F2 临床研究 Clinical Research 责任编辑 周泽虹 PCOS: 我老了以后还会 高雄 吗 据 Journal of Clinical 为探索这一问题 研究年 素的水平在绝经期前呈类似 Endocrinology & Metabolism 龄对 PCOS 女性血清雄激素的 的 下 降

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1 中 华 人 民 共 和 国 国内统一刊号CN 医学参考报社出版 2016年02月18日 星期四出版 总第440 期 本期 7 叠 A 心律学频道 B 检验医学频道 C 营养学频道 D 消化内镜学频道 E 超声医学频道 国家卫生和计划生育委员会主管 F 生殖医学频道 G 灾害救援医学频道 生殖医学频道 Reproductive Medicine Number 01 妇科肿瘤患者的生育力保存 据 Human Reproduction update 2016 年 1 月报道 题 都 存 在 所 以 这 项 研 究 结 果 结果表明 卵巢癌发病率在应 不能作为最终依据 用激素治疗的人群中比例更高 也比较安全 低 卵 巢 组 织 自 体 移 植 相 对 妇科癌症病人生育力保存后的 目前普遍认为 有乳腺癌 在无激素治疗史的女性中比例 辅 助 生 殖 技 术 的 应 用 作 者 病史的女性妊娠相对安全 但 较低 在不同肿瘤类型的发病 四 妇科癌症患者生育力保存 Ignacio Zapardiel 等 的方法 目前人们关注的重点并不只局 率不同 但是 联合口服避孕 尽管妇科癌症在中老年 限于乳腺癌 并且 癌症病史 药对肿瘤侵袭可能有保护作用 女 性 发 病 比 例 较 高 但 研 究 的女性生育的新生儿结局也是 关于这个研究的大规模流行病 于 IVF 治 疗 的 不 孕 夫 妻 来 说 显示有相当数目的女性在育 人们关注的重点 大多数研究 学调查有待开展 相 对 安 全 并 且 有 效 剩 余 胚 总之 近来辅助生殖治疗 龄 期 发 现 患 有 妇 科 癌 症 现 表明 癌症幸存者女性生育并 2 卵巢组织低温冷冻与转移性 胎的储存 OHSS 的风险 子 方式的改进提供了新的治疗策 代女性生育年龄的后延使得 不会增加新生儿先天畸形发病 恶性细胞风险 宫环境受损以及未实行的胚 略 但是 这些技术的临床应 卵巢储备成为妇科癌症病人 率 胎 转 移 都 促 进 了 胚 胎 冷 冻 用仍需要医学 伦理 社会和 卵巢组织低温冷冻是生 主 要 的 生 殖 治 疗 辅 助 生 殖 1 胚胎冷冻 胚胎冷冻对 法律层面的严格控制 育 力 保 存 的 一 个 重 要 策 略 的应用 技术仍然是大多数妇科癌症 二 类固醇激素使用与肿瘤的 但是由于这可能将肿瘤细胞 女 性 的 首 要 选 择 但 是 新 型 安全性 重新种植回已经治愈的病人 轻女性 未婚女性 生育时间 手术方式干预也成为部分女 性的选择方式 增加 2 卵母细胞冷冻 对于年 北医三院 李天杰 报道 雌 激 素 可 能 影 响 乳 腺 癌 所以临床应用受到一定限制 不确定的女性以及因为伦理或 子宫内膜癌和卵巢癌的代谢和 在 白 血 病 患 者 中 卵 巢 组 织 宗教问题无法进行胚胎冷冻的 导 读 年轻女性 小于 35 岁 占 行 为 雌 激 素 受 体 在 70% 的 低温冷冻是一个高风险的操 女性 卵母细胞冷冻是最佳手 PCOS: 我 老 了 以 后 还 子 宫 内 膜 癌 患 者 约 5% 宫 颈 乳腺癌患者中存在 这些患者 作 因 为 血 液 中 的 癌 症 细 胞 段 会 高雄 吗 癌 约 2% 卵 巢 癌 约 1.5~17% 乳腺癌复发率更高 雌激素受 可 以 渗 入 卵 巢 三 个 不 同 的 3 卵巢组织低温保存和 这些恶性肿瘤的手术治疗包括 体 在 90% 的 子 宫 内 膜 癌 Ⅰ 型 研 究 组 发 现 白 血 病 病 人 的 移植 癌症病人治疗后发生卵 卵巢和 / 或子宫的切除 从而 患者中存在 子宫内膜癌Ⅰ型 卵巢组织样本有大于一半的 巢 早 衰 的 风 险 性 大 大 增 加 造成生育力受损 生育力保存 由激素依赖的子宫内膜增生发 恶 性 细 胞 阳 性 率 并 且 达 卵巢组织低温保存和移植是 在这些妇科癌症患者中均有过 展而来 单独给予外源性雌激 到 完 全 缓 解 CR 的 白 血 病 这类病人生育力保存的最佳 成功的案例 对于妇科癌症患 素会增加子宫内膜癌的相对风 患者体内活性恶性细胞减少 手段 者 妇科医师应该让其了解生 险 而卵巢癌相对风险度的增 这与化疗前实施卵巢组织低 育力保存的方式 综上 妇科 加 只 有 2.2%~3.2% 与 长 时 间 温保存不同 这些证据表明 于 那 些 刚 诊 断 不 久 需 进 行 化 DNA 重 编 程 中 5hmC 癌症病人生育力保存后 实施 使用雌激素有关 宫颈癌与雌 除去亚微观以及检测不到的 疗 的 女 性 或 者 性 腺 轴 尚 未 的积累 辅助生殖技术的有效性和安全 激素应用关系不大 综上 现 浸 润 达 到 完 全 缓 解 的 白 血 发 育 成 熟 的 青 春 期 前 女 性 性很重要 有的数据揭示妇科癌症与雌激 病患者低温保存的卵巢组织 卵母细胞体外成熟是最佳策 圆形精子的 ICSI 可行 素应用可能的机制 这些因素 中活性恶性细胞检测到的可 略 吗 一 妇科癌症治疗后妊娠的安 在 ART 治 疗 的 过 程 应 该 充 分 能 性 很 小 另 一 个 担 心 是 以 全性 考虑到 达到完全缓解为目的的化学 妇科癌症女性治疗后妊 卵泡的生长是动态 三 辅助生殖技术与妇科癌症 综 上 化 疗 前 进 行 卵 巢 组 织 监 测 多 阶 段 的 分 析 系 统 来 的 风 险 内 科 医 师 可 能 更 担 风险 低温保存是避免卵巢储备下 评估卵泡生长以及卵母细胞 心 妊 娠 对 癌 症 复 发 的 风 险 1 促排卵药物与癌症风险 降 的 一 个 有 效 方 式 其 