', 南 京 农 业 大 学 学 报 第 卷 预先处理的肉芽组织后获得了生长发育的卵泡 ' 也有人把小鼠卵巢组织移植到同性小鼠背部肌肉组 织内 在卵巢周围能够快速建立血管网并获得生长发育的卵泡 $ 还有研究者将人卵巢组织移植到小 鼠的颈部肌肉中 % 周后仍检测到存活的卵泡 这些结果提示 肌肉可以作为

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1 南京农业大学学报 ' $! "!" # 李丰银 陶勇 李运生 等 - 小鼠卵巢移植到去势公鼠背部肌肉后的生长发育 - 南京农业大学学报 ' $ 小鼠卵巢移植到去势公鼠背部肌肉后的生长发育 李丰银 陶勇 李运生 曹鸿国 刘亚 安徽农业大学动物科技学院 安徽合肥 % 摘要 将 日龄小鼠卵巢移植到 ' 5 周龄去势雄性小鼠的背部肌肉中 分别于移植后 % 和, " 观察移植体周围血管再生状况 分离并观察移植体上的卵泡和卵母细胞发育情况 并观察移植体的组织学结构及变化 结果发现 卵巢移植后 " 卵巢 大量卵泡发生退行性变化 卵泡数量骤减 移植后 % " 移植体周围有明显的血管发生 移植体直径增加到 $' 极显著大于 日龄小鼠卵巢 * 移植体边缘可见到各阶段的卵泡 卵巢的皮质和髓质界限模糊 移植后, " 移植体直径增加到 $ 极显著大于 日龄小鼠卵巢 * 有明显的卵泡 从移植体中分离得到卵丘卵母细胞复合体 2;2 和卵母细胞 形态基本正常 提示 成年去势雄性小鼠背部肌肉组织环境可支持同种异性移植的小鼠卵巢上卵泡和卵母细胞进一步生长发育 关键词 卵巢移植 小鼠 卵泡 卵母细胞中图分类号 0$,% 文献标志码 / 文章编号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研究发现 动物卵巢移植后能恢复生殖和内分泌功能 在人医临床上卵巢移植已经有很多实际 应用, 目前卵巢移植的主要问题是如何在移植体周围快速建立血管网以适应移植后卵巢发育的血液供给 以及如何提高移植体卵母细胞的数量和质量等 卵巢移植需要寻找最佳的移植部位 以加速移植 物周围的血管化 大量研究证实 肾被膜 皮下移植和肌肉移植卵巢都能够获得生长发育的卵泡 % 相对而言 肾被膜下卵巢移植对操作要求较高 卵巢发育不易观察 而皮下卵巢移植易于观察 但皮下组织内缺乏血管周细胞 移植物周围快速血管化难以建立 另外 皮下移植容易受到温度和外界大气压力的影响 限制了移植体内卵泡和卵母细胞的发育 有人将小鼠卵巢组织移植到同性小鼠臀部 收稿日期 ' ' 基金项目 国家自然科学基金项目 %, 作者简介 李丰银 硕士研究生 通讯作者 陶勇 副教授 研究方向为动物生殖生理和生物技术研究!#!( ) *%#(

2 ', 南 京 农 业 大 学 学 报 第 卷 预先处理的肉芽组织后获得了生长发育的卵泡 ' 也有人把小鼠卵巢组织移植到同性小鼠背部肌肉组 织内 在卵巢周围能够快速建立血管网并获得生长发育的卵泡 $ 还有研究者将人卵巢组织移植到小 鼠的颈部肌肉中 % 周后仍检测到存活的卵泡 这些结果提示 肌肉可以作为同性卵巢移植目的 部位 为研究卵巢在异性体内环境下的生长发育状况 6 (< 等将 周龄小鼠卵巢移植入未去势雄性大 鼠的肾被膜下 从移植物中获得的卵母细胞经体外受精和胚胎移植后得到了后代 8! (! 