 小柱 min 取流出液 2 μl, 用 8 μl 水进行稀释 1 µg/g 添加水平马铃薯样品的 LC/MS/MS 图谱 色谱条件 仪器 : 沃特世 ACQUITY UPLC 系统 色谱柱 : ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 1 mm, 1.7 μm 流动相 A:.1 甲酸水溶液 流动相 B:.1 甲酸的乙腈溶液 梯度 : 时间 (min) A B 质谱条件 进行 LC/MS 分析 (1 μl) 仪器 : 沃特世 Quattro micro 电离模式 : ESI + 多反应监测 (MRM) 多反应监测转换 1: 多反应监测转换 2: 苯胺灵 保留时间 峰面积 1 ppm 添加 ppm 添加 ppm 添加 ppm 添加 ppm 添加 平均值 相对标准偏差 () 7.97 回收率 () 苯胺灵 保留时间 峰面积 1 ppm 添加 ppm 添加 ppm 添加 ppm 添加 ppm 添加 平均值 相对标准偏差 () 9.5 回收率 () 在马铃薯样品中添加 1 ppm 苯胺灵标准品的五次平行回收率结果 订购信息 描述 部件号 Sep-Pak Light NH 2 WAT23513 ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 1 mm,1.7 µm VanGuard Pre-column, ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 5 mm, 1.7 µm, 3 pcs/pack LC/MS 认证样品瓶 CV [ 5 ]

51 蔬菜水果中氨基甲酸酯类农药多残留分析 ( 柱后衍生法 ) 样品制备 1. 将 5 ml 乙腈加入 25 g 蔬菜或水果样品中, 均质化处理 2 min, 过滤 2. 取 4~5 ml 滤液, 加入已经放有 5~7 g 氯化钠的长颈瓶中 3. 用力摇晃长颈瓶 1 min, 在室温条件放置 4. 从乙腈层取 1 ml 上清液,8 C 氮气空气条件下吹干, 再用 2 ml 甲醇 / 二氯甲烷 (1:99, v/v) 重新溶解后进行 SPE 处理 样品 : 色谱柱上每种分析物 1 ng 进样量 : 4 μl 柱后加入 : OPA*/NaOH,.5 ml/min 检测器 : 2475 多波长荧光检测器激发波长 : 339 nm 发射波长 : 445 nm *OPA: 邻苯二甲醛 固相萃取过程 Sep-Pak NH 2 6 cc/5 mg 活化 / 平衡 4 ml 甲醇 / 二氯甲烷 (1:99, v/v) 通过 策略 2 ml 样品 结果 收集流出液 色谱条件 12 种氨基甲酸酯标准品的色谱图 洗脱 用 2 ml 甲醇 / 二氯甲烷 (1:99, v/v) 冲洗两次 色谱峰序号 化合物 保留时间 混合流出液 1 涕灭威亚砜 涕灭威砜 C 氮气吹干 3 杀线威 灭多威 6.3 用 2.5 ml 甲醇重新溶解 5 3- 羟基 - 呋喃丹 涕灭威 残杀威 仪器 : Alliance 2695 系统 8 呋喃丹 色谱柱 : 沃特世氨基甲酸酯分析专用色谱柱,3.9 x15 mm 9 西维因 流速 : 1.5 ml/min 1 1- 萘酚 流动相 A: 水 11 灭虫威 22.2 流动相 B: 甲醇 12 BDMC 流动相 C: 乙腈 氨基甲酸酯标准品保留时间 梯度 : 时间 (min) A B C 订购信息 描述 Sep-Pak NH 2, 6 cc/5 mg 沃特世氨基甲酸酯分析专用色谱柱, 3.9 x 15 mm LC/GC 认证样品瓶 部件号 WAT5456 WAT C [ 51 ]

52 蔬菜水果中农药多残留分析 样品制备 1. 将 2 g 蔬菜或水果样品绞碎, 加入 5 ml 乙腈提取 2. 过滤提取物, 收集滤液并用乙腈定容至 1 ml 3. 取 2 ml 稀释后的提取液, 加入 1 g 氯化钠和 2 ml.5 M 的磷酸盐 缓冲液 (ph 7) 4. 振摇, 然后静置使液体分层, 收集乙腈层, 加入无水硫酸钠进 行干燥 5. 在低于 4 C 条件下旋转蒸发浓缩提取液, 然后用 2 ml 3:1(v/v) 的 乙腈 / 甲苯混合溶剂溶解 固相萃取过程 Sep-Pak Vac 石墨化炭黑 / 氨基小柱 6 cc/5 mg/5 mg 活化 1 ml 3:1(v/v) 的乙腈 / 甲苯, 注意小柱不得干涸 上样 将 2 ml 提取后的样品全部上样, 然后用少量 3:1(v/v) 的乙腈 / 甲苯混合溶 剂冲洗盛提取液的容器, 再将冲洗液上样 洗脱 2 ml3:1(v/v) 的乙腈 / 甲苯混合溶剂, 控制流速为 2 ml/min 收集上样步骤和洗脱步骤的流出液并混合, 在 4 C 条件下旋转蒸发, 浓缩至 1 ml; 加入 1 ml 丙酮, 再浓缩至 1 ml; 加入 5 ml 丙酮, 再浓缩至 干 ; 用 4 ml 甲醇溶解残渣, 用于 LC/MS/MS 分析 色谱条件 仪器 : 沃特世 Alliance 2695 系统 色谱柱 : XBridge C 18, 2.1 x 15 mm, 3.5 μm 流速 :.2 ml/min 流动相 A: 水 流动相 B: 甲醇 流动相 C: 1 mm 乙酸水溶液 梯度 : 时间 (min) A B C 进样量 : 5 μl 温度 : 4 C 质谱条件 仪器 : 沃特世 Quattro Premier XE 电离模式 : 电喷雾正离子 (ESI + ) 多反应监测 (MRM) 结果 * 化合物名称 添加浓度水平 µg/g 回收率水平 阿维菌素 莎稗磷 保棉磷 吡草酮 氟丙嘧草酯 氯草敏 环虫酰肼 氯甲酰草胺 解草酯 噻虫胺 氰霜唑 环氟菌胺 二甲嘧酚 苯氧威 嘧菌腙 盐酸杀螨脒 呋线威 吡虫啉 茚虫威 丙森锌 异恶唑草酮 乳氟禾草灵 甲氧虫酰肼 密灭汀 A 密灭汀 A 萘丙胺 安磺灵 氧化萎锈灵 砜吸磷 甜菜宁 苄草唑 糖草酯 硅氟唑 噻虫啉 噻虫嗪 十三吗啉 灭菌唑 * 每一浓度水平平行分析 5 个样品 订购信息描述部件号 Sep-Pak Vac 石墨化炭黑 / 氨基小柱,6 cc, 5 mg/5 mg XBridge C 18, 2.1 x 15 mm, 3.5 μm XBridge C 18 保护柱,2.1 x 1 mm, 3.5 μm, 2 支 / 包装 Sentry Guard Holder WAT97958 LC/GC 认证样品瓶 18637C [ 52 ]

53 对苯并咪唑类杀真菌剂多组分残留的检测 SPE 条件 固相萃取小柱 :Oasis MCX 3cc/6mg 样品制备 样品溶液用甲酸调节至 PH3 活化 / 平衡 A: 1 ml 甲醇 B:1 ml 水 上样 以 5 ml/min 速度上样 清洗 1 ml 2:89:1 甲醇 / 水 / 浓氨水 Time(min) 图 1. 使用 SunFire C 18 柱对 6 种杀真菌剂进行梯度分析 (5 ng/ml 混标 进样 1 µl) 梯度条件 :9:5:5(A/B/C) 在 1 min 内到 :95:(A/B/C) 洗脱 2 ml 2 氨水甲醇 因氨基甲酸酯类在碱溶液中不稳定, 将洗脱液挥干, 用流动相溶解 色谱条件 色谱柱 : 流动相 A: 流动相 B: 流动相 C: 柱温 : 仪器 : 质谱条件 锥孔电压 : SunFire C x 1 mm, 3.5 μm 水乙腈 5 mm 甲酸铵缓冲液 (ph3.7) 3 C Alliance 2695, 沃特世 Xevo TQ MS 25 V;ESI+ 模式 ( 源温度 12 C, 去溶剂化温度 35 C) Time(min) 图 2. 使用 SunFire C 18 柱对多菌灵和涕必灵进行等梯度分析 (1 µg/ml 混标 进样 1 µl) 洗脱条件 :75:2:5(A/B/C) 分析物 母离子 [M+1] + 多菌灵 (Carbendazim) 192 涕必灵 (Thiabendazole) 22 甲基硫菌灵 (Thiophanate Methylate) 343 硫菌灵 (Thiophanate) 371 腈菌唑 (Myclobutanil) 289 丙环唑 (Propiconazole) 342 订购信息描述部件号 SunFire C x1 mm, 3.5 μm Oasis MCX 3 cc/6 mg 3 μm,1/box LC/MS 认证样品瓶 6751CV SunFire C x1 mm Sentry Universal Sentry 保护柱套 2.1x1 mm WAT97958 [ 53 ]

54 饮用水中草甘膦的分析 简介 草甘膦是一种非选择性除草剂 这种除草剂通过植物茎叶吸收, 最初由孟山都公司 (Monsanto) 首次销售, 其商标名称为 Roundup 该除草剂是使用最为广泛的除草剂之一, 常用于农业 园艺和造林 美国国家环境保护局 (US EPA) 规定使用 EPA 方法 547. 对饮用水和地表水中的草甘膦和有关化合物进行监测 欧洲联盟 (EU) 的 25/7/EU 指令为检测饮水中的草甘膦提供了指南 样品制备 样品的制备请参阅 EPA547 方法 该法描述了用.45 μm 的 Acrodisc 过滤器的方法 其他样品制备方法 使用 Oasis MAX 固相萃取法提取草甘膦及其代谢物, 此法适用的 Oasis MAX 固相萃取小柱规格为 6 cc,15 mg 规格 当样品含量大于 5 ml 时需用 6 cc,5 mg 规格的 Oasis MAX 固相萃取小柱 样品制备 ph 6-8 条件 2 ml MeOH,4 ml.5 M NaOH,2 ml H 2 O 淋洗 4 ml.5 M NaOH 淋洗 2 ml H 2 O 上样 25 ml 样品 柱后试剂的制备 试剂 1: 次氯酸盐将 1.35 g KH 2 PO g NaCl.4 g NaOH 和.2 ml Clorox 次氯酸钠 ( 纯 ) 溶于水, 稀释至 1L, 过滤, 脱气 试剂 2: 邻苯二甲醛 (OPA) 将.8 g OPA 溶于 1 ml 甲醇中, 将这些混合物加入含有 19.1 g 硼砂的水溶液中 补充溶剂直至最终容量达到 1 L, 过滤并脱气 在所得的溶液中, 加入 2 ml2- 巯基乙醇, 轻摇, 混合 操作过程需避光 注 : 两种试剂的柱后流速均为.5 ml/min, 柱后反应的温度为 38 C 在荧光检测器前面并排插入第二根反应管 色谱条件 仪器 : 沃特世 Alliance 氨基甲酸酯分析系统 洗脱液 :.5 磷酸 色谱柱 : 离子排阻色谱柱,7.8 x 15 mm, 55 C 保护柱 : Guard-Pak 组件和附件 进样量 : 2 μl 标准品混合物 流速 : 1.5 ml/min 检测 : 荧光检测, 激发波长 -34 nm, 吸收波长 -455 nm, 增益 -1 Peak Analyte 1 Glyphosate 2 AMPA 洗涤 2 ml H 2 O 洗脱 4 ml.5 M HCI 乙腈溶液 * 标准品混合物的制备 用移液管移取 1 μl AccuStandard 标准品混合物 (M-547) 到 1 ml 的酸化水中, 使其浓度为 1 酸化水的制备方法是通过滴加盐酸 (HCl) 将色谱级水的 ph 值调节为 3. 使用如上的 EPA547-2 方法, 制备 AMPA( 氨甲基膦酸 ) 溶液 洗脱液的制备 蒸馏和重新溶解与 LC 分析适应 * 交替的洗脱液为 4 ml.6 M 柠檬酸钠 将.5 ml85 的磷酸 (H 3 PO 4 ) 稀释至 1L, 混匀, 过滤 脱气 Minutes 图 1. 标准品色谱图, 每种分析物浓度为 1 ppb 订购信息描述部件号 IC-PAK 离子排阻色谱,7.8 X 15 mm WAT1295 Guard-Pak 保护套 WAT88141 Semivolatiles #2 除草剂标准品 Oasis MAX 小柱,6 cc,15 mg Oasis MAX 小柱,6 cc,5 mg 环境系统解决方案 72161EN 甘草膦和氨甲基膦酸的饮用水溶液 WA31764 饮用水中有害有机物的 LC/MS/MS 多分析物检测方法 7219EN [ 54 ]

55 采用超灵敏 UPLC/MS/MS 对饮用水样品中的酸性除草剂进行定量分析 样品预处理 饮用水直接进样 色谱条件 UPLC 系统 : ACQUITY UPLC I-Class 运行时间 : 6. min 色谱柱 : ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 1 mm, 1.7 μm 柱温 : 25 C 流动相 A:.5 NH 4 OH 水溶液 流动相 B:.5 NH 4 OH 乙腈溶液 洗脱 : 从 5 (B) 到 95 (B) 的 3 分钟线性梯度 流速 :.4 ml/min 进样量 : 1 μl 质谱条件 质谱系统 : Xevo TQ-S 电离模式 : ESI 负离子 毛细管电压 : 2. kv 锥孔电压 : 2. V 离子源温度 : 14 C 脱溶剂温度 : 55 C 脱溶剂气体流速 : 11 L/hr 锥孔气体流速 : 5 L/hr RADAR TM 技术 QUANPEDIA TM 数据库 除草剂母离子子离子 4 氯苯氧乙酸 (4CPA) 2- 甲 -4 氯苯氧乙酸 (MCPA) 2- 甲基 -4 氯苯氧丙酸 (MCPP) 2,4- 二氯苯氧乙酸 (2,4 D) 2,4- 二氧苯氧丙酸 (2,4 DP) 2,4,5- 三氯苯氧乙酸 (2,4,5-T) 绿草定 2,4,5- 三氯苯氧丙酸 (2,4,5-TP) 禾草灵 氟吡甲禾灵 三氟羧草醚 表 1. 苯氧乙酸类除草剂的 MRM 条件 结果 锥孔电压 碰撞能量 采用高灵敏度和高选择性的 UPLC/MS/MS 技术, 无需样品预处理, 直接进样, 定量限可达 5ppt Acquity UPLC BEH C 18 色谱柱提供了高分离度与良好的柱寿命 除草剂 瓶装水 自来水 4 氯苯氧乙酸 (4CPA) (1.4) 97.6 (1.6) 2- 甲 -4 氯苯氧乙酸 (MCPA) (1.3) 93.4 (1.3) 2- 甲基 -4 氯苯氧丙酸 (MCPP) 1.8 (3.1) 9.7 (1.5) 2,4- 二氯苯氧乙酸 (2,4 D) 14.6 (1.6) 85. (3.3) 2,4- 二氧苯氧丙酸 (2,4 DP) 112. (2.7) 95.3 (4.5) 2,4,5- 三氯苯氧乙酸 (2,4,5-T) 11.6 (1.6) 83.3 (1.1) 绿草定 1.5 (5.) 91.1 (6.6) 2,4,5- 三氯苯氧丙酸 (2,4,5-TP) 12.3 (2.4) 88.5 (.6) 禾草灵 (2.9) 98.1 (2.) 氟吡甲禾灵 (1.) 92.5 (2.7) 三氟羧草醚 (1.8) 86.6 (.9) 表 2. 瓶装水和自来水样品在 1 ppt 处的回收率和变异系数 (n=3) [ 55 ]

56 采用超灵敏 UPLC/MS/MS 对饮用水样品中的酸性除草剂进行定量分析 1 Inj #1 BP 98 psi : MRM of 2 Channels ES- TIC (2,4,5 T) 自来水 1 Inj #1 BP 8975 psi : MRM of 2 Channels ES- TIC (2,4,5 T) 瓶装水 Time : MRM of 2 Channels ES- TIC (2,4,5 T) Time : MRM of 2 Channels ES- TIC (2,4,5 T) Time Inj #25 1 Inj# : MRM of 2 Channels ES- TIC (2,4,5 T) Time Inj #5 BP 115 psi 1 Inj#5 BP 918 psi : MRM of 2 Channels ES- TIC (2,4,5 T) Time Time 图 1. 1 ppt 时苯氧乙酸类除草剂标准品超纯水溶液的 MRM 色谱图 图 2. 色谱柱寿命研究多反应监测色谱图示例 图中显示自来水和瓶装水样品 2,4,5- 三氯苯乙酸第 1 次 第 25 次和第 5 次进样 订购信息描述部件号 Acquity BEH C 18, 1.7 µm, 2.1 x 1 mm 色谱柱 TruView LCMS 认证样品瓶 CV [ 56 ]

57 使用 QuEChERS 检测婴儿食品和婴儿配方奶粉中的双酚 A B 和 E 简介 双酚 A(BPA) 是一种添加剂, 主要在聚碳酸酯塑料和环氧树脂的生产中使用 这些合成材料被广泛用于食品包装, 以保证食品和饮料的安全性和完整性 聚碳酸酯用于生产多种食品和饮料容器, 例如奶瓶 餐具和其它食品容器 BPA 是一种内分泌干扰物, 可模拟人体自身的激素, 并可能导致负面的健康影响 本应用资料展示了婴儿食品和配方奶粉中三种双酚 (A B 和 E) 的检测结果 样品制备条件 DisQuE 吸附剂试剂袋 : DisQuE 试剂袋 (CEN 方法 ), 4. g MgSO 4, 1. g NaCl, 1.5 g 柠檬酸钠 dspe: 15 ml 部件号 mg MgSO 4, 15 mg PSA, 15 mg C 18 沉淀 (1 g 样品,1 ml CH 3 CN) 离心并收集上清液加入 DisQuE 试剂袋的内容物 振荡 离心并收集 1 ml 上清液将上清液转移至 dspe 离心管中 振荡 离心并收集上清液用 7 ml H 2 O 稀释上清液加载至 Oasis HLB (3 cc) 清洗 2 ml 4 MeOH 洗脱 1 ml 1 MeOH 用 1 ml H 2 O 稀释洗脱液取 5 µl 进样 LC-MS/MS 分析图 1. 最终样品制备方案 SPE 小柱 : 调整 : 平衡 : 上样 : 流速 : 清洗 : 洗脱 : Oasis HLB 3 mm, 6 mg/3 cc 2 ml 甲醇 2 ml 水 7 ml 稀释提取物 < 5 ml/min 2 ml 4 MeOH 水溶液 1 ml 1 MeOH MRM of 8 Channels ES > (BPA D16) BPA mix MRM of 8 Channels E-S > 133 (BPA) LC 条件 系统 : ACQUITY UPLC 运行时间 : 5. min 色谱柱 : ACQUITY UPLC BEH C 18, 1.7 μm, 2.1x 5 mm 柱温 : 4 C 流动相 A:.5 NH 4 OH 水溶液 流动相 B:.5 NH 4 OH 甲醇溶液 洗脱 : 流动相 B 在 3 min 内以线性梯度从 5 增加至 95 流速 :.5 ml/min 进样体积 : 5 μl MS 条件 MS 系统 : Xevo TQD 电离模式 : ESI- 毛细管电压 : 3.5 kv 锥孔电压 : 3. V 源温度 : 14 C 去溶剂化温度 : 35 C 去溶剂化气流速 : 55 L/h 锥孔气流速 : 5 L/h BPA mix MRM of 8 Channels E-S > 211 (BPB) BPA mix MRM of 8 Channels E-S > (BPE) min 图 2. 1 ppb 加标婴儿配方奶粉提取物的 MRM 色谱图 [ 57 ]

