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1 密级 : 公开学号 : 硕士学位论 文 电针 关元 穴对去卵巢模型大鼠谷胱甘肽抗氧化系统的影响 研究生指导教师学科专业所在学院毕业时间 徐甜李忠仁针灸推拿学第二临床医学院 2011 年 6 月

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3 To discern the effect of acupuncture point guanyaun on glutathione antioxidant system in ovariectomized rats A Dissertation Submitted for the Master s Degree Candidate:Xu Tian Adviser:Prof. Li Zhong Ren Nanjing University of Chinese Medicine,Nanjing,China

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5 学号 : 硕士学位论文 电针 关元 穴对去卵巢模型大鼠谷胱甘肽抗氧化系统的影响 作者姓名徐甜 申请学位级别硕士 指导教师姓名李忠仁职称教授 学科专业针灸推拿学 研究方向针灸对于妇科疾病的机理研究 学习时间自 2008 年 9 月 1 日起至 2011 年 6 月 30 日止 论文提交日期 2011 年 4 月 7 日论文答辩日期 2011 年 6 月 10 日 学位授予单位南京中医药大学 学位类型医学科学学位

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7 原创性声明 本人郑重声明 : 所呈交的学位论文, 是本人在导师的指导下, 独立进行研究工作所取得的成果 除文中已经注明引用的内容外, 本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果 对本文的研究做出重要贡献的个人和集体, 均已在文中以明确方式标明 本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担 学位论文作者 ( 需亲笔 ) 签名 : 年月日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留 使用学位论文的规定, 同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版, 允许论文被查阅和借阅 本人授权南京中医药大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索, 可以采用影印 缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文 保密, 在年解密后适用本授权书 本学位论文属于不保密 ( 请在以上方框内打 ) 学位论文作者 ( 需亲笔 ) 签名 : 年月日 导师 ( 需亲笔 ) 签名 : 年 ` 月日

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9 南京中医药大学硕士学位论文 目录 摘 要... iii ABSTRACT... v 前言... 1 第一部分理论研究... 2 一 围绝经期综合征研究进展 围绝经期概述 西医西药治疗 中医研究 国外报道 结语... 7 二 关元穴治疗围绝经期综合征的古今研究 古代论著记载 现代认识 结语 三 针刺对抗氧应激系统的影响研究概述 人体抗自由基体系 谷胱甘肽抗氧化酶系统 第二部分实验研究 一 实验材料 实验主要药物与试剂 实验主要仪器 实验动物 二 实验方法 实验前准备 治疗方法 样品采集方法 指标检测及检测方法 数据处理及统计学分析 i

10 目录 第三部分实验结果 实验大鼠体重 子宫指数的变化及针刺对其的影响 实验大鼠子宫内 GSH GSSG 及 GSH/GSSG 相对比值的变化以及针刺对其的影响 实验大鼠脑垂体 GSH GSSG 及 GSH/GSSG 相对比值的变化以及针刺对其的影响 第四部分讨论 围绝经期大鼠模型的选择 对照药物的选择 各组实验大鼠体重的变化 去卵巢大鼠子宫指数的变化以及针刺对其的影响 针刺对谷胱甘肽抗氧化系统的影响 小结 攻读硕士学位期间取得的学术成果 参考文献 附录 致谢 ii

11 南京中医药大学硕士学位论文 摘要 [ 目的 ] 本课题主要研究电针对围绝经期综合征抗氧应激作用的影响 本实验以公认的去势 SD 雌性大鼠作为围绝经期的实验动物模型, 观察各组实验大鼠子宫及脑垂体中还原型谷胱甘肽 (GSH) 氧化型谷胱甘肽(GSSG) 的变化以及 GSH/GSSG 比值的变化 以此来评估电针对去卵巢模型大鼠的抗氧化作用的影响, 从抗氧应激角度探讨电针疗法治疗围绝经期综合征的可能机制, 为临床上针灸防治女性生殖内分泌疾病的应用提供了现代科学的实验依据 [ 方法 ] 将 40 只 4 月龄清洁级健康雌性 SD 大鼠 (180±20g), 按照随机数字表随机分为以下 4 组 : 电针组, 药物组 去卵巢组 假手术组, 每组 10 只 采用切除双侧卵巢造模法建立围绝经期模型, 电针组通过电针 关元 穴 ( 频率 :3Hz, 电流强度 :1-3mA, 电压 :1-3V, 电针 30min); 药物组皮下注射乙烯雌酚注射液 (2mg/100g),10 日为一疗程, 间隔 3 日, 连续治疗 2 疗程 治疗结束后分析实验大鼠的体重及其子宫指数的变化, 并测定各组大鼠子宫组织及脑垂体中 GSH GSSG 含量, 并计算 GSH/GSSG 相对比值, 实验结果全部数据采用 SPSS16.0 进行统计分析 [ 结果 ]1. 电针组与药物组的大鼠体重与去卵巢组相比均有减轻, 且都有统计学意义 (P <0.05), 电针组不如药物组显著 ;2. 电针组的子宫指数与去卵巢组相比有所上升, 并且有明显的统计学差异 (P<0.01), 与假手术组相比, 差异仍具有显著统计学意义 (P<0.001); 3. 与去卵巢组相比较, 电针组子宫组织中的 GSH 含量上升 (P<0.05),GSSG 含量下降 (P <0.05),GSH/GSSG 比值显著提高 (P<0.001);4. 电针组与去卵巢组相比, 脑垂体中 GSH 含量有所提高 (P<0.05), GSSG 含量降低 (P<0.05),GSH/GSSG 比值与去卵巢组, 假手术组相比均有明显统计学差异 (P<0.001) [ 结论 ]1. 电针可以减轻围绝经期模型大鼠增加的体重, 增加其子宫重量 ( 子宫指数 ), 故电针不仅有控制体重的作用, 还可以减缓围绝经期后子宫的萎缩性变化 2. 电针 关元 穴可以使去卵巢大鼠已降低的 GSH 含量显著升高, 同时使已升高的 GSSG 含量显著下降, 并且能够提高 GSH/GSSG 相对比值, 说明电针能够减少自由基代谢产物, 提高机体的总体抗氧化系统的水平, 从而增强机体的抗病能力和反应能力, 发挥了抗衰老的作用 3. 电针疗法可以减轻去势大鼠垂体和子宫的老化情况, 其效果不仅温和而且不良反应少, 具有更好的整体调控优势, 明显优于雌激素疗法 iii

12 摘要 关键词 : 电针 ; 围绝经期综合征 ; 关元 ; 谷胱甘肽 ; 抗氧化 iv

13 南京中医药大学硕士学位论文 ABSTRACT [Objective] To explore acupuncture on climacteric syndrome effects of antioxidant stress, our research chose the ovariectomized SD female rats as the experimental animal models of climacteric syndrome. The experiments use of modern means of detection to detect the changes of reduced glutathione (GSH), oxidized glutathione (GSSG) and the changes of GSH / GSSG ratio in the uterus and the pituitary gland of the groups. For the purpose of assessing the antioxidant effects by acupuncture on ovariectomized rat model, to explore the possible mechanisms of acupuncture antioxidant effects on climacteric syndrome, and to provide the experimental basis of treating and preventing female reproductive endocrine diseases by acupuncture from modern science. [Method] Randomly divided 40 female SD rats of 4 months old (180±20g) into 4 groups: Electro-acupuncture(EA) group, medical group, ovariectomized (OVX) group, sham operation group, n = 10, and remove both side ovaries to establish climacteric model. EA group: electro-puncture at "Guanyuan" (frequency: 3Hz, current intensity :1-3mA, voltage :1-3V, 30min); Medical group: subcutaneous injection of estrostilben (2mg/100g), 10 days for one course of treatment. Continuous treatment of 2 courses, 3 days interval. Analyse the weight index changes of rats and the uterine index changes after treatment, and detect the GSH, GSSG content and and calculated the GSH / GSSG ratio of the uterine tissue and the pituitary gland. Use the SPSS16.0 statistical software for statistical analysis. [Results] 1. Comparing with the OVX group the body weight of the EA and the medical group were reduced, and the change was significant (P <0.05), EA group was not as significant as medical group; 2. The uterine weight index of EA group was higher than OVX group, the difference is significant (P <0.001), comparing to the sham group, the difference was still statistically significant (P <0.001); 3. Comparing with the OVX group, the uterine GSH content of EA group increased (P <0.05), GSSG content decreased (P <0.05), GSH / GSSG ratio was significantly increased (P <0.001); 4. Comparing to OVX group, the GSH content in the pituitary increased, GSSG content decreased (P <0.05), GSH / GSSG ratio has significant statistical difference from OVX group and sham group. [Conclusion] 1. Electro-acupuncture can reduce the increased weight of the ovariectomized rats as perimenopause syndrome model, and increased uterine weight (uterine index), so Electro-acupuncture can control weight and reduce perimenopausal changes after the uterine contraction. 2. Electro-puncture Guanyuan on ovariectomized rats can significantly increase the reduced GSH content, while decrease the already elevated GSSG levels, and also can improve the relative GSH / GSSG ratio, which indicate that acupuncture can improve the antioxidant v

14 ABSTRACT system, raise the level of antioxidant capacity, reduce the metabolite of the free radical, thereby enhancing the body's resistance to disease and response capabilities, which play can delay senility. 3. Electro-acupuncture therapy can improve the aging signs of pituitary and uterus on ovariectomized rats, the effects are better than estrogen therapy which is more gentle, has less side effects, and it has a obvious adjusting advantage. Keywords:Electro-acupuncture; Climacteric syndrome; GuanYuan; Glutathione; Antioxidant vi

