种 发酵条件和工艺过程的控制来把握产品质量 与直接调控化学反应相比 这种 间接 的过程控制方式在把握药品质量方面具有相对较大的风险和难度 导致抗生素杂质谱较一般化学合成药更加复杂 即使是半合成抗生素 起始物为微生物发酵产物 与一般的化学合成品相比 也具有纯度低 组分复杂 分子结构中活泼基团 如羟基

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1 网络出版时间 :2 网络出版地址 "#$%&% '()*$+ (- %/ 0*)1& #新药申报与审评技术# 抗生素杂质研究与控制的策略探讨 张哲峰!蒋!煜!马!磊!李雪梅! 国家食品药品监督管理总局药品审评中心"北京 $###'6$!!! 摘要"!药品中的杂质可能与临床不良反应相关"因此杂质研究 及控 制是 药品 研发 中风 险控 制的 重要 环节& 抗生素药品因制备工艺'化学结构及组分等方面的特殊性"决定了抗生素杂质研究与控制具有不同于 化学合成药的特点本文对抗生素杂质的一般特点'杂质谱 分析及 其途 径等 方面 进 行 了 分 析 讨 论"系 统 提 出 了抗生素杂质控制策略与基本思路&! 关键词"!抗生素杂质#组分与杂质#研究与控制#杂质限度#杂质谱分析! 中图分类号" H0%!!! 文献标志码" X!!! 文章编号" $##' I'/'&!"#$%$$" I$'&$ I#6 ')$ # & $ (2$ ( /2 &*2( +* # +0" +#&* + ( OFAKLO9* AKLM>!]AJ!J@N>* + " 9" (& " %* ) %!% 2 C< $6 $& 0 ) (! & $& "J) ) $(!% 2 '0 (0 & % $& 0 ) (! /" (2 $###'6!90 ($$ %! # &( &!?9+<> : 9 + T >P + G T : TU :! 9+<> >T :T : 9Y < :: 9 Y + : P + : T >PT U <+ :?9 < : G : + :*! 9 + > > :T +< : T T 9T : G S : : G :T 9 + > > :P< : 9 T >P :+<> >T :T :?9 > : 9T > : P : 9! +<>* < : :T P T : : G :T P U : 9 P : G +<> : :T 9 G +:T % 6$ +# 2 &!+<> : : G # +< : :T +<> # >T :T : # + +<> # +<> < :!!药品临床不良反应除了与药品本身固有的生物 杂质研究与控制具有明显不同于化学合成药的特点' 活性有关外!往 往 还 与 药 品 中 的 杂 质 相 关' 如 有 些 深入探讨抗生素杂质研究与控制中的关键要素!对于 患者服用四环素 类 抗 生 素 后 会 发 生 临 床 毒 性 反 应! 有效控制杂质(降低临床风险!具有重要意义' 出现严重恶心(呕 吐(糖 尿(蛋 白 尿 及 酸 中 毒 等 D :*!!抗生素杂质的一般特点 :-征候群现象!现已证实四环素中的 差向四环 素( 9 9<杂质来源的复杂性 脱水四环素以及脱水差向四环素等杂质是引起上述 抗生素一般通过生物 合 成 " 微 生 物 发 酵 $ (半 合 毒性反应的主要 物 质!必 须 严 格 控 制' 因 此 药 品 的 成方式得到' 微生物发酵工艺具有明显不同于全化 杂质研究 及 控 制 是 药 品 研 发 中 风 险 控 制 的 重 要 环 学合成工艺的特点!其 生 产 不 是 在 反 应 釜 中 通 过 化 节(药品安全性保障的关键要素!也是药品质量控制 学键的断裂与生成 来 实 现!而 是 在 微 生 物 体 内 通 过 的核心内容之 一 % $& ' 抗 生 素 药 品 因 制 备 工 艺(化 学 菌体的初级或次级 代 谢 等 生 命 过 程 完 成!这 种 生 命 结构及组分等方面的特殊性!决定了抗生素杂质引入 过程是生物细胞按 照 其 固 有 的 遗 传 信 息!