58 使用 QuEChERS 检测婴儿食品和婴儿配方奶粉中的双酚 A B 和 E 双酚配方奶粉婴儿食品 BPA 12 (3.2) 11 (7.8) BPB 95 (5.5) 112 (6.7) BPE 81 (4.6) 99 (6.1) 表 1. 婴儿配方奶粉和绿豆泥中加标 BPA BPB 和 BPE 的回收率和 RSD (n = 3) 计算结果 MRM of 8 Channels E-S > (BPA D16) MRM of 8 Channels E-S > 133 (BPA) 2.8 MRM of 8 Channels E-S > 211 (BPB) 2.6 MRM of 8 Channels E-S > (BPE) min 图 3. 1 ppb 加标婴儿食品提取物的 MRM 色谱图 订购信息 描述 部件号 ACQUITY UPLC BEH C 18 色谱柱,1.7 µm,2.1 x 5 mm DisQuE 5 ml 离心管 DisQuE 试剂袋 (CEN 方法 ) DisQuE 15 ml dspe 净化离心管 (9 mg MgSO 4,15 mg PSA,15 mg C 18 ) Oasis HLB,3 cc/6 mg,3 µm 小柱 LCMS 认证样品瓶 WAT CV 参考资料 : 沃特世应用资料 EN 213 年沃特世公司 Waters ACQUITY UPLC Oasis Xevo 和 UPLC 是沃特世公司的注册商标 DisQuE 是沃特世公 司的商标 [ 58 ]

59 橙汁中的多菌灵和其它康唑类杀菌剂 简介 本研究对橙汁中康唑类杀菌剂 ( 包括多菌灵 ) 测定的样品制备技术进行了验证 采用 QuEChERS(DisQuE TM ) 的样品制备步骤被证明在使用 UPLC/MS/MS 时适合用于五种 1 ppb 水平的康唑类杀菌剂 经证实, 固相萃取 (SPE) 可以减少干扰物并富集样品, 从而便于使用 HPLC/UV 检测低 ppb 水平的多菌灵 样品描述 所研究的杀菌剂包括 : 多菌灵 噻菌灵 抑霉唑 腈苯唑和苯醚甲环唑 这些分析物的结构如图 1 所示 这些化合物均为碱性, 可以保留在 Oasis MCX 混合模式阳离子交换吸附剂上进行 SPE 纯化 SPE 净化 采用 Oasis MCX 固相萃取小柱可以对碱性化合物进行纯化, 例如对康唑 类杀菌剂 对于 LC/UV 分析 ( 或者, 当 UPLC/MS/MS 分析也需要进行纯化 时 ), 从 QuEChERS 提取物中取 2 ml 上清液, 加入 6 ml.1 M HCl 水溶液, 混合均匀 然后使用 3 cc Oasis MCX 小柱实施 SPE 纯化方案, 如图 3 所示 用酸性水溶液稀释 QuEChERS 提取物, 以增强混合模式 SPE 保留性能, 同 时水溶液稀释还能增强反相保留 Oasis MCX 方案 初始化 / 平衡 : 2 ml 甲醇 /2 ml 水 上样 : 8 ml 稀释后的 DisQuE 提取物 清洗 1: 1 ml 2 甲酸的甲醇溶液 清洗 2: 1 ml 甲醇 洗脱 : 2 ml 5 氨的甲醇溶液 图 2. 本研究中方案采用 3 cc 规格的 Oasis MCX SPE 小柱 康唑类杀菌剂的结构 样品制备 使用 QuEChERS 进行初步提取 向 5 ml 离心管中加入 15 ml 橙汁样品 加入 15 ml 1 乙酸的乙腈 (ACN) 溶液, 振荡离心管 1 分钟 加入用于 AOAC QuEChERS 方法的 DisQuE 试剂袋的内容物, 用力振荡 1 分钟 然后在 3 rpm 下离心 5 分钟 对于不使用 SPE 的 UPLC/MS/MS 分析, 用水将.5 ml 上清液稀释至 1. ml 基本 QuEChERS 提取方案如图 2 所示 QuEChERS 提取 DisQuE 试剂袋 用于质谱分析的 UPLC 条件 系统 : ACQUITY UPLC H-Class 色谱柱 : ACQUITY UPLC BEH C 18, 1.7 μm, 2.1 x 1 mm 进样体积 : 1 μl 柱温 : 4 C 流动相 A:.1 NH 4 OH 水溶液 流动相 B:.1 NH 4 OH 甲醇溶液 流速 :.4 ml/min 梯度 : 初始条件为 1 的流动相 B, 在 4 min 内以线性梯 度增加至 9, 保持 5 min, 在 5.1 min 时返回到 1 保持并重新平衡系统至 7 min 时 匀质化 : 取 15 g 样品加入 15 ml 1 乙酸的乙腈溶液 液相萃取 : 振荡 1 分钟 收集 : 取出一份上清液用于 LC/MS* 或进一步净化以进行 LC/UV** 图 1. 使用专用于 AOAC 方法的 DisQuE 产品进行 QuEChERS 提取 *.5 ml, 用水按 1:1 稀释 ** 2. ml, 用.1N HCl 稀释至 8 ml 以进行 SPE [ 59 ]

60 橙汁中的多菌灵和其它康唑类杀菌剂 用于 UV 检测的 HPLC 条件 ( 采用 XP 色谱柱 ) 系统 : ACQUITY UPLC H-Class 检测条件 : 光电二极管阵列 (PDA) 色谱柱 : XBridge C 18 XP, 2.5 μm, 4.6 x 1 mm 进样体积 : 5 μl 柱温 : 4 C 流动相 A: 2 mm 磷酸钾水溶液 (ph 6.8) 流动相 B: 乙腈 流速 : 1.3 ml/min 梯度 : 初始条件为 25 的流动相 B, 保持 3.4 min, 然后 以线性梯度增加, 在 9.7 min 时达到 65, 保持 至 11. min 时, 再以线性梯度增加, 在 11.7 min 时达到 95, 保持至 13. min 时, 然后线性返回 25 至 13.2 min 保持并重新平衡系统至 18.3 分 钟时 结果 ES+ MRM 46.1 > e ES+ MRM > e ES+ MRM > e ES+ MRM 22.4 > e ES+ MRM 192 > e min 化合物 康唑类杀菌剂 加标 浓度 (ppb) 回收率 (RSD) 抑制 多菌灵 (1.3) 16.1 噻菌灵 (2.3) 28.9 抑霉唑利 (.9) 4. 苯醚甲环唑 (.6) 9.7 腈苯唑 (1.6) 8.6 多菌灵 (4.2) 11.2 噻菌灵 (4.1) 34. 抑霉唑抑霉唑利 1 14 (3.7) 15.2 苯醚甲环唑 (6.5) 12.1 腈苯唑 (4.9) 5. 表 1. 使用专用于 AOAC QuEChERS 的 DisQuE 试剂袋得到的康唑类杀菌剂回收率数据总结 (n = 4) 采用 Oasis MCX 净化时, 离子抑制显著减少 ( <2)( 未显示数据 ) 图 3. 每种杀菌剂以 1 ng/g (ppb)( 仅多菌灵为 1 ppb) 加标的橙汁, 经 DisQuE 试剂袋提取物净化后的 UPLC/MS/MS 色谱图 2: 二极管阵列 22 范围 :4.337e-3 3. 伊米萨利 4. 腈苯唑 5. 苯醚甲环唑 ( 顺式和反式 ) 图 4. 经 Oasis MCX 纯化后按 1 ng/g (ppb) 加标的橙汁的 DisQuE 试剂袋提取物在 XP 色谱柱上获得的 LC/UV (22 nm) 色谱图 [ 6 ]

61 橙汁中的多菌灵和其它康唑类杀菌剂 1.e-2 2: Diode Array 281 Range: e-3 AU 5.e-3 2.5e e-2 2: Diode Array 281 Range: 4.24e-1 7.5e-3 AU 5.e-3 carbendazim 2.5e-3. 2: 二极管阵列 Min 范围 : 图 5. 用加入多菌灵的橙汁样品的 DisQuE 试剂袋提取物得到的 LC/UV 色谱图 (281 nm) 上方的色谱图未经 SPE 纯化, 下方的色谱图采用 Oasis MCX 小柱进行了纯化 图 6. 加入多菌灵的市售橙汁的 UPLC/MS/MS 和 LC/UV 对比 订购信息描述部件号 ACQUITY UPLC BEH C 18, 1.7 μm, 2.1 x 1 mm Xbridge C 18 XP, 2.5 μm, 4.6 x 1 mm 专用于 AOAC QuEChERS 方法的 DisQuE 试剂袋 Oasis MCX 3 cc 小柱 参考资料 : 沃特世应用资料 EN 212 年沃特世公司 Waters ACQUITY UPLC Xbridge 和 Oasis 是沃特世公司的注册商标 DisQuE 是沃特世公司的 商标 其他所有商标均归各自的拥有者所有 [ 61 ]

62 饮用水中的敌草快和百草枯 简介 百草枯和敌草快是季胺盐类除草剂, 在全世界被大量用于落叶和杂草的控制 由于这些化合物可能对野生动物和人类具有毒性, 因此本研究对地下水和地表水样品进行了监测, 以确保残留水平符合安全标准 之前发表的一篇文章讨论了用 Oasis WCX 进行季铵盐经固相萃取后的 HPLC/MS 测定 全新的 UPLC 方法所需时间仅为 HPLC 方法的一半 此外, 还对 SPE 进行了改进 ; 之前的方案采用三氟乙酸, 这是一种有毒的全氟化合物和持久性的有机污染物 在新的 SPE 方案中, 使用甲酸作为 SPE 洗脱液的酸性改性剂 样品制备 注 : 样品收集和所有样品制备步骤应当使用聚丙烯容器 UPLC 分析推荐使用聚丙烯材质的自动进样器样品瓶 1. 样品前处理将 1 ml 样品转移至适当的聚丙烯容器中 ( 本研究中使用的是 15 ml 离心管 ) 对于氯化样品, 加入 1 mg 硫代硫酸钠并混合均匀 向所有样品加入 4 mm ph 7 磷酸盐缓冲液 25 µl 以调整 ph 值 2.SPE 富集和净化用 Oasis WCX 小柱进行 SPE 富集和净化 ( 有关 SPE 的详细信息, 请参见图 2) 在每个小柱上连接一个 3 cc 聚丙烯储液器, 以便加载 1 ml 样品 Oasis WCX 方案 (3 cc 6 mg) 初始化 / 平衡 : 3 ml 甲醇 3 ml 25 mm ph 7 磷酸盐缓冲液 结果 按 4 ng/l 加标的三种水的敌草快 / 百草枯回收率数据 (n=7) 样品类型 -5-5 回收率 (RSD) 敌草快 回收率 (RSD) 百草枯 地下水 82 (8) 89 (16) 自来水 84 (5) 88 (8) 河水 83 (4) 89 (19) 4 ppt shrewsbury de-chlorinated8 DiBEH15DEC11_39 DiBEH15DEC11_ min 图 2. 敌草快典型 LC-MS(MS) 色谱图 (4 ng/l) 1 3 ES+ MRM > e3 1 3 ES+ MRM > e3 上样 : 1 ml 样品 清洗 1: 7 µl 25 mm 甲酸铵 ph 8. 清洗 2: 7 µl 甲醇 95 4 ppt shrewsbury de-chlorinated8 DiBEH15DEC11_39 (4 ng/l) 2 3 ES+ MRM > 洗脱 : 2 x 1. ml 4:4:2 乙腈 / 异丙醇 / 甲酸 蒸发 / 复溶 : 5 µl 4:4:2 乙腈 / 异丙醇 / 甲酸 图 1. 用于分析敌草快 / 百草枯的 Oasis WCX 小柱方案 DiBEH15DEC11_ : 3 ES+ MRM > min 图 3. 百草枯典型 LC-MS(MS) 色谱图 [ 62 ]

63 饮用水中的敌草快和百草枯 r = r 2 = * x * / 1/x Conc 图 4. 敌草快典型 LC-MS(MS) 校准曲线 r =.9951 r 2 = * x * / 1/x Conc 图 5. 百草枯典型 LC-MS(MS) 校准曲线 订购信息 描述 部件号 Oasis WCX, 3 cc/6 mg, 3 µm ACQUITY BEH HILIC, 1.7 µm, 2.1 x 1 mm 聚丙烯自动进样器样品瓶 cc 聚丙烯储液器 WAT1139 参考资料 : 沃特世应用资料 72422EN 213 年沃特世公司 Waters ACQUITY ACQUITY UPLC UPLC 和 Oasis 是沃特世公司的注册商标 [ 63 ]

64 使用 QuEChERS 检测牛肉中的有机磷农药 样品初步提取 (QuEChERS): 2 ppb spike sample 将 1 g 碎牛肉匀浆加入 5 ml 离心管中 加入 2 ml 水和 1 ml 乙腈 (ACN), 然 后用力振荡试管 1 分钟 加入专用于 CEN QuEChERS 的 DisQue 试剂袋盐内容物, 再用力振荡 1 分钟 在 4 rpm 下离心 3 分钟, 取 1 ml 上清液 ( 最上层 ) 用于 d-spe 净化 dspe 净化 : 将 1 ml 上清液转移至 2 ml 的 d-spe 净化离心管中, 管内含有 15 mg 硫酸镁 5 mg PSA 吸附剂和 5 mg C 18 吸附剂 用力振荡 1 分钟 将部分上清液转移至 LCMS 认证样品瓶中, 用于 GC/MS 分析 min 图 1. 未加标碎牛肉样品 ( 蓝色迹线 ) 和加标 2 ppb 有机磷农药的碎牛肉样品 ( 黑色迹线 ) 的 GC/MS 色谱图 GC 条件 GC 系统 : Agilent 689 色谱柱 : Rxi -5Sil MS, 3 x.25 mm( 内径 ),.25 µm 进样体积 : 1 µl 载气 : 氦气 流速 : 1. ml/min( 恒定气流 ) 温度程序 : 初始为 8 C( 持续 1 分钟 ), 然后以 1 C/min 上升至 28 C, 并保持 1 分钟 样品瓶 : LC/MS 认证样品瓶 ( 部件号 6751CV) MS 条件 MS 系统 : Quattro micro GC 质谱仪在正电子碰撞模式 (EI+) 下运行 使用选择离子监测 (SIR), 在 7 ev 电子能量下采集数据 所监测离子由以下构成, 首先列出的是主要定量 离子 化合物 SIR(m/z) 保留时间 (min) 乐果 87., 93., 甲基毒死蜱 286.1, 288.1, 马拉硫磷 173.2, 127.1, 脱叶磷 169.1, 22.2, 蝇毒磷 362.3, 226.2, 化合物 有机磷农药 加标浓度 (ppb) 回收率 RSD 乐果 甲基毒死蜱 马拉硫磷 脱叶磷 蝇毒磷 乐果 甲基毒死蜱 马拉硫磷 脱叶磷 蝇毒磷 表 1. 使用 QuEChERS DisQuE 试剂袋得到的碎牛肉中有机磷农药的 回收率 (n=5) 订购信息 描述 部件号 CEN QuEChERS DisQuE 试剂袋 DisQuE 2 ml d-spe 净化离心管 (15 mg MgSO 4, 5 mg PSA, 5 mg C 18 ) DisQuE 5 ml 离心管 LCMS 认证样品瓶 6751CV 参考资料 : 沃特世应用资料 EN 213 年沃特世公司 Waters 是沃特世公司的注册商标 DisQuE 和 Quattro micro GC 是沃特世公司的商标 其他所有商标均归各自的拥有者所有 [ 64 ]

65 食品测试和质量控制(QC) 本章中的方法可用于简单QC测试或检测掺伪产品 这些方法涉及 样品提取 样品制备 色谱条件 [ 65 ]

66 婴幼儿乳粉中的核苷酸分析 样品制备 取乳粉 5. g, 加水复溶, 调节 ph 至 4.6, 振荡 5 min, 完全溶解后用水定容至 25 ml, 过滤后取清液 5 ml, 过 Oasis HLB SPE 柱利用通过净化方式 色谱条件 LC 系统 : 检测器 : 波长 : 色谱柱 : 色谱柱温度 : 流动相 A: ACQUITY UPLC H-Class System PDA 254 nm ACQUITY UPLC BEH Amide, 1.7μm, 2.1 x 1 mm 5 C ACN 流动相 B: 1 mm NaH 2 PO 4 流动相 C:.1 H 3 PO 4 水溶液 采用 Auto Blend TM 功能, 梯度表如下 时间 (min) 流速 (ml/min) A B C 梯度曲线 初值 初值 实验结果及色谱图 实际样品 6 针连续进样分析图谱 小结 本实验采用沃特世 ACQUITY UPLC H-Class 系统,BEH Amide 1.7 μm, 2.1 x 1 mm 色谱柱, 对婴幼儿奶粉中的 5 种核苷酸进行分析方法的开发, 实验结果表明 : 1. 在沃特世 ACQUITY UPLC H-Class 系统上, 采用 BEH Amide 1.7 μm, 2.1 x 1 mm 色谱柱能迅速分离奶粉中 5 种核苷酸标准品, 且 5 种化合物的分离度均在 3. 以上 ; 对于实际的奶粉样品,5 种核苷酸样品及杂质之间的分离度均在 1.6 以上 2. 该分析方法重现性好 其中, 奶粉样品 6 次连续进样分析结果中,5 种核苷酸保留时间 RSD 值均小于 沃特世 ACQUITY UPLC H-Class 系统, 具有四元溶剂的 Auto Blend Plus TM 功能, 因此, 在该系统上进行方法开发非常灵活 方便, 节约了溶剂配置的大量时间, 大大提高了实验的效率, 从而大幅度的降低了实验的溶剂消耗, 降低了实验成本 5 种核苷酸混合标准品的 6 针连续进样分析结果 订购信息描述部件号 Oasis HLB 6 cc/15 mg XBridge Amide 3.5 μm, 4.6 x 15 mm UPLC BEH Amide 1.7 μm, 2.1 x 1 mm [ 66 ]

