CAR-T 细胞免疫疗法 CAR-T 简介 CAR-T (chimeric antigen receptor T cell) 全称为嵌合抗原受体 T 细胞, 已广泛用于癌症免疫治疗研究领域和临床应用 CAR-T 细胞免疫疗法基本流程是先采集和分离肿瘤患者外周血中的 T 细胞, 在体外进行生物技术改造

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刃富察
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2 CAR-T 细胞免疫疗法 CAR-T 简介 CAR-T (chimeric antigen receptor T cell) 全称为嵌合抗原受体 T 细胞, 已广泛用于癌症免疫治疗研究领域和临床应用 CAR-T 细胞免疫疗法基本流程是先采集和分离肿瘤患者外周血中的 T 细胞, 在体外进行生物技术改造, 使其能表达可识别特异性肿瘤相关抗原的嵌合受体 (CAR) 并激活自生增值和细胞杀伤活性, 然后将这些 T 细胞扩增后回输给患者, 达到识别并治疗肿瘤细胞的效果 CAR-T 大事记 212 年,Emily Whitehead 成为首位接受实验性 CAR-T 疗法的儿童患者 217 年 8 月, 诺华 CAR-T 细胞疗法获得 FDA 批准上市, 其商品名为 Kymriah 217 年 1 月,Kite Pharma 的 CAR-T 细胞疗法获得 FDA 批准上市, 其商品名为 Yescarta 217 年末, 国内已有三家公司的 CAR-T 细胞治疗中国临床试验申请获得 CDE 受理 CAR-T 治疗基本流程 1. 血液收集 5. 预处理和 T 细胞注射 2. T 细胞分离和激活 4. T 细胞扩增 3. T 细胞改造和修饰 1 Sino Biological

3 实体瘤靶点蛋白实体瘤相关的肿瘤抗原往往在正常组织中也会有低水平的表达同时, 实体瘤还具有异质性, 同一位患者一个部位的肿瘤也并非均表达相同的肿瘤相关性抗原因此, 靶点的选择是实体肿瘤 CAR-T 细胞治疗的一个重要挑战 Ads. Abs.(OD45nm-Blank) Human ErbB2 Protein(Cat:14-H8H-B;Lot:LC11JU225) Human ErbB2/Biotin Protein ErbB2 Herceptin 抗体 Conc.ng/mL (ng/ml) 生物素化的人 ErbB2 蛋白 ( 货号 :14-H8H-B ) 与 ErbB2 抗体 (Herceptin ) 的 ELISA 结合检测 Ads.(OD45nm-Blank) Abs.(OD45nm-Blank) GPC3-His/Biotin(Cat:188-H8H-B;Lot:HP11JL269) GPC3-His/Biotin GPC3-His GPC3-His(Cat:188-H8H;Lot:MA5SE11) FGFbasic Conc.ng/mL FGFbasic Conc. (ng/ml) 生物素化标记的人 GPC3 蛋白 ( 货号 : 1777-H8H-B ) 和未标记的人 GPC3 蛋白 ( 货号 : 1777-H8H ) 与 FGF 蛋白的 ELISA 结合检测 Ads. Abs.(OD45nm-Blank) Keytruda MAb Drug Drug A B MAb Drug B Opdivo MAb Drug C PD1-His Conc.ng/mL PD1-His Conc. (ng/ml) 两种不同 PD-1 抗体药物与人 PD-1 蛋白 ( 货号 : 1377-H8H ) 的 ELISA 结合检测表 1 义翘科技实体瘤靶点蛋白产品列表分子名称其他名称重组蛋白表达宿主肿瘤类型 CEACAM5 CEA Human cells 多种实体瘤 ( 肺癌, 结直肠癌, 胃癌, 乳腺癌, 胰腺癌 ) MET c-met Human cells 乳腺癌 EGFR Human cells/insect cells 结肠直肠癌, 晚期 EGFR 阳性实体瘤 EGFRvIII Insect cells 胶质母细胞瘤 EPCAM CD326 Human cells 肝肿瘤, 胃肿瘤 EPHA2 Human cells 恶性胶质瘤 ERBB2 HER2 Human cells 多种实体瘤 ( 乳腺癌, 卵巢癌, 肺癌, 胃癌, 神经胶质瘤, 胰腺癌 ) GPC3 Glypican-3 Human cells 肝细胞癌, 鳞状细胞肺癌 MSLN Mesothelin Human cells 间皮瘤, 胰腺癌, 卵巢癌 Muc1 CA15-3 Human cells 肝细胞癌, 非小细胞肺癌, 胰腺癌, 乳腺癌 PDCD1 PD-1 Human cells 晚期肺癌, 晚期肝癌, 晚期胃癌 CD274 PD-L1 Human cells 胶质母细胞瘤 KDR VEGFR2 Human cells 转移性癌, 转移性黑色素瘤, 肾癌 IL13RA2 Human cells 神经胶质瘤 FOLH1 PSMA Human cells 前列腺癌 FAP Human cells 恶性胸膜间皮瘤 CA9 CAIX Human cells 转移性肾细胞癌 FOLR1 FR a Human cells 卵巢癌 L1CAM CD171 Human cells 卵巢癌, 神经母细胞瘤 ROR1 Human cells 非小细胞肺癌, 乳腺癌, 白血病义翘科技可提供以上列表中分子对应的生物素化蛋白 Sino Biological 2

