细 胞 外 基 质

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1 细胞外基质 Extracellular Matrix, ECM 北京大学医学部细胞生物学系甄红英

2 内容 第一节 细胞外基质的主要成分第二节 细胞外基质的主要受体第三节 细胞外基质的降解第四节 细胞外基质的功能第五节 细胞外基质相关疾病

3 ECM 的基本概念 存在于细胞外间隙中 概述 (Overview) 由蛋白质和糖类组装成的结构精细 复杂的不溶性大分子纤维网络和凝胶 主要组成包括糖胺聚糖与蛋白聚糖 胶原 弹性蛋白 非胶原糖蛋白等

4 ECM 的组成成分 氨基聚糖与蛋白聚糖 胶原 弹性蛋白 非胶原糖蛋白 层粘连蛋白 胶原 纤连蛋白 氨基聚糖蛋白聚糖 ECM 结构示意图

5 ECM 的功能 为组织的构建提供支撑框架 骨 牙 : 钙化基质, 坚硬如岩石 肌腱 韧带 : 坚韧如绳索, 适于承受张力 角膜 : 透明层, 软而透明 膝关节

6 上皮组织和肌肉组织中 ECM 特化为基膜 基膜 腔面 上皮 肌肉 基膜 结缔组织 结缔组织 基膜 肌细胞 质膜

7 结缔组织中 ECM 含量丰富 上皮 基膜巨噬细胞 毛细血管 结缔组织 胶原纤维 成纤维细胞 弹性纤维 透明质酸 肥大细胞 蛋白聚糖

8 调节细胞的多种生命活动 增殖 分化 迁移 存活及死亡 纤粘连蛋白 整合素受体 微丝

9 第一节 ECM 的主要成分 一 糖胺聚糖与蛋白聚糖二 胶原三 弹性蛋白四 纤连蛋白 层粘连蛋白五 基膜

10 一 糖胺聚糖与蛋白聚糖 1. 糖胺聚糖 (glycosaminoglycan,gag) 由重复的二糖单位构成的直链多糖 二糖单位由氨基己糖和糖醛酸组成 氨基己糖多为 N- 乙酰氨基葡萄糖 (N-GlcNAc) 或 N- 乙酰氨基半乳糖 (N-GalNAc) 糖醛酸为葡萄糖醛酸或艾杜糖醛酸

11 类型 :6 类 根据二糖单位的类型 连接方式 硫酸化修饰的数量及位置的不同 透明质酸 硫酸软骨素 硫酸角质素 硫酸皮肤素 硫酸乙酰肝素 肝素

12 糖胺聚糖的分子特性及组织分布 糖胺聚糖 重复二糖单位 每二糖单位 所含硫酸基 透明质酸 (HA) Hyaluronic acid 硫酸软骨素 (CS) Chondroitin sulfate 硫酸皮肤素 (DS) Dermatan sulfate 硫酸乙酰肝素 (HS) Heparan sulfate 肝素 Heparin 硫酸角质素 (KS) Keratan sulfate 葡萄糖醛酸 -N 乙酰氨基葡萄糖 葡萄糖醛酸 -N 乙酰氨基半乳糖 葡萄糖醛酸或艾杜糖醛酸 - N 乙酰氨基半乳糖 葡萄糖醛酸或艾杜糖醛酸 - N 乙酰氨基葡萄糖 葡萄糖醛酸或艾杜糖醛酸 - N 乙酰氨基葡萄糖 半乳糖 -N 乙酰氨基葡萄糖 组织分布 0 结缔组织 皮肤 软骨 滑液 玻璃体 软骨 角膜 骨 皮肤 动脉 皮肤 血管 心 心瓣膜 肺 动脉 细胞表面 肺 肝 皮肤 肥大细胞 软骨 角膜 椎间盘

13 透明质酸结构特性 以 N- 乙酰氨基葡萄糖和葡萄糖醛酸为双糖单位重复排列构成的直链高分子多糖 无硫酸化修饰, 也不与多肽链形成共价修饰 合成部位 成纤维细胞内侧, 由透明质酸合酶催化下合成

