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忧郎
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1 药学学报 Acta Pharmacetica Sinica 2015, 50 (9): 定量亲和色谱质谱研究美洛昔康与 β- 环糊精的相互作用 1, 王彩芬 2 1,, 李卓 2, 王小波 1, 李海燕 2 1,, 张继稳 2*, 孙立新 1* (1. 沈阳药科大学, 辽宁沈阳 ; 2. 中国科学院上海药物研究所, 上海 ) 摘要 : 药物与环糊精的结合速率常数解离速率常数是药物从给药系统中解离吸收的基本动力学常数, 但现有研究多集中于结合平衡常数 K 本文基于定量亲和色谱技术 (qantitative high-performance affinity chromatography), 发展了测定药物环糊精超分子表观解离速率常数 (k off,app ) 的定量亲和色谱质谱方法采用质谱检测器, 经色谱峰拟合获得不同流速下药物和不保留物质尿嘧啶在 β- 环糊精柱上的保留时间与半峰宽, 计算药物与不保留物质尿嘧啶的塔板高度 (H R 与 H M,C ); 根据药物和不保留物质尿嘧啶的扩散系数差异与静态流动相传质阻抗, 计算获得理论不保留物质的塔板高度 H M,T 以 (H R -H M,T ) 对 k/(1+k) 2 进行线性回归, 根据斜率计算得到多流速条件下美洛昔康和对照药物 ( 对乙酰氨基酚 ) 的 k off,app 分别为 0.13 ± 0.00 和 4.83 ± 0.10 s 1 根据美洛昔康的结合平衡常数 K (12.53 L mol 1 ), 计算得到表观结合速率常数 k on,app 为 1.63 L mol 1 s 1 本法简便快速重复性好, 为评价药物与 β- 环糊精相互作用动力学提供了新的方法关键词 : 定量亲和色谱质谱 ; 美洛昔康 ; β- 环糊精 ; 解离速率常数中图分类号 : R917 文献标识码 : A 文章编号 : (2015) Determination of the interaction kinetics between meloxicam and β-cyclodextrin sing the qantitative high-performance affinity chromatography copled with mass spectrometry WANG Cai-fen 1, 2, LI Zho 1, 2, WANG Xiao-bo 1, LI Hai-yan 2, ZHANG Ji-wen 1, 2*, SUN Li-xin 1* (1. Shenyang Pharmacetical University, Shenyang , China; 2. Shanghai Institte of Materia Medica, Chinese Academy of Sciences, Shanghai , China ) Abstract: The association rate constant and dissociation rate constant are important parameters of the drg-cyclodextrin spermolecle systems, which determine the dissociation of drgs from the complex and the frther in vivo absorption of drgs. However, the crrent stdies of drg-cyclodextrin interactions mostly focs on the thermodynamic parameter of eqilibrim constants (K). In this paper, a method based on qantitative high performance affinity chromatography copled with mass spectrometry was developed to determine the apparent dissociation rate constant (k off,app ) of drg-cyclodextrin spermolecle systems. This method was employed to measre the k off,app of meloxicam and acetaminophen. Firstly, chromatographic peaks of drgs and non-retained solte (racil) on β-cyclodextrin colmn at different flow rates were acqired, and the retention time and variance vales were obtained via the fitting the peaks. Then, the plate heights of drgs (H R ) and racil (H M,C ) were calclated. The plate height of theoretical non-retained solte (H M,T ) was calclated based on the differences of diffsion coefficient and the stagnant mobile phase mass transfer between drgs and racil. Finally, the k off,app was calclated from the slope of the regression eqation between (H R -H M,T ) and k/(1+k) 2, 收稿日期 : ; 修回日期 : 基金项目 : 国家自然科学基金资助项目 ( ). * 通讯作者 Tel / Fax: , jwzhang@simm.ac.cn; Tel: , Fax: , slx04@163.com

2 1168 药学学报 Acta Pharmacetica Sinica 2015, 50 (9): (0.13 ± 0.00) s 1 and (4.83 ± 0.10) s 1 for meloxicam and acetaminophen (control drg), respectively. In addition, the apparent association rate constant (k on,app ) was also calclated throgh the prodct of K (12.53 L mol 1 ) and k off,app. In smmary, it has been proved that the method established in or stdy was simple, efficiently fast and reprodcible for investigation on the kinetics of drg-cyclodextrin interactions. Key words: qantitative high performance affinity chromatography-mass spectrometry; meloxicam; β- cyclodextrin; dissociation rate constant 环糊精包合是改善药物水溶性稳定性的重要制剂技术之一 [1 3], 在环糊精 (cyclodextrin, CD) 超分子给药系统中, 药物与环糊精能发生可逆性结合解离, 其结合速率常数与解离速率常数能够直接影响药物的释放与吸收目前有关药物与大分子相互作用的研究方法分为动态法和静态法 [4], 其中静态法无法体现药物与大分子的动态规律动态法中表面等离子共振技术应用较广泛, 研究中等 ~ 较强相互作用 ( 结合常数 K > 10 5 L mol 1 ) 时, 准确度和重现性较好但由于其是直接检测生物传感器表面的小分子, 不适合研究低浓度或难溶性小分子以及较弱 ~ 中等强度相互作用 [5,6] 定量亲和色谱 (qantitative high performance affinity chromatography) 将可逆结合的溶质与配体中的一方, 与固相载体偶联后填充制备亲和柱, 当溶质随流动相流经亲和柱时, 会与固定相发生选择性相互作用, 据此计算热力学和动力学参数由于可通过多种检测器进行色谱峰的检测, 其在低浓度难溶性溶质, 以及较弱 ~ 中等强度相互作用, 尤其是解离速率常数的测定方面独具优势 [7 9] 美洛昔康与对乙酰氨基酚是临床常用的抗炎与解热镇痛药物, 对乙酰氨基酚与 β-cd 包合后, 溶解性增大, 并起到缓释作用从而降低毒性 [10] ; 美洛昔康水溶性差生物利用度低的缺点限制了其应用, 与 β-cd 形成包合物可以提高药物的溶解度和稳定性 ( 已有市售包合物 ), 增强其生物利用度 [11] 本文以与环糊精相互作用动力学性质较清楚的对乙酰氨基酚为参照, 在前期以紫外检测器检测药物测定其与 β- 环糊精相互作用的表观解离速率常数 (k off,app ) 基础上 [12,13], 利用质谱作检测器, 建立基于塔板高度校正技术的定量亲和色谱质谱法, 获得美洛昔康与 β- 环糊精的 k off,app, 再结合平衡常数 K 计算获得表观结合速率常数 k on,app, 评价药物与 β- 环糊精的相互作用动力学基本理论环糊精及其衍生物可以与多种客分子形成包合物, 在环糊精包合物体系中, 药物 (D) 与环糊精 (CD) 及包合物 (D-CD) 三者之间存在结合与解离的动态平衡 [14] (1) k k on K = (2) off 其中, 结合平衡常数 (K) 是衡量结合程度的热力学参数, 结合速率常数 (k on ) 解离速率常数 (k off ) 是反映包合物形成解离的动力学参数峰轮廓 (peak profiling) 法测定 k off,app 的定量亲和色谱理论峰轮廓法是以常规溶剂为流动相, 对低浓度小体积的溶质, 采用线性洗脱, 测定溶质的洗脱时间和峰宽 [7 9], 前者反映了主分子与客分子结合的强弱, 