它 的 发育和周围颗粒细胞发育的 可 选 方 式 包 括 体 外 成 熟 和 情况 分析的方式总结了妊娠是否 要是病例报告和回顾性研究 分 离 卵 巢 移 植 在 这 些 病 人 会 增 加 乳 腺 癌 的 再 发 率 结 这些研究表明 促排卵药物的 中的应用前景还应进一步评 者功能不全的女性不能生育 果 表 明 妊 娠 女 性 生 存 期 较 应用可能与某些特定癌症类型 估 而 对 于 乳 腺 癌 病 人 研 这种情况下子宫移植成为重要 对 照 组 更 长 证 实 了 妊 娠 的 相关 性激素可能具有强有力 究显示即使肿瘤远处转移的 的治疗方法 2000 年人类第一 安 全 性 然 而 鉴 于 该 研 究 的致癌作用 可能与边界性卵 临床证据和影像学证据都缺 例子宫移植手术被实施 但是 属 于 回 顾 性 研 究 对 健 康 巢癌症发生相关 然而 目前 乏 的 情 况 下 早 期 乳 腺 癌 病 99 天后由于众多原因移植的子 母亲效应 的控制不是完全 WHO 关于这方面的证据并不充 人发生卵巢转移的可能性很 宫不得不被切除 而后也有同 的 能 够 妊 娠 的 女 性 本 身 分 大多数研究样本量小 不 低 对 于 宫 颈 癌 病 人 相 关 类手术进行 但是子宫移植术 健 康 状 况 更 好 癌 症 复 发 的 足以评估激素应用与癌症发生 报道的 5 个病例显示宫颈癌 后相应的 ART 操作相对风险更 风 险 更 低 所 以 其 与 对 照 组 的关系 近来发表的一篇 meta 患者卵巢组织移植后均未发 高 难度更大 因为子宫吻合 相 比 生 存 期 更 长 这 种 类 型 分析对绝经期激素应用与卵巢 现 复 发 的 迹 象 既 然 早 期 子 血管畸形会增加取卵过程的出 的偏倚在任何回顾性研究中 癌发病风险的关系进行了总结 宫内膜癌发生转移的风险很 血 以及取卵术后盆腔炎风险 社址 北京西城区红莲南路30号4层B0403 邮编 总机 网址 新方法 3版 PCOS 影响工作记忆 4版 5版 6版 5 始基卵泡培养和窦前 卵泡培养 治疗可能会让步于卵巢保存 的 因 此 应 该 有 相 应 的 动 态 目前相关研究很少并且主 胚胎植入前遗传诊断 4 卵母细胞体外成熟 对 娠 除 外 生 育 力 保 存 本 身 2012 年 Azim 等 人 利 用 meta 2版 6 子宫移植 子宫缺如或 mtor 信 号 通 路 对 Sertoli 细 胞 的 重 要 意 义 7版 育龄期女性癌症幸存 者的不孕症问题 8版 消息 医学参考报社网站 已开通 以生殖医学频道为 主的各频道 现正免费注册 网站会员 并可网上阅读报 纸以及参加继续医学教育等 学术活动 网址 责任编辑 周泽虹

2 F2 临床研究 Clinical Research 责任编辑 周泽虹 PCOS: 我老了以后还会 高雄 吗 据 Journal of Clinical 为探索这一问题 研究年 素的水平在绝经期前呈类似 Endocrinology & Metabolism 龄对 PCOS 女性血清雄激素的 的 下 降 趋 势 在 18~44 岁 的 岁 以 后 PCOS 2015 年 9 月 报 道 题 多 影响 北欧多个学者联合开展 女 性 里 病 例 组 女 性 与 正 常 女性原先稳步 囊卵巢综合征女性一生中 了一项多中心的病例 - 对照横 对 照 组 相 比 雄 激 素 升 高 显 下降的雄激素 雄 激 素 水 平 的 变 化 北 欧 多 断面研究 他们纳入了 681 名 著 这种差别即便是调整体重 水平又呈现一 中 心 合 作 研 究 作 者 Pekka PCOS 女性作为病例组 正在使 指数的影响也仍存在 当她们 个 显 著 升 高 Pinola 等 用激素类用药的患者被剔除在 年龄接近绝经期时 两组雄激 且个体间差异 外 另外还有 230 名正常女性 素的差别缩小 但 PCOS 女性 增 大 如 图 所 示 作为对照 的雄激素水平还是稍高于正常 PCOS 女 性 绝 经 以 后 高雄激素水平 以下简称 为 高 雄 是多囊卵巢综合 征 Polycystic Ovary Syndrome 这 些 女 性 都 进 行 了 睾 酮 女性 同时研究者还发现 随 然 而 到 了 50 高 雄 激 素 血 症 仍 然 持 续 甚 PCOS 的一个主要特点 在高 FAI A4 和 DHEAS 的 测 量 年龄增长 雄激素水平下降 至 更 加 严 重 学 者 推 测 这 雄的女性里 可能高达 80% 是 结果显示 随着年龄的增长 这些 PCOS 女性的月经逐渐规 种雄激素水平升高及个体差 向随访去分析 PCOS 女性雄激 PCOS 患者 在临床上 高雄表 PCOS 女性和正常女性的雄激 异 很 可 能 是 因 为 性 激 素 结 素的变化 可能由于各年龄组 现为多毛 痤疮 雄激素性脱 合球蛋白的水平的显著下降 的个体差异会对分析结果产生 发等 而在生化指标方面 高 它可与睾酮结合 降低血液 一定的影响 但是这个研究还 雄主要指的是血液中雄激素的 中 游 离 睾 酮 的 水 平 而 这 是给我们带来了一些有价值的 水平升高 相关的指标包括 个 蛋 白 和 体 重 增 长 糖 代 谢 提示 睾 酮 游 离 睾 酮 指 数 即 睾 功能和胰岛素敏感性受损相 是 的 PCOS 女 性 老 了 酮与性激素结合球蛋白比值 关 当 把 体 重 指 数 这 一 因 素 还是很可能高雄 且在这个时 Free Androgen Index FAI 调 整 以 后 绝 经 以 后 PCOS 期 子 宫 内 膜 癌 糖 尿 病 心 此外 大约 20%~30% 的 PCOS 女 性 和 正 常 女 性 的 FAI 水 平 血 管 疾 病 等 并 发 症 高 发 在 女性雄烯二酮 A4 及硫酸脱 并 没 有 显 著 差 别 这 说 明 绝 育龄期 更多的 PCOS 患者关 氢表雄酮 DHEAS 也可能升 经 后 体 重 与 PCOS 女 性 高 雄 注 的 是 