等将 性成熟小鼠卵巢异性移植到未去势性成熟小鼠肾被膜下 获得的卵母细胞也得到了后代 还有学者将人 的卵巢组织移植到雄性小鼠体内 也获得了形态正常的卵泡 但尚未见将小鼠卵巢移植到雄性去势 小鼠背部肌肉的报道 本试验将小鼠卵巢移植到雄性去势小鼠背部肌肉 观察移植体的生长发育状况 以研究去势小鼠体内环境是否同样支持移植卵巢的生长发育 () 材料与方法 (*() 试验动物 以 日龄健康的生长发育良好的昆明系小白鼠作为卵巢移植供体 此年龄的小白鼠卵巢上卵泡大 多处于初级卵泡和次级卵泡阶段 只有极少数发育至有腔卵泡阶段 $ % 只 ' 5 周龄健康的同品系 雄性小鼠作为卵巢移植受体 平均体重 ) 受体鼠随机分为 个处理组 / 处理组 % 只 & 处理组 只 2 处理组 只 分别于卵巢移植后 % 和, " 回收移植体进行观察 同时以 $ ' 和 日龄小鼠的卵巢作对照 整个试验过程中 小鼠每天光照 在 5 条件下自由采食 饮水 (*+) 受体鼠去势及供体鼠卵巢获取 受体雄鼠移植前均作去势处理 去势时 先对雄鼠施行全身麻醉 按 1 ) 剂量肌肉注射 用双蒸水 体积比 稀释的速眠新 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 麻醉后 提起小鼠颈 部皮肤轻轻抖动小鼠以使睾丸位于阴囊内 用消毒好的手术刀在小鼠阴囊上划约 的切口 然后用 拇指食指轻轻挤压阴囊 顺势钝性分离睾丸 去势后饲喂 周 再进行卵巢移植 将 日龄供体小鼠采用颈椎脱臼法处死 采集卵巢 放在预热的 &6 中 剔除卵巢周围组织 将 整个卵巢用于移植 另取 日龄小鼠的卵巢组织 经固定 切片后用苏木精伊红 法染色 以 观察组织学结构 (*) 卵巢移植 采取背部移植卵巢的方法 $ 移植当天 受体小鼠停水停料 按去势时采取的方法全身麻醉 剪 毛消毒后于无菌条件下行卵巢移植手术 在背中线两侧各剪开约 # 的表皮 暴露皮下肌肉层 用眼 科镊在脊柱两侧肌肉层上对称地各作一个 5 深的切口 然后轻轻地将背部肌肉层拉起 用眼科 镊夹持预先处理好的整个卵巢送入切口内 左右两侧切口内各移植 个卵巢 使移植卵巢离切口边缘约 松开眼科镊 抚平肌肉层 常规缝合表皮 移植过程在 内完成 (*) 移植后的免疫抑制 参照文献, 的方法并稍作改进 采用环孢菌素 2 " && 配合强的松和硫唑嘌呤三 联用药 配制环孢菌素时 先溶解于无水乙醇 再在溶液中加入橄榄油 使混合液中乙醇最终含量为,4 % 移植当天 皮下注射 ) 1 环孢菌素 1 此后 " 维持剂量 1 随后每隔 " 皮下注射 ) 1 环孢菌素 1 强的松 每瓶 1 浙江仙琚制药 用生理盐水稀释至, ) 1 每天肌肉注射 1 将硫唑嘌呤 每瓶 片 每片 ) ) ". (6! 片剂粉碎 用生理盐水制成 ) 1 溶液 每天灌服 1 (* ) 移植后促卵泡发育 从卵巢移植后第 ' 天开始腹腔注射 >6 卵泡刺激素 中国科学院动物研究所 此后每隔 " 腹腔注射 >6 持续 周 最后注射 >6,' 后腹腔注射 2. 人绒毛膜促性腺 激素 中国科学院动物研究所 后 所有试验小鼠均采用颈椎脱臼法处死 分离移植体 (* ) 移植体组织学染色及卵泡计数 移植后 %, " 的小鼠卵巢 以及 $ ' 日龄对照小鼠卵巢经生理盐水冲洗后 用,4 多 聚甲醛固定,' 经梯度乙醇脱水 石蜡包埋 切成, 切片 切片经苏本精伊红染色 树胶封片

3 第 期 李丰银 等 小鼠卵巢移植到去势公鼠背部肌肉后的生长发育 ' 显微镜下观察拍照 显微镜下按照文献 对各级卵泡进行分类并计数 (* ) 卵母细胞分离移植后, " 取出移植体 放在盛有事先预热的 培养液的培养皿中 用剪刀将每枚移植卵巢剪切为两半 一半卵巢放在培养皿中 用 1 注射针头轻轻撕拉移植体组织 将获得的卵母细胞移入另一盛有 3 3 培养液的培养皿中 显微镜下观察并拍照 另一半移植体组织立即放入固定液中固定备用 将移植体组织分离得到的卵母细胞复合体 2;2 在显微镜下观察并测量 2;2 直径 拍照后用透明质酸酶消化 2;2 的颗粒细胞 用细玻璃管轻轻吹打 使 2;2 脱去卵丘细胞 观察卵母细胞形态 测定卵母细胞直径和透明带厚度 (* ) 卵母细胞观察观察卵母细胞时 采集正常小鼠的卵巢卵母细胞作为对照 取 ' 和 日龄同品系小鼠各 只 每只小鼠腹腔注射 >6 " 后腹腔注射 2. 