后者与相互作用的动力学过程相关, 具有进样量少 (pmol~nmol 水平 ) 和易实现高通量测定的特点根据 van Deemter 方程 [15,16], 导致色谱峰展宽的因素包括涡流扩散 (A 项 ) 纵向扩散 (B 项 ) 和传质阻抗 (C 项 ) B H= A+ + C (3) H 为塔板高度, 为线速度, A 项与色谱柱的填充均匀程度和填料的粒径大小有关, B 项主要由待测物质的分子扩散系数决定, C 项表示由待测物质与固定相间相互作用而导致的色谱峰展宽, 是静态流动相传质阻抗 (C sm ) 和固定相传质阻抗 (C s ) 之和根据 Denizot 和 Delaage [17] 的色谱统计理论, 在实验条件 ( 即流动相色谱柱等 ) 相同的情况下, 对于溶质和不保留物质, 色谱峰展宽因素中 A 项 B 项和 C sm 相近 ; 此外, 由于理论不保留物质与固定相间不存在相互作用, 故按照公式 (3) 其固定相传质阻抗为零 (C s 为零 ), C 项为 C sm 溶质和不保留物质的塔板高度中, 仅固定相传质 C s 不同, 对于给定的亲和柱, 有如下公式 [8,18,19] : H - H = C = 2k R M S 2 koff,app (1 + k) (4) H R 为溶质的塔板高度, H M 为不保留物质的塔板高度, k 为溶质的保留因子 (H R -H M ) 对 k/(1+k) 2 作

3 王彩芬等 : 定量亲和色谱质谱研究美洛昔康与 β- 环糊精的相互作用 1169 图, 由线性斜率即可求得 k off,app 理论不保留物质塔板高度的计算按照公式 (4), 由于理论不保留物质不与固定相作用, C s 为零, 故其 van Deemter 方程应为 : BT H M, T = AT + + Csm, T (5) H M,T 为理论不保留物质的塔板高度 ; A T 与 B T 为理论不保留物质的 A 项与 B 项 ; C sm,t 为理论不保留物质的静态流动相传质阻抗但实际测定中, 常规不保留物质如硝酸钠亚硝酸钠和尿嘧啶等, 均会与固定相环糊精发生相互作用, 而且由于其分子尺寸较待测物质小, 故其 B 项也不同于待测物质因此, Denizot 和 Delaage [17] 理论中的与待测物质 B 项相近且不与固定相作用的不保留物质, 仅是理论上的, 实际不存在因此, 实际测定中常规不保留物质的 van Deemter 方程为 : BC H M, C = AC + + ( Csm,C + Cs, C ) (6) H M,C 为常规不保留物质的塔板高度, A C 和 B C 分别为常规不保留物质的 A 项与 B 项, C sm,c 和 C s,c 分别为常规不保留物质的静态流动相和固定相传质阻抗通过实验, 只能测得公式 (6) 中的 H M,C, 公式 (5) 中的 H M,T 不能够直接通过实验测定, 只能根据 H M,C 计算得到对于同一根色谱柱, 公式 (5) 中的 A T 与公式 (6) 中的 A c 相同, 因此对于公式 (5) 只需要计算 B T 与 C sm,t 前期工作中, 本文在已有色谱理论基础上, 根据药物和不保留物质的扩散系数差异与静态流动相传质阻抗, 对常规不保留物质的塔板高度 H M,C 进行校正, 可获得理论不保留物质的 H M,T, 即将公式 (5) 转化为公式 (7): H BC AC + + C λ M,T = sm, T (7) 具体而言, 通过拟合常规不保留物质的 van Deemter 方程, 可以得到 A C 和 B C, 再根据药物和不保留物质扩散系数的差异可计算得到校正因子 λ 根据色谱柱填料的粒径保留因子及扩散系数等计算 C sm,t, 将 A C B T 及 C sm,t 代入公式 (7), 即可计算 H M,T [12, 13, ( 详细过程参见文献 20 22] ) 材料与方法仪器和试剂 Agilent 1260 液相色谱仪, 包括 G1312C 型二元输液泵 G1367E 型自动进样器 G1316A 型柱温箱 G1322A 型脱气机 ( 美国 Agilent 公司 ); G6460A 型三重四极杆串联质谱仪, 配备电喷雾电离源 (ESI 源 ) 以及 MassHnter B 数据采集软件 ( 美国 Agilent 公司 ); Micro 21R 离心机 ( 美国 Thermo Fisher 公司 ); β- 环糊精柱 (50 mm 2.1 mm, 5 μm) 由中国科学院大连化学物理研究所提供 ; 美洛昔康对乙酰氨基酚和尿嘧啶 ( 纯度 > 99%) 购自大连美仑生物技术有限公司美洛昔康供试品溶液取美洛昔康对照品适量, 加甲醇制成约 0.2 mg ml 1 美洛昔康储备溶液取该储备溶液适量, 用流动相稀释成约 2.0 μg ml 1, 作为美洛昔康供试品溶液对乙酰氨基酚供试品溶液取对乙酰氨基酚对照品适量, 加甲醇制成约 1.0 mg ml 1 对乙酰氨基酚储备溶液取该储备溶液适量, 用流动相稀释成约 0.5 μg ml 1, 作为对乙酰氨基酚供试品溶液尿嘧啶取尿嘧啶对照品适量, 加水制成约 1.0 mg ml 1 尿嘧啶储备溶液取该储备溶液适量, 用流动相稀释成约 0.1 μg ml 1, 作为尿嘧啶供试品溶液色谱条件色谱柱为 β- 环糊精柱 (50 mm 