如 何 生 育 会 积 极 地 高 关系密切 去配合医生进行助孕相关治 律起来 在 PCOS 患 者 的 育 龄 期 服用影响激素水平药物 疗 实际上 在绝经后 PCOS 雄激素的产生是增加的 这个 的 PCOS 女性被该研究排除在 患者继续面临更多对生命健 基 本 成 为 大 家 的 共 识 但 是 外 因其可能引起研究偏倚 康的威胁 控制饮食及体重 正步向绝经或者已经绝经的 然而若将这部分患者纳入研 调整生活方式及适当的药物 PCOS 患者 雄激素情况是怎样 究 病例组与对照组的这种雄 干 预 等 是 伴 随 PCOS 女 性 激素差别可能更加显著 虽然 一生的功课 的 可能很多患者疑惑 我老 图 1 各年龄段 PCOS 患者与对照组雄激素水平变化 了以后还会高雄吗 这是一个横断面研究 并非纵 北医三院 周泽虹 报道 辅助生殖技术所致的异位妊娠率发生变化了 据 Hum Reprod 2016 娠的异位妊娠率的变化趋势 塞尔的一家医疗机构进行了 年 2 月报道 题 辅助生殖技 是 否 有 影 响 呢 目 前 来 自 一项基于人群的回顾性研究 异 位 妊 娠 接 受 IUI 的 妊 娠 术对异位妊娠率影响的变 比利时的一家生殖医学中心 这项研究的研究对象来自英 周期中 异位妊娠率为 1.1% 化 趋 势 英 国 全 国 范 围 开展的基于人群的回顾性研 国人类受精和胚胎学官方匿 而 接 受 IVF/ICSI 的 妊 娠 周 期 究给予了我们答案 名数据库 2000 年 ~2012 年的 中 异 位 妊 娠 率 为 1.4% 后 12 年 内 160,000 例 通 过 1.4% 数 量 为 2,244 个 是 辅助生殖技术妊娠的 过去我们认为 实施辅助 数据 并对这 12 年间接受过 分 析 作 者 Santos- 生殖技术会增加异位妊娠的 辅助生殖技术的妊娠妇女相 者的粗异位妊娠率显著高于 前 者 P =0.043 但 是 该 研 Ribeiro S 等 发生率 并呈逐年上升趋势 关 数 据 进 行 了 分 析 在 这 12 究 同 时 发 现 从 2000 年 到 近些年辅助生 随着辅助生殖技术的迅速发 年 中 共 有 161,967 个 接 受 2012 年 接 受 IVF/ICSI 妇 殖技术手段不断发 展 以 及 我 们 对 不 孕 症 发 病 辅助生殖技术治疗的周期产 女的异位妊娠率在逐年下降 展 同 时 我 们 对 不 原因的进一步认识和相关政 生妊娠 其中 8,852 个周期 而 接 受 IUI 的 妇 女 异 位 妊 娠 孕症发生原因谱的 策 的 不 断 调 整 有 必 要 对 这 来 自 IUI 而 153,115 个 周 期 率没有逐年下降趋势 认识也在不断更 些变化对异位妊娠率变化趋 来 自 IVF/ICSI 统 计 数 据 显 那 么 接 受 辅 助 生 殖 技 势的影响进行相关统计分析 示 在 这 些 通 过 辅 助 生 殖 技 术 的 妇 女 其 发 生 异 位 妊 娠 新 那么 这些改变 对通过辅助生殖技术妊 近 期 来 自 比 利 时 首 都 布 鲁 医学参考报 下转第 3 版 术 而 产 生 的 妊 娠 周 期 中 约 生殖医学频道 名誉顾问 王一飞 理事长兼总编辑 巴德年 社 长 魏海明 副理事长 曹雪涛 等 副社长 吕春雷 理事会秘书长 周 赞 副社长 周 赞 主 编 乔 卢光 编 庄广伦 杰 副 主 编 周灿权 陈振文 陈子江 黄荷凤 常务编委 冯 云 范立青 何方方 黄国宁 曲文玉 张学红 张云山 朱桂金 刘嘉茵 李尚为 辑 崔岳毅 段红英 黄 莹 赖昱臣 刘丹丹 刘昌玉 柳溪溪 龙 晓 宇 齐新宇 任一昕 王 洋 魏妹明 吴 寒 解炳腾 杨 岑 杨宇卓 袁一峰 袁 鹏 张博淳 张 哲 张曜耀 周泽虹 以拼音为序 社 址 北京西城区红莲南路30号4层B0403 以拼音为序 邮 编 编 总 机 曹云霞 陈秀娟 关咏梅 黄元华 马艳萍 孙莹璞 医学中心二层药理基地 姚元庆 王树玉 徐素欣 王世鄂 杨冬梓 翟晓梅 联系电话 医学参考报生殖医学频道编辑部委员会 委 地址 北京市海淀区花园北路49号北京大学第三医院生殖 传真 以拼音为序 编辑部主任 李 宁 霍 李天杰 蓉 邮箱地址 yxckb-sz@sohu.com

3 F3 责任编辑 : 周泽虹 临床研究 Clinical Research 胚胎植入前遗传诊断新方法 据 Journal of Genetics and 外周髓鞘蛋白 22(Peripheral 重组而造成的 尽管利用多重 NGS) 的 PGD 方法, 利用多次 (CNV), 两种方法保持双盲 Genomics 2016 年 1 月报道 Myelin Protein22,PMP22) 多态性标记可减小诊断失败或 退火环状循环扩增 (Multiple 研究显示连锁分析与 NGS 结 题 : 基于下一代测序的同时诊 基因 1.4Mb 串联重复而造成 误诊的可能性, 但是在某些家 Annealing and Looping-Based 果相符,14 枚胚胎中有 9 个无 断腓骨肌萎缩症 1A 型和染色 的 本病通常 20 岁以下发病, 系中, 由于缺乏基因的变异, Amplification Cycles,MALBAC) CMT1A 重复 另外在这 14 枚 体非整倍性的胚胎植入前遗 导致行走或跑步困难, 远端 可能很难检测突变附近的多态 进行全基因组扩增 (Whole 胚胎中, 共 9 枚为非整倍体或 传诊断新方法 ( 作者 Baoheng 对称性肌无力和萎缩, 感觉 性标记 而且, 根据连锁分析 Genome Amplification,WGA), 节段性染色体异常 Gui 等 ) 缺失 方法, 通常需要进行调整以适 在单细胞水平同时检测 CMT1A 这是首次利用 NGS 对腓骨 腓骨肌萎缩症 (Charcot- 对于 CMT1A 的胚胎植入 应疾病和对所研究的家庭 对 重复和染色体组成 胚胎来自 肌萎缩症 1A 型进行的胚胎植 