67 牛磺酸牛乳和婴幼儿配方食品中氨基酸分析 简介 沃特世 UPLC 氨基酸分析方案将成熟的 AccQ Tag TM 柱前衍生技术与 ACQUITY UPLC 系统合二为一, 可以确保对氨基酸的精准测定 该方法可作为测定婴儿配方奶粉和乳制品中牛磺酸 ( 及其他氨基酸 ) 的一种简单而可靠的解决方案 样品制备 结果与谱图 H N O N O N O AQC Reagent O O OH 1 o Amino Acid; NH 2 t1/2 < < 1 s O OH NH 2 o Amino Aci d; 1/2 < <<1 < 1s s O OH H N NH O N De rivatized Amino Acids 牛乳和婴儿配方奶粉分别按 1:25 和 1:1 用.1 M 盐酸稀释 吸取 1 ml 稀释后的样品, 转移到装有 9 ml6n 浓盐酸的水解试管中, 在 15 C 条件下水解 24 小时用移液管准确吸取 1 ml 水解后的样品, 转移到装有 6 ml 硼酸盐缓冲液和 1 ml.1m 氢氧化钠溶液的样品瓶中, 混合均匀 加入 2 ml AccQ Tag 试剂, 盖上瓶盖, 混合均匀在 55 C 下加热 1 分钟, 取 1 ml 反应液进样 色谱条件 仪器 : 沃特世 ACQUITY UPLC 系统 色谱柱 : AccQ Tag Ultra, 2.1 x 1 mm, 1.7 µm 柱温 : 55 C 样品温度 : 2 C 流速 : 7 µl/min 流动相 A: AccQ Tag Ultra 浓缩洗脱液 A 的 1:2 倍稀释液 流动相 B: AccQ Tag Ultra 洗脱液 B 进样针冲洗 : 弱洗 -95:5 水 : 乙腈 强洗 -5:95 水 : 乙腈 梯度洗脱 : AccQ Tag Ultra 水解产物 ( 参见 UPLC 氨基酸分析解 决方案指南 ) 总运行时间 : 9.5 min 进样量 : 1 µl 检测 : 紫外检测 (TUV 或 PDA)26 nm 荧光检测 : 激发波长 266 nm 发射波长 473 nm N - Hydroxy Succini mide + CO2 H 2 O t1/2 ~ 15s + N 6- Aminoquinolone ( AMQ) NH 2 AMQ M Q N N H N O H N H N O N H O bis-aminoquinolineurea (deriva tization peak) 图 1. 在 AccQ Tag 衍生过程中,AQC 试剂可在以水为主的环境中与未质子 化的一级氨基酸和二级氨基酸快速反应, 进而形成易被紫外检出的稳定衍生物 多余的试剂可在较慢的时标下与水反应形成易与所分析氨基酸分离开来的副产物 Q M QA M A 3 H a 3N y H ac N y C s i sh i H u a ut a T g r y r e l ga y rs G r l e A G S 2 1 pmol 图 pmol pmol 标准品的色谱图 AU.6 AU AU.6 AU.3.3. NH3 NH3 NH3 NH3 ~.4 µg ~.4 µg H is H is H is H is T a u T a u S er S er S er A rg r g G ly A rg r g G ly A r g G ly A s p A s p ~.15 µgg ~.15 µgg S er A r g G ly A s p A s p 2 O 2 O pse ts s t M pa e s M A G lu G lu G lu G lu u l ug l G r h rt h T T h r T h r a l aa l A A la A la o r op r P P ro P ro A a s B A A r i v t z a s A A B t i z y r L y y rt t l a i L y e a V a v s T tm lv N V i y e a N r sc M V e y D C e D D e riv D P e eak riv P eak D e riv D P e eak riv P eak L ys C ys L ys C ys T yr T yr M e t V al N V a M e t M e t V al N V a N V a N O e L u e ei e h L ul ep I e h L P M in u te s M in u te s 图 3. 水解后牛奶和婴儿配方奶粉中的氨基酸分离 对于牛磺酸分析, 不需要对样品进行水解 3 3 订购信息 描述 T h r T h r A la A la P ro P ro L ys C ys L ys C ys T yr T yr M e t V al V al N V a 部件号 UPLC 氨基酸分析的附加产品套装 Ile L e u P h e Ile Ile Ile L e u L e u L e u P h e P h e P h e UPLC UPLC [ 67 ]

68 UPLC 测定烟叶中的氨基酸含量 样品溶液的制备及衍生 将烟叶在烘箱中恒温 4 C 烘干至恒重, 粉碎, 过 8 目筛, 筛下物为实验用烟样粉末 准确称取烟样粉末 1. g 于干燥的洁净试管中, 用 8 的乙醇水溶液 1 ml 在室温下超声波提取.5 h, 过滤, 滤渣加入 1mL 相同体积分数的乙醇再提取一次, 滤液合并, 倒入 732 型阳离子交换柱中, 用 95 ml 4 M/ L 氨水淋洗, 淋洗液于 8 C 下浓缩至干, 再用 3 ml. 1 M / L 稀盐酸溶解, 溶液离心分离 2 min, 用. 45 μm 微孔滤膜过滤, 滤液中取 1 μl 按衍生标准法操作 进样量 1 μl 对照品储备液的制备 1 mm/ L 色氨酸标准液 : 称取色氨酸 2. 4 mg, 加超纯水溶解至 1 ml 含色氨酸的标定标准 : 取 1 支沃特世氨基酸水解液标品, 打开后 吸取 1 ml, 放在一支干净的 1. 5 x 15 cm 试管中, 加 2.5 ml 色氨酸标准 液 6.5 ml 超纯水, 旋涡混匀, 每支 Eppendorf 管分装 1mL 备用 浓度 见表 2 名称 名称 分子量 C(mM/ L) C(mg/mL) 1 天门冬氨酸 丝氨酸 谷氨酸 甘氨酸 组氨酸 精氨酸 苏氨酸 丙氨酸 脯氨酸 胱氨酸 酪氨酸 缬氨酸 蛋氨酸 赖氨酸 异亮氨酸 亮氨酸 苯丙氨酸 色氨酸 净的样品管底部 ; 移取 7 μl 硼酸缓冲液至样品管中, 短暂旋涡混匀 ; 移取 2 μl 衍生试剂至样品管中, 立即旋涡混匀数秒钟 ; 室温放置 1 min; 用封口膜封口,55 C 加热 5 min 色谱条件 色谱柱 : 紫外检测波长 : 柱温 : 沃特世 ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 1 mm, 1.7μm 248 nm 55 C 梯度洗脱条件见表 1 理论塔板数以谷氨酸计算不低于 5 时间 (min) 流速 (ml/min) 淋洗液 A()(V/V) 淋洗液 B()(V/V) 梯度洗脱曲线 表 2. 梯度洗脱 淋洗液 A: 取 AccQ Tag TM UItra Eluent A 5 ml 加入超纯水 95mL 淋洗液 B: 取 AccQ Tag UItra Eluent B 结果! 表 1. 氨基酸使用液浓度 衍生试剂制备 将烘箱预热至 55±1 C, 取一瓶衍生剂粉 2A, 轻轻敲动以确保打开前所有粉在瓶底 ; 移取 1 ml 稀释液 2B 至 2A 瓶中, 盖紧瓶盖, 旋涡混匀 1 s, 55 C 加热 5-1 min 使衍生剂粉溶解 ( 加热不得超过 1 min) 将溶解后的衍生试剂放入干燥器中, 可在室温保存 1 星期 图 1. 氨基酸对照品 (A) 和烟叶 (B)UPLC 色谱图! 衍生标准品 将烘箱预热至 55±1 C; 用微量进样器吸取 1 μl 标定标准至一支干 [ 68 ]

69 UPLC 测定烟叶中的氨基酸含量 烤烟 组氨酸 丝氨酸 精氨酸 甘氨酸 天冬氨酸 谷氨酸 苏氨酸 丙氨酸 脯氨酸 胱氨酸 赖氨酸 酪氨酸 甲硫氨酸 缬氨酸 异亮氨酸 亮氨酸 苯丙氨酸 色氨酸 总量 表 3. 烟叶中氨基酸的测定结果 氨基酸 线性方程 相关系数 表 4 氨基酸的检出限及线性范围 线性范围 (mg/ml) 检出限 (ng) 组氨酸 y=2.6 *1 6 x 丝氨酸 y=3.93*1 6 x 精氨酸 y=2.16*1 6 x 甘氨酸 y=5.41*1 6 x 天冬氨酸 y=3.4*1 6 x 谷氨酸 y=2.6*1 6 x 苏氨酸 y=3.49*1 6 x 丙氨酸 y=4.59*1 6 x 脯氨酸 y=3.33*1 6 x 胱氨酸 y=5.48*1 6 x 赖氨酸 y=4.56*1 6 x 酪氨酸 y=2.39*1 6 x 甲硫氨酸 y=2.8*1 6 x 缬氨酸 y=3.6*1 6 x 异亮氨酸 y=3.21*1 6 x 亮氨酸 y=3.12*1 6 x 苯丙氨酸 y=2.48*1 6 x 色氨酸 y=1.93*1 6 x 订购信息 描述 部件号 ACQUITY UPLC BEH C μm, 2.1 x1mm VanGuard Pre-column, ACQUITY UPLC BEH C x 5 mm, 1.7 μm, 3 pcs/pack AccQ. Tag Ultra 衍生试剂, 可进行 25 次分析 AccQ. Tag Ultra 洗脱液 A( 浓缩液 ),95 ml AccQ. Tag Ultra 洗脱液 B,95 ml 水解氨基酸标样,1 x 1 ml 安瓿管 全回收样品瓶,1 个样品瓶 / 包 或可单独订购 AccQ Tag Ultra ACQUITY UPLC 氨基酸分析方法包 ( 包括 AccQ Tag Ultra 试剂包 色谱柱 洗脱液 A 和 B 衍生管 氨基酸标准品 全回收样品瓶 ) 或 UPLC AAA 应用功能拓展套件 ( 配合标准 ACQUITY UPLC 系统用于氨基酸分析 包括包括 AccQ. Tag Ultra 试剂包 色谱柱 洗脱液 A 和 B 衍生管 氨基酸标准品 全回收样品瓶 应用手册和所需要的配件 ) WAT C [ 69 ]

70 ACQUITY UPLC-ELSD 测定奶粉和牛奶中八种糖的含量 样品制备 称取 2. g 奶粉样品或 5 ml 液态奶样品, 加入 2 ml( 对于液态奶添加 15 ml)1/1 的乙腈水溶液溶解, 手摇震荡混匀, 然后均质混匀 2 分钟, 室温下 8 r/min 离心 15 分钟, 取上清液过.2 µm 滤膜 ; 对于某些样品由于糖含量很高, 所以过滤后的样品可能需要用乙腈 / 水 =7/3 的溶液稀释一定倍数后, 进样检测 色谱条件 液相系统 : 沃特世 ACQUITY UPLC 配 ACQUITY ELSD 蒸发光检测器 色谱柱 : ACQUITY UPLC BEH Amide 2.1 x 1mm, 1.7 μm 柱温 : 35 C 分析时间 : 18 min 进样量 : 5 µl( 样品进样 2 µl) 流动相 : A: 水 B:.2 TEA 乙腈溶液 ; 梯度洗脱 弱洗溶剂 : 乙腈 / 水 =9/1, 8 µl 强洗溶剂 : 乙腈 / 水 =1/9, 5 µl 进样方式 : 不充满定量环 ( 使用针溢出 ) ELSD 条件 : 增益 : 5 数据率 : 1 pps 喷雾器模式 : 冷却 漂移管温度 : 55 C 气体压力 : 3 psi 实验室试验温度 : 2 C 实验室试验湿度 : 45 工作电源 : 22 V 稳定电源 梯度 : 时间 (min) 流量 /(ml/min) A B 曲线 初始 八种糖 UPLC 分离检测色谱图及数据 图 1. 8 种糖 UPLC 分离检测色谱图 图 1 是八种糖 5 ppm 混合标准品用 UPLC(ACQUITY UPLC BEH Amide 色谱柱 ) 分离,ELSD 检测的色谱图, 按照保留时间顺序分别是 :Fructose ( 果糖 ) Sorbose( 山梨糖 ) Glucose( 葡萄糖 ) Sucrose( 蔗糖 ) Maltose ( 麦芽糖 ) Lactose( 乳糖 ) Maltotriose( 麦芽三糖 ) Maltotetraose( 麦芽四糖 ); 包括 5 种单糖和 3 种多糖 有关数据见下表 名称 保留时间 ( 分钟 ) 面积 ( 微伏 * 秒 ) 面积 高度 ( 微伏 ) 峰类型 USP 分离度 Fructose 找到 58 Sorbose 找到 Glucose 找到 Sucrose 找到 Maltose 找到 Lactose 找到 Maltotriose 找到 Maltotetraose 找到 表 1. 8 种糖标准品分离分析数据 其中较难分离的 Fructose( 果糖 ) 和 Sorbose( 山梨糖 ) Maltose( 麦芽糖 ) 和 Lactose( 乳糖 ) 均分别达到 的分离度 s/n! 结果 标准配制八种糖标准分别称取 1 mg, 用 1/1 的乙腈水定容 1 ml, 然后用乙腈 / 水 =7/3 的溶液稀释配制各个浓度的标准品, 进行实验 订购信息描述部件号 Acquity BEH Amide, 1.7 µm, 2.1 x 1 mm 色谱柱 GHP.2 µm 滤膜 WAT97962 LCGC 认证样品瓶 18637C [ 7 ]

71 动物饲料水解产物中的氨基酸 简介 氨基酸分析一直在食品和饲料行业中被用于材料或工艺的验证和表征 氨基酸总量以及生长限制性氨基酸的比例是饲料营养价值的关键特征 样品 作为合作研究的一部分, 一家独立实验室对猪饲料 家禽饲料 全豆和大豆粉样品进行了酸解 样品以估计浓度为 1. mg/ml 的.1 M HCl 溶液形式提供, 并用氩气密封在安瓿瓶中 分析前将样品储存在 -8 C 下 采用的标准品为 NIST 2389 氨基酸的.1 mol/l HCl 参比溶液, 将其稀释为 5 1 和 25 pm/μl AU AU AU AU AMQ AMQ AMQ AMQ Poultry Diet NH3 His Swine Diet NH3 His Whole Soybean NH3 His Soybean Meal NH3 His Ser Ser Ser Ser Arg Arg Arg Arg Gly Gly Gly Gly Asp Asp Asp Asp Glu Glu Glu Glu Thr Thr Thr Thr Ala Ala Ala Ala Pro Pro Pro Pro Deriv Peak Deriv Peak Deriv Peak Deriv Peak Cys Cys Cys Cys Lys Lys Lys Lys Tyr Tyr Tyr Tyr Met Met Met Met Val Val Val Val Ile Ile Ile Ile Leu Leu Leu Leu Phe Phe Phe Phe min 样品衍生化 在衍生化处理前, 先用.1 M HCl 以 1:16 稀释样品 经过改良后, 标准品衍生化方案包括使用.1 M NaOH 中和过量的酸 预柱衍生化处理和分析条件详见沃特世 UPLC 氨基酸分析解决方案系统指南 ( 部件号 ) 这些衍生化条件经过改良后涉及额外的碱 1. 6 μl AccQ Tag Ultra 硼酸盐缓冲液 2. 1 μl 稀释过的样品 3. 1 μl.1 N NaOH 4. 2 μl 配置好的 AccQ Tag Ultra 衍生试剂 色谱条件 系统 : ACQUITY UPLC 色谱柱 : AccQ Tag Ultra, 1.7 µm, 2.1 x 1 mm 柱温 : 55 C 样品温度 : 2 C 流速 : 7 µl/min 流动相 A: AccQ Tag Ultra 洗脱液 A 按 1:2 稀释于 MilliQ 水中 ( 每天新鲜制备 ) 流动相 B: AccQ Tag Ultra 洗脱液 B 梯度 : AccQ Tag Ultra 水解法 ( 在 UPLC 氨基酸分析解决方 案中提供 ) 总运行时间 : 9.5 min 进样体积 : 1 µl, 针溢出的部分定量环进样 检测 : UV(TUV),26 nm 动物饲料水解产物,6 ng 柱上进样量, 采用 UPLC 氨基酸分析解决方案 氨基酸家禽饲料猪饲料全豆大豆粉平均值标准偏差 His Ser Arg Gly Asp 3.99 t Glu Thr Ala Pro Cys Lys Tyr Met Val Ile Leu Phe 来自一个分析日的不同样品类型的保留时间重新性 ( 分钟 ) 每个报告值代表了十五次进样的平均值 氨基酸 RSD 氨基酸 RSD 氨基酸 RSD His 1.3 Thr.26 Met.21 Ser.43 Ala.27 Val.22 Arg.6 Pro.3 Ile.23 Gly.39 Cys.18 Leu.24 Asp.24 Lys.23 Phe.23 Glu.23 Tyr.17 五天内水解标准品的保留时间 ( 分钟 ) 重现性 订购信息 描述 部件号 氨基酸分析试剂盒 AccQ Tag Ultra 色谱柱,1.7 µm,2.1 x 1 mm 氨基酸标准品, 水解产物,1 x 1 ml 安瓿瓶 LCMS 认证样品瓶 WAT CV 参考资料 : 沃特世应用资料 72284EN 211 年沃特世公司 Waters UPLC 和 ACQUITY UPLC 是沃特世公司的注册商标 AccQ Tag 是沃特世公司的商标 [ 71 ]

72 啤酒生产中的氨基酸 简介 游离氨基酸可作为营养物 代谢中间产物或废物存在于生物过程中, 可以用于鉴别植物的基因型和来源 通过类似的方式, 氨基酸还可以用来将某一特征与高价值食品中有价值的特性相关联 在生产流程中和生产流程之后对游离氨基酸进行监测, 可以鉴别和控制影响产品质量的生理机能 为了举例说明该应用, 我们跟踪了啤酒生产过程中的酵母发酵 通过对三种不同起始发酵大麦麦芽进行游离氨基分析, 展示了原材料的特点 然后让这些不同的麦芽分别完成发酵流程, 并在发酵的各个阶段观察游离氨基酸水平的变化 样品处理起始大麦麦芽 1. 二棱浅色麦芽 ; 六棱浅色麦芽 ; 二棱皮尔斯尼麦芽 2. 从麦芽的早期悬液中采集样品, 并在分析前储存于 -8 C 下 3. 将每份样品解冻后, 在 1611 RCF x g 下离心一分钟, 然后用.1 M HCl 按 1:1 稀释上清液 4. 衍生化体积 :7 µl 硼酸盐缓冲液,1 µl 稀释样品,2 µl AccQ Tag Ultra 试剂 酿造发酵 1. 样品 : 初始 24 小时 第 4 天和一级发酵结束 2. 在一级发酵期间以一定间隔从发酵罐采集样品, 分析前将样品储存于 -8 下 3. 将每份样品解冻后, 在 1611 RCF x g 下离心一分钟, 然后用.1 M HCl 按 1:1 稀释上清液 4. 衍生化体积 :7 µl 硼酸盐缓冲液,1 µl 稀释样品,2 µl AccQ Tag Ultra 试剂 市售淡色麦芽 1. 两种品牌的淡色麦芽分别取两个批次 oz. 瓶中采集样品, 并在分析前储存于 -8 C 下 3. 将每份样品解冻后, 在 1611 RCF x g 下离心一分钟, 然后用.1 M HCl 按 1:1 稀释上清液 4. 衍生化体积 :5 µl 硼酸盐缓冲液,1 µl 稀释样品,2 µl.1 M NaOH ( 用于中和过量的酸 ) 5. 2 µl AccQ Tag Ultra 试剂 样品衍生化 衍生化试剂在最佳 ph 值 8.5 下与伯胺和仲胺反应 在瓶盖盖紧的情况下, 批次衍生化样品可在室温下最多稳定保存一周 沃特世 UPLC 氨基酸分析解决方案系统指南 ( 部件号 ) 详细介绍了柱前衍生化和分析的条件 LC 条件 系统 : ACQUITY UPLC 色谱柱 : AccQ Tag Ultra, 1.7 µm, mm 柱温 : 6 C 样品温度 : 2 C 流速 : 7 µl/min 流动相 A: AccQ Tag Ultra 洗脱液 A 按 1:1 稀释于 Milli-Q 水中 流动相 B: AccQ Tag Ultra 洗脱液 B 弱洗针液 : 95:5 水 / 乙腈 强洗针液 : 5:95 水 / 乙腈 梯度 : AccQ Tag Ultra 细胞培养液法 ( 在 UPLC 氨基酸分析 解决方案中提供 ) 总运行时间 : 9.5 min 进样体积 : 1 µl, 针溢出的部分定量环进样 检测 : UV (TUV),26 nm AU Asn Ser min 图 1. 不同起始大麦麦芽之间的氨基酸差异 AU AU HyPro His Asn Tau Ser Gln Arg Gly EA Asp Glu Thr Ala GABA Gln Pro HyLys1 HyLys2 Arg AABA Orn Gly Deriv Peak 2-row Pale 6-row Malt Pale Malt 2-row Pilsener Malt Cys Lys Tyr Met Val NVa EA 2-row Pale Malt min Beginning 24 Hr Day 4 End Orn Deriv Peak Cys Lys Tyr min 图 2. (A) 采用 UPLC 氨基酸分析解决方案, 啤酒一级发酵过程中不同阶段的氨基酸水平 (B) 放大区域显示了发酵过程中呈时间依赖性的变化 Met Val A Ile B Asp Leu Phe Trp [ 72 ]

