A1010A0202 Mouse IL-2 ELISA Kit 说明书

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1 小鼠白介素 2 酶联免疫试剂盒 Mouse IL-2 ELISA Kit 用于血清, 血浆, 细胞上清及其他生物体液中小鼠白介素 2 的检测 货号 :A1010A tests 仅供科研使用, 勿用于药物 临床检测 联系地址 : 上海市闵行区罗锦路 98 号 2 幢 5 楼, 邮编 : 联系电话 : , web: mail: lab@biotnt.com

2 检测原理 : 本试剂盒采用双抗夹心法 用抗 Mouse IL-2 抗体包被于酶标板上, 标准品和样本中的 Mouse IL-2 与单抗结合, 加入生物素化的抗 Mouse IL-2, 形成免疫复合物连接在板上, 辣根过氧化物酶标记的 streptavidin 与生物素结合, 加入底物工作液显蓝色, 最后加终止液, 在 450nm 处测 OD 值,Mouse IL-2 浓度与 OD 值成正比, 可通过绘制标准曲线求出标本中 Mouse IL-2 的浓度 试剂盒组份 (2-8 保存 ) 1. 酶标板 (coated wells) 96 test; 2. 稀释液 I(Standard Diluent I) 10 ml; 3. 8ng 标准品 (standards) 2 vial; 4. 生物素化二抗 (Biotinylated Antibody) 11 ml; 5. 亲和链霉素 - 辣根过氧化物酶结合物 (Streptavidin- HRP Conjugate) 11ml; 浓缩洗涤液 (Wash Buffer) 50 ml; 7. 显色液 A(Color Reagent A) 6 ml; 8. 显色液 B(Color Reagent B) 6 ml; 9. 终止液 (Stop Solution) 12 ml; 未提供的试剂 仪器和耗材 : 1. 单道或多道 (8 道或 12 道 ) 移液器及移液器枪头 :10-200ul 和 ul; 2. 多道 (8 道或 12 道 ) 移液器试剂存放槽 ; 3. EP 管及试剂配置容器 ; 4. 圆柱形量筒 :100mL,200mL,500mL 和 1L; 5. 可在 450nm 处进行读数的酶标仪 ; 6. 洗瓶或自动洗板机 ; 7. 蒸馏水或去离子水 ; 8. 封板膜或板盖 ; 9. 乳胶手套 ; 10. 吸水纸 ; 注意事项 : 1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果 所有试剂都必须在使用前达到室温 使用后立即冷藏保存试剂 2. 洗板不正确可以导致不准确的结果 在加入底物前确保尽量吸干孔内液体 温育过程中不要让微孔干燥掉 3. 消除板底残留的液体和手指印, 否则影响 OD 值 4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色, 已经变蓝的底物液不能使用 5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果