Marie-Tooth,CMT) 是最常见 前遗传诊断 (Preimplantation 单个细胞或少量细胞, 该方法 一名女性 CMT1A 患者, 检测 入前诊断 研究证明 NGS 方法 的遗传性神经病变, 人群中每 Genetic Diagnosis,PGD), 一 仍需进行优化 此外, 对单基 结果与传统的连锁分析方法进 可以直接在单细胞水平有效检 2,500 人有 1 人患病 腓骨肌萎 般利用重复区域内的短串联重 因疾病的 PGD 来说, 整倍性 行了对比 测 1.4Mb 的重复, 基于 NGS 的 缩症 1A 型 (CMT disease type 复序列 (Short Tandem Repeat 的检测也十分重要, 移植染色 胚胎经卵裂球活检, PGD 可用于有小的 CNV 导致 1A,CMT1A) 占 CMT1 约 70%, Markers,STR) 但是通过连 体倍性正常的胚胎可提高妊娠 MALBAC 扩增后利用 STR 的遗传性疾病 虽然样本数有 在所有 CMT 中约占 50%, 以 锁分析, 在少部分病例中会出 率 及单核苷酸多态性 (Single 限, 但该团队认为,NGS 可以 常染色体显性方式遗传 现诊断失败或误诊, 可能是 来自中南大学的研究团 Nucleotide Polymorphism,SNP) 低测序深度在单细胞水平检测 CMT1A 在大多数情况下, 是 由于基因脱扣 (Allele Drop- 队报告了一种基于下一代测序 进行连锁分析, 其他的 WGA 产 至少约 1Mb 的 CNV 由位于染色体 17p11.2 的包括 Out,ADO) 或未发现的染色体 (Next-Generation Sequencing, 物用于 NGS 分析拷贝数变异 ( 北医三院任一昕报道 ) IVF 受精率的新型标记物 : 血清胎球蛋白 B 据 Hum.Reprod 半胱氨酸蛋白酶抑制剂超家族 球蛋白家族中胎球蛋白 B 在 其他 4 名服用过不同口服避孕 避孕药的女性 (30.0 ± 6.5 岁 ) 年 3 月报道 题 :IVF 周期中 cystatin 的一个分支 Fetuin 蛋 卵子受孕过程中起着重要作 药的女性 收集血样样本后 进行重复检测血清 fetuin-b 含 血清高胎球蛋白 B 含量与受精 白是包括胎球蛋白 -A 和胎球 用, 其实验显示, 卵巢发育 检测血清 fetuin-b, 黄体生成 量 重复的标准差为 4.0 ± 率相关 ( 作者 Floehr J 等 ) 蛋白 -B 的血清糖蛋白, 具有 正常的雌性实验鼠因体内的 素 (LH), 雌二醇和孕酮的含 2.3% 口服避孕药含有以下一 胎球蛋白 (Fetuin) 是一 多种生物学功能,Fetuin-A 和 FetuinB 基因敲除而无法受孕, 量 另外, 由 8 名进行卵胞浆 种或多种成分 :0~0.03mg 乙烯 种肝脏合成并释放至血液的蛋 Fetuin-B 在组织分布大致是一 而将其卵巢移植至胎球蛋白 B 内单精子显微注射技术 (ICSI) 雌二醇和 0.15~3.0 mg 各种类型 白 1944 年,pedersen 首度报 致的, 但不同组织含量差别很 水平正常的另一只卵巢切除 的和 19 名使用重组人卵泡刺 的黄体酮 另外, 对 27 名 IVF 道了牛血清中分离出新球蛋白 大,Fetuin-A 在盲肠 心脏 的实验鼠时, 后者恢复了生 激素 (rfsh) 和 / 或经历联合 或 ICSI 女性中重复测定三次 -fetuin, 并推测其可能与哺乳动 胎盘 皮肤 舌分布高于结肠 育能力, 故德国的科研人员 使用 FSH 与 LH 后接受 IVF 的 血清 fetuin-b 三次重复标准 物的发育有关, 并将其命名为 肝 肺 骨骼肌 小肠 脾和 提出由于体内胎球蛋白 B 的 女性来测定 fetuin-b 的正常参 偏差为 3.3 ± 1.8% 成功是指 fetuin,1988 年,Elzanowski 胃 相比较而言,Fetuin-B 在 缺乏可能是导致女性不孕不 考值 每个 IVF 周期至少取 至少一个卵母细胞受精, 而未 发现了 fetuin 的 cystatin 结构 盲肠 肾 胎盘 皮肤和舌组 育的一个原因 样 3 次 为比较血清 fetuin-b 成功则指无卵母细胞受精 成 域, 即拥有 N 端两个衔接排 织高于结肠 肝 肺 骨骼肌 2016 年德国亚琛的研究 和卵泡液 fetuin-b 的含量, 研 功者的平均年龄为 34.4 ± 4.4 列的 cystatin 结构域和在 C 端 小肠 在人体内 Fetuin-B 在女 人员探索了在体外受精 (IVF) 究者对总体卵泡液中和个体 岁, 未成功者年龄为 35.4 ± 3.3 的一个更小结构域, 所有的 性体内的含量表达是男性的两 治疗中, 血清胎球蛋白 B 卵泡中的 fetuin-b 进行分别检 岁 对监测下促排卵的患者的 Fetuin 序列包含 12 个半胱氨酸 倍 2013 德国美因茨大学和亚 (fetuin-b) 含量会与受精率的 测 取样从 2012 年 1 月开始, 血清与卵泡液进行深一步分 残基, 故 Fetuin 蛋白被确定为 琛工业大学研究人员发现, 胎 相关性, 并将研究结果发表在 至 2014 年 3 月结束 该研究 析 卵泡液和血清样本提取在 2016 年的 Human Reproduction 的所有参与者和患者已知情同 同一天 研究者在 6/9 名患者 上接第 2 版的危险因素都有哪些呢? 