2.1 mm, 5 μm); 流动相为 10 mmol L 1 NH 4 Ac (ph 6.80) 乙腈 (83 17); 流速为和 0.6 ml min 1 ; 进样量为 5 μl; 柱温为 25 质谱条件采用电喷雾离子源 (ESI 源 ), 离子检测方式为多反应监测 (MRM), 干燥气 (N 2 ) 流速为 8 L min 1, 干燥气温度为 300 ; 鞘气 (N 2 ) 流速为 10 L min 1, 鞘气温度为 350 ; 雾化气压力为 310 kpa; 碎裂电压和碰撞能量分别为 110 V 和 4 ev ( 美洛昔康 ) 122 V 和 16 ev ( 对乙酰氨基酚 ) 和 80 V 和 13 ev ( 尿嘧啶 ); 用于定量分析的离子反应分别为 m/z ( 美洛昔康 ) m/z ( 对乙酰氨基酚 ) 和 m/z ( 尿嘧啶 ) k off,app 的测定以美洛昔康为测定药物, 对乙酰氨基酚为对照药物, 尿嘧啶为常规不保留物质, 分别于不同流速 ( 和 0.6 ml min 1 ) 下进样分析, 采集其在 β- 环糊精柱上的色谱峰 (n = 3) 采用 Peakfit 4.12 软件, 按照指数修正的高斯分布 (EMG) 函数, 对色谱峰进行拟合 ( 拟合相关系数 > 0.99), 得到保留时间和半峰宽, 计算对应的塔板高度采用 Origin 8SR4 软件, 根据 van Deemter 方程, 对尿嘧啶的线速度与塔板高度 H M,C 的关系进行拟合, 得到 B C 和 (C sm,c +C s,c ) 由 Wilke-Chang 方程可知, 色谱条件相同 ( 即溶剂相同 ) 时, λ 为药物与尿嘧啶正常沸点摩尔体积 2/3 次幂 (V 2/3 [12, ) 的比值 13] 再根据 β- 环糊精柱填料粒径 d p (5 μm), 得到 C sm,t ( 详见参考文

4 1170 药学学报 Acta Pharmacetica Sinica 2015, 50 (9): [12, 献 13] ), 进而由公式 (7) 计算得到 H M,T 最后, 以 k/(1+k) 2 为横坐标, H R -H M,T 为纵坐标, 进行线性回归, 斜率即为 2/k off,app 结果与讨论 1 理论不保留物质塔板高度 H M,T 的计算药物环糊精超分子系统中, 环糊精与小分子的作用弱 (K < 10 5 L mol 1 ) 结合范围广特异性相对较差, 主要体现在环糊精与常规色谱不保留物质均有相互作用 [23], 导致实际色谱测定中难以找到与环糊精不发生相互作用的不保留物质, 仅是理论存在的因此, 本文对常规定量亲和色谱法进行改进, 通过测定常规不保留物质的塔板高度, 对其进行校正, 获得理论不保留物质的塔板高度, 使定量亲和色谱法可以应用于药物环糊精超分子体系的 k off,app 测定通过色谱测定色谱峰拟合获得了不同流速条件下 ( ml min 1 ) 美洛昔康的塔板高度 (H R ) 与尿嘧啶的塔板高度 (H M,C ) 图 1 为塔板高度 H 与线速度的关系图对于美洛昔康, 随着线速度的增加, 其塔板高度 H R 由 cm 增加到 cm, 且 H R 与线性关系良好 (r = 0.994), 表明固定相传质阻抗是导致色谱峰展宽的主要因素但不保留物质尿嘧啶的塔板高度 H M,C 明显小于美洛昔康的 H R, 且随着线速度的增加, H M,C 虽有增加, 但幅度不大 ( 在 ~ cm 内 ), H M,C 与之间线性关系相对较差 (r = 0.980) 根据公式 (3) [15, 16], 美洛昔康与 β- 环糊精柱的相互作用明显强于不保留物质尿嘧啶根据 van Deemter 方程, 对美洛昔康和不保留物质尿嘧啶的 H- 关系进行了拟合 ( 表 1) 美洛昔康和不保留物质尿嘧啶的 van Deemter 方程拟合结果中, C 项均大于 A 项 B 项, 分别是和 cm, 表 Table 1 Fitting reslts of the van Deemter eqation for meloxicam and racil on β-cyclodextrin colmn Parameter Meloxicam Uracil A B C Adj. R 明它们的塔板高度 (H) 主要由药物与 β- 环糊精结合的动力学过程贡献理论不保留物质应不与 β- 环糊精发生相互作用, 塔板高度 (H M,T ) 中 C 项应比较小或接近于零, 但尿嘧啶的 van Deemter 方程中以 C 项为主, 因此有必要根据公式 (7) 对尿嘧啶的塔板高度 H M,C 进行校正, 获得理论不保留物质的塔板高度 H M,T 此外, 表 1 中尿嘧啶的 B 项 ( 大于美洛昔康的 B 项约 4 倍 ), 校正后为 cm 2 s 1, 接近美洛昔康的 B 项, 进一步说明由于尿嘧啶分子量小, 扩散系数 D 较大, 故 B 项对尿嘧啶的色谱峰展宽贡献较大, 需要校正 2 单流速条件下 k off,app 的测定当流速由低到高变化时, 美洛昔康对乙酰氨基酚在 β- 环糊精柱上的保留逐渐减弱, 保留时间 t R 逐渐减小, 分别为 41.12~21.28 min 和 1.31~0.65 min; 色谱峰变窄, 半峰宽 W 1/2 逐渐降低, 分别为 7.28~ 