4 血液恶性肿瘤靶点蛋白 CD19 是 CAR-T 细胞疗法中应用最广泛的血液恶性肿瘤靶点, 在 B-ALL CLL FL DLBCL 和 MCL 等血液恶性肿瘤的临床试验中取得了良好的治疗效果除了 CD19 以外, CD2 CD22 CD3 IL3RA 等分子也是血液恶性肿瘤尤其是 CD19 阴性血液肿瘤的热门研究靶点义翘科技现拥有多种血液恶性肿瘤靶点分子的蛋白, 可用于 CAR-T 细胞的活性检测 5 CD2(Cat:117-H34E;Lot:ME11AU72) 5 CD3(Cat:1777-H8H;Lot:MB1OC1812) CD3/Biotin(Cat:1777-H8H-B;Lot:HP1NO183) CD3/Biotin 5 IL1R3-Fch (Cat:1121-H3H; 冻干批次 Lot:ML3AU41) IL1R3-Fch (Cat:1121-H3H; 液体批次 Lot:LC9AP74) Ads.(OD45mm-Blank) Abs.(OD45nm-Blank) Ads.(OD45mm-Blank) Abs.(OD45nm-Blank) Ads.(OD45mm-Blank) Abs.(OD45nm-Blank) MAb Drug SCT4 A Conc.ng/mL (ng/ml) Fc-CD3L Conc. Conc.ng/mL (ng/ml) IL1B-His/Biotin Conc.ng/mL IL1B-His/Biotin Conc. (ng/ml) 人 CD2( 货号 :117-H34E) 与针对 CD2 的单克隆抗体药物 A 的 ELISA 结合检测未标记的人 CD3( 货号 :177-H8H) 和生物素化标记的人 CD3( 货号 :177-H8H-B) 与 CD3L 的 ELISA 结合检测冻干批次和液体批次的人 IL1R3( 货号 : H3H) 与 IL1B 的 ELISA 结合检测表 2 义翘科技血液恶性肿瘤靶点蛋白产品列表分子名称其他名称重组蛋白表达宿主肿瘤类型 TNFRSF17 BCMA Human cells 多发性骨髓瘤 IL3RA CD123 Human cells 恶性髓系肿瘤 SDC1 CD138 Human cells 多发性骨髓瘤 CD19 Human cells 白血病, 淋巴瘤, 多发性骨髓瘤 MS4A1 CD2 E. coli 白血病, 淋巴瘤, 多发性骨髓瘤 CD22 Siglec-2 Human cells B 细胞淋巴瘤 TNFRSF8 CD3 Human cells 淋巴瘤 CD33 Siglec-3 Human cells 恶性髓系肿瘤 CD38 Human cells 急性粒细胞白血病, 多发性骨髓瘤 CD5 Leu-1 Human cells T 细胞急性淋巴母细胞性淋巴瘤 NCAM1 CD56 Human cells 急性粒细胞白血病 ULBP1 NKG2D ligand 1 Human cells 多种血液恶性肿瘤 ULBP2 NKG2D ligand 2 Human cells 多种血液恶性肿瘤 IL1RAP IL1R3 Human cells 慢性粒细胞白血病 ROR1 Human cells 非小细胞肺癌, 乳腺癌, 白血病义翘科技可提供以上列表中分子对应的生物素化蛋白表 3 义翘科技实体瘤和血液恶性肿瘤靶点蛋白在 CAR-T 应用中部分引用文献分子名称标签类型试验应用杂志年份 CD123 His tag 流式检测细胞表面 CAR 表达 (NK 细胞 )/ 阻断试验 Human gene therapy 217 CEACAM5 His tag 流式检测细胞表面 CAR 表达 Molecular Therapy 217 EGFR His tag 流式检测细胞表面 CAR 表达 US A Sino Biological

