SA-HRP LHSAHRP 1 支 130UL SA-HRP(100x) Standard Diluent LHE10216RASD 1 瓶 20ml(1x) 标准品稀释液 AB Diluent LHABD 1 瓶 12ml(1x) AB 稀释液 使用中避免污染 ; SAHRP Diluent L

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1 Rat Progesterone,prog ELISA Kit 产品使用手册 本产品仅供研究使用, 不用于临床诊断 For research use only. Not for use in diagnostic procedures. 本公司提供的电子版本说明书仅供参考, 实验请以收到的纸质手册为准 产品货号 LH-E10216RA 产品名称 Rat Progesterone,prog ELISA Kit 产品简介本试剂盒采用竞争法原理 首先用羊抗兔包被微孔板, 制成固相二抗, 然后依次加入 Progesterone( 孕酮 ) 抗原或待测样本 ( 内含待测物质 Progesterone) 生物素标记 Progesterone( 孕酮 ) 以及抗 Progesterone( 孕酮 ) 抗体, 此时特异性抗 Progesterone( 孕酮 ) 抗体首先与固相二抗结合, 随之 Progesterone( 孕酮 ) 抗原或待测样本 ( 内含待测物质 Progesterone) 将与生物素标记 Progesterone( 孕酮 ) 竞争结合抗 Progesterone( 孕酮 ) 抗体, 最终生物素标记 Progesterone( 孕酮 ) 的结合量与样品中的 Progesterone( 孕酮 ) 量成负相关 加入显色底物 (TMB),TMB 在辣根过氧化物酶催化下呈现蓝色, 加终止液后变成黄色 用酶标仪在 450nm 波长处测 OD 值,Progesterone 浓度与 OD450 值之间呈反比, 通过绘制标准曲线计算出样品中 Progesterone 的浓度 需要准备的相关试剂及设备 1. 可检测 450nm 吸光度的酶标仪 ; 2. 单道及多道移液器 ; 3. 恒温箱 ; 4. 洗板机 ( 可选 ); 5. 混匀器 ; 6. 灭菌的 EP 管 ; 7. 蒸馏水或去离子水 ; 8. 配置洗液或相关工作液用的灭菌玻璃容器 ; 试剂盒组分及储存 短期内使用请将试剂保存于 2-8 如长时间不用可将部分试剂保存于 -20 使用前请注意试剂盒有效期 组分编号描述使用中注意事项 Pre-coated Plate LHE10216RAPLA 1X96T Rat Progesterone Standard Rat Progesterone Conjugate Anti-Rat Progesterone Ab LHE10216RASTD 2 支 Rat Prog 冻干标准品 LHE10216RABIOAG 1 支 90UL 生物素标记 Rat Prog(100x) LHE10216RAAB 1 支 90UL Progesterone 抗体 (100x) 拆开后剩余的板条可放回袋中密封 -20 保 存 ; 溶解后的标准品过夜后不建议使用 ; 配置好的工作液过夜后不建议使用 ;

2 SA-HRP LHSAHRP 1 支 130UL SA-HRP(100x) Standard Diluent LHE10216RASD 1 瓶 20ml(1x) 标准品稀释液 AB Diluent LHABD 1 瓶 12ml(1x) AB 稀释液 使用中避免污染 ; SAHRP Diluent LHSAHRPD 1 瓶 12ml(1x) 链亲和素 -HRP 稀释液 Wash Buffer LHWAB 1 瓶 25ml(30x) 洗液 TMB Substrate LHTMB 1 瓶 10ml(1x)TMB 底物 配置洗液的容器避免污染 ; 勿与其他厂家的洗液混合使用 ; 使用中避免污染 ; 避免接触金属制品, 以免引起试剂失效 ; Stop Solution LHSTOP 1 瓶 6ml(1x) 终止液溶液有弱腐蚀性, 避免飞溅引起损伤 ; Plate Sealers N/A 4 张封板膜 Manual N/A 使用说明书 1 本 样本收集准备及保存本试剂盒可检测大鼠血清 血浆 尿液及相关体液 具体标本处理方法如下 : 1. 血清 : 将收集于血清分离管的全血标本在室温放置 2 小时或 4 过夜, 然后 1000 g 离心 20 分钟, 取上清即可, 或将上清置于 -20 或 -80 保存, 但应避免反复冻融 2. 血浆 : 用 EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本, 并将标本在采集后的 30 分钟内于 g 离心 15 分钟, 取上清即可检测, 或将上清置于 -20 或 -80 保存, 但应避免反复冻融 3. 尿液 : 用无菌收集管, 采集新鲜标本, 并将标本在采集后的 30 分钟内于 g 离心 15 分钟, 取上清即可检测, 或将上清置于 -20 或 -80 保存, 但应避免反复冻融 4. 其它生物标本 : 请 1000 g 离心 20 分钟, 取上清即可检测, 或将上清置于 -20 或 -80 保存, 但应避免反复冻融 注意 : 1. 以上标本均需密封保存,4 保存应小于 1 周,-20 保存小于 6 个月 2. 标本溶血会影响最后检测结果, 因此溶血标本不宜进行此项检测 3. 标本使用前应缓慢平衡至室温, 不应加热使之溶解 样本预处理 1. 血清 : 建议测试前将标本做预实验确定合适的稀释倍数 2. 血浆 : 建议测试前将标本做预实验确定合适的稀释倍数 3. 尿液 : 建议测试前将标本做预实验确定合适的稀释倍数 4. 其它生物标本 : 建议测试前将标本做预实验确定合适的稀释倍数 注意 : 1. 如您要测试的样本数量较多可使用 0.01M PBS 代替本试剂盒中的标准品稀释液对标本进行稀释 2. 由于生物机体处于不同状态下蛋白的表达量不一, 以上建议的样本稀释液倍数为正常分布状态 建议可在正式实验前做预实验确定稀释倍数, 以免损失您的样本 3. 样本使用前均应进行离心处理, 以保证检测结果的重复性 4. 由于不同蛋白在不同保存情况下的稳定性均不相同, 您在开始实验前应注意样本的保存形式 缓冲液体系 以及保存的温度