5.26 min 和 0.16~0.11 min ( 图 2) Figre 2 Typical mltiple reaction monitoring chromatograms for drgs on β-cyclodextrin colmn at different flow rates. A: Meloxicam; B: Acetaminophen Figre 1 Plate heights for meloxicam and racil on β-cyclodextrin colmn. : Plate heights for meloxicam (H R); : Plate heights for racil (H M,C); : Plate heights for theoretical non-retained sbstance (H M,T); n = 3, x ± s 在计算得到 H M,T 的基础上, 根据公式 (4) 可计算 k off,app 不同流速条件下 ( 和 0.6 ml min 1 ), 在 β- 环糊精柱上保留强出峰晚的美洛

5 王彩芬等 : 定量亲和色谱质谱研究美洛昔康与 β- 环糊精的相互作用 1171 昔康, 其 k off,app 分别为 0.18 ± ± ± 0.01 和 0.15 ± 0.00 s 1, 对乙酰氨基酚的 k off,app 分别为 ± ± ± 0.28 和 7.25 ± 0.24 s 1 ( 表 2) 上述数据表明, 单流速计算 k off,app 时, 随着流速增加, 美洛昔康对乙酰氨基酚与 β- 环糊精相互作用的 k off,app 逐渐减小 ( 图 3), 由此可见, 仅通过单流速测定 k off,app, 结果误差较大 3 多流速条件下 k off,app 的测定根据公式 (4), 以美洛昔康 ml min 1 4 个流速条件下的 H R -H M 对 (k)/(1+k) 2 作图 ( 图 4), 线性关系良好 ( 相关系数为 0.992), 直线斜率为 ± 0.54, 截距为 0.01 ± 0.00 ( 接近于零 ), 进一 Table 2 The k off,app vales of meloxicam and acetaminophen by the single and mltiple flow rate methods. n = 3, x ± s k off,app /s 1 Method /cm s 1 Meloxicam Acetaminophen Single flow rate ± ± ± ± ± ± ± ± 0.24 Mltiple flow rate 0.13 ± ± 0.10 Figre 3 Effect of the flow rate on the k off,app determined by the single flow rate method. n = 3, x ± s Figre 4 Plot of (H R-H M,T) verss (k)/(1+k) 2 according to Eq. 4 for injections of meloxicam and racil on β-cyclodextrin colmn [the fitting eqation is y = (15.70 ± 0.54) x (0.01 ± 0.00)], with the correlation coefficient of 0.992, n = 3 步表明美洛昔康的塔板高度主要受固定相传质阻抗影响根据直线的斜率可计算美洛昔康与 β- 环糊精相互作用的 k off,app, 即多流速条件下的 k off,app 为 0.13 ± 0.00 s 1 由于流速对 k off,app 的测定结果有一定影响, 本文考察了对乙酰氨基酚的流速范围 (0.2~0.8 ml min 1 ) 是否适用于美洛昔康结果, 由于美洛昔康与环糊精作用相对较强, 流速为 0.3 ml min 1 时, 美洛昔康的保留时间已约为 41 min, 半峰宽约为 7 min, 当流速为 0.2 ml min 1 时, 已不能将药物很好洗脱, 且溶质与 β- 环糊精的相互作用会达到平衡, 不能反映其动力学过程 ; 当流速为 0.8 ml min 1 时, 则柱压较高, 会损耗色谱柱的寿命因此, 考虑到实验效率及色谱柱寿命两方面因素, 选择和 0.6 ml min 1 进行测定不同药物之间进行推广时, 以能把药物洗脱下来, 又具有可以接受的柱压为主要原则, 考虑到误差计算时涉及到线性回归, 应 3 个流速进行测定此外, 本文对比了单流速与多流速的测定结果 ( 表 2), 单流速法中高流速的测定结果与多流速法接 [18, 19] 近, 与文献结果一致以弱保留的对乙酰氨基酚为例, 在 0.3 ml min 1 时 k off,app 是 ± 0.29 s 1, 约为高流速结果 (7.25 ± 0.24 s 1 ) 的 2 倍, 为多流速拟合结果 (4.83 ± 0.10 s 1 ) 的 3 倍, 差异较大考虑到上述流速的影响, 对于本文中的 β- 环糊精柱 (50 mm 2.1 mm, 5 μm), 单流速测定时 0.6 ml min 1 可获得相对较为准确可靠的 k off,app [24] 文献报道采用毛细管电泳 (ECEEM) 方法, 测定 4 种非甾体抗炎药与 α-cd β-cd 的动力学常数本文结果 (k off,app 在 0.13~14.72 s 1 之间 ) 与 ECEEM 法测定得到的结果 (k off,app 在 4.3~33 s 1 之间 ) 较为接近 [25], 表明本法 k off,app 测定结果准确可靠由于对乙酰氨基酚在前期实验中对样品浓度流速流动相组成等因素研究的比较深入, 且保留时间短, 故作为内部参照对象, 用于柱效的监控本文测得对乙酰氨基酚的 k off,app 为 (4.83 ± 0.10 s 1 ), 较前期测定结果相对偏大 [ 前期以 10 mmol L 1 NH 4 Ac 为流动相 (ph 6.80), 紫外检测器, 多流速法测得对乙酰氨基酚的 k off,app 值为 1.82 ± 0.01 s 1 [12] ] 原因是本文为更好地洗脱美洛昔康, 流动相中加入了 17% 乙腈, 有机溶剂的添加会使 k off,app 增大 [13] 本文结果表明已建立的基于塔板高度校正技术的定量亲和色谱法, 除适用于紫外检测器外, 同样适用于质谱检测, 大大扩展了可检

6 1172 药学学报 Acta Pharmacetica Sinica 2015, 50 (9): 测药品的范围同时, 高灵敏度能降低供试品浓度, 有利于延长 β- 环糊精色谱柱的使用寿命, 同时也为多种药物 k off,app 的同时测定奠定了理论基础动力学参数 k on,app 表示药物与 β- 环糊精结合快慢的正向结合速率常数, k off,app 表示反向解离速率常数, 结合平衡常数 K 则反映药物与 β- 环糊精间亲和能力的大小 [26] 本文测得美洛昔康在 ph 为 6.80 温度为 25 条件下, k off,app 为 0.13 ± 0.00 s 1, K 为 L mol 1 ( 由相溶解度法测定 [27] ), 通过公式 (1) 计算 k on,app 为 1.63 L mol 1 s 1 结论本文基于定量亲和色谱技术, 对常规不保留物质的塔板高度进行了校正, 发展了测定药物 -β- 环糊精超分子表观解离速率常数 k off,app 的定量亲和色谱质谱方法, 测得多流速条件下美洛昔康的 k off,app 为 0.13 ± 0.00 s 1, 进而得到表观结合速率常数 k on,app 为 1.63 L mol 1 s 1 利用质谱检测器高灵敏度的优点, 大大降低了待测物质的进样浓度, 有利于延长色谱柱的使用寿命本法简便快速重复性好, 为评价药物与 β- 环糊精相互作用动力学提供了新的方法 References [1] Bai XL, Gao YL. Combined effect of cosolvent and cyclodextrin on solbilization of insolble drgs [J]. Pharm Sin ( 药学学报 ), 2006, 41: Acta [2] Xia Y, Qi LY, Jin Y. Preparation and characterization of indomethacin/poly(n-isopropylacrylamide)-β-cyclodextrin complex with temperatre-sensitivity [J]. ( 药学学报 ), 2005, 40: Acta Pharm Sin [3] Li X, Go Z, Hao JB, et al. Synergetic taste masking of lipid coating and β-cyclodextrin inclsion [J]. 学学报 ), 2014, 49: Acta Pharm Sin ( 药 [4] Banker MJ, Clark TH. Plasma/serm protein binding determinations [J]. Crr Drg Metab, 2008, 9: [5] He XY, Coombs D, Myszka DG, et al. A theoretical and experimental stdy of competition between soltion and srface receptors for ligand in a biacore flow cell [J]. Math Biol, 2006, 68: Bll [6] Edwards DA. Refining the measrement of rate constants in the BIAcore [J]. Math Biol, 2004, 49: [7] Tong ZH, Hage DS. Characterization of interaction kinetics between chiral soltes and hman serm albmin by sing high-performance affinity chromatography and peak profiling [J]. J Chromatogr A, 2011, 1218: [8] Schiel JE, Hage DS. Kinetic stdies