后采用颈部脱臼法处死小鼠 将小鼠卵巢放于事先预热的 3 3 培养液中 用 1 注射针头刺破卵巢表面直径约 的卵泡 随后将获得的卵母细胞移入另一 3 3 培养液中 显微镜下观察 (* ) 统计学方法数据均记为 'C 卵巢直径及卵巢移植后移植体上卵泡数采用了 6 66 / E/ 分析 其余数据均采用 测验法检验比较各数据之间的差异 +) 结果与分析 +*() 受体鼠手术后生理状态观察与体重变化在 5 条件下 小鼠被去势后 饮食 体温正常 去势切口愈合良好 受体鼠于手术后约 开始苏醒 无 例死亡 手术伤口愈合良好 体温略有增加 卵巢移植 " 后 受体鼠恢复活动 饮食正常 毛发光滑 体温基本恢复正常 体重无明显变化 卵巢移植 % " 后 受体鼠饮食量增加 精神状态好 体温正常 体重略有增加 约 ), " 后 受体鼠体温正常 状态良好 体重增加明显 约 ' ) 颈椎脱臼法处死后 发现脾脏大小无明显变化 +*+) 移植体生长发育卵巢移植 5 " 移植体表面已逐渐建立了血管网 移植体体积稍有增加 卵巢移植 5% " 左右两侧移植体体积明显增大 突起于背部肌肉表面 图 / 左右两侧移植体周围建立了丰富的血管 图 & 图 () 去势公鼠卵巢移植后移植体发育 '*()8 $ $ $ 1#$ $!$ $ %/$# / $ % & % # 1/ $ 1#$ /- 移植后 " 的卵巢 箭头示 &- 右侧移植体 空心箭头示 周围组织水肿 星号示 左右移植体周围均有血管发生 实体箭头示 /-+!! ( ( " : (< &-3 #!! ( " )) ( (< (< < " ( #! =!!!)!!!" (("!! <!!#! :!! ( "!! 6( " (< - 卵巢移植后 " 移植体直径约 $, 较移植前增加不显著 *K 移植后 % 和, " 移植体直径分别达到了 $' 和 $ 极显著大于 日龄正常小鼠及移植 " 小鼠卵巢的平均直径 * 表

4 '% 南 京 农 业 大 学 学 报 第 卷 表 () 卵巢移植后移植体直径变化 $ # ()9 $/!&$ ' ' $ $ $ $ 1#$ ' 移植时间 " +!! ( ( 移植受体数 ((!#! 移植卵巢数 (( (!!" 回收卵巢数 (( (!!#(!!" 移植体直径 ;! "!! ', C'', & % $, C & % ' $' C%' /, $ C,% / 注 同列数据不同大 小写字母分别表示差异极显著 * 和显著 * (! E!!!#( < "!! # (! #!! (< ) # "!! #!* ( * - +!! ( (< - +*) 移植后卵泡数的变化对移植后 % 和, " 的移植体和相同日龄正常小鼠卵巢组织进行 染色 结果显示 移植 " 后 移植体原始卵泡数 初级卵泡数 次级卵泡数 有腔卵泡数 卵泡总数均极显著少于 和 $ 日龄正常小鼠卵巢上的卵泡数 * 而 $ 日龄小鼠各项指标差异均不显著 与 ' 日龄小鼠卵巢各阶段卵泡数相比 移植 % " 的移植体内原始卵泡数 初级卵泡数 卵泡总数显著降低 * 次级卵泡数以及有腔卵泡数差异不显著 *K 与 日龄小鼠卵巢各阶段卵泡数相比 移植后, " 的移植体内原始卵泡数 初级卵泡数 次级卵泡数 卵泡总数显著降低 * 而有腔卵泡数差异不显著 *K 表 卵巢移植后 % " 和, " 的移植体内卵泡数相比较 除了有腔卵泡数差异不显著外 *K 原始卵泡数 初级卵泡数 次级卵泡数以及卵泡总数均差异显著 * 表 +) 卵巢移植后各级卵泡数变化 $ # +) #!# /!&$ ' $ $ $ $ 1#$ $ 卵巢 样本数 原始卵泡数 初级卵泡数 次级卵泡数 有腔卵泡数 卵泡总数 ; : ( " ( #! : ( #! 6!#( " : ( #! / ( #! +( ( #! 