15 南京中医药大学硕士学位论文 前言 围绝经期特指妇女从中年到老年的生理过渡时期, 是人体的生理功能盛衰的重要转折点 一般发生在女性的 45 至 55 岁的阶段, 此时女性会表现出不同程度的内分泌, 躯体和心理的变化, 这个时候, 少数妇女绝经后能够通过神经 - 内分泌的自我调节, 实现新的平衡, 所以并无明显自觉症状, 然而, 这种内分泌的骤然变化, 大多数围绝经期妇女都无法适应, 故而表现出一系列以自主神经系统紊乱为主的临床症候群, 如月经紊乱, 头晕, 耳鸣, 潮红, 潮热, 汗出, 心悸, 烦躁, 抑郁, 焦虑或愤怒, 失眠甚至情绪障碍, 四肢或面部肿胀, 尿频, 尿失禁, 腰膝酸软等, 以此来应对人体内环境的失衡, 即围绝经期综合征 此期是绝大多数妇女一生中必须度过的重要时期, 妇女在此时经历生理和心理的双重危机, 如果处理不积极及时, 可诱发心血管疾病, 精神神经疾病, 肿瘤等, 将会影响妇女的生命健康和生活质量 因此, 避免和减轻围绝经期综合征症状的发生, 预防及治疗老年期疾病, 这是十分具有积极意义的医疗和社会课题 针灸治疗围绝经期综合征的疗效确切, 这点毋庸置疑, 现已被大量临床研究所证实 针灸刺激人体相关的穴位, 激活经络之气, 调整阴阳平衡, 使人体发挥最大潜能, 启动内源性保护机制, 加强人体自身的抵抗力和适应能力, 在妇科疾病的预防和治疗中占有重要地位 近几年, 我们通过大量研究发现, 针灸可能通过以下机制防治妇科疾病 :1 抗氧化体系 ;2 免疫调节 ;3 神经内分泌网 ;4 子宫和卵巢相关 ;5 改善血脂 其中, 有关针灸产生抗氧化效应的研究受到越来越广泛的重视 到目前为止, 国内外采用针刺治疗 围绝经期综合征 并不多见, 或许因为针刺治病的现代科学机理仍不明确 因此系统深入地研究针刺治疗围绝经期征候群的机制及其抗氧化作用, 应用现代医学的语言阐释针刺治病的科学内涵, 对于防治该病具有重要的学术意义及社会价值 1

16 第一部分理论研究 一 围绝经期综合征研究进展 第一部分理论研究 1. 围绝经期概述 围绝经期 [1], 之前被称为 更年期, WHO 在 1994 年已推荐以 围绝经期 一词来代替 更年期 社会不断的在进步, 人类的生活压力不断升高, 围绝经期综合征的发生 [2] 率也在日渐增高 有资料显示我国妇女围绝经期综合征的发病率约为 70%, 因此保障围绝经期妇女的身心健康, 已刻不容缓 围绝经期 是指围绕女性绝经的一段时期, 时间跨度为接近月经停止时出现的与其有关的内分泌 生物学的临床特征起至末次月经后 1 年 ( 约 45~55 岁之间 ) 此时人体内外环境失衡, 则会产生的应激状态, 超出人体自适范围便会发生病理改变, 如多系统的功能障碍, 易导致围绝经期综合症, 骨质疏松症, 高胆固醇血症, 心血管疾病, 脑血管疾病, 癌症, 糖尿病, 精神疾病和其他疾病的发生 妇女在绝经前后, 由于性激素减少所产生的一系列身心症状, 即围绝经期综合征, 包括月经失调 烘热汗出 面部潮红 耳中鸣响 头晕目眩 心悸怔仲 失眠多梦 腰背酸楚 颜面浮肿 肢体麻木 皮肤蚁行样感 精神不宁 烦躁易怒等一系列症状 目前, 社会呈老龄化趋势, 妇女寿命在延长, 围绝经期综合征的发病率有逐年上升的趋势, 而且与社会 家庭 精神心理等多种因素有关 现如今人口老龄化, 加之社会, 家庭, 心理等其他不良因素的不断影响, 围绝经期综合症的发病率逐年上升 由于围绝经期的高发疾病以及高年龄跨度, 使其长时间影响着许多妇女的生活和工作 甚至可以认为, 围绝经期是妇女生命质量由盛而衰的关键点, 妇女此时体内的激素水平突然紊乱, 并且日常疏于调养, 人体原本正常的存在的代谢紊乱, 抗氧化能力减弱, 自由基增加, 血脂异常, 有害物质快速积累, 危害妇女健康, 导致妇女的生活质量迅速下降, 加速老化, 引发心血管疾病和骨质疏松等老年疾病 由于人们对生活质量的人们的需求在不断提高, 因此, 加强对围绝经期综合征的干预, 不仅能够减轻妇女的痛苦, 提高其生活质量, 而且能够预防和减轻老年女性心血管疾病, 骨质疏松, 血脂异常等疾病的发生和发展, 起到延年益寿, 防病保健等作用 试想一下, 如果我们可以运用一些简单, 安全而又有效的方法, 以减少卵巢功能的退化, 自主神经系统紊乱等对妇女的身心的影响, 清除有害物质, 预防疾病, 缓解妇女的围绝经期症状, 增加生命活力, 提高生活质量, 使其更顺利平稳地通过这一时期, 将具有划时代的深刻的意义 2

17 南京中医药大学硕士学位论文 2. 西医西药治疗 2.1 理论基础 西方医学理论认为, 下丘脑, 垂体, 性腺三者的平衡反馈协调作用与生殖内分泌的正常功能密切相关, 任一部分结构与功能的改变都会使此平衡反馈系统发生变化, 使人体降低或损失生殖能力 人体的下丘脑 - 垂体 - 卵巢 ( 性腺 ) 轴处于动态平衡状态 : 下丘脑神经元分泌的下丘脑促性腺激素释放激素 (GNRH), 能够刺激腺垂体释放两种促性腺激素 卵泡刺激素 (FSH) 和黄体生成素 (LH), 从而促进卵泡的发育和成熟, 分泌雌激素 (E) 和孕激素 (P) 及少量雄激素 (T); 而性激素水平的变化, 特别是雌激素水平的变化, 又反过来调节着下丘脑 - 垂体的分泌功能 由于雌激素对下丘脑 GNRH 神经元上的雌激素受体起反馈调节作用 [3], 围绝经期女性体内急剧减少的性激素分泌, 通过负反馈调节作用使促性腺激素升高, 导致下丘脑 - 垂体 - 卵巢轴失衡, 机体内环境紊乱, 产生内分泌和植物神经功能紊乱为主的一系列症状 研究 [4 调查证实 5], 围绝经期综合征患者血清中雌二醇 (E 2 ) 含量明显降低, 与此同时 FSH 与 LH 的含量显著升高 科学研究发现, 妇女全身四百余处的组织和器官的细胞膜上都有雌激素受体, 当雌激素减少时, 这些组织和器官就会受到影响, 不仅引起子宫, 阴道等器官的萎缩性变化, 而且使围绝经期妇女在精神心理异常 神经内分泌失调等多方面的症状 国外研究资料表明 : 几乎所有的绝经期症状都由绝经期女性的血中较低雌激素水平导致 [6] 资料证实, 性腺甾体激素和许多神经多肽及神经递质之间复杂的相互作用是导致植 [7] 物性自主神经系统和精神症状发生的基础 有人认为围绝经期综合症的发病机理还与生殖内分泌 - 免疫调节环路有关, 由于体内过度下降的雌激素水平, 致使生理剂量的雌激素无法激活免疫活性细胞, 雌激素受体亦随之下降, 继而导致 IL-2 及 β- 内啡肽等免疫介质产生不足, 其与去甲肾上腺素的比例失调, 最终导致围绝经期综合征临床症候群 另有国外学者还认为植物神经系统紊乱及精神症状发生是由性腺甾体激素及许多神经多肽 递质 ( 如多巴胺 儿茶酚胺 内源性阿片肽等 ) 间相互作用而引起 围绝经期综合征症状的发生和程度的轻重, 除与上述因素有关以外, 还与个体体质 性格 健康状况和社会家庭 精神文化因素密切相关 可见围绝经期综合征的发病是生理变化 神经内分泌 社会文化相互作用的结果 [8] 2.2 治疗方法 目前现代医学认为, 围绝经期综合征主要是因为卵巢功能减退, 雌孕激素下降所致, 因此临床上多采用激素替代疗法 (HRT) 治疗本病, 及采用相应的对症治疗进行辅助 即根据相应的症状给予患者相应的镇静催眠, 调节自主神经功能等的西药 临床上大量事实表明,HRT 可以降低围绝经期妇女的冠心病, 脑血管疾病, 脑萎缩, 骨质疏松症, 血脂紊 3