14 功能 赋予组织黏弹性 抗压性和润滑性 在关节腔和滑膜液中起润滑作用 无免疫原性, 是天然的保湿润滑因子 可改善皮肤营养代谢, 使皮肤柔嫩光滑 增加弹性 防止衰老

15 纯化的透明质酸是优良的美容材料, 俗称玻尿酸

16 在胚胎发育早期和创伤修复时, 促进细胞迁移和增殖 在结肠癌 膀胱癌等肿瘤的浸润区及转移过程中, 透明质酸水平显著升高 肿瘤干细胞表面高表达透明质酸受体 CD44

17 2. 蛋白聚糖 (proteoglycan,pg) 由糖胺聚糖与核心蛋白的丝氨酸残基共价结合形成的巨大分子 构成蛋白聚糖的蛋白质 称为核心蛋白 (core protein), 为单链多肽 其含糖量达 90%~95%

18 蛋白聚糖单体结构特性 一条核心蛋白质 (core protein) 与一至数百个不同的糖胺聚糖共价结合而成 透明质酸除外

19 蛋白聚糖多聚体结构特性 若干个蛋白聚糖单体借助于连接蛋白以非共价键与透明质酸结合形成蛋白聚糖多聚体

20 透明质酸 蛋白聚糖单体 1μm 蛋白聚糖多聚体 ( 放大 ) 核心蛋白质 透明质酸 连接蛋白质 300nm 硫酸角质素 硫酸软骨素 软骨中的蛋白聚糖分子结构左 : 蛋白聚糖的电镜照片右 : 蛋白聚糖的模式图

21 3. 生物学特性 在 ECM 中占据较大的空间结构 氨基聚糖多位硫酸化的硫酸根 (-SO 4 2- ) 及糖醛酸的羧基 (-COO - ), 在生理 ph 下均解离, 带大量负电荷, 同种电荷间相互排斥而使蛋白聚糖单体结构伸展, 呈试管刷样结构

22 高度亲水 糖基含有多个羟基 (-OH), 且氨基聚糖带有大量的负电荷, 可吸引 Na + 云集在其周围, 而 Na + 具有渗透效应, 可导致 ECM 摄入大量的水分

23 4. 生物学功能 GAG 和 PG 在 ECM 中提供凝胶样环境, 具有缓冲和抗压作用因为在外界压力作用下体积的缩小使其负电荷相互靠近, 同种电荷间的排斥力产生膨胀压抵抗压缩, 压力去除后则反弹, 在弹性蛋白的协同作用下可恢复组织原有的体积

24 蛋白聚糖分子中含有一系列的结构位点, 可与 ECM 细胞表面以及生长因子等结合, 发挥其生物学功能

25 参与细胞的迁移和增殖在胚胎组织和创伤组织中透明质酸合成旺盛 含量高, 一旦细胞增殖到足够的数量或细胞迁移到位, 便由透明质酸酶将其破坏有的蛋白聚糖分子含有 FGF 样结构, 具有诱导细胞生长的作用

26 二 胶原 (collagen ) 1. 胶原分子的基本结构 2. 胶原的分类 3. 胶原的生成过程 4. 胶原的生物学功能 5. 胶原的降解

27 一般特点 细胞外基质中的骨架结构 一种糖蛋白, 不溶性纤维形蛋白质 动物体内含量最丰富 分布最广泛的蛋白质, 占人体蛋白质总量的 25% 以上

28 胶原纤维 成纤维细胞 胶原纤维 胶原糖蛋白是细胞外基质的骨架结构, 含量丰富, 分布广泛

29 1. 胶原分子的基本结构 三条肽链形成的三股超螺旋结构, 一般长 300nm, 直径 1.5nm

30 每条肽链称为 链 链由 (Gly-X-Y)n 重复序列构成 Gly 含量约占胶原氨基酸总量的 1/3 X 和 Y 可以为其他任何 aa, 但 X 常为 Pro( 脯氨酸 ), Y 常为 Hypro( 羟脯氨酸 ) 或 Hylys ( 羟赖氨酸 ) Hypro 或 Hylys 的羟基可形成链间氢键, 有助于三股超螺旋结构的稳固 Pro 的环状结构与 Gly 极小的侧链使 多肽链自身卷曲为左手螺旋结构, 每圈含有 3 个氨基酸残基