多因素线性回归分析结果显示, 其首要危险因素是输卵管性不孕 ( 校正 OR 为 2.23,95%CI 1.93~2.58), 次要危险因素是移植胚胎个数 ( 胚胎移植数 2 个比 1 个的校正 OR 为 1.29,95%CI 1.11~1.49 ; 胚胎移植数 3 个比 1 个的校正 OR 为 1.69,95%CI 1.35~2.11) 此外, 研究结果显示, 相比早期卵裂球移植, 延长胚胎的实验室培养时间, 培养到 Day3-4 或者 Day5-7 再进行移植可以明显降低异位妊娠的发生风险 (Day3-4 的校正 OR 为 0.85, 95%CI 0.76~0.94 ;Day5-7 的校正 OR 为 0.73,95%CI 0.63~0.84) 最后, 该项研究还发现,IVF/ICSI 后的冷冻胚胎移植对异位妊娠率没有影响 ( 校正 OR 为 0.92,95%CI 0.76~1.11) 该项研究为降低输卵管性不孕的全国筛查项目的贯彻执行, 如衣原体筛查项目, 在降低异位妊娠率方面所带来的潜在益处提供了强有力的支持 此外, 研究结果也支持倡导单个胚胎移植, 因为其不仅可以降低 IVF/ICSI 后多胎妊娠率, 同时也降低异位妊娠率 ( 北医三院段红英报道 ) 上 研究人员首先尝试确定血清 fetuin-b 正常参考范围, 研究的参与者是 5 名男性,7 名未接受过激素治疗的女性和 意 使用酶联免疫吸附试验测定 fetuin-b 对 5 名男性 (34 ±14.6 岁 ) 11 名女性参与者 (29.4 ± 4.1 岁 ) 以及 9 名口服 中其血清和卵泡液的 fetuin-b 水平无显著性差异, 表明血清与卵泡液中 fetuin-b 可自由进出 因此血清 fetuin-b 水平可替换卵泡液 fetuin-b 水平 成功者中 fetuin-b 水平显著升高 (n=15, P < ), 但在未成功 IVF 者中 fetuin-b 无变化 (n=6, P=0.118), 即便雌二醇水平不同 (P 分别是 和 ) 因此, 研究者得出结论, 血清 fetuin-b 含量可作为预测 IVF 成功与否的标记物 在 IVF 过程中对 fetuin-b 含量进行测定, 有助于预测 IVF 或 ICSI 过程中卵母细胞是能否穿过透明带成功受精 ( 北医三院张曜耀报道 )

4 F4 基础研究 Basic Research 责任编辑 刘丹丹 PCOS 影响工作记忆 据 FERTILITY AND 者们利用功能磁共振成像技术 女 性 则 是 在 阿 姆 斯 特 丹 VU 月 经 周 期 的 第 1-5 天 而 实 表现的速度和精度在对照组 STERILITY 2016 年 2 月报道 研究过高水平的雄激素和随后 大学校园里以海报形式募集 验组女性则选在雌激素水平 和实验组之间并无统计学差 题 多囊卵巢综合征影响认知 的抗雄治疗对 PCOS 女性患者 的 这 些 对 照 组 女 性 月 经 周 较低的时间点即月经周期第 异 两 组 之 间 性 激 素 水 平 的 吗 功能磁共振成像研究探索 工作记忆过程中相关脑区活性 期 规 律 月 经 周 期 不 超 过 天 N-back 任 务 测 差异也与所关注脑区的活性 工作记忆 作者 Remi S Soleman 的影响 等 天 没 有 高 雄 激 素 血 症 或 试用来检测工作记忆过程的 无 关 然 而 抗 雄 治 疗 后 该研究所选取的研究对 PCOS 的 任 何 特 征 如 果 被 神 经 活 动 在 测 试 中 表 现 的 实验组和对照组之间激活脑 多囊卵巢综合征 Polycystic 象为伴有高雄激素血症的 测试者过去接受过任何形式 精度和速度反应了工作记忆 区 的 差 异 消 失 了 而 且 实 验 Ovary Syndrome PCOS 是不孕 PC O S 女 性 患 者 1 4 名 和 没 有 的性激素治疗或者在此之前 的能力 组在完成高记忆负荷水平的 症的主要诱因 根据鹿特丹标 P C O S 的 女 性 20 名 其 中 伴 3 个月使用过激素类避孕药 该 研 究 发 现 与 对 照 组 准 满足月经稀发 高雄激素 有 高 雄 激 素 血 症 的 PCOS 女 则 被 排 除 如 果 被 测 试 者 患 相 比 在 执 行 各 种 记 忆 负 荷 该研究结果一方面说明 PCOS 血症和多囊卵巢三个特征中的 工 作 记 忆 任 务 时 精 度 提 高 性 患 者 为 实 验组 是在 2010 有任何可能对测试结果产生 水 平 的 工 作 记 忆 任 务 时 实 女性患者在完成工作记忆任 两个即可被诊断为 PCOS 患者 年 9 月 到 年 1 1 月 间 影响的精神疾病或内分泌疾 验 组 在 上 颞 叶 上 顶 叶 和 下 务时可能需要更多的神经资 大约 70% 的 PCOS 患者具有高 于 阿 姆 斯 特 丹 VU 大 学 医 学 病 也 同 样 被 排 除 对 照 组 女 顶叶比对照组呈现更多的脑 源 暗 示 了 这 些 女 性 患 者 执 雄激素血症这一特征 以往的 中 心 募 集 的 作 为 对 照 组 的 性测试时间选在卵泡早期即 区 激 活 但 完 成 任 务 过 程 所 行 能 力 可 能 相 对 低 效 而 这 研究主要关注于高雄激素血症 一 不 足 可 能 会 影 响 PCOS 女 对 PCOS 女性多毛症和不孕症 性 患 者 的 日 常 生 活 另 一 方 造成的内分泌影响 诸如多毛 面 该 研 究 指 出 抗 雄 治 疗 能 症和痤疮这样的临床特征是雄 够 改 善 PCOS 女 性 患 者 工 作 激素不平衡导致的 抗雄处理 记忆并使之趋于正常化 是针对 PCOS 女性患者最常用 总之 该研究发现 PCOS 的治疗手段 目前 已有证据 女性患者在完成工作记忆任 表明雌激素 E2 与工作记忆有 务 时 需 要 激 活 更 多 的 脑 区 关 但 是 PCOS 女 性 患 者 体 而 抗 雄 治 疗 能 够 使 之 改 善 内较高的雄激素水平是否会影 这 在 PCOS 对 工 作 记 忆 影 响 响工作记忆尚不清楚 基于这 的 研 究 上 尚 属 首 次 对 于 临 样的研究现状 来自荷兰阿姆 床治疗具有重要的指导意义 斯特丹和比利时根特市的研究 北医三院 霍莹 报道 图 功能磁共振成像示意图 多囊卵巢综合征 是否有可能治本 据 Endocrinology 2015 年 7 月报道 题 发育性编程 出 生后干预能够增加 LH 峰的幅度 作者选用了氟他米特 