18 第一部分理论研究 乱等的发病率, 延缓卵巢功能的衰退, 提高围绝经期妇女生活质量 [9-12] HRT 作为围绝经期综合症的现代医学疗法已有相当长的历史, 在多年的使用中却发现, 长期应用 HRT 也会带来许多的不良反应, 如产生阴道不规则出血 增加妇科肿瘤 心血管疾病等发生的风险 [13-18], 雌激素 雄激素 孕激素之间的相互作用, 性激素应用的个体差异 临床禁忌症等理论及临床中许多未解决的问题使 HRT 的临床推广受到限制 [19-21] 因此寻找其他的替代疗法成为现阶段医学关注的焦点 近年来, 越来越多的临床报道表明针灸治疗该病不仅成本低廉, 实用简便, 而且疗效确切, 安全可靠 3. 中医研究 3.1 古代文献记载 古代医学典籍对本病并无专篇记载, 大多散在见于 年老血崩 脏躁 百合病 等病证中, 尽管分述乱散, 但其总病机还是多从 肾虚 方面来考虑 素问 上古天真论 云 : 女子七七, 任脉虚, 太冲脉衰少, 天癸竭, 地道不通, 故形坏而无子也 王冰认为地道不通指的是经水绝止, 此句的意思是女子约在七七之时, 肾气衰弱天癸枯竭, 绝经后步入老年期 故从中医理论来看, 本病病机是以肾虚为本 肾为先天之本, 阴阳之宅, 既藏元阴又寓元阳, 为 五脏阴阳之本, 说明肾之阴阳能资助 促进 协调全身脏腑阴阳 肾中精气更是五脏六腑 十二经脉之根本 没有肾中精气, 既不能滋润五脏之阴气, 也不能升发五脏之阳气 肾藏精, 主生长发育和生殖 ; 精化气, 足则肾气充盛, 亏则肾气衰弱 所以说人体的生命过程及生殖能力, 完全取决于肾精和肾气的盛衰 由此可以看出, 围绝经期综合征就是在肾气虚衰 天癸枯竭的这一过程中出现的多种症候, 致病之本为肾虚 肾虚又可分为肾阴虚 肾阳虚和肾气虚, 日久则阴损及阳, 又可出现肾之阴阳两虚, 甚致心肝脾等多脏腑的功能失常, 气血津液代谢产生障碍, 导致多种多样的病理变化 素问 阴阳应象大论篇 中云 : 年四十, 而阴气自半也, 起居衰矣 说明人过了四十岁就如同午后的太阳, 开始走向衰退 灵枢 天年 亦言 : 四十岁, 五脏六腑十二经脉皆大盛以平定, 腠理始疏, 荣华颓落, 发颇斑白, 平盛不摇, 故好坐 也说明了四十岁以后, 人体脏腑经脉等机能已开始衰退, 因而妇女会表现出围绝经期的症状 经络方面来说任脉为阴脉之海, 统摄诸阴经气, 任脉又主胞胎 ; 冲脉为十二经脉之海, 又为血海, 调节女性胎产与月经 ; 督脉为阳脉之海, 能总领诸阳经气, 且 入属于脑 而且任 督 冲三脉同起胞中, 出于会阴, 无论是从结构还是从功能方面都与女性机能密切相关 所以说, 任督冲三脉在女性围绝经期的发病中占极为重要的地位 4

19 南京中医药大学硕士学位论文 3.2 现代科学认识 大多数现代科学研究都认为本病与 肾虚 有关 [22-24] 随着年龄的增长, 女子之肾气由盛减衰至竭, 冲任亏损, 天癸渐竭, 肾之阴阳失调 由于肾阴肾阳是人体阴阳之根本, 一旦肾阴肾阳失调, 常常涉及到其他脏腑, 尤以心 肝 肾为主 肾阴不足, 若不能上济心火, 则心火偏亢而心烦汗出 健忘失眠 怔忡心悸 口苦咽干 舌尖红 脉数等 ; 肾阴不足, 精亏不能化血, 乙癸同源, 导致肝肾阴虚, 肝失柔养, 肝阳上亢而产生烦躁易怒 烘热汗出 潮热面红 耳鸣眩晕等症状 ; 肾与脾先后天互相充养, 脾阳有赖肾阳得以温煦, 若肾虚阳衰, 火不暖土, 又导致脾肾阳衰而发生腰酸冷痛 畏寒肢凉等 ; 肾虚肝郁而情绪激动, 烦躁易怒 ; 精血同源, 肾精不足, 精不生血, 而致精枯血燥, 血液运行不畅产生瘀 [25] [26] 滞, 症见肢体疼痛 胸闷等 有人提出心肾失济是绝经前后发病之基础 还有人认为肾气亏损固然为本病发生的主要因素, 痰瘀内生却是导致本病发病 产生多样性临床表现的关键 此外, 也有一些学者认为心理特征和社会因素与本病的发生亦有一定的影响 3.3 针灸治法的临床应用 体针很多医家采用针刺及耳穴治疗围绝经期综合征, 大多首先考虑补肾, 亦重视健脾胃 治疗时除遵循常规辨证循经取穴外, 特别重视背俞穴及脾经穴位运用 目前最常用的经脉有肾经 任脉, 使用频次较高的穴位有关元 肾俞 三阴交 太溪等 [27] 有人将 60 例患者随机分为腹针组和口服百优解对照组 腹针组根据腹针理论选取了引气归元组合 ( 中脘 下脘 关元 气海 ) 气穴 气旁等穴位 腹针组 30 例中, 痊愈 8 例, 显著进步 12 例, 进步 8 例, 无效 2 例, 总有效率为 93.3% 经 HAMD 减分率比较后发现腹针疗法与百优解总有效率相当, 差异无统计学意义 (P>0.05) 有学者 [28] 在观察针刺治疗围绝经期综合征的疗效中, 根据中医治疗本病以肾为主的法则, 取关元 中极 子宫 三阴交, 发现针刺后患者的血清内分泌激素比针刺前有明显的改变 有实验 [29] 对肾阴虚型患者取神门 三阴交 百会 肾俞 太溪, 肾阳虚者取神门 三阴交 百会 命门 神阙, 结果 36 例肾阴虚患者, 痊愈 19 例, 显效 16 例, 无效 1 例, 总有效为 97.2%; 26 例肾阳虚患者中痊愈 14 例, 显效 11 例, 无效 1 例, 总有效率为 96.2% 在临床研究中发现 [30], 针刺背俞穴 三阴交 神门 中极 太冲治疗围绝经期综合征, 具有疗效确切 [31] 疗程短 安全无不良反应的特点 蔡礼松等通过刺激背俞穴, 再取募穴关元 中极, 以俞募配穴为基础上再配以神门 三阴交 百会 ; 再辅以耳穴贴压, 总有效率达 90% 以上 其中大部分研究采用 Kupper-man 指数评分进行疗效评价, 发现与治疗前相比, 治疗后 Kupperman 指数评分均呈下降显著, 尤其是潮热一症的 Kupperman 指数下降明显, 提示针刺可以有效改善围绝经期的血管舒缩状况 耳穴耳针疗法 5

20 第一部分理论研究 临床上亦可采用耳针或者贴压耳穴的方法来治疗围绝经期综合征, 方法为寻找耳穴区的敏感点予以电针刺激 [32], 或贴压王不留行籽 [33] ; 主穴取耳穴之子宫 卵巢 交感 内分泌 内生殖器 肾 肝, 再加适当配穴进行治疗 ; 5-10 次一疗程, 嘱患者每日自行按压穴位, 以耳廓热 胀 微痛感为度, 一疗程后总有效率达 88%-98.39%, 说明耳针疗法能 [34] 够调整失衡的内分泌功能及植物神经系统, 改善妇女围绝经期综合征症状 还有研究耳穴针灸治疗 34 例患者, 主穴为内分泌 卵巢 子宫 配穴随症, 若肾阴虚证辅以肝 肾, 若肾阳虚证辅以脾 肾 ( 均取双侧 ) 结果显示, 显效患者 6 例, 有效 22 例, 无效 2 例 其他疗法针灸治疗围绝经期综合征方法众多, 临床上还有许多研究采用穴位埋线法 [35] 灸脐疗法 [36] 梅花针叩刺法 [37] 头针刺 [38] [39 按摩推拿 40] 走罐法 [41] [42 捏脊疗法 43] 红外偏 [44] 振光疗法等方法进行治疗, 疗效可观, 总有效率为 97.4%-100% 说明传统疗法对围绝经期综合症均有较好疗效 联合疗法治疗采取联合应用单纯针刺法加电针或加耳穴贴压 内服中药饮剂 西药 按摩推拿 [45-47] 穴位注射等两种或以上的方法, 都取得了较好的临床效果 有许多研究对比单纯应用某种方法及联合使用两种或更多方法, 结果都发现综合疗法效果要好于单一疗法,, 有效率可达 82% 以上, 说明疗法叠加能取得较好协同作用 4. 国外报道 近年来, 国外学者对针灸治疗围绝经期综合征也进行了不少临床研究, 开展了许多临床随机对照试验 (RCT) 观察其疗效, 其中有大量关于针灸治疗围绝经期潮热的文献报道 [48-50] 这些试验或针或灸, 其中设立的对照组大多包括等待治疗组 安慰针组或假针刺组等, 潮热的频率 潮热严重度或潮热症状评分的改善是疗效评价的首要指标, 次要指标是生存质量的指标, 采用围绝经期量表 (MRS) 妇女健康问卷(The Women s Health Questionnaire) 等 这些试验结果都提示在改善潮热频率和潮热严重度方面, 等待治疗组的效果远远低于针灸组, 但针刺组 假针刺组 安慰针组之间疗效却并无明显统计学的差异 [51 系统评价中显示 52], 从现有临床随机对照试验中看来, 并没有充分的证据说明真针刺在改善围绝经期潮热方面优于假针刺, 尽管之前的某些研究已显示在改善血管舒缩的症状方面看来针刺疗法优于激素疗法 很多激素疗法或安慰针作为对照的临床试验不仅数量少, 且试验设计在方法学上不够严谨, 所以还需更进一步的研究才能说明问题 这与国内报道的高比例的阳性结果相悖, 加之国内一些临床试验设计方面不够严谨, 方法学上质量不高, 仅从某些主观症状的改善 实验室指标检查来判断疗效, 缺少影响生命质量的评价及对远期结局的评价, 使国内试验结果的可信度不高 6