T 细胞激活和扩增 T 细胞激活从患者外周血中收集分离得到的 T 细胞在用于改造之前需要先进行活化 CD3 CD28 抗体是最常见的用于 T 细胞体外活化的分子 A B.7 CD4+ T Cells 1.2 CD4+ T Cells Proliferation (OD Value).6.5.4.3.2 IFN-gamma (OD Value) 1..8.6.4.1.2...1 1 5 1 Antibody Conc.

5 T 细胞激活和扩增 T 细胞激活从患者外周血中收集分离得到的 T 细胞在用于改造之前需要先进行活化 CD3 CD28 抗体是最常见的用于 T 细胞体外活化的分子 A B.7 CD4+ T Cells 1.2 CD4+ T Cells Proliferation (OD Value) IFN-gamma (OD Value) Antibody Conc. (ug/ml) Antibody Conc. (ug/ml) 人 CD3 抗体 ( 货号 : 1977-H1) 对 CD4 + T 细胞的增殖和 IFN-gamma 分泌水平的影响.6 IL-2 (OD Value) Antibody Conc. (ug/ml) 人 CD28 抗体 ( 货号 :11524-H1) 的共刺激作用对 CD4 + T 细胞 IL-2 分泌水平的影响在存在 2 μg/ml 的 CD3 抗体时, CD28 抗体的 IC5 通常为.256 μg/ml 表 4 义翘科技 T 细胞激活抗体靶点纯度 (by HPLC) 内毒素含量 (EU/mg) 货号 Human CD3 (humanized OKT3) >95% <.5 GMP-1977-H1 Human CD28 >95% <.5 GMP H1 Sino Biological 4

6 T 细胞扩增 SEC-HPLC: 95% 无外源动物源性纳米膜过滤除病毒义翘神州 GMP 级细胞因子的安全与品质 SDS-PAGE: 95% 细胞活性比肩进口品牌微生物检测内毒素 <.1EU/μg 注射级别用水注射小鼠毒性检测 1 8 液体 MY9MY61 冻干品 LC11JL76 Human IL2 6 5 液体 ME8NO191 冻干品 LC11FE138 Human IL7 Proliferation,% Proliferation,% E-4 1E IL2 Conc.(ng/mL) -1 1E IL7 Conc.(ng/mL) 使用 CTLL2 小鼠 T 淋巴细胞检测 IL2 对 T 细胞扩增的促进作用使用 CD3 抗体激活的人外周血淋巴细胞检测 IL17 对淋巴细胞扩增的促进作用 12 Human IL 液体 ME8JL11 冻干品 LC9AU35 Human IL21 Proliferation,% Proliferation,% secretion of IFN-γ (ng/ml) IL15 IL15 Conc.(ng/mL) IL21 conc Conc. (ng/ml) (ng/ml) 使用 MO7e 巨核淋巴细胞检测 IL15 对淋巴细胞扩增的促进作用使用 NK-92 人自然杀伤细胞检测 IL21 对自然杀伤细胞 IFN-gamma 分泌的促进作用表 5 GMP 级细胞因子产品列表货号分子名称货号分子名称 GMP HNAE IL2 GMP-1584-HNAE IL21 GMP-115-HNAH GMCSF GMP-162-HNAE TNFa GMP-136-HNCE IL15 GMP-165-HNAE EGF GMP-1395-HNAE IL6 GMP HNAS IFN-gamma GMP HNAE IL7 GMP HNAE IL4 GMP-CT11-H8H IL12 5 Sino Biological