of biological interactions by affinity chromatography [J]. J Sep Sci, 2009, 32: [9] Hage DS, Angizola JA, Bi C, et al. Pharmacetical and biomedical applications of affinity chromatography: recent trends and developments [J]. J Pharm Biomed Anal, 2012, 69: [10] Zhang H. Electrochemical and florescence spectral stdy on inclsion complexes of p-acetaminophen with β-cyclodextrin [J]. J Ningxia Univ Nat Sci ( 宁夏大学学报自然科学 ), 2011, 32: [11] Wang RL, Sn TJ, Pei XL, et al. Inclsion Interaction of meloxicam with β-cyclodextrin derivatives [J]. Chin J Appl Chem ( 应用化学 ), 2008, 25: [12] Li HY, Ge JW, Go T, et al. Determination of the kinetic rate constant of cyclodextrin spramoleclar systems by high performance affinity chromatography [J]. J Chromatogr A, 2013, 1305: [13] Wang CF, Ge JW, Zhang JW, et al. Mltianalyte determination of the kinetic rate constants of drg-cyclodextrin spermolecles by high performance affinity chromatography [J]. J Chromatogr A, 2014, 1359: [14] Bohne C. Spramoleclar dynamics stdied sing photophysics [J]. Langmir, 2006, 22: [15] Kirkp L, Foot M, Mlholland M. Comparison of eqations describing band broadening in high-performance liqid chromatography [J]. J Chromatogr A, 2004, 1030: [16] Walker EA, Palframan JF. Techniqes in gas chromatography. 2. Developments in van Deemter rate theory of colmn performance a review [J]. Analyst, 1969, 94: 609. [17] Denizot FC, Delaage MA. Statistical-theory of chromatography-new otlooks for affinity chromatography [J]. Proc Natl Acad Sci USA, 1975, 72: [18] Yoo MJ, Hage DS. Evalation of silica monoliths in affinity microcolmns for high-throghpt analysis of drg-protein interactions [J]. J Sep Sci, 2009, 32: [19] Hage DS, Angizola J, Barnaby O, et al. Characterization of drg interactions with serm proteins by sing highperformance affinity chromatography [J]. Crr Drg Metab, 2011, 12: [20] Wilke CR, Chang P. Correlation of diffsion coefficients in dilte soltions [J]. Am Inst Chem Eng, 1955, 1: [21] Poling BE, Prasnitz JM, John Pal OC. The Properties of Gases and Liqids: Chapter for [M]. 5th ed. New York: Pressre-Volme-Temperatre Relationships of Pre Gases and