21 南京中医药大学硕士学位论文 5. 结语 HRT 虽为西医治疗围绝经期综合征的主要疗法, 但有一定的不良反应 依据中医理论, 临床上首治肾虚, 再进行辨证治疗 针灸能够激发机体产生良性应激, 充分调动自身潜能, 启动内源性保护及自愈机制, 减轻不良因素对机体带来的损伤, 是古今重要预防治疗保健方法, 而且简便易行, 副反应少, 针灸疗法能够有效的干预围绝经期妇女发生的病理性应激, 使机体迅速适应内外环境的骤然变化, 减少稳态失衡造成的机体损伤及诱发的相关疾病, 对提高围绝经期妇女的生命质量具有极为重要的意义, 尚未广泛推广使用的原因可能在于其机理的研究尚未明确 因此我们在今后的研究中, 应以中医理论为指导, 利用现代的科学研究方法, 提高针灸治疗围绝经期综合征的科学性及疗效 二 关元穴治疗围绝经期综合征的古今研究 1. 古代论著记载 灵枢 寒热病 中最早就有关于 关元穴 的记载, 在 素问 气穴论 中名 下纪 灵枢 寒热病 中名 三结交 甲乙经 中名 次门 在 针灸资生经 中还被称为 大中极 丹田 等 难经 中有云 : 脐下肾间动气者丹田也, 人之根本也, 精神之所藏, 五气之根元 关元穴的重要性可见一斑 灵枢 寒热病 上又述 : 三结交者, 阳明 太阴也, 脐下三寸关元也 从经脉循行来论述关元穴 医经精义 认为先天之原气与元阴元阳交合之所就是关元 : 元阴元阳交关之所, 即先天之气海也 关元穴属任脉穴位, 还是小肠募穴, 位置临近女子胞, 此处不仅有任脉与足太阳 足少阳 足厥阴经几经交会, 还通冲脉, 这在 素问 举痛论 中已有提及 : 冲脉起于关元 在 类经图翼 被称为 女子蓄血之处 所以此穴可以调理冲任 温通胞脉, 有极好的调经与治疗下焦疾病作用, 早在 妇人大全良方 中就有论述 : 因经不调而生他病, 当先调经, 经调则他病自愈 古代论著中早有大量文献记载针灸关元穴善调冲任 治疗妇女经带病, 能够调理围绝经期, 防病延年, 故为临床调治妇女经带病必选穴 宋 窦材 扁鹊心书 : 保命之法, 灼艾第一 人至三十, 三年一灸脐下三百壮 ; 五十, 二年一灸脐下三百壮 ; 六十, 一年一灸脐下三百壮, 令人长生不老 人无病时常灸 虽未能长生, 亦可得百余年寿 针灸甲乙经 述: 女子绝子, 衃血在内不下, 关元主之 脉经 道: 尺脉滑, 血气实, 妇人经脉不利 针关元泻之 备急千金要方 云 : 绝子, 衃血在内不下, 胞转不得尿, 小腹满, 石水痛, 刺关元 又主引胁下胀, 头痛, 身背热, 贲豚寒, 小便数, 泄不止 针灸逢源 : 治妇人带下, 月经不通 明代 医学入门 中记载, 每年的四季交替之时各熏灸一次, 可使 真气坚固, 百病不生 医说 中亦有提到: 若要安, 丹田 三里莫要干 7

22 第一部分理论研究 此外, 关元一穴有健脾补虚 养肝疏泄 补肾益精 解痉止痛 调和气血 回阳固脱等作用, 主治泌尿 生殖 消化 肝胆 神经等多方面的疾病, 上至呼吸系统, 中及消化系统, 下达泌尿 生殖系统病症, 广泛运用于临床各类疾病的治疗 因此, 科学的认识关元一穴, 不但对治疗下焦妇科疾病能起到指导作用, 且对提高针灸临床疗效亦有十分重要的意义 2. 现代认识 有人对文献分析发现 [53], 在围绝经期综合征的针灸治疗研究中, 关元穴是选用最多的 [54] 穴位之一 又有文献通过 CNKI 检索了 1998 年至 2008 年针灸防治围绝经期综合征的文献, 对文献中的选穴 配穴情况进行了统计 归纳和分析, 关元的选用频次为 32 穴次, 在 59.6% 的文献中被选用, 针灸关元不但与选肾俞 太溪 命门等腧穴一样能补肾培元 治病之本, 还可直接调理冲任 因此本文研究将选取调理冲任之要穴 关元穴, 应用针刺的方法, 观察其对随后去卵巢围绝经期模型大鼠自由基代谢指标, 以探讨针刺治疗围绝经期综合征的特异穴位之特性以及起效的抗氧化作用的可能机制 针灸治疗围绝经期综合征的机制, 可以大体总结为从以下几个方面 :1 抗氧化体系 ;2 免疫调节 ;3 神经内分泌网 ;4 子宫和卵巢相关 ;5 改善血脂 2.1 抗氧化体系 研究结果表明 [55], 针刺 关元 穴可以提高脑 心 肾组织中一氧化氮合酶 (NOS) 过氧化氢酶 (CAT) 的活性, 降低脂褐质 (LIP) 的含量, 起到抗氧化的作用 另外在抗衰老的研究中发现 [56], 针刺 关元 穴能调节大鼠肝组织中 NO 的含量, 能提升肝组织中抗氧化能, 提高 GSH -PX 的含量, 降低肝组织中 LIP 的含量 针刺老年雌性大鼠的 关元 穴能够提高其脑组织 NO 含量及 SOD 活性, 降低 MDA 的含量, 提高脑组织的抗氧化能力 [57] [58] 针刺 关元 穴可有效调节其 SOD NOS 的水平使之重新接近于稳态, 可延缓自然更年期大鼠的衰老过程 针刺组大鼠卵巢组织 NO 含量及 SOD 活性明显提高,MDA 的含量明显降低, 认为针刺 关元 穴能显著提高更年期雌性大鼠卵巢组织抗氧化 清除自由基的能力, 改善和调节卵巢生理功能, 从而延缓卵巢的衰老进程 [59] 2.2 免疫调节 免疫功能紊乱是引起围绝经期后心血管疾病 自身免疫性疾病 恶性肿瘤等疾病的重要原因 大量实验结果表明, 针灸能够调节机体免疫功能具有双向性, 不仅能够抑制过高的免疫应答, 还能提高过低的免疫能力 针灸 关元 穴使单核巨噬系统的吞噬功能增加 [60], 提高红细胞免疫粘附能力 [61], 使脾脏指数上升, 增加过低的白介素 -2(IL-2) 含量, 降低过高的白介素 -6(IL-6) 含量, 总体改善衰老小鼠的 T 细胞亚群的失衡状态, 降低已 8

23 南京中医药大学硕士学位论文 经升高的 IL-2R 的含量, 使衰老小鼠的红细胞 C3b 受体活性增强, 说明针灸 关元 穴 [62 可以在一定程度上延缓免疫衰老 63] 2.3 神经内分泌网络 中枢神经递质的变化常为导致病理状态下体内激素水平的变化 出现相应临床症状的 [64] 直接原因 中枢 5- 羟色胺 (5-HT) 可以调节下丘脑 - 垂体 - 卵巢轴 有研究通过针刺 关元 穴, 发现可针刺显著降低随着月龄增长的自然更年期大鼠的皮层 5-HT NE 的含量, 所以我们可以推测针刺 关元 穴调节中枢神经递质的水平的作用, 可能是通过调节应激激素的合成与释放而起效, 在一定程度上还可以改善神经内分泌功能紊乱 现有实验研究表明 [65], 针灸 关元 穴能够调整下丘脑 - 垂体 - 肾上腺轴的活性, 实验结果发现针刺对围绝经期大鼠下丘脑的水平的促肾上腺皮质激素释放激素 (CRH) 血浆促肾上腺皮质激素 (ACTH) 均有较好的调节作用 针刺还可以降低围绝经期时过高的血清黄体生成素 (LH) 卵泡刺激素 (FSH) 含量, 升高过低的血清雌二醇 (E 2 ) 含量以及提高下丘脑 β- 内啡肽 (β-ep) [66 的含量, 以此实现调节生殖内分泌和自主神经系统的功能的作用 67] ; 针刺 关元 穴后去卵巢大鼠血中睾酮 (T) 水平下降, 脑内的雌激素受体 α(erα)mrna 的反转录 - 聚合酶链锁反应 (RT-PCR) 产物有所上升, 而 ERβmRNA 的 RT-PCR 产物则降低 [68] E 2 是雌激素中的主要成分, 在生长 分化及雌性生殖功能中扮演重要角色 雌激素效应的发挥不仅受 E 2 浓度的影响, 也取决于 ER 的表达水平 [69] 研究表明电针可使去卵巢大鼠外周血淋巴细胞内雌激素受体明显升高 [70], 并可改善围绝经期妇女内分泌激素异常以及自主神经功能紊乱产生的症状 [71], 在预防疾病和抗衰老方面有积极意义 2.4 调控血脂 [72-74] 现有大量临床及实验研究都发现针灸关元穴可以调整围绝经期机体内紊乱的血脂状态, 降低其血中已增高的总胆固醇 (TC) 甘油三酯(TG) 低密度脂蛋白(LDL) 水平及升高低下的高密度脂蛋白 (HDL) 水平, 以此防治由高脂血症而诱发的高血压 冠心病等心脑血管疾病, 具有重要防病保健和治疗意义 2.5 子宫 卵巢关联 关元穴与子宫联系密切, 已被现有大量研究证实, 关元穴可特异性影响子宫的功能, [75] 现代研究运用辣根过氧化物酶 (HRP) 神经束路追踪技术, 将 5%HRP 分别注入大鼠关元穴, 观察标记细胞在脊神经节内的节段分布, 结果发现在腰 3 到骶 5 之间的脊神经节内关元和子宫的传入投射的汇聚与重叠, 推测子宫与关元联系的神经基础或许在此 另有研 [76] 究针刺大鼠 关元 穴后用 CB-HRP 示踪法, 观察到电针组标记细胞的总数最多的分布 9