在 所 处 的 途径(杂质谱构成等较化学合成药 更为 复杂!抗 生素 营养和培养条件下!进 行 的 复 杂 而 细 微 的 各 种 动 态! 作者简介"!张哲峰!男!博士!主任药师!主要从事药品技术审评 工 + #^ :P >/6$$$(1$(' +" 作" 联系电话#%#$# &(6%6%%((!)* 生化反应集合!对这 些 代 谢 过 程 难 以 如 同 化 学 反 应 一样实施精 细( 准 确 的 调 控! 只 能 在 研 究 菌 体 的 发! 通讯作者"!李雪梅!女!博士!副主任药师!主要从事药品技术审 评 育(生长和代谢等 生 命 过 程!以 及 各 种 生 物(理 化 和 + # ^ +1 T P :" 工作" 联系电话#%#$#&(6%6%%((!)* 工程环境因素对这 些 过 程 影 响 的 基 础 上!通 过 对 菌!$ "%!! 中国新药杂志 "#$% 年第 "& 卷第 $" 期

2 种 发酵条件和工艺过程的控制来把握产品质量 与直接调控化学反应相比 这种 间接 的过程控制方式在把握药品质量方面具有相对较大的风险和难度 导致抗生素杂质谱较一般化学合成药更加复杂 即使是半合成抗生素 起始物为微生物发酵产物 与一般的化学合成品相比 也具有纯度低 组分复杂 分子结构中活泼基团 如羟基 氨基 醛基等 较多 大多存在构型问题等特点 因而导致多种副产物的产生 因此与纯化学合成产品相比 抗生素产品的杂质谱分析会更复杂 杂质更加难以预测和 控制 ' 杂质种类的多样性发酵液组成情况复杂 处理措施与化学合成法明显不同 通常情况下 发酵液中目标物浓度很低 而杂质含量却很高 成分远较化学反应母液复杂 大量菌体细胞 培养基 各种蛋白质胶状物 色素 高价金属离子 其他代谢物 同系物 异构体以及半合成制备工艺中活性基团保护剂等都会混杂其中 同时 抗生素作为天然化合物 分子结构复杂 平面结构 立体构型方面存在不稳定性 在半合成 制剂过程 贮藏中多会进一步降解 聚合等 因此抗生素杂质较化学合成药杂质更具多样性的特点 ' 严格控制的必要性作为微生物次级代谢产物 抗生素杂质中的同系物 异构体以及经过半合成后的副产物往往具有类似主成分的生物活性 临床应用中会带来一些预期之外的不良反应 残存蛋白 色素 高价金属离子等杂质则对人体具有明确的危害 因此 在杂质谱分析指导下 通过发酵液的纯化 精制针对性去除相关杂质 并在质量标准中进行针对性检测与严格控制十分必要 其中残存蛋白 色素 高价金属离子的控制应符合发酵类药物杂质控制的一般共性要求 本文不做进一步讨论 仅对与具体抗生素药物密切相关的杂质 如同系物 异构体 副产物 降解物等有关物质的研究与控制进行分析探讨 杂质谱分析的基本途径杂质谱包括药物中所有杂质的种类 研究初期可为色谱保留值等 (< 信息 来源 含量及结构等信息 通过杂质谱分析可以较为全面地掌握杂质概貌 有针对性地选择合适的分析方法 以确保杂质的有效检出和确认 跟踪杂质谱对安全性试验或临床试验结果产生的影响 评估杂质的可接受水平 结合规模化生产时杂质谱的变化 评估杂质安全性风险 确立上市药品安全性的杂质控制水平 更重要的 是 通过杂质谱分析明确可能的杂质及其来源 进一步评估制备工艺是否设置了相应杂质针对性去除措施 再根据杂质的检出情况 评估这些针对性去除措施的有效性 以实现从杂质产生的源头主动性地把控产品中的杂质情况 实现杂质研究的最终目的 因此 杂质来源的分析论证是杂质谱分析的切入点 杂质谱分析应综合原料药的发酵工艺 半合成工艺 反应机理 药品结构特点及降解途径 制剂处方工艺 药典 已有标准的同品种资料以及其他相关文献等分析药品中可能的杂质组成及杂质来源 以使杂质检查方法的建立 验证以及杂质的去除措施制定具有针对性和有效性 ' 原料药制备工艺与杂质谱分析!'!' 