31 胶原 链的一级结构特点示意图

32 链相同形成同源三聚体, 不同形成异源三聚体 ; 编码 链的基因 25 种, 形成 20 多种胶原 类型分子组成三股螺旋的长度特点 I [ 1(I)] 2 [ 2(I)] 或 [ 1(I)] 3 300nm 67nm 横纹 较粗大的纤维束 II [ 1(II)] 3 300nm 67nm 横纹 III [ 1(III)] 3 300nm 67nm 横纹 较细的条状纤维束 较细的纤维束 IV [ 1(IV)] 2 [ 2(IV)] 390nm 三维交联网络.C 端球状, 不形成纤维束

33 类型组织分布类型组织分布 I 大多数结缔组织 ( 包括骨组织 ) XI 含有 Ⅱ 型胶原的组织 II 软骨 间隙组织盘 玻璃体 XII 含有 I 型胶原的组织 III 可拉伸性结缔组织 ( 皮肤 肺 血管系统 ) XIII 大多数组织 IV 基底膜 XIV 含有 I 型胶原的组织 V 含有 I 型胶原组织中的次要组成成分 XV 大多数组织 VI 大多数结缔组织 XVI 大多数组织 VII 表皮 小肠黏膜的锚定原纤维 XVII 皮肤半桥粒 VIII 血管内皮和其他组织 XVIII 许多组织 ( 肝 肾 ) IX 含有 Ⅱ 型胶原的组织 XIX 在横纹肌肉瘤中发现 X 增生软骨 XX

34 原纤维性胶原 2. 胶原的分类 形成胶原原纤维, 并可进一步聚集成粗大的胶原纤维 包括 Ⅰ Ⅱ Ⅲ 型胶原 在组织中含量最丰富, 细胞间质的主要成分 主要分布于皮肤 角膜 骨 肌腱 韧带等 为结缔组织提供抗张强度

35 原胶原 原纤维 胶原纤维 三股 肽链 Collagen fibers as seen by SEM

36 成网胶原 胶原一级结构中的 Gly-X-Y 重复序列被一些非重复序列所间隔, 并形成散在的球状结构区域, 因而导致三股螺旋结构中断和折转, 形成网状结构 包括 Ⅳ 和 VII 型胶原 是基膜大分子网络的主要组成成分

37 C 成网胶原的结构 C C C 7S 7S 7S N N N N N N C 1 个 Ⅳ 型胶原分子 C C 4 个 Ⅳ 型胶原分子 N 端的共价交联 C 2 个 Ⅳ 型胶原分子 C 端的聚合 Ⅳ 型胶原分子形成的网状结构示意图

38 原纤维相关胶原 具有间断三股螺旋并与原纤维相关的胶原 (FACIT) 包括 IX 和 Ⅻ 型胶原 结合在胶原原纤维的表面, 与 ECM 中的其他成分相互作用, 辅助原纤维性胶原的装配

39 短链胶原 如 Ⅷ 和 Ⅹ 型胶原 其分子都很小 其它类胶原 如 ⅩⅢ 型胶原

40 产生胶原的细胞 以间质型细胞为主, 如成纤维细胞 成骨细胞及成软骨细胞等 胶原的生物合成及组装过程 细胞内阶段 细胞外阶段 3. 胶原的生成过程 I 型胶原为例进行讲述 成纤维细胞 软骨细胞