24 第一部分理论研究 节段在 L 2, 推测针刺关元穴信号传入脊髓的主要途径或许在 L 2 进一步研究针刺 关元 [77] 穴后运用伪狂犬病毒 (PRV) 作为神经示踪剂, 观察从穴位传递到神经中枢的针刺信号的传递通路, 发现 PRV 免疫阳性细胞在大鼠的脊髓 脑干 下丘脑以及大脑皮层均有表现 ; 并且在相同核团内的去卵巢 + 电针组的阳性细胞数量与去卵巢组相比明显增加 故我们可以退出, 雌性大鼠在切除卵巢后机体功能异常改变, 影响正常状态下的神经通路, 针刺 关元 穴可促使其原有神经结构恢复 综合以上研究结果, 我们可以大胆推测, 针刺信号在针刺 关元 穴后, 传入脊神经节, 需要首先经过穴区的躯体神经与周围的血管神经丛, 然后再进一步跨突触传入到脊髓 脑干 丘脑 下丘脑和大脑皮层 另外针刺还可通过下调 FasmRNA, 上调 Bcl-2 mrna 在卵巢颗粒细胞中的表达, 继而进一步调控 Fas Bcl-2 的蛋白表达水平, 以达到抑制卵巢颗粒细胞凋亡的作用 [78] [79] 此外还有实验结果说明艾灸 关元 穴可调节子宫局部 E 2 P 及 ER2α 表达, 从而延缓围绝经期大鼠子宫退行性改变 有研究发现 [80] 卵巢炎症 在体表的反应区域所属的脊髓神经节段, 是与支配卵巢功能的脊髓神经节段相一致的, 针刺该区域相对应的经穴对卵巢功能有特异性调节作用 此外, 女性围绝经期肥胖和卵巢功能减退被证明还与瘦素抵抗有关 [81], 有研究发现针灸自然更年期大鼠 关元 穴, 自然更年期可以通过改善围绝经期机体瘦素抵抗的状态, 在一定程度上减缓围绝经期体脂的异常堆积和卵巢功能的减退, 早期预防机体的异常 [82] 以上研究结果都值得我们在临床选穴治疗中重视及思考 3. 结语 综上所述, 针灸对于围绝经期综合征的治疗机制如今已经取得了一些进展, 但从查阅的文献看来, 很多都缺乏中医针灸理论的指导, 而且大多数的研究只注重针灸治疗围绝经期综合征症状的机制的一个或几个方面, 所以我们现在的任务应该是整合已有的资料与研究结果, 在这个基础上进行全面的研究工作, 结合各种有效的指标提出假设机制, 更加全面深入地探索针灸治疗围绝经期综合征的可能机制 妇女进入围绝经期首先是卵巢功能的衰退, 紧接着下丘脑和垂体的功能也开始衰退, 此时雌激素水平锐减, 下丘脑 - 垂体 - 卵巢轴失衡或肾上腺功能异常, 导致神经递质, 激素, 细胞因子等代谢紊乱, 便出现了一系列围绝经期女性的临床上的症状和体征 因此, 神经 - 内分泌 - 免疫网络与围绝经期综合征的关系密不可分 而自由基亦能在很大程度上影响妇女的围绝经期 围绝经期阶段随着卵巢功能的衰退 性激素 促性腺水平紊乱, 导致脂质过氧化作用的升高, 自由基清除酶超氧化物歧化酶活性下降, 引发围绝经期综合征及各种老年疾病如动脉硬化症 高血压 骨关节病等的产生, 更加速了人体衰老的过程 [83] 机体内适应环境的保护效应, 会在自由基形成以后, 产生一个完整的抗氧化防御系统来将其清除 ; 如果机体内这种平衡失调, 保护效应消失, 则自由基将对该组织器官产生不可逆的损伤与破坏, 使组织细胞的化学结构产生破坏性的反应, 破坏水平还会逐步扩大, 最后将造成功能性损 10

25 南京中医药大学硕士学位论文 坏 很多疾病的病理生理学基础都有自由基的参与, 故我们认为现阶段研究应以针刺对自由基代谢的影响为主要着眼点, 以求初步揭示针刺治疗围绝经期综合征的根本机制 三 针刺对抗氧应激系统的影响研究概述 近年来, 自由基损伤理论渗透至各种衰老 疾病学说中 自由基产生于机体代谢过程中的氧化还原反应, 可诱导不饱和脂肪酸过氧化, 产生脂质过氧化反应, 在体内生成过氧化脂质代谢产物, 使生物酶和生物蛋白变性, 影响组织和器官的正常功能, 促使生物体老化 过剩的自由基广泛参与生理和病理过程, 通过其诱导的长期氧化反应, 危害健康导致衰老, 甚至能够严重氧化损伤 DNA, 导致极为严重的后果, 这是公认的最重要的诱导老化的因素之一 此外丙二醛 (MDA) 作为自由基引起的脂质过氧化代谢产物不仅导致了 DNA 分子之间的交联, 而且使蛋白质分子内部产生交联, 酶蛋白的质和量都受到这种分子的交联的影响, 毒害细胞的同时更产生了遗传上的变异作用, 与此同时, 自由基抗氧化酶系统作为人体固有的防御系统之一被激活, 清除自由基, 使得自由基的产生和清除始终处在动态平衡中 如果自由基产生与清除失衡, 细胞及其重要成分就会受到过量的氧自由基的损害, 从而发生膜功能的减退, 蛋白质和酶的变性,DNA 分子链断裂 交联等损伤, 渐渐导 [84 致衰老 85] 随着年龄的增长, 正常机体内自由基由正常水平渐渐升高, 而抗氧化系统的功能逐渐衰弱, 相关酶的抗氧化活性下降, 清除自由基的能力也明显下降, 使得自由基产 [86 生与清除不在动态平衡范围内, 加重自由基对细胞组织器官等的损伤, 加速衰老的进程 87] 而针灸已被发现具有清除自由基 提高抗氧化酶的活性 延缓细胞衰老等作用 实验 [88] 研究发现围绝经期组大鼠脂质过氧化物 (LPO) 值较青年组大鼠显著增高, 而超氧化物歧化酶 (SOD) 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px) 值则明显降低, 证明围绝经期鼠自由基 [89-91] 代谢紊乱确实存在 研究显示针刺能使超氧化物歧化酶 (SOD) 的含量升高和使丙二醛 (MDA) 的含量降低, 并且能调节一氧化氮 (NO) 在脑组织中含量, 提高一氧化氮合酶 (NOS) 在心组织中的含量, 提高 SOD 过氧化氢酶(CAT) GSH-Px 的活性 有人通 [92] 过实验观察自然更年期雌性大鼠抗衰老指标在针刺 关元 穴后的变化, 结果显示针刺 关元 穴后 SOD NOS 在血浆中的含量与正常同月龄大鼠组比较升高显著 ; 增高的 SOD 水平, 可拮抗过氧化作用及停止自由基的链反应, 增加氧利用率, 增大末梢血流量, 减少失眠 疲劳等症状的发生 升高的 NOS 水平则可增加成骨 破骨细胞之间的信号传导过程的调节作用, 进而起到预防围绝经期时发生的骨质疏松等症的作用, 延缓衰老的进程 1. 人体抗自由基体系 抗自由基体系主要包括超氧化物歧化酶 (SOD) 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px), 以及维生素 E C β- 胡萝卜素等抗氧化剂 在生物体的生理状态下, 自由基的生成与体内 11

26 第一部分理论研究 抗氧化系统 ( 例如超氧化物歧化酶 SOD) 间始终保持动态平衡 ; 病理条件或增长的年龄会打破这种平衡, 过剩自由基不断累积, 超过机体抗氧化防御系统, 损伤组织器官, 因为自由基对生物大分子的破坏作用其实就是指对维持生命活动的重要蛋白质和 DNA 的破坏, 所以说自由基对蛋白质, 遗传物质 (DNA,RNA) 等都具有潜在的危险性 自由基的含量与老化密切相关, 这与 素问 上古天真论 中关于 中年 以后衰老机理与征象论述不谋而合 岁, 皮肤开始松弛老化, 因为自由基损害皮肤胶原系统, 对应 五七阳明脉衰, 面始焦, 发始堕 ;35-50 岁时的性功能减退是由于自由基损害内分泌系统, 六七三阳脉衰于上, 面皆焦, 发始白 ; 超过 50 岁, 自由基损害心血管系统, 会造成各种心脑血管疾病, 甚至严重影响人体健康 七七, 任脉虚, 太冲脉衰少, 天癸竭 ; 地道不通, 故形坏而无子也 当组织中氧自由基大量生产堆积和抗自由基系统的活性降低时, 会造成自由基的链反应, 导致细胞膜破裂, 细胞死亡 当机体有损伤时, 常导致氧自由基和过氧化脂质的升高, 内源性抗氧化酶系统活性的降低, 从而使内源性抗氧化酶系统不能有效抵御氧自由基对生物体造成的损害, 衰老与疾病的发生在所难免, 渐渐走向死亡 2. 谷胱甘肽抗氧化酶系统 谷胱甘肽抗氧化酶系统是人体抗氧化系统中较为重要的部分, 具有清除羟自由基 不饱和脂肪酸自由基 烷过氧自由基, 以及防止自由基损伤的作用, 该系统主要包括谷胱甘肽 (GSH GSSG), 谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-Px), 谷胱甘肽还原酶 (GR), 谷胱甘肽巯基转移酶 (GST) 而目前对谷胱甘肽抗氧化系统的研究大多集中在谷胱甘肽和谷胱甘肽过氧化物酶方面 2.1 谷胱甘肽 谷胱甘肽 (glutathione) 是人类细胞中自然合成的, 主要在肝内合成, 由谷氨酸 (γ -glutathione,γ-glu) 半胱氨酸(cysteine,Cys) 甘氨酸(glycin,Gly) 组成的小分子三肽化合物, 是细胞内主要的非蛋白质巯基化合物, 广泛分布于机体各个器官内, 对维持细胞生物功能起到重要作用 在细胞内的正常环境下, 还原型 (GSH) 和氧化型 (GSSG) 的谷胱甘肽是其主要存在形式 [93] 还原型谷胱甘肽 (GSH) GSH 主要存在于胞浆内, 一种细胞内重要的调节代谢物质, 由 γ- 谷氨酰半胱氨酸合成酶和谷胱甘肽合成酶催化而合成, 是机体内自由基防御系统中的一个重要物质, 其半胱氨酸上的巯基为其活性中心, 巯基是 GSH 中最重要的功能集团, 多种人体内重要的生化反应都有巯基的参与, 它可以保护体内重要酶蛋白巯基不被氧化 灭活, 并保证能量代谢 细胞利用 通过巯基结合与体内的自由基, 使自由基还原, 即转化为可代谢的酸类物质从 12