3 相关试剂准备部分试剂需您配置成工作液后再使用 1. 所有试剂在启用前请于室温平衡 30 分钟, 室温请控制在 25 左右 酶标板平衡请不要拆掉封口袋 2.Rat Prog Standard:Rat Prog 标准品为冻干粉 每支标准品加入 Rat Prog 标准品稀释液 0.5mL, 即为 100ng/mL 盖好后室温静置 3 分钟, 使用混匀器混匀或颠倒混匀 此后进行 3 倍稀释成 100ng/ml,33.3ng/ml,11.1ng/ml, 3.7ng/ml,1.2ng/ml, 标准品稀释液 (0ng/mL) 为空白孔 根据您需要的量配置好标准品待用 配置好的标准品建议在 15 分钟内加样, 不建议放置过长时间 3.Rat Prog Conjugate:Rat Prog 标记生物素为 100x 高浓度试剂 使用前用标准品稀释液将其稀释 100 倍 根据您需要的量配置好工作液待用 配置好的工作液建议在 15 分钟内加样, 不建议放置过长时间 4.Anti-Rat Prog Ab:Anti-Rat Prog Ab 为 100x 高浓度试剂 使用前 AB Diluent 将其稀释 100 倍 根据您需要的量配置好工作液待用 配置好的工作液建议在 15 分钟内加样, 不建议放置过长时间 5.SA-HRP: 链亲和素 -HRP 为 100x 高浓度试剂 使用前用链亲和素 -HRP 稀释液将其稀释 100 倍 根据您需要的量配置好工作液待用 配置好的工作液建议在 15 分钟内加样, 不建议放置过长时间 6.Wash Buffer: 洗液为 30x 高浓度试剂 使用前用蒸馏水或去离子水将其稀释 30 倍 根据您需要的量配置好待用 注意 : 1. 为了保证实验时间的准确性, 建议您提前 10 分钟配置好您要使用的试剂 2. 溶解使用过的标准品溶液不建议过夜使用, 部分蛋白的活性可能因此损失 3. 配置好的工作液不建议过夜使用, 标记抗体及酶活性可能因此损失 4. 高浓度的试剂使用前可进行离心, 再根据您的实验要求吸取一定量配置成工作液 5. 实验中请使用本试剂盒提供的洗液, 请勿使用其他厂家的洗液, 否则可能造成实验结果不理想 6.TMB Substrate 使用中避免污染 ; 避免接触金属制品, 以免引起试剂失效 7.Stop Solution 溶液有弱腐蚀性, 避免飞溅引起损伤 8. 需要稀释配置成工作液的试剂, 请在配置好后注意充分混匀, 否则可能造成实验结果不理想 9. 需要稀释配置成工作液的试剂, 请使用无菌容器进行配置, 否则可能造成实验结果不理想 10. 实验过程中建议佩戴口罩, 以免由于唾液飞溅对检测结果造成干扰 ( 唾液中含有大量酶等物质 ) 实验步骤 1. 试剂平衡 将需要使用的相关试剂, 如 : 预包被微孔板 标准品 标记抗原 标准品稀释液 待检测的样本等, 在实验开始前于室温平衡 30 分钟 2. 取出酶标板 根据实验需要, 取出相应的预包被条 剩余部分, 放回封袋中密封于 -20 保存 3. 加样 空白孔加 50ul 标准品稀释液, 余孔依次加入 Progesterone( 孕酮 ) 抗原或待测样本 ( 内含待测物质 Progesterone) 生物素标记的 Progesterone( 孕酮 ) 以及抗 Progesterone( 孕酮 ) 抗体,50ul/ 孔 酶标板加上覆膜,37 温育 1.5 小时 推荐测试 2 条平行的标准曲线, 计算时取平均值 4. 洗板 弃去孔内液体, 洗板 3 次 每孔用 350ul 的洗涤液洗涤, 浸泡 1-2 分钟, 甩掉酶标板内的液体 ( 或用洗板机进行洗板 ) 最后一次洗涤完成后, 在吸水纸上将酶标板拍干 5. 加链亲和素 -HRP 工作液 酶标板拍干后, 立即每孔加链亲和素 -HRP 工作液 ( 可提前 15 分钟配制 )100ul 每孔, 加上覆膜,37 温育 30 分钟 6. 洗板, 加 TMB 底物溶液 弃去孔内液体, 甩干, 洗板 5 次, 方法同步骤 4 立即每孔加 TMB 底物溶液 90ul, 酶标板加上覆膜,37 避光显色 ( 反应时间控制在 分钟, 不要超过 30 分钟 当显色反应有明显的梯度蓝色, 即加入终止液终止反应 ) 7. 加终止液, 读数 每孔加终止液 50ul, 终止反应, 此时蓝色立转黄色 轻轻晃动酶标板使终止反应充分进行 轻拭酶标板底部, 立即使用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度 (OD 值 ) 推荐使用双波长进行检测 :450nm, 630nm