7 细胞因子 ELISA 检测细胞因子的检测是指示 CAR-T 细胞活性的主要方式之一, 也可以用于对肿瘤免疫抑制微环境的研究义翘科技的 ELISA 试剂盒 9% 以上以真核表达蛋白作为对照, 严格遵循由精密度回收率线性最低检测极限稳定性天然样本检测交叉反应干扰试验构成的八大放行质控标准, 确保检测结果的有效性和可靠性表 6 T 细胞相关细胞因子 ELISA 检测试剂盒部分列表分子名称货号样本适用类型最低检测限 (pg/ml) 线性范围 (pg/ml) TNF KIT162 PBMC 上清液 IFNG KIT11725A PBMC 上清液 IL4 KIT11846 PBMC 上清液 IL6 KIT1395A 血清, PBMC 上清液 IL1 KIT1947 PBMC 上清液 CSF2 KIT115 PBMC 上清液 CXCL9 KIT1888 血清 CCL2 KIT1134 血清, 尿样 IL13 KIT1369 PBMC 上清液 IL7 KIT11821 PBMC 上清液 IL17A KIT1247 PBMC 上清液 CRP KIT1125 血清八大质控检验 : 确保 ELISA 试剂盒的高品质评估试剂盒测量结果趋于真实值的程度确保试剂盒可以检测天然样本以及确定适用的天然样本类型评估试剂盒的特异性, 判定其他分子与抗体对的结合能力判定其他分子对抗原和抗体对相互作用的影响回收率天然样本检测交叉反应干扰实验回收率偏高或偏低会产生假阳性或者假阴性的结果, 影响测定值的准确性若不对天然样本检测类型进行确定, 可能会导致假阳性或假阴性结果交叉反应越大, 试剂盒的特异性越差干扰性越大, 待测物测定值越不准确确保试剂盒长期存放的稳定性评估试剂盒对同一样本重复测定时能够得到相同结果的指标评估试剂盒的灵敏度评估试剂盒的准确度稳定性实验精密度最低检测限线性实验稳定性越好, 试剂盒存储时间越长精密度差的试剂盒会导致对同一样本重复测定时的结果值重现性差最低检测限的值越低说明试剂盒越灵敏线性实验的结果偏高或偏低, 会产生假阳性或假阴性结果 Sino Biological 6

T 细胞流式抗体流式细胞术是判断 CAR-T 细胞活性和组分的重要方式, 而流式抗体的质量直接影响实验的成败义翘科技自主研发多种 T 细胞相关流式抗体, 多选用真核表达重组蛋白免疫, 优选特异性好亲和力佳信噪比优的流式抗体, 有效避免流式抗体对实验的影响 Anti-CD4 Anti-CD8 PE CD3 PE CD3 FITC CD4 FITC CD8a 使用 CD4 抗体 ( 货号

APC, PerCP, FITC, PE Mouse MAb Human CD8A CD8/CD8 alpha/leu-2 Antibody APC, FITC Mouse MAb Human IL-18R IL18R1 Antibody APC, FITC, PE Mouse MAb Human CD26 DPP4 / CD26 Antibody PE, APC, FITC Mouse MAb