发酵菌株与生产要素抗生素杂质谱在很大程度上取决于制造过程 同一抗生素在不同厂家可能采用不同的生产菌株 有时也会导致产品组分 异构体等质量特征方面存在一定差异 如氨基糖苷类抗生素大多结构非常类似 其生产制备采用的生产菌株多是在庆大霉素发酵菌种基础上进行诱变得到 或发酵产物为纯度较高的庆大霉素某一组分 因此 杂质谱分析需要针对这一特点 锁定可能存在的杂质组分 另一方面 即使相同的微生物菌株 发酵过程的培养条件 营养条件 分离提纯方法等方面的差异也会导致其杂质谱的不尽相同 所以 杂质谱的分析需要考虑各方面因素的影响 结合发酵及纯化工艺进行针对性的研究与控制!'! 起始原料的纯度与组分半合成抗生素起始物为微生物发酵产物 与一般的化学合成品相比 具有纯度较差 组分复杂的特点 因其组分的化学结构类似 多为同系物 纯化分离较为困难 这些组分同样会参与后续的合成反应 导致多种副产物的产生 给中间体及终产品的纯化和质量控制带来一定影响 有时得到的半合成抗生素是一种多组分抗生素 故杂质谱分析需要结合原料组分和反应条件的控制情况 如异帕米星的合成是以庆大霉素 D 为母核 与侧链异丝氨酸反应制得 庆大霉素 D 来源于微生物发酵 采用的棘孢小单孢菌突变株 不只是产生庆大霉素 D 这一组分 发酵液中还含庆大霉素 : 组分 故杂质谱分析需考虑这些组分参与后续合成反应后 对终产品组分和杂质的影响 氨基糖苷类抗生素的某些组分具有明显的耳毒性和肾毒性 通常的动物安全性试验难以充分暴露 因此 这些副产物杂质的生物活性和毒性等在研发和评价需要重点关注

3 !'! 起始原料的活泼基团半合成抗生素起始物作为微生物合成天然化合物 分子结构中含有的活泼基团 如羟基 氨基 醛基等 较多 而化学修饰时 仅希望修饰其中的一部分 而另一些官能团需要进行化学保护 如氨基糖苷类半合成抗生素的制备中不但存在起始原料 发酵产物 的组分纯度问题 而且存在活泼基团的保护问题 威替米星由发酵产物威大米星为起始原料 在 进行乙基化修饰而得到 一般有 条合成路线 以威大米星为起始原料 直接同乙醛反应 然后进行硼氢化还原 分离纯化得到本品 以威大米星为起始原料 先制得 三乙酰威大米星 再与乙醛反应生成 "' * 碱 然后进行硼氢化反应还原 精制纯化 脱三乙酰保护基团得到本品 以威大米星为起始原料 乙酸酐保护 的 个氨基 得到 三乙酰威大米星 与六甲基二硅胺烷进行硅烷化反应 保护 的 个羟基 得到 三乙酰 三硅烷化威大米星 与乙醛反应 生成 "' * 碱 再发生硼氢化反应 在 上连接乙基 经过碱处理 树脂纯化 硫酸成盐 得到硫酸威替米星 图 图 ' 硫酸威替米星 硫酸异帕米星和 1 甲基硫四唑 的化学结构式 对活性基团的保护问题在上述 种工艺中具有不同的措施 合成中不对拟不修饰的活性基团进行保护 得到的产物组分复杂 纯化分离的难度加大 对这些基团进行保护 可减少产物分离纯化的难度 但增加了合成反应的复杂性 杂质谱分析中需结合具体工艺 进行针对性研究与控制 硫酸异帕米星 图 的合成工艺同样存在类似问题 通常以庆大霉素 D 为起始原料 庆大霉素 D 结构中 位均连接氨基 反应活性相当 多采用羟基硅烷化后产生的空间位阻作用降低 位氨基的反应活性 以保证得到异帕米星 一般采用叔丁氧羰基法或甲酰基保护法直接保护 位氨基 根据有关物质检测结果 位氨基进行酰化的副产物约 提示 位氨基都有可能参加了反应 故在质量研究中需根据杂质谱分析结果 针对性验证采用的有关物质检查方法是否能将可能的副产物检出 必要时订入质量标准 以有效控制产品质量!'! 起始原料的空间构型天然来源起始原料的分子结构中大多存在构型问题 有时这些构型并不十分稳定 需要考虑在后续的化学合成过程中是否会引起这些构型的转化 以及如何对此进行监控和保护 威替米星及其合成起始原料威大米星均有 个手性中心 虽然从 个结构式看 手性中心的位置没有发生改变 但在合成中 尤其活泼基团的保护 解保护以及反应过程的酸碱环境等因素都可能会引起手性中心的构型转化 故需要说明在合成过程中如何保持现构型的稳定性 并说明在合成过程中保持构型稳定的措施以及验证方法 这都是杂质谱分析时需要考虑的问题!'!) 结构修饰中的特定副反应天然抗生素的结构修饰中特定副反应的控制也是研发和评价中值得关注的一个问题 如 内酰胺类抗生素常以 ):) 或 )-:) 为原料进行结构修饰 合成过程中应重点关注的问题包括 异构体 头孢母核双环结构上双键发生差相异构 及 位侧链肟基的顺反异构现象 从现有文献资料可知 异构体产生的途径主要有 条 由起始原料引入 如头孢氨苄 终产物中的 异构体是由 )-:) 中残留的 异构体引入 在保存过程中降解产生 如头孢泊肟酯 头孢呋辛酯等 在合成过程中引入 如头孢吡肟 头孢他啶 文献显示 在合成过程中引入 异构体时 受多种因素影响 如化合物结构 反应路线