41 3. 胶原的生成过程

42 Ⅰ 基因 Ⅱ 前体 RNA Ⅲ mrna 转录剪接 翻译 细胞核 Ⅳ 前 链 N 端前肽 重复 Gly-X-Y 序列 C 端前肽 RER Ⅴ 前胶原 细胞内 细胞外 Ⅵ 原胶原 组装 Ⅶ 胶原原纤维 胶原的分子结构及生物合成过程示意图 S-S 为二硫键 为半乳糖基 为葡萄糖基

43 胶原生成的细胞内阶段 主要包括转录 翻译 前 链的修饰及修饰 后的聚合 翻译是在 RER 进行, 合成信号肽, 并具有 N 端前肽和 C 端前肽的前 链 (pro- chain) N 端前肽 重复的 Gly-X-Y 序列 C 端前肽

44 前 链在 ER 中进行修饰 羟化 Pro 和 Lys 残基发生羟化 分别由脯氨酰羟化酶 赖氨酰羟化酶催化 维生素 C 是羟化酶的辅助因子 维生素 C 缺乏则前胶原的羟化不足, 不能形成稳定的三股螺旋结构, 导致坏血病 OH OH N 端前肽 OH OH C 端前肽

45 前 链在 ER 进行修饰 糖基化 羟赖氨酸的糖基化 : 赖氨酰羟化酶催化进行 前肽部分 Asn( 天冬酰胺 ) 残基的糖基化 糖链很短 糖基化程度可调控原胶原纤维的直径 OH OH N 端前肽 OH OH C 端前肽

46 前 链的 C 端前肽借二硫键形成链间交联, 使三条 链 对齐 排列, 因而从 C N 端聚合形成三股螺旋结构

47 带有前肽的三股螺旋胶原分子称为前胶原 (procollagen) 前胶原是原胶原的前体和分泌形式, 在高尔基进一步加工, 以囊泡的形式分泌到细胞外

48 胶原生成的细胞外阶段 前胶原分子在细胞外特异性蛋白水解酶作用下切去 N 端前肽及 C 端前肽, 形成不溶性的原胶原 (tropocollagen) 胞内 ( 水溶性 ) 前胶原氨肽酶 胞外 ( 水不溶 ) 前胶原羧肽酶

49 原胶原是胶原纤维的基本结构单位 三条 链盘绕而成三股螺旋结构称为原胶原 (tropocollagen), 直径约 1.5nm 长度约 300nm 原胶原疏水性极强, 不溶性的纤维分子 300nm 长, 直径 1.5nm

50 胶原生成的细胞外阶段 原胶原在细胞外进一步组装成原纤维 (collagen fibril) 原胶原分子呈 1/4 交替有序排列, 前后首尾相隔, 侧向共价交联, 形成明暗相间 直径 10~300nm 长至数微米 有周期性横纹的胶原原纤维 原纤维

51 原纤维的明暗相间横纹的形成

52 胶原原纤维共价交联, 形成不溶性的巨大 胶原纤维 (collagen fiber) 胶原纤维

53 胶原的合成及组装过程

54 胶原原纤维 原胶原 胶原纤维 三股 肽链 Collagen fibers as seen by SEM

55 4. 胶原的生物学功能 胶原构成 ECM 的骨架 胶原在 ECM 中含量最高, 刚性及抗张力度最大, 是构成 ECM 的骨架结构, 并与其他成分结合形成结构与功能的复合体 胶原几乎参与所有 ECM 的构建, 不同器官 组织中胶原的含量 类型 排布方式不同, 这些差别与器官 组织的功能相适应 胶原原纤维在 ECM 中按组织的需要以不同的形式组装

56 胶原纤维 I 型胶原纤维的抗张力强度超过钢材 交联键越多则抗张力强度越大 跟腱是体内最强的腱, 交联度最高 随年龄增长, 交联键日益增多, 胶原纤维亦越发紧密, 从而导致皮肤 血管及各种组织变得僵硬, 成为老化的一个重要方面 如果交联受到抑制, 则胶原纤维的抗张强度大大降低, 皮肤 肌腱及血管变脆, 易于撕裂