8 T 细胞流式抗体流式细胞术是判断 CAR-T 细胞活性和组分的重要方式, 而流式抗体的质量直接影响实验的成败义翘科技自主研发多种 T 细胞相关流式抗体, 多选用真核表达重组蛋白免疫, 优选特异性好亲和力佳信噪比优的流式抗体, 有效避免流式抗体对实验的影响 Anti-CD4 Anti-CD8 PE CD3 PE CD3 FITC CD4 FITC CD8a 使用 CD4 抗体 ( 货号 :14-MM8F) 和 CD8 抗体 ( 货号 :198-MM28-F) 通过流式细胞术检测人外周血淋巴细胞表面 CD4 和 CD8 分子的表达表 7 T 细胞流式抗体部分列表分子抗体名称标记类型抗体类型靶点种属 CD3E CD3e / CD3 epsilon Antibody APC, PerCP, FITC, PE Mouse MAb Human CD4 CD4 Antibody APC, PerCP, FITC, PE Mouse MAb Human CD8A CD8/CD8 alpha/leu-2 Antibody APC, FITC Mouse MAb Human IL-18R IL18R1 Antibody APC, FITC, PE Mouse MAb Human CD26 DPP4 / CD26 Antibody PE, APC, FITC Mouse MAb Human TNF-α TNF-alpha / TNFA / TNFSF2 Antibody FITC Mouse MAb Human TNF-α TNF-alpha / TNFA / TNFSF2 Antibody APC, FITC, PE Rabbit MAb Human IFN-gamma Interferon Gamma/IFN gamma/ifng Antibody APC, PerCP, FITC, PE Rabbit MAb Human CD45RA CD45RA Antibody FITC, PE Mouse MAb Human CD62L CD62L / L-Selectin / SELL Antibody APC, PerCP, PE Mouse MAb Human CD38 CD38/ADPRC1 Antibody APC, PerCP, FITC, PE Mouse MAb Human CD25 IL2RA/IL-2RA/CD25 Antibody FITC, PE Mouse MAb Human CD25 IL2RA / IL-2RA / CD25 Antibody APC, PerCP, FITC, PE Rabbit MAb Human CD127 IL7R / IL-7R / CD127 Antibody APC, PerCP, FITC, PE Rabbit MAb Human CD73 CD73 / NT5E Antibody FITC, PE Mouse MAb Human 7 Sino Biological

Annexin V/7-AAD 凋亡检测试剂盒自主研发品质保障现货储备闪电发货试剂盒检测原理 FITC 或 PE PE 等荧光标记物 7-AAD/PI Annexin Annexin V V Ca 2+ Ca 2+ Ca 2+ Ca 2+ Ca 2+ Ca 2+ 磷脂酰丝氨酸细胞核正常细胞 Annexin V

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V-FITC 信噪比 (S/N) 佳, 便于设门分析, 实验结果更可靠 S/N=89 S/N=65 S/N=5 S/N=93 义翘科技 Annexin V-FITC S/N=39 义翘科技 Annexin V-PE 国外品牌 Annexin V-PE 国外品牌 Annexin V-Alexa flour 488 国产品牌

9 Annexin V/7-AAD 凋亡检测试剂盒自主研发品质保障现货储备闪电发货试剂盒检测原理 FITC 或 PE PE 等荧光标记物 7-AAD/PI Annexin Annexin V V Ca 2+ Ca 2+ Ca 2+ Ca 2+ Ca 2+ Ca 2+ 磷脂酰丝氨酸细胞核正常细胞 Annexin V -- 7-AAD -- 细胞核凋亡早期 Annexin V ++ 7-AAD -- 细胞核凋亡晚期 Annexin V ++ 7-AAD ++ Annexin V 联合 7-AAD/PI 双染法操作简单, 更省时, 结果稳定可靠, 是目前最为理想的检测细胞凋亡的方法小提示 : 双染法不可区分晚期凋亡和细胞坏死, 建议同时采用两种以上方法综合判断凋亡状态值得信赖的义翘科技凋亡检测试剂盒与国外品牌对比, 准确区分凋亡早晚期细胞 Jurkat Hela 义翘神州国外品牌义翘神州国外品牌 ADD 7-ADD ADD 7-ADD Annexin V-FITC Annexin V-Alexa Annexin V-FITC Annexin V-FITC 信噪比 (S/N) 佳, 便于设门分析, 实验结果更可靠 S/N=89 S/N=65 S/N=5 S/N=93 义翘科技 Annexin V-FITC S/N=39 义翘科技 Annexin V-PE 国外品牌 Annexin V-PE 国外品牌 Annexin V-Alexa flour 488 国产品牌 Annexin V-PE 表 8 义翘科技 Annexin V/7-AAD 凋亡检测试剂盒列表产品名称货号规格 Annexin V-FITC/7-AAD 凋亡检测试剂盒 APK1448-F 2 Tests Annexin V-PE/7-AAD 凋亡检测试剂盒 APK1448-P 1 Tests Sino Biological 8