27 南京中医药大学硕士学位论文 而加速其排泄, 能有效清除生物氧化产生的自由基, 稳定细胞内环境, 还可保护暴露于低氧环境的组织免受自由基损害, 减少自由基对重要脏器的损害 [94] 另外, 亦能抑制氧自由基过氧化引发的细胞凋亡 坏死及自身稳态改变等, 降低的 GSH 含量是一种凋亡早期的 [95 激活信号, 随后产生的氧自由基诱导细胞发生凋亡 96] 同时也可作为 GSH-Px 催化反应 [97 中的底物, 起到清除氧自由基的作用 98], 参与了脂多糖诱导的细胞因子转录调节及 I-KB/NF-KB 信号通路调节 [99] 氧化型谷胱甘肽 (GSSG) 生理状态下,GSH 在发挥抗氧化作用后会生成 GSSG, 而 GSSG 也会在还原型辅酶 Ⅱ 以及 GSH-Px 谷胱甘肽还原酶(GR) 作用下又还原为 GSH, 多余的 GSSG 则排出细胞外, 使 GSH/GSSG 这一氧化还原对在细胞内维持在一定水平 氧化应激出现时, 一方面细胞内合成 GSH 的能力降低, 另一方面 GSH 被大量消耗转变为 GSSG, 造成 GSH 减少,GSSG [100] 增加,GSH/GSSG 比值也发生改变 目前研究认为分析 GSSG 的量也可在一定程度上 [101] 可以反应细胞的氧化应激态 有人观测二氧化硫 (S0 2 ) 吸入后小鼠多种脏器内抗氧化物质谷胱甘肽 (GSH) 和抗氧化系统 GSH/GSSG 的变化, 发现在 SO 2 浓度为 148mg/m 3 时, 雌 雄鼠各脏器 GSH 水平和 GSH/GSSG 均有下降, 其中 GSH 在雄鼠肝 肺 肾 心 脑 胃 小肠 睾丸和雌鼠肝 肺 肾 小肠中下降显著,GSH/GSSG 在雄鼠肝 肾 小肠 翠丸和雌鼠肝 肺 肾 脑 胃 小肠中下降显著, 结果认为 SO 2 的毒作用与其降低体内 [102] 抗氧化物质水平 削弱体内抗氧化防御系统有关 还有人通过对谷胱甘肽代谢研究来探索氟对成骨细胞氧化应激的影响, 发现低剂量氟作用下 GSH 含量和 GSH/GSSG 比值增加, 同时 GSSG 水平下降, 这反映了成骨细胞处于活跃的抗氧化状态, 进一步证明了成骨细胞内氧化应激水平明显增强 这表明 GSSG 也可以反应细胞的氧化应激态 2.2 谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-Px) 谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-Px) 主要存在于细胞线粒体中, 是一种含硒 (Se) 的酶, 它不直接清除自由基, 而是机体广泛存在的一种重要的催化过氧化氢分解的酶, 它能有特异性地催化 GSH 对过氧化氢 (H 2 O 2 ) 等过氧化物的还原反应, 使 H 2 O 2 脂氢过氧化物 [103 (LOOH) 等还原为无毒或较小毒性的物质 104], 从而中断脂质过氧化过程的恶性循环, 在保护生物膜及生物大分子免受自由基损伤方面起着极为重要的作用 谷胱甘肽抗氧化物酶系统在清除羟自由基 不饱和脂肪酸自由基 烷过氧自由基, 防止自由基损伤, 发挥抗氧化方面具有极大作用, 因此研究谷胱甘肽抗氧化物酶系统在抗氧应激机制中的作用, 具有重要临床和科研价值 以往的研究中对谷胱甘肽的抗氧化作用主要集中在 GSH, GSH-Px 等方面, 针对 GSSG 的研究较少 而我们认为筛选或评价某一抗氧化药物或疗法时, 单纯以某种抗氧化指标来判断并不够, 必须从该抗氧化作用的正反两 13

28 第一部分理论研究 方面进行比较性研究才能得出可信的客观结论 故在本研究中, 除了观测 GSH 与 GSSG 的含量 还观测了 GSH/GSSG 比值的变化 14

29 南京中医药大学硕士学位论文 第二部分实验研究 一 实验材料 1. 实验主要药物与试剂 1.1 水合氯醛 ( 分析纯, 批号 : ): 国药集团化学试剂有限公司 用蒸馏水配成 10% 的溶液备用 1.2 乙烯雌酚注射液 1.3 硫酸庆大霉素注射液 ( 批号 : ) 南京金陵制药厂 1.4 GSH 含量测定试剂液 : 所需试剂盒均来自建成生物, 按试剂盒说明书严格操作配置 1.5 GSSG 含量测定试剂液 : 所需试剂盒均来自建成生物, 按试剂盒说明书严格操作配置 2. 实验主要仪器 1.1 电子分析天平 ( 型号为 DY89-I, 厂家为上海新科天平有限公司 ) 1.2 电动玻璃匀浆机 ( 型号为 DY89-I, 宁波新芝科器有限公司 ) 1.3 离心机 ( 型号为 LD5-2A, 北京医用离心机厂 ) 1.4 漩涡混合器 ( 型号为 MVS-1, 北京北德科学器材有限公司 ) 1.5 一次性 华佗牌 针灸针 ( 规格为 0.35mm 25mm, 苏州医疗用品厂 ) 1.6 电针仪 ( 型号为 WQ1002K, 安隆光电技术公司 ) 1.7 其他 : 试验中所用手术刀 剪刀 止血钳 镊子 缝合针线 鼠板, 固定台 固定器等实验器材均由南京中医药大学针药结合实验室提供 3. 实验动物 清洁级健康雌性 Sprague Dawley(SD) 大鼠 40 只,4 月龄, 体重 180±20g, 来自南京中医药大学动物实验中心, 常温 26 下适应性喂养 1 周后用于实验 动物饲料来自南京中医药大学动物实验中心, 大鼠均饮用自来水 术前自由进食及饮水 二 实验方法 1. 实验前准备 1.1 动物分组将 40 只 SD 实验大鼠随机分成 4 组 : 1 假手术组 ;2 去卵巢组 ;3 药物组 ( 造模同去卵巢组, 同时进行雌激素药物注射治疗 ); 4 电针组 ( 造模同去卵巢组, 同时电针 关元 穴 30 分钟 ) 15

30 第二部分实验研究 1.2 模型的制备及处理 [105] 造模方法把待造模大鼠用 10% 水合氯醛 (3.5ml/kg 体重 ) 进行腹腔注射麻醉, 成功后, 腹位固定于无菌手术板 以最后肋稍后方为中心用剪毛剪剪毛, 消毒皮肤 自腰椎沿背部正中线向下做约 1-2cm 的纵向切口, 切开皮肤, 扩张及剥离皮下肌层 离脊柱约 1cm 处沿肩胛线分别于左右两肋下腰肌处剪开长约 1cm 切口, 钝性分离 ( 经筋膜, 肌层 ) 逐层进入腹腔, 将两侧肾脏外下方脂肪组织轻轻提出腹腔, 可见被包裹于脂肪组织中大鼠卵巢, 呈粉红色 桑葚样, 绿豆大小, 分离脂肪团, 结扎输卵管峡部, 切除卵巢, 检查无渗血, 将脂肪组织和子宫角送回腹腔内, 逐层缝合 对侧同法 假手术组同法操作, 但仅切除卵巢周围少量脂肪 术后连续 3 天, 每日两次腹腔注射庆大霉素 (0.2ml/kg 体重 ) 以防感染 其中有 4 只大鼠于造模手术期间死亡,3 只在假手术后因伤口感染死亡 成模标准去势术后第 4 天开始进行阴道脱落细胞涂片检测 ( 上午 9 时及下午 3 时 ), 连续 7 天 涂片 : 将小棉签 ( 耳鼻喉科用的最小的棉签 ) 用生理盐水沾湿, 放入大鼠阴道里旋转两圈, 再将棉签涂于洁净的玻片上, 自然风干后用瑞氏染料染色, 置光学显微镜下进行细胞学检查, 检查去势是否完全 动情周期从阴道涂片细胞学变化可分为 1 动情间期 2 动情前期 3 动情期 4 动情后期这四个期 若动物模型涂片中未见成熟脱落上皮细胞, 无动情周期性变化 ( 符合更年期特征 ), 证明卵巢已彻底切除, 说明围绝经期实验动物模型造模成功 弃去 3 只不合格大鼠 2. 治疗方法 1 假手术组 : 与电针组 药物组同步, 固定于自制固定台上, 不予任何治疗,10 日一疗程, 间隔 3 日, 连续 2 疗程, 以确保给予除不同治疗方法以外的相同刺激量 2 去卵巢组 : 同假手术组 3 药物组 : 注射乙烯雌酚注射液每只大鼠 2mg/ kg 体重皮下注射, 每日 1 次,10 日为一疗程, 间隔 3 日, 连续 2 疗程 4 电针组 : 将大鼠每天固定于自制固定台上, 取大鼠 关元 穴, 选穴标准大鼠穴位 [106] 的定位方法参照李忠仁主编 实验针灸学 华佗牌 针具 0.35mm 25mm 的毫针, 关元 穴直刺, 深度为 0.3cm, 时间为 30min 电针仪型号:WQ1002k( 安隆光电技术公司 ) 负极接关元穴, 正极接于大鼠尾部, 刺激强度以针柄轻微颤动, 大鼠不嘶叫为宜, 10 日为一疗程, 间隔 3 日, 连续 2 疗程 刺激参数 : 连续波, 电流强度 :1-3mA, 频率 3HZ, 为避免日夜节律对观测指标的影响, 治疗均在每天上午 8:30-10:00 进行 16