73 啤酒生产中的氨基酸 Pro Brand A Brand B AU NH3 HyPro His Asn Ser Gln Arg Gly EA Asp Glu Thr Ala GABA AABA Orn Deriv Peak Cys Lys Tyr Met Val Ile Leu Phe Trp min 图 3. 两种市售淡色麦芽的不同游离氨基酸特征 箭头指示品牌间的显著差异 第 1 批 第 2 批 氨基酸平均值标准偏差平均值标准偏差 His Asn Ser Arg Gly EA Asp Glu Thr Ala GABA Pro Orn Cys Tyr Met Val Ile Leu Phe Trp 表 1. 同品牌淡色麦芽的批次间差异性 这些值 ( 以 pmol/µl 样品表示 ) 包括两种衍生化产物的三次进样 订购信息 描述 部件号 氨基酸分析试剂盒 AccQ Tag Ultra 色谱柱, 1.7 µm, mm LCMS 认证样品瓶 WAT88122 参考资料 : 沃特世应用资料 EN 213 年沃特世公司 Waters ACQUITY UPLC 和 UPLC 是沃特世公司的注册商标 AccQ Tag 是沃特世公司的商标 其他 所有商标均归各自的拥有者所有 [ 73 ]

74 强化食品中的脂溶性维生素 简介 在本应用纪要中, 介绍了一种从强化食品中同时提取脂溶性维生素 (FSV) 的 SPE 方法 所提出的方法可应用于从早餐麦片 婴儿配方奶粉和巧克力中提取 FSV 为了分析脂溶性维生素化合物, 采用了一种仅需六分钟的快速 UPLC /MS/MS 法, 该方法使用正离子模式大气压化学电离 (APCI) SPE 方案 食品基质 +2 ml 乙醇, 漩涡混合 / 超声处理 在 6 rpm 下进行离心取 1 ml 上清液向其中加入.5 ml Milli-Q 水 SPE: 沃特世 Oasis HLB 小柱 色谱条件 系统 : ACQUITY UPLC 色谱柱 : ACQUITY UPLC BEH C 18, 1.7 µm, mm 柱温 : 4 C 样品温度 : 24 C 流速 :.6 ml/min 流动相 A: 9:1 乙腈 / 水 流动相 B: 甲醇 梯度 : 时间 (min) A B 总运行时间 : 6 min 进样体积 : 5 µl,plno 质谱条件 MS 系统 : Xevo TQ-S 电离模式 : APCI 正离子 电晕电流 : 15 µa 提取器 : 3. V 源温度 : 15 C 探头温度 : 55 C 脱溶剂气 : 1 L/h 采集 : RADAR [ 带有全扫描的多反应监测 (MRM)] 碰撞气 : 氩气, mbar 图 1. 提取方案图示 活化 : 1 ml 甲醇 平衡 : 1 ml Milli-Q 水 上样 :.5 ml 样品基质 清洗 : 1.5 ml 5 甲醇 洗脱 1: 1 ml 1:1 IPA:ACN 洗脱 2: 1 ml 2 乙酸乙酯的 ACN 溶液 图 2. 婴儿配方奶粉中 FSV 的采集所得 MRM(A) 和婴儿配方奶粉提取物的全扫描数据 (B) [ 74 ]

75 强化食品中的脂溶性维生素 维生素 加标浓度 (ng/ml) 早餐麦片 日内差异 (n=6) 平均回收率 ± RSD 日间差异 (n=3) 平均回收率 ± RSD A- 棕榈酸酯 ± ± 5.1 D ± ± 5.1 D ± ± 9.9 E ± ± 4.1 E- 乙酸酯 ± ± 7. K ± ±.6 K ± ± 3.6 表 1. 早餐麦片中的 FSV 加标回收率 () 日内差异 (n=6) 日间差异 (n=3) 婴儿配方奶粉 日内差异 (n=6) 平均回收率 ± RSD 日间差异 (n=3) 平均回收率 ± RSD A- 棕榈酸酯 ± ± 4.1 D ± ± 5.2 D ± ± 5. E ± ± 6.8 E- 乙酸酯 ± ± 7.4 K ± ± 1. K ± ± 8. 表 2. 婴儿配方奶粉中的 FSV 加标回收率 () 维生素 加标浓度 (ng/ml) 巧克力 日内差异 (n=6) 平均回收率 ± RSD 日间差异 (n=3) 平均回收率 ± RSD A- 棕榈酸酯 ± ± 5.8 D ± ± 8.1 D ± ± 2.5 E ± ± 8. E- 乙酸酯 ± ± 8.8 K ± ± 8.1 K ± ± 1.3 表 3. 巧克力中的 FSV 加标回收率 () 订购信息 描述 部件号 ACQUITY UPLC BEH C 18, 1.7 µm, mm Oasis HLB, 3 cc/6 mg 小柱 LCMS 认证样品瓶 WAT88122 参考资料 : 沃特世应用资料 EN 213 年沃特世公司 Waters ACQUITY UPLC Xevo UPLC 和 Oasis 是沃特世公司的注册商标 其他所有商标均归各 自的拥有者所有 [ 75 ]

76 人参根粉提取物中的人参皂苷 RB1 简介 本应用简报介绍了针对人参根中人参皂苷 Rb1 的简单提取方案和 LC/ UV 条件 人参皂苷是人参根中的主要研究目标 样品提取步骤 1. 称量 2 mg 人参根粉, 置于提取容器中 2. 加入 1 ml 8 甲醇, 超声处理 5 分钟 3. 在 1, rpm 下离心 5 分钟 4. 收集上清液 5. 再重复步骤 2-4 两次 6. 合并提取液, 混合均匀 7. 用 13 mm 尼龙.2 µm 过滤器进行过滤, 以用于进样 色谱条件 系统 : 配有 2998 PDA 的 Alliance 色谱柱 : XBridge Amide, 3.5 µm, 4.6 x 15 mm 流动相 : 8:2 乙腈 / 水 等度流速 : 1.4 ml/min 进样体积 : 11.5 μl 柱温 : 6 C 样品温度 : 1 C 洗针液 : 95:5 乙腈 / 水 密封清洗液 : 1:9 乙腈 / 水 UV 波长 : 23 nm 采样速率 : 2 Hz 过滤时间常数 :.1 s 结果 AU 结构 Ginsenoside Rb1 Ginseng root powder extract Tailing factor =.95 USP plate count = min β 人参皂苷 Rb1 订购信息描述部件号 XBridge Amide 色谱柱, 3.5 µm, mm Acrodisc LC 13 mm,.45 µm, 1/ 包 WAT LCMS 认证玻璃螺纹颈口样品瓶 6751CV 211 年沃特世公司 Waters XBridge 和 Alliance 是沃特世公司的商标 其他所有商标均归各自的拥有者所有 [ 76 ]

77 掺假菠萝汁中的橙皮甙 简介 食品和饮料掺假是一个非常严重的问题, 它涉及多种不同的食用产品 本研究使用超高效液相色谱 (UPLC ) 分析了菠萝汁样品, 该分析方法可实现高分辨率分离 光电二极管阵列 (PDA) 检测和精确质量数 MS 和 MS/MS 通过多变量分析 (MVA) 和数据库检索对数据进行解析, 以便发现真正的菠萝汁与掺假菠萝汁之间的关键差异 结果 AU 5.e S12 Authentic min 前处理 在分析前, 使用配有 PDA 检测器的沃特世 ACQUITY UPLC 系统, 并与 Xevo G2 四极杆飞行时间质谱仪 (QTof MS) 联用, 将所有菠萝样品离心 过滤和稀释 色谱条件 系统 : ACQUITY UPLC 色谱柱 : ACQUITY UPLC HSS T3, 1.8 μm, mm 柱温 : 45 C 进样体积 : 3 μl 流速 :.4 ml/min 流动相 A: 1 mm 醋酸铵水溶液 流动相 B: 乙腈 梯度 : 时间 A B (min) UV 条件 UV 系统 : ACQUITY PDA 检测器 范围 : 21-5 nm 采样速率 : 2 点 / 秒 AU AU e-2. 5.e min min S11 S1 S : TOF MS ES Da 8.9e min : TOF MS ES Da 8.9e min min S11 Adulterated S1 Adulterated 三种菠萝汁的 UV 对比 ( 提取波长 -283 nm):s1 S11 和 S12( 正品 ) 1: TOF MS ES Da 8.9e3 S1 S11 和 S12 中 m/z ( 橙皮苷 ) 的提取离子色谱图 (XIC) 质谱条件 MS 系统 : 电离模式 : Xevo G2 QTof MS 电喷雾负离子 (ESI-) 订购信息描述部件号 ACQUITY UPLC HSS T3, 1.8 µm, mm 参考资料 : 沃特世应用资料 EN 212 年沃特世公司 Waters ACQUITY UPLC ACQUITY UPLC 和 Xevo 是沃特世公司的注册商标 [ 77 ]

78 软饮料的快速分析 简介 软饮料市场是一项重要的全球业务, 为几家主要的制造商带来了可 结果 观的利润 要确保产品一致性 满足质量控制要求, 对添加剂的准确定量至关重要 常用的六种添加剂包括作为防腐剂的苯甲酸钠和山梨酸钾 ; 乙酰磺胺酸钾 ; 作为甜味剂的阿斯巴甜和糖精 ( 减肥饮料 ); 以及咖啡因 在各种饮料中, 可能仅含有部分上述化合物, 也可能全部.3 AU mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l 包含, 具体取决于特定饮料的配方 5 6 LC 条件 系统 : ACQUITY UPLC H-Class 运行时间 : 7. min 色谱柱 : ACQUITY UPLC BEH Phenyl, 1.7 μm, mm 柱温 : 35 C 流动相 : 沃特世饮料流动相 ( 包含在试剂盒内 ) 流速 :.5 ml/min 进样体积 : 1 μl 检测条件 : UV 214 nm min 标准品的色谱图 4 分析物 保留时间 (min) RSD RT 理论量 测定量 乙酰磺胺酸钾 糖精钠 苯甲酸钠 山梨酸钾 咖啡因 阿斯巴甜 QC 标准品七次进样的重现性数据 RSD 含量 偏差 订购信息 描述 部件号 ACQUITY UPLC BEH Phenyl, 1.7 µm, mm 沃特世饮料分析试剂盒 参考资料 : 沃特世应用资料 72416EN 21 年沃特世公司 Waters 和 ACQUITY UPLC 是沃特世公司的注册商标 WAT2512 [ 78 ]

79 食品和膳食补充剂中的大豆异黄酮 样品制备 标准溶液 使用黄豆苷(25 ppm) 黄豆黄苷(25 ppm) 染料木苷(15 ppm) H 黄豆苷原(25 ppm) 黄豆黄素(25 ppm)和染料木素(15 ppm) 用1:9乙 腈/水稀释剂制备 备选标准参比物质来自美国国家标准技术研究所 ೯ Ⴄ 称量每份样品 放入12 ml离心管中(表1) 在每根离心管中 加入4 ml 8:2甲醇/水 然后超声处理1小时 在3 rpm下离心2分钟 从每根离 ೯ ᛟ H 心管中取2 ml上清液 并用.45 μm GHP注射式过滤器过滤 再进行分析 每根离心管中剩余的样品用15 μl 2N氢氧化钠水解 混合1分钟后 用 લ ᛟ daidzin લ ᛟᏇ 5 μl冰醋酸中和溶液 在3 rpm下再次将样品离心5分钟 将收集到的 上清液在分析前用.45 μm GHP注射式过滤器过滤 H O 样品 重量 大豆粉 (csrm) 14.2 mg 大豆片 (csrm) mg 大豆蛋白分离物 (csrm) mg 大豆浓缩蛋白 (csrm) mg 大豆蛋白婴儿配方奶粉 (市售) mg O glycitin લ લᛟ લ લႤ ፊલᄲ ᛟಢ 图1. 三种主要大豆异黄酮(染料木素 黄豆苷原 黄豆黄素)及其相应的苷 类(染料木苷 黄豆苷 黄豆黄苷)的结构 表1. 用于分析的样品 HPLC 1 2 色谱条件 系统 配有PDA检测器的ACQUITY SQD 色谱柱 ACQUITY UPLC HSS Cyano, 1.8 μm, mm 流动相A.1甲酸水溶液 流动相B.1甲酸的乙腈溶液 柱温 3 C 梯度 流动相B在1保持.36 min 在3.6 min内从1 1 检测条件 UV 26 nm 进样体积 3 μl 强洗针液 5:5乙腈/水 弱洗针液 1:9乙腈/水 છ ᇕ(ppm) 1.લ ᛟ(25) 2.લ લᛟ(25) 3. ೯ ᛟ(15) 4.લ ᛟᏇ(25) 5.લ લႤ(25) 6. ೯ Ⴄ(15) min 2.5 µm min UPLC 1.8 µm 4.2 min 1. 间以1重新平衡系统1.8 min.58 ml/min 5 5 µm 增加至3 在3下保持.36 min 每次进样之 流速 4 3 图2. Cyano色谱柱上大豆异黄酮标准品的HPLC和UPLC分离(UV) XSelect HSS Cyano 5 µm mm(上) XSelect HSS Cyano XP 2.5 µm 4.6 x 75 mm(中) ACQUITY UPLC HSS Cyano 1.8 µm 2.1 x 5 mm(下) 采用ACQUITY UPLC方法转换计算器缩放每种方法的梯度 流速和进样体积 流速分别 为1. ml/min 2. ml/min和.58 ml/min છ ᇕ 1.લ ᛟ 2.લ લᛟ 3. ೯ ᛟ 4. औΊ લ ᛟ 这些UPLC条件是使用ACQUITY UPLC方法转换计算器直接从5 μm HPLC方 法放大而来 对于5 μm和2.5 μm 可使用该计算器将这些条件缩放回 HPLC条件 9.લ ᛟᏇ 1.લ લႤ 11.ጰΊ ೯ ᛟ 12. ೯ Ⴄ 5. औΊ લ લᛟ 6.ጰΊ લ ᛟ 7.ጰΊ લ લᛟ 8. औΊ ೯ ᛟ ࡍ ࡍ ຢ! AU AU 3.4 质谱条件.2 电离模式 ESI+ 采集范围 单离子记录(SIR) 锥孔电压. 锥孔气 L/h 源温度 1 C 脱溶剂气温度 35 C ᄋན min min ࡍ เჁ!ڹ ၺஊ 1 5 V 6 L/h 11 ၺஊ ࡍ ڹ ಭᇕ! 3.19 kv 脱溶剂气 67.4 AU 沃特世 SQD AU MS系统 5 2 ᄋན 毛细管电压 ᄋན ᄋན ၺஊ min ၺஊ min 图3. 提取后(上方色谱图)和水解后(下方色谱图)的备选标准参比物质 (csrm)的uplc分析 [ 79 ]

80 食品和膳食补充剂中的大豆异黄酮 1 csrm m/z (min) m/z a b c d e UV (26 nm) MS (TIC) m/z ( ) m/z ( ) m/z ( ) min min 图 4. 使用单离子记录 (SIR), 经 ESI+ LC/MS 确认大豆粉 csrm 的峰 图 5. 市售大豆蛋白婴儿配方奶粉 ( 水解后 ) 中异黄酮的 UPLC 分析 ;a) UV [26 nm],b) MS 总离子色谱图 [TIC],c) 提取离子色谱图,m/z [ 黄豆黄苷和黄豆黄素 ],d) 提取离子色谱图,m/z [ 黄豆苷和黄豆苷原 ],e) 提取离子色谱图,m/z [ 染料木苷和染料木素 ] 订购信息 描述 部件号 ACQUITY UPLC HSS Cyano, 1.8 μm, mm XSelect HSS Cyano XP 色谱柱, 2.5 μm, mm 参考资料 : 沃特世应用资料 EN 213 年沃特世公司 Waters ACQUITY UPLC UPLC 和 XSelect 是沃特世公司的注册商标 其他所有商标均归各自 的拥有者所有 [ 8 ]

81 婴儿配方奶粉中的维生素 A 和 E 简介 在本研究中, 证实了利用 UltraPerformance Convergence Chromatography 结果 (UPC 2 ) 同时测定婴儿配方奶粉中维生素 A 和 E 的可行性 nm nm 前处理 nm nm 通过液液萃取从婴儿配方奶粉 (IF) 样品中提取维生素 A( 视黄醇乙酸 酯和视黄醇棕榈酸酯 ) 和维生素 E(α- 生育酚乙酸酯和 α- 生育酚 ) nm 293 nm 色谱条件 系统 : ACQUITY UPC 2 色谱柱 : ACQUITY UPC 2 HSS C 18, SB, 1.8 µm, 3. 1 mm 流动相 A: CO 2 流动相 B: 甲醇 A 配有 PDA 检测器的 UPC 2 进行分析所得的维生素 A 和 E 的典型色谱图 (A) 标准品 ;(B) 婴儿配方奶粉样品 色谱峰 :1. 顺式 - 视黄醇乙酸酯,2. 全反式 - 视黄醇乙酸酯,3. 顺式 - 视黄醇棕榈酸酯,4. 全反式 - 视黄醇棕榈酸酯, 5.α- 生育酚乙酸酯和 6.α- 生育酚 B 化合物 范围 (μg/ml)* R 2 线性方程 b LOQ (μg/ml)* 视黄醇乙酸酯.4 to Y=9186x 视黄醇棕榈酸酯 α- 生育酚乙酸酯 α- 生育酚.2 to Y=4212x to Y=199x to Y=315.7x 化合物 重复性 (n=6) 回收率 () (n=3) 平均值 ± SD(μg/g) a RSD() 平均值 ± SD 视黄醇乙酸酯 5.34 ± ±.8 视黄醇棕榈酸酯 13.6 ± α- 生育酚乙酸酯 13. ± ± 1.4 α- 生育酚 82.3 ± 加标婴儿配方奶粉样品所得的重复性和回收率结果 a 该值为每克婴儿配方奶粉中维生素的 µg 数 订购信息 描述 部件号 ACQUITY UPC 2 HSS C 18, SB, 1.8 µm, 3. 1 mm 参考资料 : 沃特世技术简报 EN 213 年沃特世公司 Waters 是沃特世公司的注册商标 ACQUITY UPC 2 是沃特世公司的商标 [ 81 ]

