黄石市蓝图生物科技有限公司 仅供科研使用, 不得用于临床检验 人纤溶酶原激活物抑制因子 1(PAI-1) 定量检测试剂盒 (ELISA) 说明书 货号 :LT-E12073 使用前, 请务必仔细阅读说明书, 如有不清楚的, 请拨打 24h 技术支 持专线 : 或

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1 仅供科研使用, 不得用于临床检验 人纤溶酶原激活物抑制因子 1(PAI-1) 定量检测试剂盒 (ELISA) 说明书 货号 :LT-E12073 使用前, 请务必仔细阅读说明书, 如有不清楚的, 请拨打 24h 技术支 持专线 : 或 , 咨询清楚再进行实验 网址 : 电话 :

2 产品名称 通用名称 : 人纤溶酶原激活物抑制因子 1(PAI-1) 定量检测试剂盒 (ELISA) 英文名称 :Human plasminogen activator inhibitor 1 (PAI-1) ELISA KIT 包装规格 48 人份 / 盒,96 人份 / 盒 预期用途 仅供科研使用, 定量检测血清 血浆 细胞培养上清液中人纤溶酶原激活物抑制因子 1 (PAI-1) 的浓度 检验原理 本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验 (ELISA) 在预包被抗人纤溶酶原激活物抑 制因子 1(PAI-1) 抗体 ( 固相抗体 ) 的微孔酶标板中, 加入人纤溶酶原激活物抑制因子 1 (PAI-1) 校准品和待测样本, 再加入另一株 HRP 标记的抗人纤溶酶原激活物抑制因子 1 (PAI-1) 抗体 ( 酶标抗体 ), 经过温育与充分洗涤, 去除未结合的组分, 在微孔板固相表面 形成固相抗体 - 抗原 - 酶标抗体的夹心复合物 加底物 A 和 B, 底物在 HRP 催化下, 产生蓝色 产物, 在终止液 (2M 硫酸 ) 作用下, 最终转化为黄色, 在酶标仪上测定吸光度 (OD 值 ), 吸 光度 (OD 值 ) 与待测样品中人纤溶酶原激活物抑制因子 1(PAI-1) 的浓度正相关 拟合校 准品曲线, 可以计算出样本中人纤溶酶原激活物抑制因子 1(PAI-1) 的浓度 主要组成成分 主要成分 组分 数量 主要成分 校准品 0.5ml/ 管 *6 管 抗原配制的 6 个浓度标准品 包被微孔板 96T 预包被固相抗体 HRP 标记抗体 6mL HRP 标记的检测抗体 样本稀释液 6mL 缓冲液 底物液 A 6mL 过氧化脲工作液 仅供科研使用, 不得用于临床诊断

3 底物液 B 6mL TMB 工作液 终止液 6mL 2M 硫酸 20 浓缩洗涤液 30mL 含 0.15%Tween20 的 PBS 终止液 6mL 2M 硫酸工作液 说明书 1 份 -- 自封袋 1 个 -- 不干胶 2 片 -- 校准品浓度依次为 : ng/mL 校准品已经通过测试, 结果表明 HBs 抗原阴性,HIV1 HIV2 和 HCV 抗体阴性, 由于不 存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质, 本品必须按照具有潜在的感染性进行处理, 处理过程应当遵循通用的安全措施 需要但未提供的材料及耗材 1 能够检测 450 nm 吸光度的酶标仪 2 精密移液器及一次性吸头 3 蒸馏水或去离子水 4 洗瓶或者自动洗板机 5 37 水浴锅或恒温箱 6 1L 量筒 7 无粉一次性乳胶手套 8 稀释用聚丙烯试管 储存条件及有效期 保存, 切勿冷冻, 有效期 6 个月 2 开封使用后, 包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中, 密闭自封袋, 并将全部试剂放回 2-8 冰箱 3 开封后, 按照建议的条件保存, 校准品 包被微孔板和 HRP 标记抗体, 有效期为 28 天, 其他成分在标签标明的有效期内是稳定的 适用仪器 仅供科研使用, 不得用于临床诊断

4 半自动的酶标仪, 如 Thermo MK3, 或者国产酶标仪 样本要求 样本类型和采集以下只是列出样品采集的一般指南 所有样本采集过程中, 不得使用叠氮钠做为防腐剂 1 细胞培养上清:4000rpm 条件下离心 20min, 去除细胞颗粒和聚合物, 上清液保存在 - 20 以下, 避免反复冻融 2 血清: 使用不含热原和内毒素的试管, 操作过程中避免任何细胞刺激,4000rpm 条件下离心 20min, 小心地分离出血清, 保存在 - 20 以下, 避免反复冻融 3 血浆: 肝素,EDTA, 或柠檬酸钠作为抗凝剂 在 4000rpm 条件下, 离心 20 分钟取上清, 血浆保存在 -20 以下, 避免反复冻融 样本保存和稳定性样本在 2-8 条件下, 可以储存 72h, 或者在 - 20 储存 6 个月 样本收集后, 不是一次检测完, 请按一次用量分装冻存, 避免反复冻融, 使用时在室温下解冻, 确保样品均匀充分解冻 试剂准备 1 使用前, 所有的组分都要至少复温 30min, 确保充分复温到室温 2 浓缩洗涤液: 从冰箱取出的浓缩洗涤液, 会有结晶产生, 这属于正常现象, 水浴加热使结晶完全溶解 浓缩洗涤液与蒸馏水, 按 1:20 稀释, 即 1 份的浓缩洗涤液, 添加 19 份的蒸馏水 3 底物: 底物液 A 和 B, 在使用前, 按 1:1 体积充分混合, 混合后 15 分钟内使用 操作程序 1 所有试剂和组分都先恢复到室温, 标准品 质控品和样品, 建议做复孔 2 按前面试剂准备中描述的方法, 配制好试剂盒各种组分的工作液 3 从铝箔袋中取出所需板条, 剩余的板条用自封袋密封放回冰箱 仅供科研使用, 不得用于临床诊断