31 南京中医药大学硕士学位论文 3. 样品采集方法 于末次治疗 / 给药后 24h, 上午 8:30-11:30, 处理各组实验大鼠 先用电子天平称量各大鼠体重 在大鼠的清醒状态下, 采用快速断头法于无菌工作台上快速剪开颅腔, 在冰皿上解剖取脑, 迅速分离垂体, 并在低温环境下开腹剪取子宫, 吸取多余水分, 称重后即制备组织匀浆, 把组织置于玻璃匀浆管内, 加入 1mol/LHCL1ml 溶液, 进行充分匀浆, 放置在室温下 100 分钟后加入 1mol/LNaOH0.8ml 溶液中和, 低温环境下离心 (3500prm, 20min), 取用上清液,-20 保存备用 4. 指标检测及检测方法 4.1 子宫指数用天平仪称得子宫湿重 (mg) 后, 以每 100g 体重的子宫重量数表示 (mg/100g) 子宫指数即子宫湿重 (mg) 与每 100g 体重的比值 4.2 抗氧化指标 GSH GSSG 测定 GSH 与 GSSG 均采用酶标法, 严格按试剂盒内说明书的操作程序操作 计算公式 : 1T-GSH 含量 (μmol/l)= 测定 OD 值 / 标准 OD 值 标准浓度 (50μmol/L) 样本测试前稀释倍数 2GSSG 含量 (μmol/l)= 测定 OD 值 / 标准 OD 值 标准浓度 (50μmol/L) 样本测试前稀释倍数 3 还原型谷胱甘肽 (GSH) 含量 =T-GSH 含量 -2 GSSG 含量 5. 数据处理及统计学分析 本文统计采用 SPSS16.0 软件, 数据处理结果以均数 ± 标准差 ( x ±s) 来表示, 两组间比较采用 t 检验, 多组间比较采用方差分析 方差齐性时应用 LSD 检验行样本均数间的多重比较, 方差不齐时用 Dunnett-t 检验来检验, 若 P<0.05 为差异有显著性统计学意义 ; P<0.001 则为差异有极显著性统计学意义 17

32 第三部分实验结果 第三部分实验结果 1. 实验大鼠体重 子宫指数的变化及针刺对其的影响 表 1:: 各组大鼠治疗前后体重比较 ( x ±s) 单位 :g 组别例数治疗前治疗后 ( 治疗前后差值 / 治 电针组 ± ± ±6.72 药物组 ± ± ±6.74 去卵巢组 ± ± ±6.69 假手术组 ± ± ±8.99 注 : 与去卵巢组相比,P<0.05; 与去卵巢组相比,P<0.001 表 1 结果表明 : 1. 治疗前假手术组体重低于其他各组, 但差异无统计意义 (P>0.05); 2. 治疗后假手术组体重低于其他各组, 但无统计学差异 (P>0.05); 3. 治疗后去卵巢组体重高于其他组, 差异有显著统计学意义 (P<0.001); 4. 假手术组及药物组治疗前后差值百分比显著低于去卵巢组 (P<0.001); 5. 电针组治疗前后差值与治疗前体重百分比低于去卵巢组, 差异有统计学意义 (P< 0.05) 6. 电针组治疗前后差值与治疗前体重百分比与药物组的差异有统计学意义 (P<0.05) 提示电针及雌激素都可以控制大鼠去卵巢后的体重增加, 但电针组不如药物组显著 表 2 治疗后各组大鼠子宫指数比较 ( x ±s) 组别例数子宫指数 ( 单位 mg 100g-1) 电针组 ±9.17 药物组 ±14.93 去卵巢组 ±11.61 假手术组 ±10.92 注 : 与假手术组比较,P<0.001; 与去卵巢组比较,P<

33 南京中医药大学硕士学位 电针组 去卵巢组 子宫指数 图 1. 各组子宫系数比较 表 2 与图 1 的结果表明 : 1. 去卵巢组与假手术组相比较, 子宫指数明显降低, 差异显著 (P<0.001); 2. 电针组比去卵巢组子宫指数上升, 有明显统计学差异 (P<0.001), 与假手术组相比, 差异仍具有统计学意义 (P<0.001) 3. 药物组与假手术组比较, 子宫指数异常升高, 与在实验取样过程中观察到的子宫组织呈明显增大 水肿状态相吻合 提示电针可以使去卵巢大鼠子宫萎缩程度减轻, 但并不能回到正常水平 2. 实验大鼠子宫内 GSH GSSG 及 GSH/GSSG 相对比值的变化以及针刺对其的影响 表 3: 各组大鼠子宫组织 GSH 含量 GSSG 含量与 GSH/GSSG 比值 ( x ±s) 组别例数 GSH 含量 (μmol/l) GSSG 含量 (μmol/l) GSH/GSSG 电针组 ± ± ±0.40 药物组 ± ± ±0.19 去卵巢组 ± ± ±0.18 假手术组 ± ± ±0.56 注 : 与去卵巢组比较,P<0.05; 与假手术组比较 P<0.05; 与去卵巢组比较,P< 0.001; 与假手术组比较 P<0.001 表 3 结果表明 : 1. 与去卵巢组相比, 电针组的 GSH 含量上升 (P<0.05),GSSG 含量下降 (P<0.05), GSH/GSSG 比值显著提高 (P<0.001); 2. 药物组与假手术组比较,GSH 含量下降,GSSG 含量上升,GSH/GSSG 比值显著下降, 并与去卵巢组各相应值差异无统计学意义 (P>0.05) 19

34 第三部分实验结果 提示电针关元穴可以提高子宫中谷胱甘肽抗氧化系统的水平 3. 实验大鼠脑垂体 GSH GSSG 及 GSH/GSSG 相对比值的变化以及针刺对其的影响 表 4: 各组大鼠脑垂体组织 GSH 含量 GSSG 含量与 GSH/GSSG 比值 ( x ±s) 组别例数 GSH 含量 (μmol/l) GSSG 含量 (μmol/l) GSH/GSSG 电针组 ± ± ±0.58 药物组 ± ± ±0.18 去卵巢组 ± ± ±0.31 假手术组 ± ± ±0.16 注 : 与去卵巢组比较,P<0.05; 与假手术组比较 P<0.05; 与去卵巢组比较,P< 0.001; 与假手术组比较 P<0.001 表 4 结果表明 : 1. 电针组与去卵巢组相比, 提高了脑垂体中 GSH 含量, 降低了 GSSG 含量 (P<0.05); 2. 电针组 GSH/GSSG 比值与去卵巢组, 假手术组有明显统计学差异 (P<0.001) 提示电针关元穴可以提高脑垂体中谷胱甘肽抗氧化系统水平, 但仍未达到假手术组的水平 20

35 南京中医药大学硕士学位论文 第四部分讨论 1. 围绝经期大鼠模型的选择 性激素的分泌逐渐减少是妇女步入围绝经期后衰老的主要原因 性激素水平的降低导致了围绝经期中老年妇女的神经内分泌功能 免疫功能及自由基代谢等的显著改变 [107] 去卵巢大鼠 [ ] 自然老化鼠 [111] [112] X 线损伤卵巢大鼠这三种模型为现今的围绝经期研究的主要大鼠模型 本实验主要采用第一种去卵巢大鼠为模型模拟人类绝经后的状态, 来观察针刺及雌激素对雌性去卵巢大鼠代谢及抗氧化功能的影响, 切除雌性大鼠双侧卵巢后会造成雌激素的急剧降低 选择该模型的主要原因是由于种种客观条件限制, 而且目前本实验室去卵巢大鼠造模技术较为成熟, 且该种模型具有判定标准一致, 更具统一性等优点 2. 对照药物的选择 本实验用乙烯雌酚作为对照组的用药, 主要是因为非甾体类药物乙烯雌酚 (Diethylstibestrol,DES) 具有明显雌激素活性, 可促使女性性器官以及女性的第二性征正常发育 ; 还能促使子宫内膜增生及阴道上皮角化 ; 更能减轻因为妇女围绝经期或妇科相关的手术后性腺功能不足或功能障碍导致的全身性功能紊乱 DES 适用于各种卵巢或垂体功能异常而引起的疾病, 比如闭经 围绝经期综合征等, 治疗效果明显 3. 各组实验大鼠体重的变化 实验前各组大鼠体重差异无统计学意义 实验结束后各组大鼠体重均有一定的上升, 但去卵巢组大鼠体重显著高于其它各组, 差异有统计学意义 (P<0.05), 且去卵巢组大鼠体重上升幅度也明显高于其它各组, 治疗前后差值与治疗前体重百分比明显大于其它各组, 差异有统计学意义 (P<0.05) 治疗措施的干预下的药物组大鼠体重的差值百分比低于去卵巢组, 差异有意义 (P<0.05) 电针组大鼠体重改变百分比与去卵巢组相比, 差异有统计学意义 (P<0.05), 由此可以推断去双侧卵巢后大鼠体重的增加在一定程度上可以由电针疗法和雌激素疗法控制, 且电针组不如药物组显著 4. 去卵巢大鼠子宫指数的变化以及针刺对其的影响 子宫指数可反映围绝经期妇女子宫的萎缩状态, 雌激素水平逐渐下降引起子宫萎缩, 宫颈管闭锁, 黏液的分泌减少 正常雌性大鼠子宫的结缔组织中有较丰富的血管和腺体, 而自然老化的雌性大鼠以及双侧卵巢摘除的围绝经期模型大鼠均发生了子宫明显萎缩, 腺体和血管明显减少, 子宫指数明显降低等退行性变化, 而针灸治疗在某种程度上可以改善这种变化 [ ] 在本实验中, 观察到去卵巢围绝经期模型大鼠子宫与假手术组相比明显 21