4 关键步骤使用的试剂种类 试剂加入顺序 反应的立体选择性以及反应温度等 例如在合成头孢吡肟的过程中 母环引入 1 甲基吡咯烷的反应可以同时生成 异构体 其中 异构体的含量与合成路线是先 位取代后 位酰化或先 位酰化后 位取代 以及反应的具体工艺条件如反应溶剂 反应温度等密切相关 第 代和第 代头孢菌素的结构中通常含有 个甲氧肟基 如头孢噻肟 头孢唑肟 头孢甲肟 头孢曲松 头孢他啶 头孢克肟 头孢匹罗 头孢吡肟 头孢唑兰 以及单环类 内酰胺氨曲南等等 目的是提高药物对 内酰胺酶的稳定性 但甲氧肟基具有顺 反异构现象 且 个异构体间的活性差别非常大 如头孢噻肟 顺式结构 抗菌活性要比反式结构强 > 倍 甲氧肟基的双键对紫外光非常敏感 如头孢噻肟钠水溶液 F 1 # 1 紫外光照射 有 降解 ' 后损失 感光降解产物主要是反式异构体 杂质谱分析中需要针对性考虑!'!* 特定工艺杂质如头孢类抗生素 : 位和 : 位的侧链 用于合成头孢噻肟 头孢曲松 头孢地嗪 头孢他美酯等的氨噻肟酸系列中间体 包括氨噻肟酸 ) 活性酯 氨噻肟酸乙酯 去甲氨噻肟酸乙酯等 合成头孢氨苄和头孢羟氨苄的苯甘氨酸以及对羟基苯甘氨酸 尤其用于合成头孢哌酮 头孢孟多 头孢替坦 头孢甲肟 头孢替安等的 1 甲基硫四唑 图 已有研究表明可能与人血液凝固疾病及戒酒硫样反应有关联 需作为特定已知杂 质严格控制 对于第 代头孢菌素 如 头孢氨苄 头孢羟氨苄 头孢克洛 头孢拉定等 在 : 位侧链引入苄氨基 由后者引入 个新的手性碳原子 苄氨基的光学纯度直接影响了终产品的比旋度 已有文献报道头孢氨苄在该手性中心的异构体抗菌活性远低于主药 故在此类抗生素杂质谱分析与控制中需要加以关注 化学结构与杂质谱分析化学结构是导致药物降解破坏的主要内因 环境因素是外界对该化合物施加的外因条件 外因通过内因发挥作用 导致药物降解 因此 通过化学结构分析药物降解途径 经适当的强制降解措施制备得到相应的降解产物 验证可能存在的降解途径及降解产物 是杂质谱分析的重要路径之一!!' 特定化学结构的关注!!! 头孢菌素 : 位水解 在酸性 碱性和中性溶液状态下 : 位侧链的水解是头孢菌素的主要降解途径之一 在 值 时 这类 : 位降解衍生物迅速分子内环化 生成内酯化合物 当 : 位基团为乙烯基时 如头孢地尼 头孢美唑等 也会与 : 位羧基进行分子内环合 形成五元环内酯 其降解的途径如图 图 头孢菌素 : 位水解机制 位侧链上的杂环取代基脱落后可形成两部分有关物质 脱取代基头孢残基以及小分子降解物 当 0 为乙酰氧甲基 氨基甲酰或类似结构时 水解均可导致乙酰基氧 硫 键断裂 生成脱乙酰基衍生物 如头孢乙腈 头孢匹林 头孢噻吩 头孢噻肟 头孢来星 头孢呋辛 头孢曲松 头孢噻呋等 ( 6& " %# 等用同位素 $A 标记的方法 提出在酸性条件下的 : 位水解断裂 不单单存在乙酰基氧 硫 键断裂 其中 约 > 的反应是可逆的烷基 氧键断裂 当 0 为 基团时 会水解产生 给药后体内也会出现少量 的代谢物 如头孢孟多 头孢替坦 头孢甲肟 头孢哌酮 头孢替安等 头孢他啶和头孢匹罗 水解分别产生吡啶和 环戊烯吡啶 这些 : 位降解物现已引起越来越多的关注 中国药典在头孢他啶质量标准中对吡啶进行了单独控制 头孢吡肟 : 位降解生成 甲基吡咯烷 美国药典对其含量控制为不超过!!!! 开环降解 虽然与青霉素相比 头孢菌素 内酰胺环中 原子上的未公用电子对与氢化噻嗪环的双键具有共轭体系 增加了稳定性 但由于其母核上 : 位乙酰氧基是一个较好的离去基团 在固态或者溶液状态下 受酸 碱和酶的催化 容易接受亲核试剂对内酰胺羰基的进攻使 : 位乙酰氧基带负电离去 导致头孢类药物 内酰胺环开环而失活 发生降解后可引起 值的降低 如果 : 位连有强吸电子基团或者 : 位侧链酰胺键连接有供