82 水溶性维生素 咖啡因和食用色素 简介 配有紫外检测器的沃特世 ACQUITY 超高效液相色谱 (UPLC ) 提供了一种快速 简单的方法, 可利用水 / 甲醇梯度, 在 7.5 分钟的检测中, 同时分析 1 种水溶性微生素化合物, 以及咖啡因和六种常见的食用色素 色谱条件 系统 : ACQUITY UPLC 色谱柱 : ACQUITY UPLC HSS T3, 1.8 μm, mm 柱温 : 3 C 样品温度 : 4 C 流速 :.45 ml/min 流动相 A: 水 (.1 甲酸 ) 流动相 B: 甲醇 (.1 甲酸 ) 弱洗针液 : 3:1:1 水 / 甲醇 / 乙腈 (1 µl) 强洗针液 : 5:1:1 乙腈 / 异丙醇 / 水 (5 µl) 梯度运行时间 : 7.5 min 进样体积 : 2 μl, 满环进样 (min) A PDA 条件 检测器 : ACQUITY PDA 波长 : 63 nm 27 nm 和 25 nm 分辨率 : 1.2 nm 滤波器响应 :.1 s 采样速率 : 2 点 / 秒 曝光时间 : 自动 结果.7 AU * min * { 浓度大约为 5 ng / µ L 的溶剂标准品的色谱图 除化合物 6 12 和 16 之外, 全部在 27 nm 下提取 * 在 25 nm 下提取 16 在 63 nm 下提取 化合物编号 化合物名称 保留时间 (min) 15A 15 15B 16^ 17 紫外提取波长 (nm) 1 硫胺素 (B1) 抗坏血酸 (C) 烟酸 (B3-OH) 烟酸 (B3-OH) 吡哆醇 (B6) 泛酸钙 (B5) FD&C 黄色 5 号 (E12) 氰钴胺 (B12) 叶酸 (B9) 咖啡因 FD&C 黄色 6 号 (E11) 生物素 (B7) 核黄素 (B2) FD&C 红色 4 号 (E129) FD&C 绿色 3 号 (E143) FD&C 蓝色 1 号 (E133) FD&C 蓝色 1 号 (E133) 图 1. 色谱图中化合物的鉴定, 以及保留时间和紫外提取波长信息 ( 水溶性维生素化合物 食用色素等 ) 订购信息 描述 部件号 ACQUITY UPLC HSS T3 色谱柱, 1.8 µm, mm 参考资料 : 沃特世应用资料 EN 213 年沃特世公司 Waters ACQUITY UPLC 和 ACQUITY UPLC 是沃特世公司的注册商标 [ 82 ]

83 动物性食品中糖皮质激素类兴奋剂的测定 样品制备 1. 称取 5 g 的处理均匀的猪肉样品, 依次加入 1 g 无水硫酸钠,2 ml 乙酸乙酯, 混合均匀后均质 1 min, 振荡提取 1min, 在 1 rpm 下离心 5 min 2. 上清液转移至浓缩瓶中, 再向残渣中加入 1 ml 乙酸乙酯重复上述操作一次, 合并两次提取液, 在 4 C 下旋转蒸发至干 3. 将浓缩后的样品用 5 ml 3 甲醇水溶液溶解 质谱条件 质谱系统 : 沃特世 ACQUITY TQD 检测器电离模式 : ESI - MassLynx 4.1 软件用于数据采集,TargetLynx 应用管理软件用于数据处理 调节 ACQUITY TQD 使得母离子和子离子在半峰宽的分辨率为.7 Da 以内 本实验的多反应监测 (MRM) 驻留时间 锥孔电压和碰撞能量列表参见表 1 标注下划线的离子对用于定量分析 色谱条件 : 固相萃取过程 (Oasis HLB 6 cc/5 mg) 活化 / 平衡 A.3 ml 甲醇 B.6 ml 水 上样 所有提取液 清洗 A.5 ml 水 B.5 ml 甲醇 / 水 (1/1, v/v) 抽干小柱 3 分钟 洗脱 1 ml 乙腈 / 甲醇 (1/1, v/v) 洗脱液在 4 C 氮气流下吹干, 用乙腈 / 水 (2:8) 溶解定容至 1 ml, 过.2 μm 滤膜后上机分析测定 仪器 : 沃特世 ACQUITY UPLC 系统 色谱柱 : ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 5 mm, 1.7 μm 柱温 : 3 C 流速 :.5 ml/min 流动相 A: 水 流动相 B: 乙腈 梯度 : 时间 ( 分钟 ) A B 进样量 : 1 μl 泼尼松 泼尼松龙氢化可的松 可的松 甲基泼尼松倍他米松地塞米松倍氯米松氟氢可的松 MRM 变化区间 43.2> > > > > > > > > > > > > > > > > >349.2 表 1. ACQUITY TQD MRM 参数 保留时间 (min) 典型离子比值 驻留时间 (s) 锥孔电压 (V) 碰撞能量 (ev ) [ 83 ]

84 动物性食品中糖皮质激素类兴奋剂的测定 结果 化合物 线性方程 相关系数 相对标准偏差 RSD 回收率 泼尼松 Y= x 泼尼松龙 Y= x 氢化可的松 Y= x 可的松 Y= x 甲基泼尼松 Y= x 倍他米松 Y= x 地塞米松 Y= x 氟氢可的松 Y= x 表 2. 糖皮质类兴奋剂测定方法线性方程 相关系数 相对标准偏差和回收率 糖皮质激素素类混合标准品 MRM 色谱图 9 种糖皮质类激素混合标准品在 1 ng/ml-1 ng/ml 浓度范围内进样分析, 得到线性方程和相关系数 采用空白样品添加 1 μg/kg 水平下, 平行 6 次, 计算添加回收率及 RSD, 结果如表 2 订购信息 描述 部件号 Oasis HLB, 6 cc/5 mg ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 5 mm, 1.7 µm VanGuard Pre-column, ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 5 mm, 1.7 µm, 3 pcs/pack LC/MS 认证样品瓶 CV [ 84 ]

85 液相色谱 - 质谱联用测定乳及乳制品中 29 种性激素 样品制备 样品制备 : 取 12.5 g 奶粉于 1 m L 容量瓶中, 加温水溶解, 冷却对室温, 定容 ; 液体乳液直接取样 样品提取 : 准确称取试样 5. g, 加入 125 μl 1 μg/l 内标混合溶液 先用 1 ml 乙腈沉淀蛋白, 再在超声波上提取 1 min, 以 15 r/min 离心, 取清液 ; 沉淀再用 1 ml 乙酸乙酯提取一次, 合并提取液, 静置待分层弃去水相, 将有机相蒸近干 ; 加入 2 ml 1(V/V, 下同 ) 乙腈溶解, 待净化 样品净化 : 用 6 ml 甲醇 6 ml 水活化 Oasis HLB 小柱, 上样, 待样液流干, 分别用 6 ml 的 2 乙酸 5 甲醇 (V/V) 2 氨水 5 甲醇和 1 甲醇淋洗小柱, 抽干 1 min; 用 6 ml5 氨化甲醇洗脱, 收集洗脱液,4 C 以氮气吹干 ; 用 1 ml 乙腈 - 水 (1:1,V/V) 溶解, 过.22 μm 滤膜, 进行 LC-MS/MS 分析 色谱条件 正离子 : ACQUITY UPLC HSS T3, 2.1 x 1 mm, 1.8 μm 负离子 : BEH Shield RP18, 2.1 x 1 mm, 1.7μm 柱温 : 4 C 样品温度 : 4 C 进样体积 : 5 μl 流动相 A:.1 甲酸 ( 正 ).8 氨水 ( 负 ) 流动相 B: 甲醇 ( 正 ) 乙腈 ( 负 ) 流速 :.3 ml/min 梯度洗脱 : 正 : -.8min, 4B.8-1. min 4-67B min, 67-7B min, 7-1B min, 1B min, 1-4B 总运行时间 1 min 负 : -1. min, 3B min, 3-5B min, 5B min, 5-1B min, min,1-3b 总运行时间 8 min 质谱条件 电喷雾电离源 (ESI+ 和 ESI-) 毛细管电压 : 3.5 kv(+) 3. kv(-) 锥孔电压 : 3 V 离子源温度 : 15 C 脱溶剂温度 : 5 C 脱溶剂气流量 : 9 L/h 碰撞池压力 :.3 kpa 离子能 1 和离子能 2 分别为.9 和.8 其它质谱参数参见表 1 序号 名称 保留时间 (min) 母离子 (m/z) 子离子 (m/z) 锥孔电压 (V) 碰撞能量 (ev ) 检出限 (µg/kg) 内标 ** 1 睾酮 *, , 甲睾酮 *, , 诺龙 *, , 雄烯二酮 *, , 表睾酮 *, , 表雄酮 *, , β- 羟基雄烷酮 *, , 去氢甲睾酮 *, , 美雄诺龙 *, , 美睾酮 *, , 甲基炔诺酮 *, , 孕酮 *, , a- 羟基孕酮 *, , a- 羟基孕酮 *, , 醋酸甲地孕酮 *, , 醋酸甲羟孕酮 *, , 孕二烯酮 *, , 醋酸氯地孕酮 *, , 表 1.* 为定量离子,** 为对应内标序号 [ 85 ]

86 液相色谱 - 质谱联用测定乳及乳制品中 29 种性激素 接表 1 序号 名称 保留时间 (min) 母离子 (m/z) 子离子 (m/z) 锥孔电压 (V) 碰撞能量 (ev ) 检出限 (µg/kg) 内标 ** 19 雌二醇 *, , 雌三醇 *, , 雌酮 *, , 己二烯雌酚 *, , 炔雌醇 *, , 己烷雌酚 *, , 己烯雌酚 *, , 苯甲酸雌二醇 *, , 玉米赤霉酮 *, , a- 玉米赤霉醇 *, , β- 玉米赤霉醇 *, , 睾酮 -d , 19* 34 2, 醋酸甲地孕酮 -d , , 己烯雌酚 -d , 245.1* 45 35, 雌二醇 -d *, , 4 34 雌三醇 -d *, , C- 玉米赤霉酮 *, , 26 表 1.* 为定量离子,** 为对应内标序号 结果 基质效应的评估用空白试样基质溶液和溶剂分别配制相同浓度的标准, 上机进样比较, 样品经本方法提取和净化后, 基质效应影响较小 ( 下图 ), 在 2-32 之间, 再用内标法计算, 检测结果更准确 参考资料 赖世云陶保华傅士姗何光华魏莹张京顺任一平 1 浙江省疾病预防控制中心, 杭州 贝因美研究院, 杭州 浙江大学, 杭州 3157 线性关系 : 以内标法计算, 各化合物在.1-5 μ/l 浓度范围内的线性方程, 线性关系 R2 均大于.995 回收率与重复性 : 采用奶粉及牛奶基质进行加标回收实验, 加标浓度为.1,1. 和 1 μg/kg, 平行 6 次, 各物质回收率均在 7-12 之间,RSD 在 -2 之间 订购信息 描述 部件号 Oasis HLB 6 cc/15 mg 6 μm 3/Box ACQUITY UPLC HSS T3, 2.1 x 1 mm,1.8 μm, VanGuard Pre-column, ACQUITY UPLC HSS T3, 2.1 x 5 mm, 1.8 μm, 3 pcs/pack ACQUITY UPLC BEH Shield RP x 1 mm,1.7 μm VanGuard Pre-column, ACQUITY UPLC BEH ShieldRP18, 2.1 x 5 mm, 1.7 μm, 3 pcs/pack LC/MS 认证样品瓶 6751CV [ 86 ]

87 水体中微囊藻毒素的分析 样品制备 吸取经.45 μm 滤膜过滤的水样 1 ml, 加入 1 μl( 浓度为 1 μg/l) 的脑腓肽内标液, 混匀 固相萃取过程 (Oasis HLB 3 cc/6 mg) 活化 / 平衡 A. 3 ml 甲醇 B. 6 ml 水 上样 1 ml 水样 (1 ml/min) 清洗 A. 3 ml 水 B. 5 ml 2 甲醇 减压抽干 1 min 分析物 脑腓肽 MCYST- LR MCYST- RR MCYST- LW MCYST- LF a 为选择的母离子, b 为定量离子 结果 MRM 分子量 [M+H] + [M+H] 2+ 离子 特征碎片离子 停留时间 (s) 碰撞能量 (ev ) a N.D 278. b a 135. b a a N.D b a N.D 色谱条件 洗脱 5 ml 甲醇 5 C 下氮气吹干用 5 甲醇水溶液定容至 1 ml 仪器 : 沃特世 Alliance 2695 系统 色谱柱 : Symmetry3 C 18, 4.6 x 75 mm, 3.5 μm 柱温 : 3 C 流动相 A:.2 甲酸的水溶液 流动相 B:.2 甲酸的甲醇溶液 流速 :.2 ml/min 进样体积 : 1 μl 梯度 : 时间 (min) A B 分析物 MCYST-RR MCYST-LR MCYST-LW MCYST-LF (n=6) 添加浓度 (μg/l) 平均回收率 () RSD() 质谱条件 仪器 : 沃特世 Quattro Ultima Pt TM 电离模式 : ESI + 锥孔电压 : 5 V 订购信息 描述 部件号 Oasis HLB, 3 cc/6 mg WAT94226 Symmetry3 C 18, 4.6 x 75 mm, 3.5 μm LC/MS 认证样品瓶 6751CV [ 87 ]

88 水和动物组织中辛烷磺酸 (PFOS) 的分析 样品制备 水样品 1. 在 1 ml 水样添加适当的化合物, 用甲酸调节到 ph 3 鸡肝样品 1. 取 1 g 磨粉碎样品, 加入 1 ml 1 mm 氢氧化钾的甲醇液, 均浆, 振摇提取 16 hrs 2. 样品 8 rpm 离心 1 min 3. 取 1 ml 上清液, 用水稀释至 2 ml, 用 2 甲酸调节 ph 值到 4 5 注意 : 1. 洗脱液收集在聚丙烯试管中, 用 2 ml 含 2 甲酸水溶液稀释再用水 定容至 5 ml 固相萃取过程 (Oasis WAX 3 cc/6 mg) 预处理好的样品 活化 / 平衡 A. 2 ml 甲醇 B. 2 ml 水 上样 1 ml 水样品或 2 ml 组织样品 清洗 A. 1 ml 2 甲酸 B. 2 ml 甲醇 洗脱 2 ml 含 1 氨水的甲醇 2. 或者, 洗脱液蒸干后用 1 ml 流动相再定容 必须用聚丙烯试管 色谱条件 仪器 : 沃特世 ACQUITY UPLC 系统 色谱柱 : 沃特世 ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 5 mm, 1.7 μm 柱温 : 4 C 流动相 A: 2 mm 醋酸铵水溶液 / 乙腈 (9:1) 流动相 B: 乙腈 流速 :.4 ml/min 梯度 : 8 min 内,B 相从 进样体积 : 1 μl( 满环进样 ) 质谱条件 仪器 : 沃特世 Quattro Premier XE 电离模式 : ESI 毛细管电压 : 3 kv 分析物 MRM 锥孔电压 (V) 碰撞能量 (ev ) PFBS 299 > PFOS 499 > C3 163 > C4 213 > C5 263 > C6 313 > C7 363 > C8 413 > C9 463 > C1 513 > C > C > : MRM of 1 Channels ES- 6.16e4 1: MRM of 2 Channels ES > > e3 分析物 : C3 = (perfluoropropanoic) C4 = (perfluorobutyric) C5 = (perfluoropentanoic) C6 = (perfluorohexanoic) C7 = (perfluoroheptanoic) C8 = (perfluorooctanoic) C9 = (perfluorononanoic) C1 = (perfluorodecanoic) C11 = (perfluoroundecanoic) C12 = (perfluorododecanoic) [ 88 ]

89 水和动物组织中辛烷磺酸 (PFOS) 的分析 结果 饮用水中 PFCs 的回收率 饮用水的回收率 () 添加浓度 (µg/l) PFBS PFOS C3 C4 C5 C6 C7 C8 C9 C1 C 鸡肝中 PFCs 的回收率 鸡肝中的回收率 () 添加浓度 (µg/kg) PFBS PFOS C3 C4 C5 C6 C7 C8 C9 C1 C11 2 LOQ 81 LOQ LOQ LOQ LOQ 订购信息 描述 部件号 Oasis WAX, 3 cc/6 mg ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 5 mm, 1.7 μm ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 5 mm, 1.7 μm, 3/pk µl Polypropylene Vial PFS Column Kit( 含 PFC isolator) [ 89 ]

90 环境水样中痕量雄激素和孕激素残留分析 固相萃取过程固相萃取柱 1 (Oasis HLB 6 cc/5 mg) 活化 / 平衡 A. 6 ml 乙酸乙酯 B. 6 ml 乙腈 C. 12 ml 水 上样.5 至 2 L 水样 ( 预先用玻璃纤维过滤除去悬浮颗粒杂质 ), 流速 5-1 ml/min 清洗 1 ml 水 梯度 : 时间 (min) A B 曲线 流速 :.3 ml/min 柱温 : 4 C 进样量 : 2 μl 通氮气将小柱吹干洗脱 15 ml 乙酸乙酯氮气流吹干, 用.2 ml 乙酸乙酯溶解, 加入 1.8 ml 正己烷用于第二步固相萃取固相萃取柱 2 (Sep-Pak Silica 3 cc/5 mg) 活化 / 平衡 A.4 ml 用水饱和的乙酸乙酯溶液 B.4 ml 正己烷 / 乙酸乙酯 9/1(v/v) 上样 2 ml 第一步固相萃取得到的溶液清洗 3 ml 正己烷 / 乙酸乙酯 9/1(v/v) 通氮气将小柱吹干洗脱 3 ml 正己烷 / 乙酸乙酯 38/62(v/v) 氮气流吹干, 用.5 ml 甲醇将残渣重新溶解, 经.2 μm 滤膜过滤后进行 LC/MS/MS 分析 质谱条件 仪器 : 电离源 : ESI + 毛细管电压 : 离子源温度 : 脱溶剂气温度 : 锥孔气流速 : 脱溶剂气流量 : 化合物名称 19- 去甲基 -4 雄烯二醇 (NAD) 孕三烯酮 (TBL) 诺龙 (NDL) 雄烯二酮 (ADD) 炔诺酮 (NTD) [ 13 C 2 ] Ethynyl- NTD MRM 沃特世 ACQUITY TQD 检测器 2.5 kv 12 C 45 C 5 L/h 9 L/h 锥孔电压 碰撞能量 (ev) 273 > > > > > > > > > > > 驻留时间 (s) 扫描时间 (min) 色谱条件 仪器 : 色谱柱 : 流动相 A: 流动相 B: 沃特世 ACQUITY UPLC 系统 ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1x1 mm, 1.7 μm.1 甲酸水溶液甲醇, 含.1 甲酸 17α- 羟基孕酮 (17- HPT) 睾酮 (TTR) [ 13 C 2 ] 睾酮 ([ 13 C 2 ] TTR) 331 > > > > > α- 羟基孕酮 (21- HPT) 331 > > 不同雄激素和孕激素的 MRM 参数 [ 9 ]

91 环境水样中痕量雄激素和孕激素残留分析 不同雄激素和孕激素的 MRM 参数 ( 续 ): 化合物名称 炔诺孕酮 (NGT) 炔诺孕酮 -d 6 (NGT-d 6 ) 17α,2β- dihydrox-4- progegnen- 3-one(DPO) 甲睾酮 (MTTR) 表雄酮 (EADR) 吡唑甲氢龙 (SZL) 6αmethylhydroxyprogesterone- (MHPT) 醋酸甲地孕酮 (MTA) 安宫黄体酮 (MPA) 孕酮 (PGT) 酮 -d9 (PGT-d9) 雄甾酮 (ADR) MRM 锥孔电压 碰撞能量 (ev) > > > > > > > > > > > > > > > > > > > > > > 驻留时间 (s) 扫描时间 (min) 订购信息 描述 部件号 Oasis HLB, 6 cc/5 mg Sep-Pak Silica, 3 cc/5 mg WAT281 ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 5 mm, 1.7 µm VanGuard Pre-column, ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 5 mm, 1.7 µm, 3 pcs/pack LC/MS 认证样品瓶 CV [ 91 ]