36 第四部分讨论 萎缩, 而针刺 关元 穴后, 去卵巢组大鼠的子宫指数与模型组相比有所提高, 有明显统计学差异, 故我们推测电针 关元穴 可以改善摘除卵巢后的子宫萎缩情况 与此同时, 我们在实验中还观察到雌激素的应用使子宫明显增重, 肉眼能观察到子宫异常水肿, 说明了雌激素疗法存在一定的副作用 5. 针刺对谷胱甘肽抗氧化系统的影响 围绝经期是妇女衰老进程中关键的过渡时期, 是妇女衰老的重要标志, 机体功能盛衰的关键点 自由基损伤学说是重要的衰老学说之一, 故围绝经期与机体自由基的损伤联系密切 大量研究表明, 围绝经期妇女机体的抗氧化能力逐渐减弱, 自由基显著增多, 如此恶性循环, 促进衰老的进程, 而针刺有提高更年期或衰老机体的抗氧化能力, 增强自由基清除酶活性, 减少自由基损伤的作用 本实验结果显示 : 去卵巢大鼠子宫与垂体中 GSH 含量显著下降,GSSG 含量显著升高, GSH/GSSG 相对比值显著降低,, 说明卵巢功能的消失造成了机体清除自由基的能力下降, 呈现氧化应激状态 而电针能提高去卵巢模型大鼠子宫组织中的 GSH 含量, 降低其 GSSG 含量, 显著升高 GSH/GSSG 相对比值, 表明电针可以大幅提高机体抗氧化平衡系统的整体水平, 清除体内过多的自由基, 从而起到抗衰老的作用 上述研究结果说明, 电针通过调控去卵巢大鼠子宫及垂体的 GSH GSSG 含量, 能使机体中的谷胱甘肽抗氧化系统维持在一个较高的动态平衡水平, 从而减轻去卵巢后因自由基过量而导致的损伤, 以发挥其整体抗氧化保护作用 22

37 南京中医药大学硕士学位论文 小结 本课题以去卵巢大鼠为围绝经期模型, 通过电针 关元 穴, 观察谷胱甘肽抗氧化系统在针刺后的变化, 以此来评估电针对去卵巢模型大鼠的抗氧化作用的影响, 试图从抗氧应激角度探讨电针疗法治疗围绝经期综合征的可能机制, 为临床上针灸防治女性生殖内分泌疾病的应用提供了现代科学的实验依据, 通过本研究可以得出 : 1. 电针可以减轻围绝经期模型大鼠增加的体重, 增加其子宫重量 ( 子宫指数 ), 故电针不仅有减轻体重的作用, 还可以减缓围绝经期后子宫的萎缩性变化 2. 电针 关元 穴可以使去卵巢大鼠已降低的 GSH 含量显著升高, 同时使已升高的 GSSG 含量显著下降, 并且能够提高 GSH/GSSG 相对比值, 说明电针能够减少自由基代谢产物, 提高机体的总体抗氧化系统的水平, 从而增强机体的抗病能力和反应能力, 发挥了抗衰老的作用 3. 电针疗法可以减轻去势大鼠垂体和子宫的老化情况, 其效果不仅温和而且不良反应少, 具有更好的整体调控优势, 明显优于雌激素疗法 23

38 攻读硕士学位期间取得的学术成果 攻读硕士学位期间取得的学术成果 1. 徐甜, 李忠仁. 关元穴在妇科疾病中的应用及作用机制 [J] 辽宁中医药, 2010,37(5): 徐甜, 李忠仁. 针刺调节细胞信号转导的研究及思考 [J] 针刺研究, 2011,36(2):

39 南京中医药大学硕士学位论文 参考文献 [1] 乐杰. 妇产科学 [M]. 北京 : 人民卫生出版社,2003: [2] 郑修霞. 妇产科护理学 [M]. 3 版. 北京 : 人民卫生出版社,2002:224. [3]Pfaff DW, Kow LM, Zhu YS,et al. Hypothalamic cellular and molecular mechanisms helping to satisfy axiomatic requirements for reproduction. J Neuroendocrinol,1996; 8(3): [4] 王秀梅, 蒋福才. 更年期女性性激素 RIA 测定的临床意义 [J]. 武警医学,2004; 15 (2 ): [5]Overlie I,Morkrid L,Andersson AM, et al. Inhibin A and B as markers of menopause: a five-year prospective longitudinal study of hormonal changes during the menopausal transition. Acta Obstet Gynecol Scand, 2005;84(3): [6]Ouzounian S,Christin-Maitre S. What is menopause? Rev Prat 2005;55(4): [7] 李大金. 更年期综合征生殖内分泌 - 免疫功能 [J]. 上海医学,1996; 19 (1): [8] 韩丽琳, 王小云. 更年期综合征的研究与治疗近况 [J]. 现代中西医结合杂志,2000;9(19): [9]Khoo CL,Perera M. Diabetes and the menopause. J Br Menopause Soc,2005;11(1):6-11 [10]Kuh D,Langenberg C,Hardy R},et al. Cardiovascular risk at age 53 years in relation to the menopause transition and use of hormone replacement therapy: a prospective British birth cohort study. BJOG, 2005;112 (4): [11]Mizunuma H. How to chose HRT or bisphosphonate for postmenopausal osteoporosis? Clin Calcium, 2003:13(2): [12]Gambacciani M,Vacca F. Postmenopausal osteoporosis and hormone replacement therapy. Minerva Med, 2004;95(6): [13]Siddiqui N I,Rahman S,Mia A R,et al.evaluation ofhormone replacement therapy[j].mymensingh Med J, 2005,14(2): [14]Bassol S,Carranza-Lira S,Celis-Gonzalez C,et al. The impact of a monophasic continuous estro-progestogenic treatment on Latin American menopausal women. Maturitas,2005:50(3): [15]This P. Hormonal replacement therapy and breast cancer. Rev Prat 2005;55(4): [16]Bergkvist L,Adami HO,Presson I,et al. Therisk of breast cancer after estrogen and estrogen-progestin on replacement therapy. N Engl J med. 1989;321:293 [17]Nkondjock A,Ghadirian P. Risk factors and risk reduction of breast cancer. Med Sci (Paris),2005;21 (2):175 一 180 [18]Mills PK,Riordan DG,Cress RD,et al. Hormone replacement therapy and invasive and borderline epithelial ovarian cancer risk. Cancer Detect Prev,2005;29(2): [19] 王岩, 李振彬, 王晓旭, 等. 中医药治疗妇女更年期综合征的现状与对策 [J]. 河北中医,2001:23 (4): [20] 陈名道, 杨颖. 绝经妇女激素替代治疗的困境与中医药治疗更年期综合征的前景 [J]. 中西医结合学报,2003,1( 1) :

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45 南京中医药大学硕士学位论文 附录 英文缩略词还原型谷胱甘肽 (GSH); 氧化型谷胱甘肽 (GSSG) 超氧化物歧化酶 (SOD) 过氧化氢酶 (CAT) 谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-Px) 谷胱甘肽 S- 转移酶 (GST) 一氧化氮合酶 (NOS) 丙二醛 (MDA) 脂褐质 (LIP) 下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素 (CRH) 血浆促肾上腺皮质激素 (ACTH) 黄体生成素 (LH) 卵泡刺激素 (FSH), 雌二醇 (E 2 ) 睾酮 (T) 下丘脑 β- 内啡肽 (β-ep) 总胆固醇 (TC) 甘油三酯 (TG) 低密度脂蛋白 (LDL) 高密度脂蛋白 (HDL) 脂质过氧化物 (LPO) 总抗氧化能力 (T-AOC) 自由基 (FR) 氧自由基 (OFR) 活性氧 (ROS) 中枢 5- 羟色胺 (5-HT) 二氧化硫 (S0 2 ) 31

46 致谢 致谢 三年的时光如白驹过隙 首先我要感谢我的母校南京中医药大学的培养, 在她浓厚的学术和科研氛围的熏陶下, 使我在今后的学习工作和生活充满了智慧和力量 感谢我的导师李忠仁教授, 从论文的选题, 实验设计直至论文的完成无不浸透着您的心血 导师崇高的医德, 严谨的治学态度, 渊博的知识, 追求科学 真理的无畏精神, 思考问题的大师风范, 对于生活中的问题给予我长者和朋友式的指导, 教育我如何做人 做事和做学问, 使我终生受益 感谢南京中医药大学研究生院及第二临床医学院各位老师对我的关心及支持, 也要十分感谢课题完成过程中提供无私帮助的教研室全体老师, 特别感谢沈梅红 马骋 项晓仁老师的关心和指导 感谢李成师兄, 潘建玲, 景丹丹师姐及刘晓华 李平 侯玉昆 吴晓亮等同学在临床和实验中给予的指导和帮助 深深的感谢我的父母, 我所拥有的一切无不浸透着他们的爱和希望 另外, 向支持 关心和帮助我的所有人表示最真挚的谢意 最后, 还要感谢为我的实验奉献出生命的实验大鼠们为人类的医学事业做出的贡献 32