57 含量最丰富的细胞外基质糖蛋白 由 3 条 α 链盘绕成的三股超螺旋结构 链具有 Gly-X-Y 三肽重复序列, 通常 X 是脯氨酸或赖氨酸,Y 是羟脯氨酸或羟赖氨酸 是构成结缔组织和基膜的主要大分子骨架 对于维持组织器官的形态和受力强度具有重要作用

58 三 弹性蛋白 人表皮中的弹性蛋白纤维网络扫描电镜图 ( 已将胶原及氨基聚糖处理掉 )

59 非糖基化的纤维状蛋白质 由成纤维细胞 大动脉平滑肌细胞和软骨细胞等产生 构成弹性纤维的主要成分 主要存在于伸展性较大的组织中 肺 大动脉血管 子宫 胎盘及一些弹性韧带 在皮肤结缔组织中特别丰富, 使皮肤具有弹性

60 由 750 个氨基酸残基组成的蛋白质, 富含 Pro 和 Gly, 很少羟化, 高度疏水非糖基化不含 Gly-X-Y 重复序列, 呈无规则卷曲结构, 借 Lys 间交联键形成网状结构肽链由两种片断交替排列结合而成 一是疏水性片断, 赋予分子弹性 一是富含丙氨酸和赖氨酸的 α 螺旋, 负责在相邻分子间形成交联

61 弹性蛋白分子交联成的网络示意图

62 四 纤连蛋白 层粘连蛋白 广泛存在于细胞外基质 细胞表面和血浆的糖蛋白 细胞外基质中的非胶原糖蛋白 ( noncollagenous glycoprotein) 由多个结构域构成的多功能大分子 既可与细胞相结合, 又可与细胞外基质其它大分子相结合, 介导细胞与细胞外基质其他成分的粘着

63 分布 1. 纤连蛋白 (Fibronectin, FN) 血浆 FN: 存在于血浆及其它体液中 表面 FN: 附着在细胞表面 基质 FN: 存在于细胞外基质中 胎儿型 FN: 子宫绒毛膜 ECM 成分

64 分子结构 由两个相似的亚单位通过近羧基端的两个二 硫键交联形成 V 字形二聚体 铂标记的 FN 的旋转投影电镜图 FN 的结构模式图

65 FN 具有多个功能域, 可与肝素 胶原以 及细胞表面受体结合, 功能多样

66 RGD( 精氨酸一甘氨酸一天门冬氨酸 ) 序列 :FN 肽 链中的一些短肽序列, 是 FN 与细胞表面受体整合素 相互作用的关键基序

67 功能 : 诱导细胞粘附 铺展和迁移运动 10 min 30min 120min 粘着斑 红色 :actin; 绿色 :vinculin 小鼠心肌成纤维细胞在纤连蛋白基质上的粘附与铺展 [Balasubramanian S,et al., Plos One 2012]

68 胚胎发育过程中,FN 促进神经脊细胞迁移到各个区域, 分化为神经节 色素细胞等 在创伤修复中,FN 促进成纤维细胞 内皮细胞 巨噬细胞和其它免疫细胞迁移到受损部位

69 Ѫ 纤连蛋白小结 广泛存在于细胞外基质 细胞表面和血浆的糖蛋白 血浆纤连蛋白呈 V 字形二聚体, 表面纤连蛋白和基质纤连蛋白为多聚体 纤连蛋白具有多个可与细胞外基质大分子和细胞表面受体相结合的结构域, 并含有与整合素结合的 RGD 三肽序列 其主要功能是诱导细胞迁移运动和介导细胞黏附铺展

70 铂标记的 LN 的旋转投影电镜图 2. 层粘连蛋白 (Laminin, LN) 细胞外基质中的一种高分子量糖蛋白 由一条重链 (α 链 ) 和两条轻链 (β 和 γ 链 ) 组装成不对称的十字形 三条短臂分别由 链 及 的 N 端肽链形成 长臂为三条多肽链 C 端相互缠绕在一起, 借链间二硫键 构成三股超螺旋结构