92 液质法测定饮用水中丙烯酰胺时应对水体基质干扰的方法 样品制备 Sep-Pak AC2-Plus 固相萃取柱先用 1 ml 甲醇和 1 ml 水活化, 然后将 1 ml 的玻璃纤维滤膜过滤后的水样过柱富集, 小柱吹干后用 1 ml 甲醇洗脱, 洗脱液氮吹至全干, 加 1 ml 超纯水定容, 过 PTFE 滤膜后进样 色谱条件 色谱柱 : 流动相 A: 流动相 B: 流速 : 梯度 : 进样量 : 柱温 : ACQUITY UPLC HSS T3 1.8 μm, 2.1 x 5 mm.1 甲酸水甲醇.25 ml/min 初始流动相为 98A 和 2B, 到 1.5 min 线性变化到 9A 和 1B,1.6 min 变回到起始梯度, 样品分析总时间为 2min 样品( 根据需要加内.75μg/L) 过膜后直接进样 2 μl 3 C 质谱条件 采用 ESI 正离子模式毛细管电压 : 3.5 kv 离子源温度 : 12 C 脱溶剂温度 : 45 C 脱溶剂气 : 6 L/h 锥孔气 : 2 L/h 碰撞气 :.17 ml/min 丙烯酰胺 (Acrylamide) 和丙烯酰胺 -d3(d3-acrylamide) 定量离子对分别为 71.9>54.9 和 74.9>57.9, 定性离子对均为 71.9>43.5, 锥孔电压和碰撞能分布都为 24 V 和 9 ev 结果 选择了常用的 HLB 柱 Sep-Pak C 18 柱, 以及 AC-2 柱,1 ml 加标.1 μg/ L 自来水样, 进行固相萃取及液质分析 发现 C 18 柱和 HLB 柱的回收率都低于 1, 而 AC2 柱为 85 不同浓度加标的回收率变化见图 1, 在低浓度时, 回收率接近 1, 随着浓度上升回收率下降, 当水样中丙烯酰胺浓度为 5 μg/l 时, 回收率只有 6, 说明 AC2 柱已经有一定的穿透 对于饮用水, 丙烯酰胺浓度很少有检出超过.5 μg/l,1 ml 水穿透的可能性很小.2 μg/l 的样品信噪比大约为 18( 图 1), 据此估算本方法的 LOD 约为 3 ng/l,loq 约为 1 ng/l 据此富集 1-2 倍也可以满足饮用水水质监管和研究的需要, 小体积富集可不用固相萃取装置, 而用注射器或 96 孔板, 可提高分析效率 图 1. 不同加标浓度水样回收率变化及.2 µg/l 样品 MRM 图 讨论 液相色谱 - 串联质谱法分析水样中的丙烯酰胺时, 基质干扰可能会影响测定 对于无干扰峰的样品, 优先使用同位素内标法进行基质效应校正 ; 无法获得同位素内标时, 也可以对水样进行一系列浓度加标测定, 用校正曲线来对样品准确定量, 但此方法工作量大 有基质干扰峰时, 应尽可能考虑用固相萃取等前处理方法进行富集 净化, 减少假阳性, 提高灵敏度 本研究为获得更准确的丙烯酰胺检测结果提供支持, 有利液质在饮用水水质检测中应用 订购信息 描述 Sep-Pak AC2 5/ 盒 部件号 JJAN2229 ACQUITY UPLC HSS T3 1.8 μm, 2.1 x 5 mm VanGuard Pre-column, ACQUITY UPLC HSS T3, 2.1 x 5 mm, 1.8 μm, 3 pcs/pack LC/MS 认证样品瓶 CV [ 92 ]

93 违禁添加物和生物毒素分析 食品 保健品或化妆品中违禁添加药物的现象屡禁不止,这些化合物的毒副作用严重影响了 人们的身体健康 加大对这些项目的监管力度 是监管部门及检测部门要面临的问题 本章内容中介绍了利用最新的仪器设备及色谱技术进行的热点应用 例如 邻苯二甲酸酯 三聚氰胺 黄曲霉毒素等 [ 93 ]

94 使用液相荧光色谱法快速检测多环芳烃 (PAHS), 确保海产品的安全 简介 1989 年瓦尔迪兹号 (Exxon Valdez) 漏油和 21 年 4 月墨西哥湾漏油事件, 已经引起人们对出自这些地区的海产食品质量的担忧 在石油中一组重要的化合物是多环芳烃 (PAHs), 美国环境保护局 (US EPA) 已经将这些化合物确定为重点污染物 通过使用 DisQuE 基质分散样品制备试剂盒 (QuEChERS) 进行简单萃取后, 配有荧光检测器的 ACQUITY UPLC H-Class 系统可用不到 4 分钟的时间完成一次 PAHs 分析 样品预处理 用食品加工机对鱼肉块 ( 比目鱼 ) 带壳虾以及带水的去壳牡蛎分别进行均质化处理 每个样品取 15 g 均质后的组织到离心管中, 按三种不同水平加入认证的 PAH 标准溶液 向鱼和虾样品中加入 5 ml 水来帮助混合, 牡蛎不需要另外加水 加标后的各种样品彻底混合, 并允许在室温下放一个小时 样品制备 向每个离心试管中加入 DisQuE 管的试剂, 即 6 g 硫化镁 +1.5 g 醋酸钠以及 15 ml 乙腈 用力摇动试管至少 1 分钟, 从而形成海产食品组织 缓冲盐和乙腈的一种乳浊液 按 3 rpm 的转数离心 5 min 后, 取一部分乙腈层转移至一个自动进样瓶中进行进样 梯度程序 : 时间 ( 分钟 ) 结果 流速 (ml/min) A B C 梯度线型 分散样品制备通常也称为 QuEChERS, 是用于食品中农药分析的一种行 之有效和快速的样品制备方法 就在最近, 该方法已被用来从食品基质中萃取其他污染物, 包括多环芳烃 利用 ACQUITY UPLC H-Class 系统, 在短短的 3.5 min 内就将被 US EPA 列为 重点污染物的 15 种荧光 PAHs 分离出来了 分析物的分离如图 2 所示, 箭 头所指向的是程序定时控制波长的变化 1 μg/g 和 1 μg/g 浓度的加标样品分别用 1:1 和 1:1 的乙腈稀释 用 6 点 线性校正曲线对样品进行定量 标准曲线是用乙腈稀释认证的标准品来制备 色谱条件 系统 : 带大容量流动池 (LVFC) 的 ACQUITY UPLC H-Class 色谱柱 : PAH 4.6 x 5 mm,3 μm 柱温 : 35 C 进样量 : 1 μl 采样率 : 2 点 / 秒 检测 : 采用程序定时控制荧光检测波长变化 软件 : Empower 2 流动相 A: Milli-Q 水 流动相 B: 甲醇, 费舍尔最优级 流动相 C: 乙腈, 费舍尔最优级 标准品 : PAH 认证标准,AccuStandard M 831 流速 : 2. ml/min 图 2. PAH 分析物 (.1 mg/l) 的分离, 采用程序定时控制波长变化, 如箭头所示 PAH 分析物被确定如下 :(1) 萘 ;(2) 苊 ;(3) 芴 ;(4) 菲 ;(5) 蒽 ;(6) 荧蒽 ;(7) 芘 ;(8) 苯并蒽 ;(9) 屈 ;(1) 苯并 (b) 荧蒽 ;(11) 苯并 (k) 荧蒽 ;(12) 苯并 (a) 芘 ;(13) 二苯并 [a,h] 蒽 ;(14) 苯并 [g,h,i] 芘 ;(15) 茚并 [1,2,3] 芘 图 3 所示为以 1 μg/g 的浓度加标的虾 鱼和牡蛎基质的色谱图实例 如 图 3D 中所示, 同样通过样品制备程序制备出的空白水样显示了非常清 晰的色谱图 图 1. 配有荧光检测器的 ACQUITY UPLC H-Class 系统 [ 94 ]

95 使用液相荧光色谱法快速检测多环芳烃 (PAHS), 确保海产品的安全 结论 采用 DisQuE 基质分散样品制备试剂盒样品制备过程快速 简单结合 ACQUITY H-Class 系统荧光色谱法能够提供一种适合海产品中 PAH 检测的快速筛选工具, 筛选海产品中的多环芳烃 (PAHs) 用时不到 4 分钟 图 3. 按 1. μg/g 加入标品到 (A) 虾,(B) 鱼和 (C) 牡蛎中的 PAHs 的色谱图 ( 萃取后用乙腈按 1:1 稀释 ) 插图显示的是 (1) 萘 (6) 荧蒽 (7) 芘 (8) 苯并 (a) 蒽和 (9) 屈的放大后的色谱峰 还显示了通过萃取程序得到的空白水样 (D) 通过 Waters DisQuE 基质分散样品制备试剂盒, 从三种不同的海产品基 质中提取多环芳烃 虾 鱼和牡蛎的回收率范围 订购信息 描述 部件号 DisQuE 5 ml 样品提取管 Waters PAH 专用柱 4.6 x 5 mm, 3 μm LC/MS 认证样品瓶 6751CV [ 95 ]

96 婴幼儿配方奶粉和液态奶中三聚氰胺和三聚氰酸含量测定 样品制备 1. 取婴幼儿配方奶粉 1 g( 或液态奶 5 g), 加入 4 ml 水 2. 加入 5 ng(5 μl 浓度为 1 μg/ml 的储备液 ) 三聚氰胺同位素内标 3. 加入 25 ng(25 μl 浓度为 1 μg/ml 的储备液 ) 三聚氰酸同位素内标 4. 加入 2 ml 乙腈 / 水 (1/1, v/v) 5. 涡旋 2 分钟,34 rpm 转速离心 1 分钟, 取上清液 固相萃取过程 (Oasis MCX 6 cc/15 mg) 清洗 A.5 ml.1 M NaOH 乙腈 B. 5 ml.1m 盐酸乙腈 活化 / 平衡 A.5 ml 乙腈 B. 5 ml4 甲酸水溶液 上样 3 ml 4 甲酸水溶液 +2 ml 上清液 清洗 A.5 ml 乙腈 B. 5 ml.2 DEA 乙腈 色谱条件 仪器 : 沃特世 ACQUITY UPLC 系统 色谱柱 : ACQUITY BEH HILIC 2.1 x 1 mm, 1.7 µm 流动相 A: 1 mm 乙酸铵 流动相 B: 含 1 mm 乙酸铵的 95/5 乙腈 / 水 进样体积 : 5 µl 梯度 : 时间 (min) 流速 A B 曲线 质谱条件 仪器 : 沃特世 ACQUITY TQD 检测器 软件 : 沃特世 MassLynx v.4.1 电离模式 : ESI ( 三聚氰胺和三聚氰胺同位素内标 C 3 N 3 ) ESI ( 三聚氰酸和三聚氰酸同位素内标 C 3 N 3 ) 洗脱 4 ml 2 DEA 乙腈 洗脱液用.2 μm PTFE 滤膜过滤入样品瓶, 进行 LC/MS/MS 分析 固相萃取过程 (Oasis MAX 6 cc/15 mg) 待分析物 MRM 锥孔电压 (V) 碰撞能量 (ev) 三聚氰胺 127 > > 三聚氰胺同 133 > C 3 N > 位素内标物 ESI + 三聚氰胺参数 清洗 A.5 ml.1 M 盐酸乙腈 B.5 ml.1 M NaOH 乙腈活化 / 平衡 A.5 ml 乙腈 B.5 ml 5 氨水溶液上样 3 ml 5 氨水溶液 + 2 ml 上清液 待分析物 MRM 锥孔电压 (V) 碰撞能量 (ev) 三聚氰酸 128 > > 三聚氰酸同 134 > C 3 N > 位素内标物 ESI - 三聚氰酸参数 清洗 5 ml 乙腈 洗脱 2 ml 4 甲酸乙腈 洗脱液用.2 μm PTFE 滤膜过滤入样品瓶, 取 95 μl 滤液与 5 μl 水混匀后进行 LC/MS/MS 分析 [ 96 ]

97 婴幼儿配方奶粉和液态奶中三聚氰胺和三聚氰酸含量测定 结果 日内重现性 日间重现性 Melamine3Nov8_21 1 Dry Infant Formula Fortified Melamine at 25 µg/kg : MRM of 4 Channels ES+ 127 > e6 添加水平 平均回收率 ± RSD (n) 平均回收率 ± RSD (n) 5 µg/kg 115. ± 4.7 (n = 5) 11.7 ± 6.9 (n = 11) 25 µg/kg 19.6 ± 3.1 (n = 5) - 婴幼儿配方奶粉中添加三聚氰胺的回收率数据 日内重现性 日间重现性 添加水平 平均回收率 ± RSD (n) 平均回收率 ± RSD (n) Dry Infant Formula Fortified Melamine at 5 µg/kg Dry Infant Formula Blank 1 µg/kg 13.9 ± 1.5 (n = 5) 14.7 ± 8.2 (n = 8) 1 µg/kg 15.7 ± 3.2 (n = 5) 15.1 ± 4.5 (n = 8) 液态奶中添加三聚氰胺的回收率数据 Time 婴幼儿配方奶粉中加标 5 ppb 和 25 ppb 三聚氰胺得到的图谱 添加水平 日内重现性 平均回收率 ± RSD (n) 日间重现性 平均回收率 ± RSD (n) Melamine31Oct8_5 1 1: MRM of 4 Channels ES- 128 > e4 5 µg/kg ± 3.9 (n = 5) ± 4.8 (n = 8) Liquid Infant Formula Fortified Cyanuric Acid at 5 µg/kg 25 µg/kg 19.6 ± 3.1 (n = 5) 14.9 ± 4.8 (n = 8) 婴幼儿配方奶粉中添加三聚氰酸的回收率数据 日内重现性 日间重现性 添加水平 平均回收率 ± RSD (n) 平均回收率 ± RSD (n) Liquid Infant Formula Fortified Cyanuric Acid at 1 µg/kg.59 1 µg/kg ± 4. (n = 5) 115. ± 5. (n = 8) 5 µg/kg 13.8 ± 5.9 (n = 5) 13.1 ± 2.9 (n = 8) Liquid Infant Formula Blank 液态奶中添加三聚氰酸的回收率数据 Time 液态奶中加标 1 ppb 和 5 ppb 三聚氰酸得到的图谱 订购信息 描述 部件号 Oasis MCX, 6 cc/15 mg Oasis MAX, 6 cc/15 mg ACQUITY UPLC BEH HILIC, 2.1 x 1 mm, 1.7 µm VanGuard Pre-column, ACQUITY UPLC BEH HILIC, 2.1 x 5 mm, 1.7 µm, 3 pcs/pack LC/MS 认证样品瓶 CV [ 97 ]

98 苹果汁中棒曲霉素 ( 展青霉素 ) 的分析 固相萃取过程 (Oasis HLB 3 cc/6 mg) 活化 / 平衡 A.3 ml 甲醇 B.3 ml 水 上样 2.5 ml 苹果汁 MRM 参数 化合物棒曲霉素 5-Hydroxymethylfurfural (HMF) 结果 MRM 清洗 1 3 ml1 的碳酸氢钠水溶液 (1 g/1 ml) HMF 清洗 2 1 ml.1 的乙酸水溶液真空抽干小柱洗脱 2 x 1.5 ml 1 乙酸乙酯 / 叔丁基甲醚溶液 AU 3. e e e e e - 1 棒曲霉素 5.e min 色谱条件 仪器 : ACQUITY UPLC 系统 色谱柱 : ACQUITY UPLC BEH Shield RP18 2.1x 1 mm, 1.7 μm 流速 :.6 ml/min 流动相 A: 含.1 氨水的水溶液 流动相 B: 含.1 氨水的乙腈溶液 梯度 : 时间 (min) A B 进样量 : 2 μl, 满环进样 色谱柱温度 : 4 C 样品温度 : 4 C 检测器 : ACQUITY UPLC PDA 检测波长 : 276 nm 质谱条件 氮气流吹干, 用 5 μl 水溶解定容 仪器 : 沃特世 ACQUITY TQD 检测器 电离模式 : 电喷雾负离子 (ESI - ) 多反应监测 (MRM) 棒曲霉素和 HMF 浓度水平为 5 μg/kg 的苹果汁提取液的 LC/UV 图谱 (276 nm) 1 1 棒曲霉素和 HMF 浓度水平为 5 μg/kg 的苹果汁提取液的 LC/MS/MS 图谱 (MRM) min 浓度水平 (μg/kg) * 考察用 Oasis HLB 提取苹果汁中的棒曲霉素的回收率数据, 每个浓度水 平平行分析 4 个样品 订购信息 描述 Oasis HLB, 3 cc/6 mg 棒曲霉素 HMF 7528 部件号 WAT94226 ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 1 mm, 1.7 μm VanGuard Pre-column, ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 5 mm, 1.7 µm, 3 pcs/pack LC/MS 认证样品瓶 平均回收率 (RSD) 5 µg/kg 86.1 (13.6) 5 µg/kg 95.4 (5.9) 5 µg/kg 89.9 (17.5) 6751CV [ 98 ]

99 火锅底料中的罂粟壳分析 简介 一些不法商家和饭店为了牟取暴利, 在火锅 麻辣烫 牛肉粉 烤禽类等的汤料和辅料中添加罂粟壳及其水浸物等违禁原料, 使食物味道鲜美, 吸引更多的食客 因此, 建立灵敏 准确 快速的罂粟壳残留检测方法, 为执法提供技术鉴定依据, 是当务之急 样品制备 取 1 g 样品, 加入 5 ml.1 M/ L HCl 溶液后超声 1 min,4 r/ min 离心 1 min 后取下层清液, 再加入 5 ml.1 M/ L HCl 溶液重复上述操作, 合并 2 次提取液, 加入 5 ml 正己烷摇匀,4 r/ min 离心 5 min 后弃去正己烷层 色谱条件 色谱柱 : Atlantis T3, 2.1 x 15 mm, 5 μm 柱温 : 3 C 样品温度 : 室温 进样体积 : 1 μl 流速 :.2 ml/ min 流动相 A : 1 mm/ L 醋酸铵溶液 流动相 B : 甲醇 色谱洗脱条件 : - 6 min 4-1B 6-1 min 1 B min 1-4 B min 4 B 质谱条件 电离模式 : ESI + 毛细管电压 : 318 kv 锥孔电压 : 7 V 离子源温度 : 1 C RF 透镜 1: 4. 固相萃取过程 (Oasis MCX 3 cc/6 mg) 活化 / 平衡 A.3 ml 甲醇 B. 3 ml HCl 上样 水相样品层 清洗 A.3 ml.1 ML HCl B. 3mL 四氢呋喃 C. 3 ml5 甲醇 抽干 5min 洗脱 5 氨水的甲醇 N 2 吹干, 定容到 1mL 上机分析 光圈 :. RF 透镜 2. 锥孔反吹气流量 : 5 L/ h 脱溶剂气温度 : 35 C 脱溶剂气流量 : 4 L/ h 碰撞池压力 : 3. x 1-3 质量分析器 : 低端分辨率 L F Lens1, 12. V 高端分辨率 HM Lens1,12. V 离子能量 1:.3 入口透镜电压 : 1 V 碰撞梯度 : 1. 出口电压 : 12 V 质量分析器 : 低端分辨率 L F Lens2, 12. V 高端分辨率 HM Lens2, 12. V 离子能量 2:.6 ev ; 质量条件参数详见表 1 名称母离子子离子 1) 停留时间 /s 咖啡 可待因 3.2 罂粟碱 34.7 那可丁 吗啡 (D 3 ) 表 1. * 为定量离子 结果 图 1. 最低限度值 碰撞能量 /ev 165.* * * * * [ 99 ]