日龄 ; %,,% C, C$ % C% ' C' %$ C% 移植 " +,% C, ' C % C, C %, C' $ 日龄 ; $ % % C% %, C '$ C' ' C C 移植 % " + % ' C, ' C$ % C % C, C,% ' 日龄 ; ' %,, C$ %% C $ C% C% C' 移植, " +,, C, C '$ C C' % C' 日龄 ; ',% C C, C$ ' C, ' C ' 注 ; ; $ ; ' ; 表示 $ ' 日龄卵巢 + 表示移植 表示移植后与同日龄未移植相比差异显著 (! ; ; $ ; ' ; "! (! $ ' " : ( " ( : +!! ( ( ( - 3! * ( #(!" <! " : ( " (!(! -+!! ( (< - +*) 移植体组织学变化由图 / 可见 日龄正常小鼠卵巢皮质内有腔卵泡数量很少 皮质边缘分布大量初级卵泡和次级卵泡 图 & $ 日龄小鼠卵巢皮质边缘集中大量各级发育的卵泡 大的有腔卵泡内卵母细胞清晰可见 颗粒细胞紧密地包裹于卵母细胞周围 图 2 卵巢移植 " 移植体表面大量卵泡丢失 现存大的有腔卵泡内未发现有卵母细胞 只见大量散在的颗粒细胞 早期有腔卵泡内可见卵母细胞 图 ' 日龄小鼠卵巢内可见大量次级和有腔卵泡 图 卵巢移植 % " 各阶段卵泡分布于移植体皮质边缘 卵母细胞清晰可见 卵巢皮质 髓质界限模糊 图 > 日龄小鼠卵巢皮质内可见发育各阶段的卵泡 早期有腔卵泡内多层颗粒细胞均匀分布于卵母细胞周围 图. 卵巢移植, " 移植体皮质内发育的早期有腔卵泡 卵母细胞周围紧密包裹着 层以上颗粒细胞 图

5 第 期 李丰银 等 小鼠卵巢移植到去势公鼠背部肌肉后的生长发育 ' 图 +) 卵巢移植后移植体组织学观察 '*+) # '!$# $ $ 1#$ $ $ $ $ 1#$ $ /- 日龄小鼠卵巢 卵巢皮质内有腔卵泡数量很少 &- 大量初级和次级卵泡分布于卵巢皮质边缘 2-$ 日龄小鼠卵巢 许多卵泡已经形成腔隙 - 卵巢移植 " 移植体依附于受体鼠背部肌肉表面 星号示 移植体表面大量卵泡丢失 现存的卵泡内散在大量颗粒细胞 卵母细胞轮廓不清晰 箭头示 -' 日龄小鼠卵巢内 可见许多次级和有腔卵泡 颗粒细胞紧密包裹于卵母细胞周围 >- 卵巢移植 % " 各阶段卵泡分布于卵巢皮质边缘 卵巢皮质 髓质界限模糊.- 日龄小鼠卵巢内早期有腔卵泡 多层立方形颗粒细胞均匀分布于卵母细胞周围 - 卵巢移植, " 早期有腔卵泡内 多层立方形颗粒细胞紧密包裹于卵母细胞周围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移植体中卵母细胞观察卵巢移植 % " 刺破移植体得到大量呈椭圆形集合的颗粒细胞团 图 / 透明质酸酶消化后未得到卵母细胞 移植, " 后 刺破移植体分离得到了 2;2 其中大多数 2;2 有 层以上卵丘细胞包裹 图 & 透明质酸酶消化后得到裸卵 卵母细胞透明带较厚 卵母细胞膜与透明带之间形成发育不正常的腔隙 卵母细胞膜清晰可见 卵母细胞中心颜色较淡 边缘较深 图 2 得到部分颗粒细胞包裹的卵母细胞 较薄的卵母细胞透明带清晰可见 卵母细胞膜与透明带接触紧密 图 刺破移植后, " 的移植体 B 获得 2;2 和卵母细胞 其平均直径分别为 '$ 和 '%