5 电子基团时 可增强内酰胺环受亲核攻击的敏感性 如果 : 位侧链酰胺键连接有吸电子基团 则反应敏感度降低 见图 > 图 亲核试剂导致 内酰胺环开环机制图 头孢唑林的开环过程以及可能产生的有关物质!! 差向异构化头孢菌素的 位碳为 ) ) 构型 多数头孢 菌素存在 )! 型差向异构体 有文献认为在碱性条件下更容易产生差向异构化 另外 在头孢地尼中尚产生了! ) 型差向异构体 $ 未发现其他头孢菌素存在该类异构体 其他如四环类 林可酰胺类等抗生素也容易产生差向异构体 有些品种中的差向异构体进行了生物活性的研究及安全性限度的控制 这在杂质谱研究分析中需要予以关注!! 光降解 顺反异构化部分第 代 第 代头孢菌素 具有顺式甲氧亚氨基以及类似结构 如头孢噻肟 头孢唑肟 头孢甲肟 头孢曲松 头孢唑喃 头孢他啶 头孢克肟 头孢匹罗 头孢吡肟 头孢唑兰 以及单环类 内酰胺氨曲南等等 研究显示该顺式甲氧亚氨基结构对于抗菌活性起着重要作用 如头孢噻肟 顺式结构 抗菌活性要比反式结构强 > 倍 在某些情况下 可能降解生成反式异构体 研究显示某些顺式异构体对紫外光敏感 如头孢噻肟钠水溶液 F 1 # 1 紫外光照射 有 降解 ' 后损失 感光降解产物主要是反式异构体 中华人民共和国药典中头孢曲松即采用将其在紫外线照射 ' 后产生反式异构体进行系统适用性试验 见图 图 ) 头孢曲松在紫外线照射后产生反式异构体!! 酯类水解为适于口服给药 某些头孢菌素以酯的前药形式存在 如头孢呋辛酯 头孢替安酯 头孢泊肟酯 头孢托仑酯等在 : 位羧基形成酯键前药 另外 头孢孟多酯钠给药后 药物受酯酶水解脱去羧基侧链形成活性成分 这些前体药物在某些条件下可水解成为活性成分 需考虑相应杂质的存在 制剂工艺与杂质谱分析即使是同一抗生素 因在制剂中所处环境不同 经历的制剂过程不同 也会生成不同的杂质 杂质谱分析中 需针对不同的具体情况 进行针对性的深入分析和试验考证 如某阿奇霉素口服制剂使用了国内并不常用的辅料甘油山嵛酸酯 制剂工艺包括 较为剧烈的 挤出 融化物添加 喷雾后处理 过程 结合原辅料的结构特点 并经分析方法的针对性检出 表明产生的杂质谱与通常阿奇霉素口服制剂明显不同 除阿奇霉素 氧化物 去甲基阿奇霉素等通常降解物之外 还包括阿奇霉素棕榈酸酯等 个酯化物 为主药与辅料甘油山嵛酸酯在高温条件下生成 是该制剂的特征降解产物 需进行针对性的安全性限度求证 并通过有效的过程控制措施 将杂质控制在安全合理的范围内 抗生素杂质控制策略 ' 总体思路一般来讲 杂质谱在很大程度上取决于制造过程 即使是相同的微生物菌株 因培养条件 营养条

6 件 分离提纯方法等方面的差异 也会导致其杂质谱的不尽相同 需要提供相应生产要素与产品组分 杂质谱关联性的针对性研究信息 对于发酵得到的抗生素 有时其活性成分可能由密切相关的多种组分混合而成 不同组分的抗菌谱 抗菌活性以及毒副作用可能存在互补 协同等联系 此时 可能很难明确某些组分是活性成分的一部分 还是应该被认为是杂质 如替考拉宁 一般情况下 如果该活性物质已经作为临床治疗药物在国内外上市 其组分情况已被明确 没有被定义为活性物质成分的相关化合物则被认为是杂质 对于新的发酵来源抗生素 应该基于临床前和临床研究来定义何种物质是否属于活性成分 组分 何种物质应作为杂质进行控制 发酵产物的杂质谱分析至少应包括副产物 组分 中间体和降解产物的分析和论证 对于半合成抗生素来讲 发酵后合成路径越短 发酵起始原料越复杂 就越加需要详细描述可能产生的组分情况 组分与生产要素的关联性研究以及针对性精制和纯化过程的相关信息 并且发酵起始原料需要制定适宜的内控标准 