雄 生前及出生后使用雄激素拮抗剂及胰岛素增敏剂能够预防孕期雄 激素拮抗剂 与罗格列酮 胰岛素增敏剂 两种药物分别 激素暴露绵羊模型的青春期提前现象并改善其 LH 峰分泌 作者 于出生前及出生后应用于孕期雄激素暴露的绵羊及对照组 Vasantha Padmanabhan 等 绵羊 观察效果 多囊卵巢综合征 PCOS 是育龄期妇女最常见的生殖内分泌 研究者发现 无论是干预组还是对照组绵羊 其子代 疾病 其主要表现为稀发排卵或无排卵 高雄激素表现 卵巢多囊 的体重并无明显差异 而孕期睾酮暴露的子代母羊 其肛 样改变 LH 过多及神经内分泌异常等 由于目前尚不清楚 PCOS 阴距显著大于对照组 研究者还发现 孕期使用氟他米特 的病因 因此至今尚并没有对应的行之有效的治疗 PCOS 的特效药 能够预防这种外阴雄性化的表型 但孕期使用罗格列酮 既往研究表明 早期发育过程中机体异常的发育与编程可能是造成 或出生后使用两种药物却并没有这种作用 PCOS 的重要原因 例如 有研究发现 胚胎期暴露于过高的雄激 进一步对接受几种干预的绵羊的青春期进行研究发 素能够使个体在成年后会产生类似 PCOS 的表型 基于此 来自美 现 孕期睾酮暴露能够显著提前绵羊青春期的出现时 国密歇根大学的研究者 VasanthaPadmanabhan 等 针对该病因进行 间 而同时使用氟他米特或罗格列酮则能够预防此种 了一系列动物试验 探讨对于 PCOS 治本的可能性 青春期提前现象的发生 对各干预组绵羊排卵前 LH 基于既往的研究 作者做出了如下的科学假设 1 出生前 峰的分析发现 对照组绵羊 1 岁前均会出现动情周期 干预 使用雄激素拮抗剂或胰岛素增敏剂 能够改善 PCOS 绵羊 的同步化 而孕期睾酮暴露组绵羊只有 2/3 能够出现 模型青春期提前的表型 但出生后干预不能改善 2 出生前 出生前使用氟他米特能够使该现象逆转 同期使用罗格 或出生后干预均无法恢复 PCOS 绵羊模型 LH 峰的分泌 3 出 列酮却并无该效果 与此同时 孕期睾酮暴露的绵羊如同预 期的一样几乎没有 LH 峰或其 LH 峰分泌持续减退 但无论是出 生前的药物干预还是出生后的药物干预 均无法重塑其分泌 尽管如此 研究者还是对 LH 峰的发生时间与幅度进行了研究 研究者发现 虽然各种干预并不能重塑 LH 峰分泌 但出生后的药 物干预的确使 LH 的幅度发生了一定的增大 同 时 并 不 影 响 LH 峰分泌时间 由此 作者认为这些现象对于人类 PCOS 的治疗 具有一定的指导意义 虽然这些干预是否适合在人类孕期或青 春期应用仍需要大量的实验去验证 图 PCOS 模型绵羊动情周期测量时间 北医三院 崔岳毅 报道

5 F5 责任编辑 : 刘丹丹 基础研究 Basic Research DNA 重编程中 5hmC 的积累 MiR-133b 可逆转胚胎植入障碍 据 NATURE CELL BIOLOGY 2016 年 2 月报道 题 : 小鼠合子中 DNA 甲基化的重新建立驱动了 5hmC 的积累 ( 作者 Rachel Amouroux 等 ) 在小鼠合子中, 父源的基因组在受精之后迅速发生 DNA 去甲基化 之前人们认为 DNA 去甲基化过程主要依赖于 Tet3 的羟化活性, 这也使得雄原核中 5hmC 的积累 为了进一步搞清楚 5hmC 在 DNA 去甲基化中的作用, 英国的研究者们对受精后 5mC 和 5hmC 的动态变化进行了更精细的检测, 发现父源基因组 DNA 去甲基化的起始并不依赖于 5hmC 的形成 通过免疫荧光技术, 研究者们证实了在合子后期的雄原核中确实有 5hmC 的积累, 并与 Tet3 的表达和定位相符 然而, 对 5mC 据 Journal of Clinical Endocrinology andmetabolism 2016 年 1 月报道 题 :mir-133b 通过降调 SGK1 逆转由输卵管积水引起的胚胎植入障碍 ( 作者 Chengcai Kong 等 ) 输卵管积水是一种慢性炎症, 引起输卵管堵塞 肿大或充液 输卵管积水占输卵管疾病的 10%~30%, 是主要影响女性不孕的因素, 且输卵管积水的病人其体外受精 (IVF)- 胚胎植入 (IVF-ET) 的效果比其他输卵管疾病的病人差 有研究发现输卵管积水病人子宫内膜组织中的容受性标记分子 HOXA10 LIF MUC1 和 ITGB3 表达下降 说明输卵管积水影响子宫内膜容受性和胚胎植入, 但其中存在的确切机制还不清楚 MicroRNA 是一类高度保守的小分子非编码 RNA, 以各种形式在转录水平上调控基因的表达 越来越多的 图小鼠合子中 DNA 甲基化的重新建立驱动了 5hmC 的积累 -1 图小鼠合子中 DNA 甲基化的重新建立驱动了 5hmC 的积累 -2 和 5hmC 的表达数据进行分析后, 发现 5mC 的擦除发生在 PN3 的早期, 而 5hmC 在 PN4 时才开始积累 并且 5fC 和 5caC 的出现与 5hmC 的出现一致, 都是在 5mC 擦除几小时后才出现 为了检测 Tet3 产生的 5hmC 在 DNA 去甲基化中的作用, 研究者利用两种小分子抑制剂来抑制 Tet3 的活性 发现两种抑制剂处理后都有效的抑制了雄原核 mirna 被发现在内膜容受性和胚胎植入过程中有重要作用 有研究显示炎症趋化因子 TNF-α 在肌肉炎症中通过抑制 mir-133b 的表达抑制成年人骨骼肌的分化 而另一项研究发现 mir-133b 通过调节 Foxl2 和 TAGLN2 诱导卵巢合成雌激素及调节卵泡发育 说明其对女性生殖有重要作用 通过 qrt-pcr 和 western blot 检测输卵管积水患者子宫内膜的 HOXA10 和 mir-133b 表达, 发现比正常人的表达分别下降 60% 和 50% 用输卵管积水的不孕患者 50% 的输卵管液 (HF) 处理子宫内膜癌细胞系 Ishikawa 48 小时后,miR-133b 的表达下降约 50%, 同时 