6 '' 南 京 农 业 大 学 学 报 第 卷 卵母细胞透明带平均厚度为 与分离自 日龄小鼠卵巢表面 卵泡得到的卵母细胞 相比 2;2 直径 透明带厚度相近 但卵母细胞直径显著变小 * 表 图 ) 卵巢移植到去势公鼠后移植体中的卵母细胞 '*)8! $ 1#$ $ $ $ $ 1#$ $!$ $ %/$# / /- 移植 % " 椭圆形颗粒细胞团 &- 移植, " 卵丘卵母细胞复合体 2- 裸卵 卵母细胞透明带较厚 空心箭头示 透明带与卵母细胞膜之间形成腔 字母示 卵母细胞膜清晰可见 箭头示 卵母细胞胞质颜色中心较淡 边缘较深 星号示 - 部分颗粒细胞包裹的卵母细胞 较薄的卵母细胞透明带清晰可见 箭头示 卵母细胞膜与透明带接触紧密 /-+<! : " : ( ) #! ( "! &->( : " : # ((#:!#(!! 2-! "!" ((#:! (! # " (!((#:!< #= ( (< (<!!< (! (< # :!<!!!!!( ((#:! " (! # " ( ((#:!!! "!!!( ((#:!< #! : (< (<!#! #( ( ( ((#:! < ) "! ) #( ( ( ((#:! < " =! = -+!((#:!< :) #!! # (!" (! # " ( ((#:!< " #! : (< (<!#(!# (!<!! ((#:!!! " (! # " < )-6#! B - 表 ) 卵巢移植 > % 后卵母细胞参数测定 $ # )8! 1$ $/ / $ ' $ $ $ $ 1#$ $ > %$ 项目!, " 移植体 +, 日龄卵巢 对照组 ; 2( ( 复合体直径 2 ((#:!#(!! "!! ' '$ C' $ C 卵母细胞直径 ;(#:! "!! '% C, ' C% 透明带厚度 (! # " #=! % C % C ) 讨论 本试验将小鼠卵巢移植到雄性去势小鼠背部肌肉内 发现移植后 " 卵巢的周围即开始有血管增生 到移植后 % " 移植体生长明显增大 隆起于小鼠背部肌肉表面 周围有粗大的血管生成 移植体直径由 ' 增加到 移植体表面明显可见有大小不等的卵泡发育 提示卵巢生长状态活跃 组织学染色发现 移植体中大量分布有处于不同发育阶段的卵泡 尤其是在移植体的边缘 有大量的有腔卵泡发育 而本试验所用的 日龄幼年小鼠卵巢上有腔卵泡数较少 $ 这清楚证明了移植后卵泡的生长发育 并且 从移植体表面有腔卵泡中获得了形态基本正常的卵丘卵母细胞复合体 透明质酸酶消化后得到了形态基本正常的卵母细胞 进一步研究发现 从移植后, " 的移植体中获得了 2;2 其卵母细胞的平均直径 '% 约为同时期 日龄 小鼠卵母细胞的平均直径 约 ' 的 '4 超过了移植前卵巢上最大卵泡 次级卵泡 中卵母细胞直径的 '4 这说明 移植体中的卵母细胞有发育潜力 ' $ 有研究发现 卵巢移植后使用大剂量促性腺激素能够促进卵泡发育 本试验中得到了发育正常的卵泡卵母细胞 可能与从移植后第 ' 天开始给受体鼠注射促性腺激素有关 但未发

7 第 期 李丰银 等 小鼠卵巢移植到去势公鼠背部肌肉后的生长发育 '$ 现移植体有排卵和黄体形成 可能对 2. 的使用尚需进一步的摸索 在获得发育正常的卵泡和卵母细 胞后 也可以借助卵母细胞体外成熟 体外受精和单精子卵胞浆内注射 26 等技术获得胚胎乃至 后代 此前 8! (! 等在雄性小鼠肾被膜下进行半卵巢移植 ( (! 等在免疫缺陷雄性小鼠上 进行卵巢移植 都得到了正常发育的卵泡和卵母细胞 他们都是以未去势雄性小鼠作为移植受体 去势 会对雄性机体内分泌产生很大的影响 尤其是降低体内高水平的雄激素 如睾酮 而高水平的雄激素 会干扰卵泡发育 本试验以去势雄性小鼠为移植受体 也得到了正常发育的卵泡和卵母细胞 这可以为 人医临床上变性 男变女 后重新获得生殖能力提供一定的参考 关于移植体在去势小鼠体内生长和 卵泡卵母细胞发育的内分泌学机制 还有待进一步的研究 本研究结果同时也显示 移植后短时间内移植体上细胞发生明显的退行性变化 卵泡数量减少 密 度降低等 这与此前小鼠卵巢移植的报道结果类似 这可能与移植后营养供给中断有关 卵巢表面 各级卵泡发育很大程度上取决于机体新陈代谢的高低, 卵巢移植后 移植体的快速血管化是保证卵 巢上卵泡存活的关键 组织突然缺血和血管重建时局部血液灌注 