100 火锅底料中的罂粟壳分析 结论 采用 MCX 固相萃取柱对汤料 油样 烤禽类等提取液中的罂粟壳成 分进行富集和提纯, 达到了浓缩 净化的目的 采用三重四极杆的 ESI+ 离子源, 对吗啡 可待因 罂粟碱和那可丁分别确定 M+1 为母离子和 2 个子离子, 经碰撞能量优化, 使用 MRM 方式检测, 方法检出定量限 (LOQ) 分别是 μg/l, 使吗啡 可待因 罂粟碱和那可丁可获得极高的检测灵敏度, 满足了低含量样品的测定 经方法学验证, 在低浓度范围内 r =.999, 回收率在 之间, 天内精密度与天间精密度 RSD < 1, 实际样品测定结果表明, 可适用于食品中生物碱的测定 该方法具有准确 灵敏度高 适用范围广等优点 a-4 种生物碱加标样品,b- 空白样品 图 2. 咖啡 可卡因 罂粟碱 那可丁标准混合物和空白样品的总离子流图 订购信息描述部件号 Waters Atlantis T3, 2.1 x 15mm, 5 μm Oasis MCX 3 cc/6 mg 3 μm, 1/Box LC/MS 认证样品瓶 6751CV [ 1 ]

101 沃特世食品中 18 种邻苯二甲酸盐 UPLC/MS/MS 分析解决方案 简介 本方法介绍了两种基于沃特世超高效液相色谱技术 (UPLC ) 分析 18 种邻苯二甲酸盐的方法, 方法一为采用沃特世超高效液相色谱质谱联用技术 (UPLC/MS/MS), 该方法具有分析速度快 灵敏度高的特点, 适用于实验室拥有质谱系统并追求检测灵敏度的用户 方法二采用沃特世超高效液相色谱系统和二极管阵列检测器 (UPLC/PDA) 分析方法, 适用于暂时还不具有质谱系统的用户 邻苯二甲酸二甲酯 邻苯二甲酸丁基苄基酯 邻苯二甲酸二乙酯 邻苯二甲酸二异丁酯 邻苯二甲酸二丁酯 邻苯二甲酸二 (2- 甲氧基 ) 乙酯 邻苯二甲酸二 (2- 乙氧基 ) 乙酯 邻苯二甲酸二戊酯 邻苯二甲酸二己酯 邻苯二甲酸二 (2- 丁氧基 ) 乙酯 邻苯二甲酸二环己酯 邻苯二甲酸二 (2- 乙基 ) 己酯 邻苯二甲酸二正辛酯 邻苯二甲酸二壬酯 邻苯二甲酸二 (2- 丙基庚 ) 酯 邻苯二甲酸二 (4- 甲基 -2- 戊基 ) 酯 邻苯二甲酸二异壬酯 邻苯二甲酸二异癸酯 目标物 :18 种邻苯二甲酸酯类 样品制备 DMP BBP DEP DIBP DBP DMEP DEEP DPP DHXP DBEP DCHP DEHP DNOP DNP DPHP DMPP DINP DIDP 1. 液体样品类,Oasis HLB Glass 柱 如含有酒精, 先适度旋蒸 活化 / 平衡 5 ml 甲醇 /5 ml 水 上样 5 ml 样品 清洗 5 甲醇水溶液 洗脱 5 ml 甲醇 氮气挥干 乙腈 1 ml 定容 上机分析 LC/PDA 或 LC/MS/MS 2. 固体 半固体样品等含脂肪较高的样品 ( 蛋糕 酱类 ),Certified Sep-Pak Sillica 柱 方法一 :UPLC/MS/MS 方法色谱条件 LC 系统 : 色谱柱 : 流动相 A: 流动相 B: 流速 : 梯度洗脱 : 时间 ( 分钟 ) ACQUITY UPLC H-Class 系统 ACQUITY UPLC HSS C 18, 1.8 μm, 2.1 x 1 mm.1 FA 水溶液乙腈.4mL/min 梯度表 流速 (ml/min) A() B() 曲线 进样体积 : 柱温 : 样品温度 : 强洗溶剂 : 弱洗溶剂 : 运行时间 : 质谱条件 系统 : 离子化模式 : 电离电压 : 离子源温度 : 脱溶剂气温度 : 脱溶剂气流量 : 1 μl 35 C 1 C ACN H 2 O:CAN=95:5 7.5 分钟 ACQUITY UPLC TQD ESI+ 3.2 kv 12 C 4 C 65 L/Hr 活化 / 平衡 6 ml 正己烷 上样 取净化液上样 清洗 6 ml 正己烷 洗脱 6 ml 乙酸乙酯 氮气挥干 乙腈 1 ml 定容 上机分析 LC/PDA 或 LC/MS/MS [ 11 ]

102 沃特世食品中 18 种邻苯二甲酸盐 UPLC/MS/MS 分析解决方案 方法二 :UPLC/PDA 方法色谱条件 仪器系统 : 色谱柱 : 波长 : 柱温 : 流速 : 流动相 : 沃特世 UPLC H-Class/PDA ACQUITY UPLC HSS C 18, 1.8 μm, 2.1 x 1 mm 225 nm 45 C.4 ml/min A- 水,B- 乙腈, 进行梯度洗脱! 饮料基质 2 加标与空白结果 订购信息 描述 部件号 Oasis HLB Glass 柱 5 cc/2 mg Certified Sep-Pak Sillica 柱 6 cc/5 mg ACQUITY UPLC HSS C 18, 1.7 μm, 2.1 x 1 mm VanGuard Pre-column, ACQUITY UPLC HSS C 18, 2.1 x 5 mm, 1.8 μm, 3 pcs/pack LC/MS 认证样品瓶 CV [ 12 ]

103 乳及乳制品中 L- 羟脯氨酸残留的测定 简介 日前, 农业部下发 211 年全国生鲜乳质量安全监测计划 ( 计划 ) 和 农业部生鲜乳质量安全监测工作规范 两个文件 此次安全监测计划提出, 除所有抽检样品都必须检测三聚氰胺外, 其中 3 的样品还要检测皮革水解蛋白和碱类物质 皮革水解蛋白是由皮革废料或动物皮毛 脏器等水解生成的一种蛋白粉, 非法添加可以提高乳及乳制品中蛋白质的含量 皮革水解蛋白主要成分为胶原蛋白,L- 羟脯氨酸为胶原蛋白的特征性氨基酸, 在原料乳的本底中是不存在的, 因此对于皮革水解蛋白的违法添加, 可以通过检测 L- 羟脯氨酸残留的方法来监测 液相色谱法样品制备 1. 准确称取 5 g 于 5 ml 刻度试管中, 加 4 ml 水溶解 混匀 2. 加入 6 高氯酸 2.5 ml, 用水定容至刻度, 超声波震荡 1 min 3. 样品于 2 rpm 下离心 1 分钟, 取中间清液, 经.22 μm 的滤膜过滤后备用 4. 用 AccQ Tag 方法, 对于上述滤液进行衍生后, 待测 色谱条件 色谱柱 : UPLC BEH C x 15 mm, 1.7 μm 流动相 A: AccQ Tag TM 流动相 B: 乙腈 流速 :.45 ml/min 柱温 : 4 C 进样量 : 5-2 μl 荧光检测波长 : 激发波长 25 nm 发射波长 395 nm 梯度 : 时间 (min) 流动相 A() 流动相 B() 曲线 液相色谱串联质谱法 样品制备 1. 准确称取 5 g 于 5 ml 刻度试管中, 加 4 ml 水溶解 混匀 2. 加入 6 高氯酸 2.5 ml, 用水定容至刻度, 超声波震荡 1 min 3. 样品于 2 rpm 下离心 1 分钟, 取中间清液, 经.22 μm 的滤膜过滤后备用 4. 用 AccQ Tag 方法, 对于上述滤液进行衍生后, 待测 色谱条件 色谱柱 : 流动相 A: 流动相 B: 流速 : 柱温 : 进样量 : 梯度 : UPLC BEH C x1 mm,1.7 μm 1 mm 乙酸铵水溶液乙腈.3 ml/min 4 C 5-1 μl 时间 (min) 流动相 A() 流动相 B() 曲线 质谱条件 L- 羟脯氨酸离子选择参数表 L- 羟脯氨酸 母离子 定量子离子 碰撞能量 定性子离子 碰撞能量 离子化方式 L-Phy ESI+ 订购信息 标准色谱图 描述 部件号 ACQUITY UPLC BEH C x1 mm, 1.7 μm ACQUITY UPLC BEH C x15 mm, 1.7 μm VanGuard Pre-column, ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1x5 mm, 1.7 μm, 3 pcs/pack AccQ Tag Ultra 衍生化试剂 AccQ Tag Ultra 洗脱液 A( 浓缩液 ), 95 ml 全回收样品瓶 1 个 / 包 C [ 13 ]

104 乳和乳制品中黄曲霉毒素 M1 的测定 (LC-MS) 简介 国家食品安全标准 GB 规定了四种对婴儿食品和乳品中黄曲霉素 M1 的测定方法 第一法使用免疫亲和柱净化样品, 用液相色谱 - 质谱 (LC-MS) 对黄曲霉素 M1 进行定量分析 该法适合用沃特世 ACQUITY UPLC 系统配 TQ 质谱仪进行检测 样品制备 乳样称取 5 g( 精确到.1g) 混匀的式样 在水浴中加热到 C 在 6 转 / 分钟下离心 15 min 收集全部上清液, 供净化用 按照免疫亲和柱的使用说明书要求 将 5 ml 上述提取液以 2-3 ml/min 稳定的流速过柱 用 1 ml 水以稳定的流速洗柱 然后, 抽干亲和柱 用 4 ml 乙腈洗脱黄曲霉素 M1 然后用氮气缓缓地在 3 C 下将洗脱液蒸发至近干 ( 如果蒸发至干会损失黄曲霉素 M1) 用乙腈- 水溶液 (1+9) 稀释至 1 ml 注 : 其它样品的制备 如发酵乳 乳粉和粉状婴幼儿配方食品 干酪 奶油等, 请参考食品安全国家标准 GB GB 参考色谱条件 色谱柱 : ACQUITY UPLC HSS T3, 2.1 X 1 mm, 1.8 μm 柱温 : 35 C 样品温度 : 2 C 流动相 A:.1 甲酸水溶液 流动相 B: 乙腈 / 甲醇 (5/5 v/v) 流速 : 3 μl / min 进样体积 : 1 μl 梯度 : 时间 (min) 流动相 A() 流动相 B() 曲线 质谱条件 离子化模式 : ESI+ MRM 参数化合物 : 黄曲霉素 M1 MRM1(m/z): 329.>273.5 碰撞能量 (V): 22 MRM2(m/z): 329.>259.5 碰撞能量 (V): 22 标准工作溶液 : 黄曲霉素 M1 在空白基质中浓度为.5,.8,1.,2., 4.,6.,8. ng/ml 推荐使用 : 沃特世 ACQUITY UPLC 系统配 TQ 质谱仪 参考资料 1. 国家食品安全标准 : 婴幼儿食品和乳品中黄曲霉素 M1 的测定 (GB ) 2. Rapid analysis of rapid analysis of aflatoxins without derivatization using ultra performance liquid c hromatography and fluorescence detection, Waters literature code: en 订购信息 描述 部件号 ACQUITY UPLC HSS T3 column, 2.1x1 mm, 1.8 mm Vicam AflaTest wb Column VanGuard Pre-column, ACQUITY UPLC HSS T3, 2.1 x 5 mm, 1.8 μm, 3 pcs/pack LC/MS 认证样品瓶 G CV [ 14 ]

105 使用 UPLC 和荧光检测器, 无需衍生反应的黄曲霉素快速分析 简介 黄曲霉毒素由一组由黄曲霉和寄生曲霉真菌所产生的代谢物霉菌毒素组成 它们存在于各种食品中, 如谷物 干果 食用香料和乳制品 天然存在的黄曲霉毒素有四种 :B1 B2 G1 和 G2 另有两种,M1 和 M2, 是当奶牛食入受到黄曲霉毒素 B 类污染的谷物时, 所产生的代谢副产物 这些代谢副产物可造成乳制品的污染 国家标准 规定了一种使用液 - 液萃取和薄层色谱 (TLC) 测定食品中的黄曲霉毒素 M1 和 B1 的方法 本例介绍了利用免疫亲和柱 (Vicam AflaTest 净化柱 ) 制备样品, 使用配有大流量池的 ACQUITY 荧光检测器, 对麦片粥 谷物 干果和其它食品中的黄曲霉毒素含量 (M1 M2 B1 B2 G1 和 G2) 进行测定的方法 与国家标准相比, 本方法可同时分析各种黄曲霉毒素, 且分析过程更简单 更快速 更可靠 图 1. 使用配备大体积流通池的荧光检测器和 ACQUITY UPLC H-Class 系统 得出的黄曲霉毒素标准品混合物的色谱图 样品制备 用混合器将 25 g 样品, 5 g 氯化钠和 1 ml 8/2 甲醇 / 水混合液高速混合 1 分钟 用 Whatman 槽过滤纸过滤上述混合物 ( 滤液 1) 将 1 ml 滤液 1 与 4 ml 水混合, 经玻璃微纤维滤纸过滤 ( 滤液 2) 将 1 ml 滤液 2 过柱 (Vicam AflaTest WB 柱 ) 用 1 ml 水 (HPLC 级 ) 洗柱 2 次 用 1 ml 甲醇 (HPLC 级 ) 洗脱 用 1 乙酸水溶液等体积稀释 色谱条件 液相色谱系统 : 配备 ACQUITY UPLC 荧光检测器的沃特世 ACQUITY UPLC H-Class 系统 流通池 : 大体积荧光流通池 ( 部件编号 2569) 色谱柱 : ACQUITY UPLC BEH C 18 柱 2.1x1 mm, 1.7 μm( ) 柱温 : 3 C 流速 : 4 μl/min 流动相 : 水 / 甲醇 / 乙腈 ( 体积比 64:18:18) 进样体积 : 2 μl( 使用 5 μl 定量环 ) 运行时间 : 4. 分钟 检测 : 荧光 激发波长 : 365 nm 反射波长 : 429 nm, 适用于 M1 M2 B1 和 B2 455 nm, 适用于 G1 和 G2 订购信息 描述 部件号 ACQUITY 荧光检测器 ( 大体积流通池 )FLR Large Volume 2569 ACQUITY UPLC BEH C x 1 mm,1.7 μm VanGuard Pre-column, ACQUITY UPLC BEH C 18, 2.1 x 5 mm, 1.7 μm, 3 pcs/pack Vicam AflaTest wb Column LC/MS 认证样品瓶 或可直接购买黄曲霉毒素分析方法包 : 包括 UPLC 色谱柱 大体积流通池荧光检测器 免疫亲和柱 分析方法 CD 及相关的应用文献 G CV [ 15 ]

106 饮料中 4- 甲基咪唑和 2- 甲基咪唑分析方法 简介 焦糖色素是一种允许使用的着色剂, 而以加氨或其铵盐制成的焦糖会产生 4- 甲基咪唑,4- 甲基咪唑是一种能够诱发肿瘤的高水平的化学物质 由于 4- 甲基咪唑分子极性很大, 含量很低, 所以如何快速 准确地检测出其含量, 就成为人们现阶段研究的重点 样品前处理 固相萃取 SPE 解决方案 Oasis MCX(3 cc/6 mg) 小柱净化取 3g 饮料样品, 超声 5 分钟, 后待净化 目标化合物 4- 甲基咪唑 2- 甲基咪唑 结果 检测离子电离模式离子对锥孔电压碰撞能量 [M+H]+ [M+H]+ ES+ ES+ 83>56 83>42 83>42 83>56 38V 38V 14V 14V 活化 / 平衡 3 ml 甲醇 /3 ml 水 混合标准品 TIC! 上 3 ml 样品 清洗 A: 2 甲酸水溶液 /B: 1 甲醇 洗脱 5 氨化甲醇 氮气挥干 茶饮料样品加标与空白对比分析 乙腈 : 甲醇 (9:1) 定容 上机分析 UPLC H-Class PDA 方法 : 色谱柱 : ACQUITY UPLC BEH HILIC Column, 2.1 x 1 mm, 1.7 µm 流动相 A: 乙睛 流动相 B: 5 mm 甲酸铵 柱温 : 35 C 检测波长 : 215 nm 进样量 : 5 µl 运行时间 : 3 min 流速 :.5 ml/min ACQUITY UPLC XEVO TQ MS 超高效液相色谱 - 串联质谱法 : 色谱柱 : ACQUITY UPLC BEH HILIC Column, 2.1 x 1 mm, 1.7µm 流动相 A: 乙睛 流动相 B: 5 mm 甲酸铵 柱温 : 35 C 进样量 : 2 µl 运行时间 : 3 min 流速 :.5 ml/min 可乐样品加标与空白对比分析 结论 采用 ACQUITY UPLC H-Class-PDA 和沃特世 ACQUITY UPLC / Xevo TQ MS 可以 快速高效地对 4- 甲基咪唑和 2- 甲基咪唑的含量进行测定,ACQUITY UPLC H-Class-PDA 灵敏度可以达到 1 mg/kg, 沃特世 ACQUITY UPLC / Xevo TQ MS 灵敏度可以达到 1 μg/kg 应用沃特世的固相萃取 SPE 解决方案配合 Waters HILIC 模式色谱保留, 对于大极性的小分子有很好的保留以及分离提取的作用, 达到理想净化效果以及色谱分离效果 订购信息 描述 部件号 BEH HILIC Column, 2.1 x 1 mm 1.7 µm VanGuard Pre-column, ACQUITY UPLC BEH HILIC, 2.1 x 5 mm, 1.7 μm, 3 pcs/pack Oasis MCX 3 cc/6 mg 3 μm,1/box LC/MS 认证样品瓶 6751CV! [ 16 ]

107 烘烤和油炸食品中丙烯酰胺的分析 样品制备 1. 称取 1 克经粉碎处理的油炸马铃薯产品, 放入离心管中 2. 加入 15 ml 2 M 的氯化钠溶液和 1 μl 丙烯酰胺 -D 3 内标溶液, 涡旋 3 min 3. 1 rpm 条件下离心 12 min 4. 取 1.5 ml 上清液进行后续的固相萃取提取处理 固相萃取过程固相萃取柱 1(Oasis HLB 6 cc/2 mg) 结果 信号强度, m/z 72 丙烯酰胺 71 µg/kg 活化 A.2 ml 甲醇 B.2 ml 2 M 氯化钠 上样 1.5 ml 上清液 min 油炸薯条中丙烯酰胺的 LC/MS 图谱 清洗.8 ml 水 洗脱 3 ml1 甲酸甲醇溶液 固相萃取过程固相萃取柱 2 (Oasis MCX 3 cc/6 mg) 添加水平 (μg/kg) 测量结果 (μg/kg) RSD () * 每个添加水平平行分析 5 个样品 活化 2 ml 甲醇 2 ml 水 1. 将 Oasis HLB 柱的洗脱液全部上样 2. 用.5 ml 甲醇冲洗盛洗脱液的小瓶, 上样 3. 一起收集 氮气吹干, 用.4 ml 水重新溶解 色谱条件 仪器 : 色谱柱 : 流速 : 流动相 : 进样量 : 色谱柱温度 : 沃特世 Alliance 2695 系统 Atlantis dc 18, 2.1 x 15 mm, 5 μm.2 ml/min.1 甲酸水溶液 2 μl 3 C 质谱条件 仪器 : 沃特世 ZMD 质量检测器 电离模式 : 电喷雾正离子 (ESI + ) 选择性离子监测 (SIR) 化合物 : 质量 锥孔电压 (V) 丙烯酰胺 丙烯酰胺 - D 订购信息 描述 部件号 Atlantis dc 18, 2.1 x 15 mm, 5 μm Oasis HLB, 6 cc/2 mg WAT1622 Oasis MCX, 3 cc/6 mg LC/MS 认证样品瓶 6751CV [ 17 ]