HOXA10 的表达也相应下降 MTT 检测说明 HF 对细胞没有毒性 而使用 50% HF 处理 Ishikawa 细胞和 BeWo 细胞后,BeWo 细胞球对 Ishikawa 细胞的黏附作用下降, 而 25% HF 对此没有影响 过表达或干扰 Ishikawa 细胞中 mir- 133b, 引起 HOXA10 表达升高或降低, 以及相应 BeWo 细胞的黏附能力升高或降低 说明 mir-133b 在子宫内膜容受性和胚胎植 中 5hmC,5fC 和 5caC 的产生, 但并没有影响 5mC 的早期擦除 这说明父源 5mC 的早期擦除不依赖于 Tet3 介导的 5hmC 的形成 另外重复序列 Line1 的亚硫酸氢盐测序结果也显示其 5mC 的擦除不依赖 5hmC 的形成 在这些分析方法中, 免疫荧光技术可以进行间接的定量, 依赖于抗体的特异性和亲和力 另外, 染色步骤 信号获取和结果矫正方法的差异使得不同研究结果的可比性下降 而亚硫酸氢盐测序技术虽然能够提供精确的序列信息, 但不能区分 5mC 和 5hmC,C 5fC 和 5caC 另外全基因组的亚硫酸氢盐测序的结果有偏好性, 不能有效的反应重复序列的状况 因此, 为了进一步证实结果, 研究者们采用了另外一种先进的方法 超敏液相色谱与质谱联用技术 (LC-MS) 研究者们对精子 卵子 受精卵和孤雌胚胎的 5mC 和 5hmC 的水平进行了液质联用分析, 发现受精卵的 5mC 水平比精子和卵子都要低, 而孤雌胚胎的水平与卵子相似, 说明受精卵中主要是父源基因组发生了 DNA 去甲基化, 并且比受精卵 5hmC 的水平高很多 同时 5mC 的去除不依赖 Tet3 的活性 这就证实了之前的结果 另外人们还利用 Tet3 的母源敲除鼠来对其结果进行了进一步的证实 在小分子抑制剂处理和 Tet3 母源敲除后的胚胎中, 研究者还敏锐的发现了意想不到的结果 他们发现这些胚胎的 DNA 甲基化水平在合子后期竟有所升高 在这之前, 人们认为早期胚胎中缺乏 DNA 甲基化维持酶活性, 更没有考虑过会 入中起作用 进一步研究发现 mir-133b 的启动子区域带有 NF-κB 的结合序列,NF-κB 被抑制后能使细胞因子和 HF 诱导的 mir-133b 表达降低发生逆转 此外 luciferase 活性实验也说明 HF 是通过激活 NF-κB 来抑制 mir-133b 的表达 通过软件分析发现 SGK1 mrna 的 3 UTR 上有一段公认的 mir- 133b 靶序列 Luciferase 实验发现 mir-133b 确实有调控 SGK1 的作用, 过表达和抑制 mir-133b 引起 SGK1 mrna 和蛋白水平相应的减少和增加 而过表达 SGK1 能显著影响 mir-133b 诱导的 BeWo 细胞球的黏附作用 输卵管病人的 SGK1 存在 DNA 甲基化重新建立的问题 为了明确这个问题, 人们对蛋氨酸进行了标记, 发现在体外培养的合子中有明显的带标记的 5mC, 并且抑制 DNA 复制后, 信号会下降 这就说明在小鼠合子中存在着 DNA 甲基化维持和重新建立的活性 为了探究 DNA 甲基化酶活性和 5hmC 的关系, 研究者分别采用了 DNMT3a DNMT3L DNMMT1 的母源敲除鼠 人们发现 DNMT3a DNMMT1 母源敲除鼠胚胎 表达量比正常人高 1.9 倍, SGK1 和 mir-133b 的表达呈负相关 且 HF 处理 Ishikawa 细胞后 SGK1 的蛋白表达量增加 进一步研究发现过表达 SGK1 引起 HOXA10 表达显著降 图小鼠胚胎黏附 Ishikawa 细胞的各个阶段 的 5hmC 水平大大下降 这说明 DNMT3a 和 DNMMT1 产生的 5mC 发生了羟化 为了证实 5hmC 是来自于新产生的 5mC, 作者用 DNMT3a DNMT3L DNMMT1 全敲的 ES(TKO-ES) 进行核移植 与预想的一样,TKO-ES 核中没有 5mC 和 5hmC, 而在激活后 14h 时, 类原核中出现了相当程度的 5mC 和 5hmC 这就说明了 5hmC 来自于新产生的 5mC 该项研究使人们意识到合子中 DNA 去甲基化的过程还没有被完全揭示, 使人们对 5hmC 的作用有了新的认识,5hmC 可能是通过防止甲基化的重新建立维持基因组的低甲基化水平 ( 北医三院解炳腾报道 ) 低及磷酸化 CREB(p-CREB,ser133) 的表达增加, 磷酸化是 CREB 的活性形式 而在此基础上干扰 CREB 的表达使 p-creb 减少,SGK1 对 HOXA10 的抑制作用减弱 且过表达 mir-133b 减少 SGK1 CREB 及 p-creb 的表达量 此外过表达 HOXA10 能逆转 SGK1 诱导的 BeWo 细胞球黏附降低 体外小鼠胚胎和 Ishikawa 细胞共培养, 用 HF 处理, 同时过表达 mir-133b, 发现 mir-133b 逆转了 HF 对胚胎黏附的影响作用 以上数据表明 mir-133b 通过抑制 SGK1 介导的 CREB 活性上调 HOXA10, 从而逆转 HF 对胚胎黏附的抑制作用 ( 北医三院刘丹丹报道 )