内容包括含量测定 组分分布 如果相关 有关物质 特定杂质 非特定杂质及总杂质 半合成抗生素杂质谱至少应包括发酵起始原料及其有关物质 组分等 合成副产物 包括起始原料中杂质的合成副产物 合成中间体和降解产物等 通过杂质谱的分析和检出情况 反馈各生产要素的优化 通过工艺参数的确定 关键中间体质量标准的确立等生产工艺的过程控制措施有效把控产品质量 对关键中间体应制订内控 质量标准 包括明确的杂质和单个未知杂质及总杂质的限度 申报注册时应提供对潜在杂质的研究论证情况 包括产品将出现何种杂质 生产过程中如何针对性去除这些杂质 这些去除杂质措施的效果如何 质量标准中的分析方法以及如何确定的杂质限度 新抗生素对于抗生素杂质的控制 一般包括每个明确的 已知杂质和未知特定杂质 任何非特定杂质 不超过鉴定限度 以及总杂质 在试验表明现有技术的确无法鉴定某个杂质时 至少要提供此杂质结构的充分证据来表明它可归属为母体化合物或某侧链等有关物质 将其作为明确的未知杂质使用适当的分析标识手段进行识别和控制 如采用 < : 法的相对保留时间识别某特定未知杂质 需要进行充分的方法耐用性验证 并在质量标准中规定色谱柱的品牌 规格等分析条件 以保证检测方法具有足够的重现性 仅仅按照药典标准格式规定色谱填料的类型是不够的 在杂质谱非常复杂或两种杂质非常相似的情况下 可能难以获得有效的色谱峰分离度 此时须将未分离色谱峰合并后制定限度 抗生素杂质情况比较复杂 杂质限度的确定需要根据其来源 类别 结构信息等因素 必要时结合毒理学研究乃至临床研究中各批次试验样品的杂质组成情况综合考虑 目前 我国相关技术指导原则对此方面的要求尚不完善 ) 制订抗生素有关物质限度的指导原则 中的相关原则可供参考 一般说来 与母体化合物结构并不密切相关的杂质应符合我国 化学药物杂质研究技术指导原则 中的限度规定 如果杂质结构与主药化合物结构密切相关 其限度可适当放宽 但要对放宽限度的合理性进行充分论证 按照 ) 指导原则 与母体化合物结构密切相关的有关物控制限度为! 其他有关物质的控制限度为! 二者同时适用 如果申请人声明有关物质 未包含在活性物质中的化合物 与母体化合物密切相关 必须采用高效液相色谱 质谱分析法或高效液相色谱 二极管阵列检测器或使用分析标识物予以证实 杂质分析时只要可能 应使用外标法来计算重量比 以便评估和排除任何可能的质量不守恒 如果使用面积归一法 相关成分和有关物质应在检测器中产生相似反应 否则应使用响应因子进行校正 不同类型的抗生素杂质 可参考 ) 指导原则如下限度进行研究与控制 见表 表 ' 抗生素杂质限度 报告限度 鉴定限度 质控限度 类别 原料药 制剂 原料药 制剂 原料药 制剂 半合成抗生素! 2! /!! 或 2! /!! 或 2! /! 发酵单组分抗生素!!!!!! 发酵多组分抗生素!!!!!!!! 日剂量 2/ 日剂量? 2 取最小值

7 ) 在制定抗生素杂质限度时 除了考虑到杂质情况复杂 难以充分纯化之外 同时也考虑了大部分情况下抗生素治疗时间有限的因素 因此 制订的杂质限度较一般全化学合成药物宽松一些 需要关注的是 全新抗生素的新结构杂质限度确定尚应基于毒理学乃至临床研究提供的相关信息 不同种类抗生素限度也不尽相同 大多数情况下 改善纯化措施 降低杂质含量至控制限度以下 可能比提供安全性资料更好 更便捷 已有上市同品种抗生素时 与原研产品进行对比研究更有助于杂质谱分析 进而实施有效的杂质研究与控制 抗生素仿制药!!' 基本路径杂质谱的对比研究是仿制型药物研发的重要环节 也是桥接上市产品安全性的重要途径 对于抗生素来讲 杂质含量较高 杂质类别较多 杂质来源较为复杂 与原研产品进行杂质谱的对比研究相对于对每个杂质进行鉴别定性并进行安全性求证更为重要和便捷 杂质谱对比中 与原研产品相同的杂质 含量不超过质量标准 药典等 对该杂质限度的规定或原研产品时即认为可接受 相同杂质如超出标准规定 或出现原研产品中没有的新杂质 需按照上述! 