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10 慢病毒载体扩增转染试剂利用重组慢病毒载体将表达 CAR 的基因导入并整合到 T 细胞当中是一种最常用的 CAR-T 细胞改造方法义翘科技转染试剂 Sinofection Transfection Reagent( 货号 :STF2) 可以用于慢病毒载体的高效转染, 获取的重组慢病毒 TCID5 可以达到 1 7 以上使用 Sinofection 转染试剂对 HEK293T 贴壁细胞进行重组慢病毒质粒转染,72 小时后进行免疫荧光检测 EGFP 蛋白的表达强度用经由 Sinofection 转染后得到的重组慢病毒 ( 表达 EGFP 蛋白 ) 重新感染 HEK293T 细胞,72 小时后检测 EGFP 蛋白的表达强度细胞培养基义翘科技 SMM 293-TI 无血清培养基 ( 货号 :M293TI), 是一款不含有动物源性组分的 HEK293 细胞无血清培养基, 使用过程中无需添加血清 SMM 293-TI 无血清培养基用于 HEK293T 及 HEK293FT 细胞的悬浮驯化与培养, 在悬浮培养条件下包装与扩增重组慢病毒, 实现更高效的慢病毒扩增, 且易于纯化该应用已经获得客户的大规模使用验证 Supernuclease (Benzonase 同类核酸酶 ) Supernuclease ( 货号 :SSNP1) 是一种 Benzonase 同类核酸酶, 可以用于去除慢病毒扩增过程中的 DNA 污染 Supernuclease 的 HPLC 纯度在 99% 以上, 同等用量条件下 DNA 降解效率高于大多数同类竞争品牌核酸酶电泳纯度 DNA 降解效率 HPLC 检测曲线 116. Plasmid M SuperNuclease Competitor 1 Competitor 2 DNase Ⅰ (U) mau bp min 9 Sino Biological

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11 试用装免费领从即日起至 217 年 6 月 3 日, 义翘神州对 CAR-T 客户提供免费试用装, 扫描下方二维码或填写经销商提供的纸质版调查问卷, 我们将为您提供免费试用装 ( 注 : 每个客户最多申领两个货号产品, 每个货号产品仅限申领一支 ) 可试用产品 : CD3,CD28 抗体 ( 货号 :GMP-1977-H1, GMP H1) 293T 悬浮培养基 ( 货号 :M293TI) 细胞因子产品转染试剂 ( 货号 :STF2) 生物素化蛋白细胞因子 ELISA 试剂盒以上其他产品具体货号请参照宣传册或咨询当地经销商扫码后请准确填写信息, 以便我们联系您并发放试用装本活动最终解释权归北京义翘神州科技有限公司所有如有问题请致电进行咨询, 或联系当地经销商

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未标题-1 T 细胞激活抗体强大的 T 细胞增殖能力不含防腐剂无血清培养获得靶点抗体名称产品编号规格应用来源交叉反应抗体类型 6001T01 1 mg Human CD3 Lymactin-T (Anti-Human CD3) 细胞培养小鼠人 6001T1 10 mg 日本原装进口冻存液无需程序降温无血清, 不含不明动物源成分细胞培养试剂产品类型产品编号产品名称规格 302-14681 120