7 王彩芬等 : 定量亲和色谱质谱研究美洛昔康与 β- 环糊精的相互作用 1173 Liqids, 2000: [22] Schiel JE, Ohnmacht CM, Hage DS. Measrement of drg-protein dissociation rates by high-performance affinity chromatography and peak profiling [J]. Anal Chem, 2009, 81: [23] Malik A, Jinno K. Determination of void dead volme of liqid-chromatographic colmns containing β-cyclodextrin as the stationary phase. 1. Existing methods for the determination of LC colmn dead volme a srvey of literatre [J]. Chromatographia, 1990, 30: [24] Al-Sofi W, Reija B, Felekyan S, et al. Dynamics of spramoleclar association monitored by florescence correlation spectroscopy [J]. Chemphyschem, 2008, 9: [25] Mironov GG, Okhonin V, Gorelsky SI, et al. Revealing eqilibrim and rate constants of weak and fast noncovalent interactions [J]. Anal Chem, 2011, 83: [26] Kang J, Kmar V, Yang D, et al. Cyclodextrin complexation: inflence on the solbility, stability, and cytotoxicity of camptothecin, an antineplastic agent [J]. Er J Pharm Sci, 2002, 15: [27] Bandarkar FS, Vavia PR. An optimized commercially feasible milling techniqe for moleclar encapslation of meloxicam in β-cyclodextrin [J]. Drg Dev Ind Pharm, 2011, 37: Acta Pharmacetica Sinica B 药学学报英文刊简介 Acta Pharmacetica Sinica B(CN: /R,ISSN: ) 是由中国药学会和中国医学科学院药物研究所共同主办, 主编为中国医学科学院药物研究所所长蒋建东教授本刊是由药学学报编辑部与荷兰 Elsevier B.V. 出版公司合作出版的药学综合性英文期刊, 是药学学报的系列期刊, 创刊于 2011 年 6 月其办刊宗旨是搭建世界药学前沿和高端学术交流平台, 引领和促进本学科的发展, 展示中国学者在药学领域研究的特色和成果, 增强其国际影响力, 推动我国药学事业的发展报道范围覆盖化学药物中药和天然药物抗生素蛋白质多肽类药物生物技术药物等的合成分离鉴定质量控制药理制剂代谢等的原创性创新性科研成果, 栏目设综述与述评研究论文研究简报 Acta Pharmacetica Sinica B 已被国外数据库收录, 包括 :Chemical Abstracts,Scops,Excerpta Medica, Abstract Jornal,DOAJ,Pbget,Free Medical Jornals,JornalTOCs,ABC- Chemistry: Free Chemical Information, Worldcat 等 2012 年荣获中国科协优秀国际科技期刊三等奖创办英文科技期刊项目的支持 Acta Pharmacetica Sinica B 采用开放获取 (OA) 出版模式, 全世界读者可以免费阅读和下载本刊发表的文章全文期刊内容在世界上最大的出版平台 ScienceDirect 发布, 论文内容传播速度快范围广影响大采用国际通用的英文投审稿系统,1 个月完成审稿,4~5 个月上线出版目前不收取版面费和审稿费, 稿酬从优 ; 免费为所录用的非英语母语作者的文章进行语言润色修改, 并根据文章质量及被引用情况, 评选优秀论文, 向优秀论文的作者颁发荣誉证书和奖金编辑部地址 : 北京市先农坛街 1 号药学学报编辑部邮编 yxxb@imm.ac.cn 电话 : 网址 : 欢迎广大药学研究者下载阅读全文并踊跃投稿!

说明为了反映教运行的基本状态, 为校和院制定相关政策和进行教建设与改革提供据依据, 校从程资源 ( 开类别开量规模 ) 教师结构程考核等维度, 对 2015 年春季期教运行基

说明为了反映教运行的基本状态, 为校和院制定相关政策和进行教建设与改革提供据依据, 校从程资源 ( 开类别开量规模 ) 教师结构程考核等维度, 对 2015 年春季期教运行基内部资料东北师范大教运行基本状态据报告 2015 年春季期教务处 2015 年 10 月 27 日说明为了反映教运行的基本状态, 为校和院制定相关政策和进行教建设与改革提供据依据, 校从程资源 ( 开类别开量规模 ) 教师结构程考核等维度,