3 6. 在储存和温育时避免强光直接照射 7. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发出来的强烈气体 任何漂白成分都会破坏试剂盒中反映试剂的生物活性 8. 标准孔及待测样本均建议做复孔, 每次测定应同时做标准曲线, 请合理安排预实验 9. 不能使用过期产品 样本与试剂准备 : 1. 收集标本 : 血清, 血浆 (EDTA, 肝素抗凝 ), 细胞培养上清液, 组织匀浆等尽早检测, 2-8 保存 48 小时, 更长时间需冷冻 (-20 或 -80 ) 保存, 避免反复冻融 2. 标准品配制 : 使用前加入 1ml 稀释液 I 复溶标准品, 充分混匀, 配成 8ng/ml 的溶液 ( 此溶液可进行分装,-20, 有效期约 1 个月 ); 准备一支空 EP 管, 取 250ul 的 8ng/ml 标准品复溶液至空 EP 管中, 加入 750ul 稀释液 I, 配成浓度为 2000pg/ml 的标准品溶液 ( 标准曲线最高点 ); 再准备六支空 EP 管, 分别加入 500ul 稀释液 I, 吸取 2000pg/ml 的标准品溶液 500ul 加入第一管中, 充分混匀, 从第一管中取 500ul 加到第二管中, 充分混匀, 如此反复对半稀释至浓度 62.5pg/ml 的标准品溶液 ; 另取一空白 EP 管加入足量的稀释液 I, 设为空白对照 2000pg/ml 1000pg/ml 500pg/ml 250pg/ml 125pg/ml 62.5pg/ml 31.25pg/ml 3. Biotinylated Antibody: 即用型 平衡到室温后直接使用 4. Streptavidin-HRP Conjugate: 即用型 平衡到室温后直接使用 5. 显色液配制 :A 液和 B 液做 1:1 配制, 即配即用, 可根据使用量临时配制 ( 不稳定 ), 不要配制过多的显色液 6. 1 洗涤液配制 : 用蒸馏水 1:20 倍稀释 ( 示例 :1ml 20 浓缩洗涤液加入 19ml 蒸馏水 ); 操作步骤 : 1. 加样 : 加入相对应标准品, 待测样品各 100ul, 封板, 充分混匀置 37 温育 60 分钟 ; 2. 洗板 : 用 1 洗涤液将反应板充分洗涤 4 次, 在吸水纸上拍干 ; 3. 每孔加入已稀释 1 Biotinylated Antibody 100ul, 封板, 置于 37 温育 45 分钟 ; 4. 洗板 : 同第二步 ;

4 5. 每孔加 1 Streptavidin- HRP 100ul, 封板, 置于 37 进行温育 15 分钟 ; 6. 洗板 : 同第二步 ; 7. 每孔加入已配制的显色工作液 100ul, 将反应板置暗处室温 5-30 分钟 ( 可以目测实际 显色情况, 如显色过深, 请及时终止 ); 8. 每孔加入 100ul 终止液, 混匀 ; 9. 设置酶标仪主波长 450nm 副波长 630nm 检测吸光度, 终止后 30 分钟内读数 结果计算与判断 : 1. 所有 OD 值都应减除空白值后在计算 ; 2. 以标准品 2000,1000,500,250,125,62.5,31.25,0pg/ml 为横坐标,OD 值为纵坐标, 画出标准曲线 3. 根据样本 OD 值在该曲线图上查出相对应 Mouse IL-2 含量, 如样本有稀释, 请再乘上稀释倍数 Standard (pg/ml) O.D. (450 nm) Mean Zero Standard Subtracted (Std.)-(S1) 2000 pg/ml 2.128, pg/ml 1.316, pg/ml 0.746, pg/ml 0.4, pg/ml 0.247, pg/ml 0.158, pg/ml 0.107, pg/ml 0.059, Mouse IL-2 标准曲线 (pg/ml)

5 试剂盒数据重复性 : 选取血清 血浆 细胞上清等不同类型不同浓度的小鼠样本各 8 例做双复孔验证试验, 将检测的 OD 值复孔间 C.V. 值统计结果如下 : 样本类型 n C.V. Average C.V. Range 血清 % % 血浆 % % 细胞上清 % % 试剂盒数据回归性 : 选取血清 血浆 细胞上清等不同类型的小鼠样本按低浓度 中浓度 高浓度分组稀释 做回归性验证试验, 将线性回归后的浓度值与理论浓度值相比较统计结果如下 : 样本类型 Average Recovery Average Recovery Average Recovery (0-62.5pg/ml) ( pg/ml) (1000pg/ml 以上 ) 血清 97.20% 92.00% 86.80% 血浆 % 98.30% 91.42% 细胞上清 % % 96.93% 试剂盒灵敏度 : 本试剂盒检测 Mouse IL-2 的最低浓度为 3.9pg/ml, 验证试验选取两条标准品进行梯度 稀释确认 3.9pg/ml 以上浓度的反应孔 OD 值呈正相关线性分布,IL-2 浓度在 pg/ml 之间样本可以被检测到但会有较大偏差, 低于 3.9pg/ml 无法被检出