108 花生中的黄曲霉素 B1,B2,G1,G2 的分析 样品制备 1. 称取粉碎过筛 (1 目 ) 样品 2 g, 加入 5 g 氯化钠,3 ml 正已烷 2. 准确加入 1 ml 6 甲醇水容液, 摇匀 3. 用超声提取 3 min 4. 提取后, 用直径 15 cm 快速定性滤纸过滤 5. 待静止分层后, 取 1 ml 甲醇水溶液净化 结果 F 净化 未净化 固相萃取过程 (Oasis HLB 1 cc/3 mg) 活化 / 平衡 A. 1 ml 甲醇 B. 1 ml 水 时间 / 分钟 上样加入 1 ml 样品清洗 1 ml 水洗脱 1 ml 甲醇用甲醇定容至 2 ml 样品进入 Oasis HLB 小柱后, 基体的干扰比直接进样大大减小 方法讨论 化合物 回收率 含量 µg/kg 黄曲霉素 G2 11± 黄曲霉素 G1 72.8± 黄曲霉素 B2 97.5± 黄曲霉素 B1 68.8± 花生样品黄曲霉素 B1, B2, G1, G2 的分析结果 N=5 色谱条件 仪器 : 沃特世 Alliance 2695 系统, 2475 荧光检测器 色谱柱 : SymmetryShield RP 18, 4.6 x 15 mm, 5 μm 柱温 : 3 C 流动相 A: 甲醇 流动相 B: 水 35 A :65 B, 保持 2 min 流速 : 1 ml/min 进样量 : 1 μl 柱后衍生剂 : 用 1 ml 甲醇溶解 2 mg 碘, 待碘完全溶解后, 用纯水稀释至 1 ml,.45 μm 水相滤膜过滤 碘的流速 :.2 ml 衍生反应温度 : 8 C 激发波长 : 365 nm 发射波长 : 455 nm 订购信息 描述 部件号 Oasis HLB, 1 cc/3 mg WAT94225 SymmetryShield RP 18, 4.6 x 15 mm, 5 μm SymmetryShield RP 18 保护柱芯, 3.9 x 2 mm, 5 μm Sentry Guard Holder WAT4691 LC/GC 认证样品瓶 18637C [ 18 ]

109 辣椒产品中苏丹红的分析 样品制备 水性辣椒酱 / 新鲜辣椒 1. 称 1 g 辣椒, 用 1 ml 丙酮均浆, 提取 2. 取 1 ml 提取液, 用氢氧化钠溶液稀释至 5 ml( 调到 ph 11) 固相萃取过程 (Oasis MAX 3 cc/6 mg) 活化 / 平衡 A. 2 ml 乙酸乙酯 B. 2 ml 甲醇 C. 1 ml.1 M 氢氧化钠 D. 2 ml 水 色谱条件 仪器 : 色谱柱 : 柱温 : 流动相 A: 流动相 B: 梯度 : 流速 : 进样体积 : 沃特世 Alliance 2695 系统 Atlantis dc x 1 mm, 3. μm 3 C.1 甲酸水溶液乙腈 8 B 到 95 B, 1 min.4 ml/min 15 μl 上样 5 ml 稀释的提取液 清洗 A. 2 ml 含 7 甲醇的水溶液 B. 1 ml 1M 氢氧化钠 C. 2 ml 甲醇 D. 1 ml 乙酸乙酯 洗脱 2 ml (89:9:2) 乙酸乙酯 / 甲醇 / 甲酸 蒸发再定容于 2 μl (9:1) 乙腈 / 水中 注意 : 极性酚类化合物如辣椒素在 ph 11 无离子交换作用, 用 7 甲醇水溶液清洗 进一步推高 ph 使苏丹红类化合物以离子交换和反相作用牢牢保留在吸附剂上, 再用甲醇和乙酸乙酯清洗杂质 ( 除去非极性碱和中性化合物 ) 辣椒粉 / 辣椒油 1..1 g 辣椒油, 用 1 ml 正己烷溶解 2. 1 g 辣椒粉 / 油, 用 1 ml 丙酮均浆, 提取 3. 1 ml 提取液吹干, 残渣定容于 1 ml 正己烷 固相萃取过程 (Sep-Pak Alumina B 3 cc/5 mg) 质谱条件 仪器 : 沃特世 Quattro micro API 电离模式 : ESI + 分析物 MRM 锥孔电压 (V) 碰撞能量 (ev ) Sudan I Sudan II Sudan III Sudan IV 结果 活化 / 平衡 A. 2 ml 甲醇 B. 2 ml 乙酸乙酯 C. 3 ml 正己烷 上样 1 ml 提取液 清洗 A. 3 ml 正己烷 B. 1 ml 乙酸乙酯 洗脱 4 ml (9:1) 乙酸乙酯 / 甲醇 蒸发再定容于 2 μl 乙腈 / 水中 LC/MS 分析添加辣椒结果 (8 μg/kg), Oasis MAX 方法 注意 : 用正己烷和乙酸乙酯能完全除去脂肪. 胡萝卜素类色素亦被乙酸乙酯清洗掉. 在 1 甲醇 - 乙酸乙酯中, 苏丹红类染料被洗脱, 但更极性的辣椒素仍被吸附 [ 19 ]

110 辣椒产品中苏丹红的分析 分析物 回收率 () RSD () Sudan I 83 9 Sudan II 83 1 Sudan III 77 3 Sudan IV 75 4 辣椒酱结果 (n = 6, 8 μg/kg) LC/MS 分析添加辣椒粉结果 (8 μg/kg), Sep-Pak Alumina B 方法 分析物 回收率 () RSD () Sudan I Sudan II Sudan III 93 6 Sudan IV 辣椒油结果 (n = 6, 8 μg/kg) 订购信息 描述 部件号 Oasis MAX, 3 cc/6 mg Sep-Pak Alumina B, 3 cc/5 mg, 5/box WAT2825 Atlantis dc 18, 2.1 x 1 mm, 3 μm* Atlantis dc 18, 2.1 x 1 mm, 3 μm 保护柱 2 pcs/pack Sentry Guard Holder WAT97958 LC/MS 认证样品瓶 6751CV * 可用 Atlantis T3 色谱柱替代 ( 部件号 : ) [ 11 ]

111 应用文献索引 多农药残留分析 待分析物应用文章沃特世应用资料编号 Pesticides Determination and Confirmation of Priority Pesticides in Baby Food (Xevo) EN Pesticides A Rapid Method for the Screening and Confirmation of Over 4 Pesticide Residues in Food EN Pesticides Application of ACQUITY TQD for the analysis of pesticide residues in baby food EN Pesticides Targeted and non-targeted pesticide screening in food using elevated resolution GC-ToF-MS - fruit-based baby food 72227EN Pesticides Application of Elevated Resolution GC-TOF-MS for the Multi-Residue Analysis of Pesticides in Food - multiple commodities 72167EN Pesticides Determination of pesticides in food using UPLC with polarity switching tandem quadrupole LC/MS/MS EN Pesticides Determination of priority pesticide residues in baby food by tandem quadrupole LC/MS/MS and GC/MS/MS EN Pesticides New technologies for the simultaneous analysis of multiple pesticide residues in agriculture produce EN Pesticides Application of GC-triple quadrupole MS/MS for multiresidue analysis of pesticides in complex matrices 72987EN Pesticides UPLC with oa-tof MS for Rapid Screening of Multiple Pesticide Residues EN Pesticides An enhanced LC/MS/MS method for the determination of 81 pesticide residues in fruit and vegetables using the Quattro Premier mass spectrometer 7284EN Pesticides Determination of pesticide residues in complex matrices using the Waters micromass Quattro Premier: a method combining extreme sensitivity and unmatched robustness 72839EN Pesticides The Confirmation of the presence of incurred pesticide residues detected using a multi-residue surveillance method to screen for 81 target analytes 72692EN Pesticides The advantages of multiple reaction monitoring (MRM) over Single ion Recording (SIR) for the analysis of 81 pesticide residues in fruit and vegetables 72693EN Pesticides A multi-residue LC/MS/MS method for the determination of 81 pesticide residues in fruit and vegetables: Part 1, method overview 72686EN Pesticides Comparison of SIM and MRM for the Quantitative Confirmation of Pesticide Residues in Food EN 污染物分析 待分析物应用文章沃特世应用资料编号 melamine, cyanuric acid melamine, ammelide, cyanuric acid A Rapid and Sensitive Method for the Simultaneous Determination of Melamine and Cyanuric Acid in Infant Formulas, Adult Nutritional Products, and Protein Powders Analysis of Melamine and its Degradation Products in Milk-based Products Using GC-MS/MS EN EN melamine A Rapid Method to Detect Melamine in Liquid Milk and Infant Formula Using UPLC/MS/MS EN acrylamide The determination of acrylamide using the Waters micromass Quattro Premier LC/MS/MS system 72846EN dioxin Dioxin and furan analysis in animal feedingstuffs to EU limits using the Waters Autospec Ultima NT 72739EN melamine Melamine, ammeline and cyanuric acid analysis by UPLC/MS/MS and UPLC/PDA 7223EN PAH The Use of Tandem Quadrupole GC/MS/MS for the determiantion of Polycyclic Aromatics Hydrocarbons (PAHs) in food Products EN PCBs Determiantion of Ocs, PCBs and sunthetic pyrethroids in animal fat EN Sudan Dyes Effective SPE strategies for LC/MS determination of Sudan dyes in chili products 72144EN Sudan Dyes A rapid and sensitive analysis method of Sudan Red I, II, III & IV in tomato sauce using UPLC MS/MSshellfish EN [ 111 ]

112 应用文献索引 兽药残留分析 待分析物应用文章沃特世应用资料编号 corticosteroids, ß- agonists and rbst Xevo TQ Facing Some New Challenges in the Field of Growth Promoters in Biological Samples EN macrolides Automated Analysis of Macrolides Antibiotics in Milk 72296EN aminoglycosides Analysis of Aminoglycoside antibiotics with Waters 2465 electrochemical detector 7283EN Anabolic Steroids Application of GC/MS/MS for the Analysis of Anabolic Steroids in Meat Products EN chloramphenicol A confirmatory method dor the determination of chloramphenicol, tiamphenicol and florfenicol in honey 72115EN chloramphenicol Determination of chloramphenicol using the ACQUITY UPLC and the Quattro Premier XE in ES negative ion mode MS/MS EN chloramphenicol Application of ACQUITY TQD for the analysis of chloramphenicol residues in honey extracts EN chloramphenicol A Rapid Method for the Determination of Chloramphenicol Residues in Black Tiger Shrimp 72767EN hormones Application of GC/MS/MS for the analysis of banned growth promoters EN hormones Comparing SIT to MRM for the Quantitative confirmation of steroid growth promoters in bovine urine EN nitrofurans Application of ACQUITY TQD for the analysis of nitrofuran veterinary drug residues in shrimp EN nitrofurans LC/MS/MS determination of nitrofuran metabolite residues in honey 72134EN nitrofurans Determination of Nitrofuran Veterinary Drug Residues Using Waters Micromass Quattro Premier: Tandem Mass Spectrometer 72847EN nitrofurans Analysis of Nitrofuran Veterinary Drug Residues using ACQUITY UPLC and Quattro Premier XE EN Screening Advanced Multi-Residue Screening in Veterinary Drug Analysis Using UPLC ToF MS EN streptomycin A confirmatory LC/MS/MS method for the determination of streptomycin in honey 72981EN sulfonamide A rapid multiresidue method for the determination of sulfonamide ande b-lactam residues in bovine milk 72165EN 水分析 待分析物应用文章沃特世应用资料编号 N-Nitrosamines Complete System Solution for the Determination of N-Nitrosamines in Drinking Water EN Phenyl Urea herbicides ON-Line SPE LC/MS/MS Part IV: US EPA Method 532 Phenyl Urea Compounds in Drinking Water 72271EN pharmaceuticals Emerging Contaminants in Drinking Water Part I: Painkillers and Illicit Drugs 72272EN Endocrine-Disrupting Compounds A Sensitive Method for the Determination of Endocrine-Disrupting Compounds in River Water by LC/MS/MS EN estriol, bisphenol A, estrone, estradiols Determination of Endocrine Disrupting Compounds (EDCs) in River Water by ACQUITY UPLC Tandem Quadrupole MS EN Alachlor, acetochlor, metolachlor, propachlor, Analysis of Chloroacetanilide and Acetamide Herbicide Degradates in Drinking Water by UPLC/MS/MS EN flufenacet & dimetheamid Perchlorate The Determination of Perchlorate in Water Using LC/MS/MS 72941EN Perchlorate The Determination of Perchlorate in Drinking Water using Single Quadrupole Mass Spectrometry EN Priority pollutants Multi-Residue Analysis of Priority Pollutants in Drinking and Surface Waters Using Solid Phase Extraction and GC Tandem Quadrupole MS/MS EN Priority pollutants Priority pollutants, including PAHs & PCBs, in surface waters EN Synthetic pyrethroids A Confirmatory Method for the Determination of Synthetic Pyrethroids in Waste Water 72193EN On-line SPE LC/MS/MS Part I: System Classification EN On-line SPE/LC/MS/MS Part II: Waters AquaAnalysis System 72245EN On-line SPE LC/MS/MS Part III: Waters AquaAnalysis System Performance EN [ 112 ]

113 应用文献索引 食品功能组分分析 待分析物应用文章沃特世应用资料编号 Peppermint essential oils Automated Qualitative Analysis of Complex Mixtures Using ChromaLynx XS Software EN Fat soluble vitamins Rapid separation of key fat soluble vitamins in butter using UPLC/MS/MS on ACQUITY SQD with PDA 72221EN Fat soluble vitamins Chromatographic Separation of Fat-Soluble Vitamins, Including the Two Vitamers D2 and D EN Fat soluble vitamins A Rapid and Sensitive UPLC-MS (APCI) Method for the Determination of CoQ EN Water soluble vitamins A Novel Method for the Analysis of Water-Soluble Vitamins by UPLC 7221EN Water soluble vitamins UPLC/PDA/MS Analysis of Riboflavin and Related Compounds EN Water soluble vitamins LC/MS Analysis of Vitamin B EN Anthocyanidins ACQUITY UPLC for the Rapid Analysis of Anthocyanidins in Berries 72187EN Isoflavones Analysis of isoflavones from soy products using ACQUITY SQD with PDA 72211EN 生物毒素分析 待分析物 应用文章 沃特世应用资料编号 mycotoxins Rapid Analysis of Aflatoxins without Derivatization Using UPLC and Fluorescence Detection EN mycotoxins Application of ACQUITY TQD for the analysis of mycotoxins contaminants in pistachio, almond and cashew nuts EN mycotoxins Rapid multi-mycotoxin analysis using ACQUITY UPLC and Quattro Premier XE EN mycotoxins The analysis of milk aflatoxins by HPLC using fluorescence detection EN mycotoxins Multi-analyte mycotoxin analysis 7215EN mycotoxins A method for the rapid and sensitive determination of ochratoxin A in red wine 72792EN Patulin Rapid analysis of patulin contamination in apple juice 72241EN biotoxins A fast and sensitive UPLC/MS/MS method for the detection of lipophilic marine biotoxins in shellfish EN POPs( 持久性污染物 ) 分析 待分析物应用文章沃特世应用资料编号 PAHs & explosives The Science of ACQUITY UPLC Applied to Environmental Analyses of PAHs and Explosives in Water EN BFRs Analysis of Brominated Flame Retardants (BFRs) using AutoSpec 7227EN BFRs Analysis of BFR diastereomers HBCD & TBBP-A using UPLC/MS/MS EN dioxin Dioxin and furan analysis in animal feedingstuffs to EU limits using the Waters Autospec Ultima NT 72739EN Dioxin and furan The Analysis Of Dioxins And Furans Using HRGC-High Resolution MS With The Autospec Ultima NT 72556EN Dioxin and furan Ultra Trace Analysis Of Dioxins And Furans In Human Adipose Tissue Using SFE-LC Extraction/Cleanup and the Waters AutoSpec Ultima NT 72829EN N/A The Advantages of Using GC/MS/MS for the Analysis of Trace Components in Complex Matrices (Carp samples) 72876EN PAH The Use of Tandem Quadrupole GC/MS/MS for the determiantion of Polycyclic Aromatics Hydrocarbons (PAHs) in food Products EN PAHs Fast GC/MS/MS Analysis of Polyaromatic Hydrocarbons using the Waters Quattro micro GC 72191EN Aldehydes & Ketones Fast Analysis of Aldehydes and Ketones by ACQUITY UPLC 7215EN PCBs The analysis of polychlorinated biphenyls (PCBs) by GC-High resolution MS using Autospec Ultima NT 7252EN PCDD A single injection screening method for tetra-octa chlorinated PCDD/FS in fish and flyash matrices using triple quadrupole MS/MS 72759EN Pesticides Comparison of SIM and MRM for the Quantitative Confirmation of Pesticide Residues in Food EN Polybrominated Diphenyl Ether Flame A Study of the Analysis of Polybrominated Diphenyl Ether Flame Retardants by GC/MS/MS 72121EN Retardants POPs, PCBs & Dioxins Technical Note: Dual column analysis of POPs, PCBs and dioxins 72768EN PFCs Analysis of Perfluorinated Compounds (PFCs) on the ACQUITY UPLC System and the Quattro Premier XE in ES- MS/MS EN PFOs Separation of Branched PFOS Isomers by UPLC with MS/MS Detection EN [ 113 ]

114 备注 [ 114 ]

115 简单, 洁净 通向洁净的便捷之路 更洁净的形式并得到高的灵敏度 从先导药物的筛选到临床后期的方法开发, 沃特世公司在生物样本分析领域可提供多种多样的样品前处理产品满足不同应用需求, 其中包含全新的 Ostro TM 磷脂去除板 敬请登陆 : 沃特世公司 Waters, The Science of What s Possible, Ostro, Oasis 和 Sirocco 是沃特世公司的商标

116 北京分公司北京市朝阳区铜牛国际大厦光华路 15 号院 2 号楼 9 层邮编 :126 电话 : 传真 : 广州分公司广州市荔湾区中山七路 5 号西门口广场 室邮编 :5117 电话 : 传真 : 成都分公司成都市新光华街 7 号航天科技大厦 183 室邮编 :6116 电话 : 传真 : 沃特斯中国有限公司香港新界沙田香港科学园科技大道西 2 号生物资讯中心 6 楼 68 室电话 : 传真 : 全国免费售后服务热线 : 8(4) 沃特世科技 ( 上海 ) 有限公司上海市浦东新区金海路 1 号金领之都 13 栋邮编 :2126 电话 : 传真 : Waters, UPLC, ACQUITY, ACQUITY UPLC, UPC 2, Connections INSIGHT, SYNAPT, Xevo, XBridge, XSelect, Sunfire,Symmetry, Alliance, Atlantis, Oasis, Sep- Pak, Empower, Masslynx, XTERRA 和 The Science of What s Possible 是沃特世公司的注册商标 DisQuE, ACQUITY UPC 2, Ostro, CSH, XPoSure, VanGuard, Sentry, Guard-pak, Quattro micro, Quattro Premier, Q-Tof, Quattro Ultima Pt, Accell, StepWave, Auto Blend, Auto Blend Plus, Targetlynx, Posi±ive,SymmetryShield, Symmetry3, IntelliStart,AccQ Tag,QUANPEDIA 和 RADAR 是沃特世公司的商标 所有其他商标属于各自拥有者所有 214 年沃特世公司中国印刷 214 年 1 月 ZH