中的思路与策略消除该杂质或降低其含量 否则 应进行充分的安全性求证 论证该限度的合理性 另外 对于抗生素仿制药 杂质控制方面已有的权威文献信息也是杂质研究与控制的重要参考与依据 中国药典 (: 成员国药典规定控制的同品种特定杂质 须进行相同的研究与控制 对于因制备工艺不同而不可能存在于在研产品的杂质可不进行控制 但要提供针对性的研究论证资料!! 分析方法对比研究中需关注该产品是否在 (: 成员国药典收载 收载的检测方法与申报方法有无明显差异 是否进行了方法比较研究 如果申报方法与 (: 成员国药典方法之间存在较大差异 应进行包括检测能力和样品测定结果的方法对比研究 在此基础上优选专属性好 灵敏度高 能够充分检出相关杂质的检测方法 需要注意的是 在杂质一致性的研究求证中 分析手段不能等同于日常检测 分离技术 如 < : 法 应与质谱分析 或二极管阵列检测 相结合或使用分析标识物 如杂质对照品 以便从色谱行为 E 特征 分子量及分子碎片特征等 信息共同把握其物质一致性!! 对照样品对照样品是仿制药研发的标杆与基础 在求得与上市产品物质基础一致 质量特征等同时 对照样品的选择至关重要 即使同一品种 因历史原因 市售品的质量水平也有较大差别 如误选质量较差产品为参比 其中的不良因素在仿制过程中可能被传递甚至放大 导致难以预测的结果 一般来讲 原研产品的上市过程包含了严格的安全性评估和规范的临床试验 其中的杂质及其限度要求也经过了安全性的验证和认可 仿制品中相同的杂质可以桥接其安全性要求 不同于原研产品的新增杂质则需要进一步求证其可接受性 抗生素药品杂质情况复杂 含量较高且需严格控制 因此 与原研产品的杂质谱对比分析更加重要 为全面提升抗生素仿制药质量 有效规避安全性风险 选择品质优良的原研产品作对照十分必要 具体选用可参照如下思路 首选原研进口产品或原研厂在中国分厂的产品 如果无法获得上述产品 可以采用 (: 成员国的上市产品 即美国 欧盟或日本等国的上市仿制品或其在中国的进口品 在无法获得 和 所述产品的情况下 如果国内企业采用上述产地的无菌原料分装生产无菌粉针 也可采用该企业产品作为杂质研究对照样品 但需提供相关证明性文件以说明该制剂确为进口原料药分装制得 并说明原料药的生产厂及批号 对于其他制剂 因可能采用的辅料 溶剂等情况比较复杂 或使用可能产热的某些工艺如 流化床制粒 干燥 压片等 即使采用进口原料制得的制剂 其杂质谱也可能与国外样品有差异 对于此类制剂 建议采用新药研发的基本思路 确实无法购买到上述国外上市产品 尤其原料药 时 如 (: 成员国药典已有收载 且对杂质控制较为严格 如阿奇霉素 克拉霉素 头孢地尼等 严格按照该药典标准进行了杂质的分析研究 包括检测方法的有效性 杂质对照品的使用 特定杂质非特定杂质总杂质的控制等 并符合药典要求 不出现异常杂质 同时 进行的杂质谱对比研究表明其质量不低于国内已上市产品时 也可认为其杂质得到了有效控制 如果仿制药品为国内早期研制 未在上述 (: 成员国上市 如呋布西林钠 头孢硫脒等 则建议进行深入的杂质研究和控制 按照新药杂质研究的相关思路和技术要求进行研究和限度 确定

8 !! 对比研究目前进行的杂质谱对比 一般仅仅提供 < : 图谱 单个杂质与总杂质的比较数据 实际上 由于药品杂质情况比较复杂 这种仅提供简单的 < : 图谱 尚无法充分说明杂质种类的异同和相应杂质含量的高低 建议以列表形式 采用多种检测手段 如 -)- : 等技术手段逐个进行对比 对样品与原研品进行所有杂质种类 含量及分布的比较和分析 并参照杂质研究相关技术指导原则的思路说明本品杂质安全性得到有效控制 与上市品进行杂质谱的比较只是杂质研究的手段之一 在无法获得上市产品 或上市产品质量状况较差 不宜作为仿制参照物时 采用杂质对照品等方法确定产品的主要杂质 按照杂质研究指导原则的相关要求和思路 求证杂质限度的安全性依据 或按照现行版 (: 成员国药典中的严格标准对相关杂质进行有效控制 需要说明的是 建立抗生素杂质科学可行的分析方法 确定安全合理的杂质限度并不是杂质研究的终极目的 杂质的有效控制尚应在杂质谱分析指导下 从杂质产生的源头 优化制定合理的生产过程控制措施和包装贮藏条件 从根本上优化控制杂质产生的因素 方可实现杂质的有效控制 已有文献报道 四环类抗生素降解的情况比较复杂 在酸性 中性 碱性环境中的降解途径和异构化情况不同 产生的杂质各异 有些杂质是引起临床 "# 征候群现象的主要物质 必须作为特定杂质严格控制 杂质谱分析表明 替加环素在 $! 