4 结果计算将标准品 空白孔 样本 OD 值取其平均值计算 以标准品的浓度为纵坐标 ( 或对数坐标 ),OD 值为横坐标 ( 或对数坐标 ), 绘出标准曲线 推荐使用曲线专家软件进行分析 根据标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的回归方程式, 将样品的 OD 值代入方程式, 计算出样品浓度, 再乘以稀释倍数, 即为样品的实际浓度 典型数据展示 由于各个实验室可能存在室间的差异, 本说明书提供的标准曲线仅是本公司测试所得, 仅供展示, 具体计算请以 您所在实验室的结果为准 检测范围 1.2ng/mL-100ngmL 标准曲线浓度依次为 100ng/ml,33.3ng/ml,11.1ng/ml,3.7ng/ml,1.2ng/ml 精密度批内差用同一份质控样品, 在一个批次的产品内重复检测 10 次, 计算变异系数 (CV) 测试 CV<5% 批间差用 3 个批次的产品检测同一份样本, 计算 3 个批次的产品之间的变异系数 (CV) 测试 CV<10% 线性向已知浓度的样本中加入定量的大鼠 Progesterone, 并将此样本进行倍比梯度稀释, 线性范围则为测定样本的含量与理论值的比值 Rat Serum(n=5) Rat EDTA Plasma(n=5) Rat Heparin Plasma(n=5) 1:2 1:4 1:8 1:16 平均值 98% 102% 99% 测试范围 % % % 平均值 97% 101% 98% 测试范围 % % % 平均值 109% 96% 102% 测试范围 % % % 平均值 100% 103% 97% 测试范围 % % 94-98%

5 重复性 用高中低 3 个浓度的质控样品, 在一个批次的产品内分别重复检测 10 次, 计算变异系数 (CV) 测试 CV<10% 回收率 向已知浓度的样本中加入定量的大鼠 Progesterone, 计算测定的平均值, 回收率为测定值与理论值的比值 样本类型 回收率范围 平均回收率 Rat Serum(n=5) % 102% Rat Heparin Plasma(n=5) % 97% 灵敏度用标准品稀释液做为样本进行检测, 重复测定 20 次, 得出 20 次测量结果的吸光度值, 计算其平均值 (M) 和标准差 (SD), 得出 M+2SD 对应的值为本试剂盒的检测灵敏度 经测试本试剂盒的灵敏度为 0.064ng/mL 特异性本试剂盒用于特异性检测大鼠天然或重组 Progesterone 蛋白, 经检测与其它相似物质无明显交叉反应 稳定性根据相关行业标准, 对试剂盒进行热稳定性测试 在 37, 破坏 3 天后, 对试剂盒的检测灵敏度 特异性 重复性进行复检, 计算各项参数均符合要求 有效期本试剂盒有效期为六个月 相关注意事项 1. 本产品中 Stop Solution 为稀硫酸, 有轻微的腐蚀性, 请注意做好相应的防护 2. 请使用本产品时注意试剂不要混用其他批次或者其他厂家的, 否则结果可能与预期存在差异 3. 收到产品后, 请务必按照说明书的要求存放试剂 4. 请在实验开始前, 确定已准备好需要的实验用具及相关仪器, 以免给实验造成不必要的困扰 5. 本产品在生产后均进行了相关的检测, 如您对实验结果有疑问, 请联系我们