5 4 设置标准品孔 样本孔和空白孔, 标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL, 样本孔加待测样本 50μL, 空白孔不加 5 除空白孔外, 标准品孔和样本孔, 加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体 100μL 6 用封板膜盖住反应板,37 水浴锅或恒温箱温育 60min 7 揭开封板膜, 弃去液体, 吸水纸上拍干, 每孔加满洗涤液, 静置 20s, 甩去洗涤液, 吸水纸上拍干 8 如此重复 4 次 ( 共洗板 5 次 ) 若使用自动洗板机, 请按洗板机操作程序进行洗板, 添加浸泡 20s 的程序, 可以提高检测的精度 洗板结束, 加底物前, 要在干净不掉屑的纸上, 充分拍干反应板 9 将底物 A 和 B 按 1:1 体积充分混合, 所有孔中加入底物混合液 100μL 用封板膜盖住反应板,37 水浴锅或恒温箱温育 15min 10 所有孔加入终止液 50μL, 在酶标仪上读取各孔吸光度 (OD 值 ) 检验结果的解释 检测完成后, 以标准品浓度做为纵坐标, 对应的吸光度 (OD 值 ) 作为横坐标, 利用计算机软件, 采用四参数 Logistic 曲线拟合 (4-pl), 创建标准曲线方程, 通过样本的吸光度 (OD 值 ), 利用方程计算样品的浓度值 如果样品被稀释, 通过上述方法测的的浓度值, 要乘以稀释倍数, 才是样品的最终浓度 检验方法的局限性 1 仅供科研使用, 不得用于临床诊断 2 在试剂盒标示的有效期内使用, 过期产品不得使用 3 跟其他厂家的试剂盒或者组分不能混用 4 使用试剂盒配套的样品稀释液 5 如果样本值高于标准曲线最高浓度, 请用检测缓冲液稀释样本, 并重新检测 如果细胞培养上清样本需要较大的稀释倍数, 请用细胞培养基进行适度稀释 6 待测样本中存在的人抗鼠等异嗜抗体会干扰检测结果, 检测前, 请排除该因素 仅供科研使用, 不得用于临床诊断

6 7 通过其他方法得到的检测结果, 与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性 产品性能指标 1 物理性能试剂盒的各液体组分应澄清透明 无沉淀或者絮状物 微孔板铝箔袋应真空包装, 无破损漏气 2 剂量反应曲线线性校准品剂量反应曲线相关系数 r 值, 大于等于 精密度批内精密度 : 三组已知的高 中 低浓度样品, 进行二十次在同一个板块内精度评估 批内变异系数 CV% 小于 10% 批间精密度 : 三组已知的高 中 低浓度样品, 进行二十次在不同板块内精度评估 批间变异系数 CV% 小于 15% 4 灵敏度最低检出剂量小于 0.1ng/mL 5 回收率三组已知的高 中 低浓度样品, 进行五次回收率评估, 回收率在 85%-115% 之间 6 特异性本试剂盒识别天然和重组人纤溶酶原激活物抑制因子 1(PAI-1), 与结构类似物无交叉 7 稳定性 2-8 保存, 有效期 6 个月 注意事项 生物安全 1 检测必须符合实验室管理规范的规定, 严格防止交叉污染, 所有样品 洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置 仅供科研使用, 不得用于临床诊断

7 2 试剂盒的液体组分中, 含有 proclin-300 防腐剂, 可能引起皮肤过敏反应, 避免吸入烟雾与皮肤接触 3 底物液对皮肤 眼睛和上呼吸道有刺激作用, 避免吸入烟雾 戴上防护手套, 实验完成后彻底洗手 4 试剂盒中的终止液为酸性溶液, 在使用终止液时, 请佩戴防护服, 及防护眼睛 手及面部的设施 5 本试剂盒用于科学研究, 不能用于诊断治疗 6 请不要使用其他批号或其他来源的试剂替代本试剂盒中的试剂 技术要点 1 重溶或者混合蛋白溶液时, 避免起泡 2 加标准品与样本时, 每个标准品浓度和样本都要更换移液枪头, 公共组分应该悬臂加样, 避免交叉污染 3 合适的温育时间, 和充分的洗涤步骤, 是保证实验结果准确性的必要条件 4 底物溶液为无色液体, 保存过程中变为蓝色, 代表底物溶液已经失效, 不得使用 5 终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致, 加入终止液后, 蓝色底物产物, 会瞬间变为黄色 6 实验中, 用剩的板条, 应立即放回自封袋中, 密封 ( 低温干燥 ) 保存 7 所有液体组分, 使用前充分摇匀, 严格按照说明书标明的时间 加样量及加样顺序进行温育操作 废物处理所有使用或未使用的试剂, 所有污染性的一次性材料, 应当遵循传染性或潜在传染性产品的处理程序, 每个实验室都有责任根据其实验的类型和危险性级别, 进行废物和污物的处理, 同时要严格依照有关规定对待所有的废物和污物 基本信息 企业名称 : 生产地址 : 湖北省黄石市黄石港区磁湖路 41 号仅供科研使用, 不得用于临床诊断

8 固定电话 : 网 邮 址 : 箱 说明书批准日期及修改日期 批准日期 : 第一次修改日期 : 仅供科研使用, 不得用于临床诊断