71 LN 形成多功能的结构域 具有 Ⅳ 型胶原 硫酸乙酰肝素 肝素 脑苷脂和神经节苷脂结合部位 有与细胞结合的位点

72 LN 含糖量很高, 具有 50 条左右连接的糖链 LN 的多种受体可识别并结合其糖链结构, 因此 LN 的糖链直接参与其生物学功能 LN 序列中含有 RGD 序列, 可与细胞表面的整合素受体结合, 参与细胞的粘附 迁移等

73 LN 是基膜中特有的黏附蛋白 基膜是特化了的 ECM 主要由坐落在基膜上的上皮细胞和内皮细胞, 以及被基膜包绕的肌细胞生成 LN 是胚胎发育中最早出现的细胞外基质成分

74 五 基膜 (basal lamina, BL) 特化的 ECM, 为一薄而坚韧的网膜 E BL C 鸡胚角膜基膜的扫描电镜图 E: 上皮细胞 BL: 基膜 (basal lamina) C: 胶原

75 分布 : 各种上皮细胞及内皮细胞坐落的铺垫 也包绕在肌细胞 中枢神经系统 神经鞘细胞 (Schwann cell) 及脂肪细胞周围 E BL C

76 基膜的分布情况示意图 将细胞与结缔组织隔离 ; 选择性通透屏障作用 ; 使坐落在其上的细胞具有极性

77 基膜的主要组成成分 : 胶原 :Ⅳ 型胶原为主, 构成基膜的框架结构 蛋白聚糖 : 多为渗滤素 (perlecan), 一种硫酸乙酰肝素蛋白聚糖 粘附性糖蛋白 : 层粘连蛋白 LN 内联蛋白 (entactin/nidogens)

78 基膜的分布及结构模式图

79 生物学功能 决定上皮细胞和内皮细胞的形状与极性 调节细胞的增殖, 分化与迁移 胚胎发育中发挥重要作用 LN, 将 4 和 8 细胞阶段的胚胎细胞粘附在一起, 形成球体 神经系统发育中, 神经元沿着含有 LN 及其它成分的 ECM 途径迁移, 并进行定向分化

80 参与创伤愈合和组织修复 : 该过程中上皮及其皮下结缔组织的重建都需要 ECM 的指导 : 上皮的愈合首先在血痂下形成临时基膜, 成为上皮细胞迁移的 脚手架, 然后降解临时基膜代之以永久性基膜

81 对于肿瘤的发展具有特别重要的意义 肿瘤细胞实现转移需三次穿过基膜

82 Ѫ 基膜小结 上皮细胞 内皮细胞 肌细胞等细胞底侧或外侧特化的网状细胞外基质层 由所属细胞分泌形成, 主要组分为 IV 型胶原和层粘连蛋白 基膜将所属细胞与其下方的结缔组织隔开, 具有选择性通透屏障作用 基膜可诱导细胞极性的形成并促进细胞分化, 还可参与创伤修复和再生

83 人工基膜 (Matrigel) 可从小鼠 EHS 瘤中提取, 可制成人工基膜 其主要成分与基膜相似, 是体外研究肿瘤细胞侵袭能力时所用的最接近体内情况的基膜成分

84 Matrigel 可用于以下实验研究 1. 细胞生长分化 2. 细胞代谢及毒理研究 Matrigel 有效促进各种细胞贴壁及生长分化 Matrigel 能在体外抑制肝细胞伴随的分化, 维持肝细胞功能, 增加细胞色素 P450 表达

85 3. 肿瘤侵袭实验 4. 体内外血管新生研究 Matrigel 可包被不同孔径的微孔膜建立体外肿瘤侵袭转移模型 Matrigel 可构成体外上皮细胞移行和血管形成所需的基底膜

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