造成细胞生长发育受限和细胞凋 亡 % 尤其是发育阶段较高的卵泡退化更为严重 啮齿类动物卵巢在移植后,' 内能够快速重建血 管 但血管重建成前这段时间内的缺血损伤足以成为影响移植体发育的主要因素, 另外 血管 重建前移植物中的缺血性低氧环境可能是影响大量卵泡丢失的主要因素 ' 但在低氧环境下 组织能 够快速地促进血管内皮生长因子表达以实现代偿作用 $ 本试验采用 日龄小鼠整卵巢移植 可能更 易引起缺血损伤和低氧应激 试验中还观察到移植后移植体中卵母细胞透明带变厚 颗粒细胞扩散性生 长 这可能是与卵母细胞在移植体内减数分裂受到影响有关 卵巢异体移植中一个重要的问题是免疫抑制 异基因小鼠之间 卵巢移植后一周内移植体周围存在 严重的白细胞浸润现象 表明移植中卵巢仍然受到免疫排斥 (! 等研究发现在遗传基因非相 似姐妹之间实施卵巢移植 移植前需要对卵巢移植受体实施免疫处理 供体骨髓移植给受体以降低免 疫排斥 可有助于移植体的存活和发育 本试验中采用的免疫抑制处理是将环孢菌素配合强的松和硫 唑嘌呤 移植后, " 受体鼠脾脏大小无明显变化 饮食正常 移植体中有卵泡和卵母细胞发育 说明 了该三联用药的作用 综上所述 去势雄性小鼠背部肌肉组织环境可支持同种异性移植的小鼠卵巢上卵泡和卵母细胞进一 步生长发育 移植后受体小鼠的激素环境变化及其与卵泡发育的关系尚需进一步研究 参考文献 6!&! # & > #= 3- (!) #! "!! () ( (! <!"! (! (!<! ->! 6!,,' 1!! 3 & )! -1!! (! -!,,' %$$ ' 3! (< 1! ( ".! +! -!) #:! ( ( # :(!!!" (!! < (!! #! (! : - ) 3!" ', 3! (< 1! ( ".! +! -3( ( )!(!! ( ( ( # :(!!!" (!! "(#! "!! ( #:#! "! ->! 6! ','!,'! ;= : & : < =! -/!#?! ( ( ( ( #( # (! (! ->! 6! ' $ $' % 9 ) 9 2( 6 1! =.! -.! " )( "( ( (! #!!! "? :( ((#:! (! (!) -@! (" % ' ' $! :+. (! -@! ("! ) " ) ()!!!#( #( # # (!(! #:! " # (( #!#!! #!( ( ) -& (" %' %, '! :+! (! /! -@!" # ) #! #" )! ("! (! ()!" () (! (" % %' $ $ "!!:!! -& #= #! ( )! ( (! ( ("! (" ' %$ %% 3 + (! > # >! -! ( ( ( (!!#! )( "( (!" 62 #!!!!# ( (!#( : -/ # % % %&,,% 6 (<3 2( 6 1! =.! -.!! ( (!:( ) (! ()!" (!(! -6#! #! $ $

8 $ 南 京 农 业 大 学 学 报 第 卷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责任编辑 周广礼

方永强 翁幼竹 戴燕玉 吕小梅 方少华 张跃平 用组织学和胚胎学方法对厦门国家级自然保护区文昌鱼的生殖季节 胚胎发育和幼虫培育 进行详细研究 结果表明 自然保护区文昌鱼生殖季节可分为两个繁殖时期 从 月初开始至 月 初为繁殖高峰期 和 月为繁殖小产期 观察人工繁殖得出 文昌鱼 产卵时间在傍晚 前后 可以观察到雌 雄文昌鱼的产卵和排精行为 雄性文昌鱼先离开沙 并跃 出水面快速游动和排精 接着雌鱼也跃出水面

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