附近较为稳定 在酸性条件下 位二甲胺基易发生差向异构化 同时 因分子中酚羟基在解离状态下较非解离的分子状态更易氧化 在处方设计上需要通过两方面措施提高产品质量和稳定性 用盐酸调节 值低于其酚羟基的 使酚羟基处于非解离状态 以有 效抑制其氧化降解 为进一步抑制替加环素在酸性条件下的差向异构化 筛选加入能够有效抑制其差向异构化的辅料 同时 在制剂过程和产品包装贮藏条件中 通过强化对氧 温度等因素的控制 降低其不稳定因素 质量标准中针对性控制此类特定杂质 采取多种措施 使产品杂质处于可控状态 参 考 文 献 张哲峰! 新法规下药物研发中的几个关键问题 9! 中国药事 $ 1$! :< < G < ) :E < ( )!:# % # #* % & #* ' "# #& / % "&!! 张哲峰! 我国药物研发中杂质研究面临的挑战与思考 9! 药品评价 $ 1! 蒋煜 张哲峰 王虹! 内酰胺类抗生素异构体杂质研究和质控进展 9! 中国抗生素杂志 $ 1! 张哲峰 魏农农 鲁爽! 浅谈杂质限度制定的一般原则 9! 中国新药杂志 $ 1! ) : < :E < G < $ $!) & & %#*%'& %#* &6 " #6 "% "# % 2& % 2 # "% & / % "&!$! 蒋煜 王虹 张哲峰! 头孢菌素常用合成起始原料及其质控进展 9! 中国抗生素杂志 1! $ 张哲峰 杨更亮 梁贵键 等! 注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠的 < : 分析及其质量研究 9! 中国药学杂志 $ 1! 张哲峰 马磊 张星一半合成抗生素的制备工艺特点及技术评价要素探讨 : 药品技术评价文集 第三辑! 北京 中国医药科技出版社! 张哲峰! 微生物来源药物制备工艺研究中质量控制要素探讨 : 药品技术评价文集 第三辑! 北京 中国医药科技出版社! ) :E < E(: $ "# 2& 6 E(:! & % # "&6 & 6 ""& % "&" %& *# &&%& 6 2 / % "& 6 & &6 " #6 "% "'& " / % "&!! 张哲峰! 药物杂质研究中风险控制的几个关键问题 9! 现代药物与临床 1! 李雪梅 张哲峰! 化学仿制药杂质研究的几点思考 9! 药品技术审评论坛 1$! 编辑 王宇梅 接受日期 1 1 上接第 页 任晓岚 汪鑫 李志裕 等! 表皮生长因子受体 0 酪氨酸激酶抑制剂的研究进展 9! 中国新药杂志 $ 1$! 丁岩 符立梧! 抗肿瘤药物吉非替尼的研究进展 9! 中国新药杂志 $ 1$$! $ 张艳华 宁华 姜洋! 表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼 9! 中国新药杂志 1! 肖西祥! 新化学实体药物专利布局策略 以阿斯利康公司药物吉非替尼在华系列专利为例 9! 中国发明与专利 1! 李巍巍 王建英! 吉非替尼合成工艺研究 9! 广东化工 $ 1$! 李兰城! 酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼及其合成进展 9! 北方药学 1! 张卉 张树才! 表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂的耐药机制及其治疗策略 9! 中国新药杂志 1$! 编辑 王宇梅 接受日期 1 1

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