6 F6 基础研究 Basic Research 责任编辑 刘丹丹 圆形精子的 ICSI 可行吗 据 Proceedings of the 然而 临床医生应该考虑其他 和 Yanagimachi 发 现 仓 鼠 的 研 究 者 从 这 种 Crem 基 因 敲 除 精时不能得到正常的精子或者 National Academy of Sciences 的可能性 向卵母细胞中注射 圆形精子和卵母细胞进行电融 的雄性小鼠睾丸中收集圆形精 晚期的精细胞 他们运用患者 2015 年 11 月 报 道 题 通 过 圆形精子 来自日本和美国的 合可以形成原核 并且可以参 子 再注射到成熟卵母细胞之 的圆形精子来进行 ROSI 人类卵母细胞内注射圆形精子 研 究 组 他 们 在 临 床 上 发 现 与核融合 后来他们又报道通 后可以得到可育的后代 自从 获 得 14 个 婴 儿 作 者 Atsushi 30% 的无精子症患者缺乏精子 过 显 微 注 射 圆 形 精 子 ROSI 第一个 ROSI 人类婴儿诞生后 通过细胞大小和形态来鉴定圆 Tanaka 等 他们首先在干涉显微镜下 或者晚期的精细胞但拥有圆形 得 到 了 正 常 的 小 鼠 后 代 当 也有几个怀孕的报道 然而近 形精子 FISH 和核型分析结果 无精子症是一种在精液中 精子 而这种称为圆形精子的 Crem 基因突变后 雄性小鼠不 年来很少有类似的报道 可能 显示他们对圆形精子的鉴定是 缺失精子的状况 它在人群中 生殖细胞可以作为最后的救命 能正常进行精子发生 因此停 是因为许多临床研究者担心 非 常 准 确 的 虽 然 ROSI 单 独 发 生 率 为 男 性 人 口 的 1% 梗 稻草 留在小鼠最后阶段的生殖细胞 ROSI 的效率 安全性和实际价 也可以诱导卵母细胞激活 但 就是圆形精子 Yanagimachi 等 阻性的无精子症患者可以通过 在 早 期 的 研 究 中 Ogura 值而感到悲观 实际上 美国 是这种激活并不稳定 他们之 显微手术来取得附睾中的精子 生殖医学协会的实践委员会和 前 的 研 究 结 果 显 示 在 ROSI 用附睾精子和射精的精子来注 辅助生殖技术实践委员会都把 之前用电流刺激卵母细胞比没 射卵母细胞得到的怀孕率基本 ROSI 当作是一个实验而不是推 有电流刺激能更好的发育成卵 相当 然而 高达 94% 的无精 荐的实践 裂的胚胎 因此 在 ROSI 之前 子症患者被诊断是非梗阻性的 来自日本和美国的研究组 他们将所有卵母细胞进行电刺 对这些男性患者 显微取精术 为了进一步的尝试 他们在体 激 10 分钟 之后再进行注射 被广泛的用来寻找睾丸中的精 外培养人类初级精母细胞来分 在 2011 年 9 月 到 2014 年 3 月 子 并且有报道在高达 60% 的 化成精子 虽然一些精母细胞 期间共有 14 名婴儿出生 这些 患者中可以找到精子 当精子 发育成圆形精子 但是它们不 孩子可以健康的成长 并没有 或者晚期的精细胞在睾丸中不 能进一步向后发育 尝试在体 出现身体 神经以及表观上的 存在 这些患者被认为是不育 外将圆形精子分化成精子也几 问题 的 之后会建议他们考虑供精 图 1 ROSI 过程 乎不能成功 因此 当显微取 北医三院 刘昌玉 报道 早期胚胎发育母源因子 LSD1/KDM1A 据 elife 2016 年 2 月 赖氨酸的甲基化受多个同 来研究胚胎最初发育过程中该 着某种重要的功能 然而具体 验发现缺失 LSD1 在受精卵阶 报道 题 母源 LSD1/KDM1A 家族的甲基化转移酶和去甲基 蛋 白 所 发 挥 的 具 体 功 能 目 功能尚不清楚 为了探索 LSD1 段对 H3K4me1/2 及 H3K9me1/2 调节合子基因组活化过程的重 化酶特异调节 在小鼠中 阻 前 已有报道利用该方法敲除 在胚胎发育早期所发挥的功能 的去甲基化作用并没有造成显 要作用 作者 Katia Ancelin 等 断这些表观遗传修饰蛋白的表 了 H3K27 甲 基 转 移 酶 EZH2 来 自 法 国 居 里 研 究 所 的 Edith 著 影 响 却 使 得 H3K9me3 水 配子是高度分化的细胞 达通常会导致胚胎期发育的严 H3K4 甲 基 转 移 酶 Mll2 并 揭 Heard 研究团队通过条件性敲 平 显 著 升 高 表 明 了 LSD1 在 类 型 在 精 子 和 卵 子 的 受 精 重缺陷甚至是死亡 或者是表 示了它们在胚胎发育早期的重 除 LSD1 小鼠对这一问题进行 受精卵阶段可能会通过与其它 过 程 中 需 要 通 过 大 量 的 表 现在成体中组织特异的表型 要功能 了深入研究 的染色质调节因子作用间接 观遗传重塑事件来调和双亲 因此 目前认为这些甲基化修 LSD1 又 叫 KDM1A 是 研究者首先利用 Cre-LoxP 1f/f 调 控 H3K9me3 去 甲 基 化 在 cre 二 细 胞 阶 段 缺 失 LSD1 使 得 的基因组形成一个具有全能 饰酶在细胞命运的维持和分化 科学家们发现的第一个组蛋白 转基因技术获得了 Lsd ::Zp3 型 的 受 精 卵 精 子 的 基 因 组 以及基因组的稳定过程中起 去 甲 基 化 酶 最 早 发 现 LSD1 表 型 小 鼠 从 而 实 现 条 件 性 H3K4me1/2/3 及 H3K9me1/2/3 致 密 的 包 裹 在 精 蛋 白 上 而 到 了 至 关 重 要 的 作 用 然 而 可 以 催 化 H3K4me1/2 去 甲 基 缺失了卵母细胞中 LSD1 的表 水平均显著升高 卵 子 的 基 因 组 高 度 特 化 因 在 胚 胎 发 育 伊 始 由 于 母 源 化 并与转录抑制相关 而后 达 该 团 队 发 现 Lsd1f/f::Zp3cre 此受精卵的基因活化和早 mrna 蛋白的存在阻碍了科 科学家们又发现该蛋白也具有 雌鼠不能产生后代 通过进一 和 蛋 白 启 动 胚 胎 发 育 过 程 期发育有赖于母源因子的调 学家们对这些修饰蛋白在胚胎 催 化 H3K9me1/2 去 甲 基 化 作 步 的 研 究 发 现 敲 除 LSD1 的 然后合子基因组开始逐渐激 控 早 期 的 研 究 发 现 在 受 发育早期具体功能的研究 在 用 与转录激活相关 早期研 雌性个体出现严重的 MII 卵母 活 Zygotic genomeactivation 精 卵 发 育 之 初 组 蛋 白 的 翻 小鼠的卵母细胞中 条件性敲 究 发 现 敲 除 LSD1 的 小 鼠 死 细胞纺锤体构成损伤 从而阻 ZGA 小 鼠 的 ZGA 主 要 在 2 译 后 修 饰 Post-translational 除基因从而抑制母源性 mrna 于原肠胚形成之前 提示 LSD1 碍了卵母细胞的第二次减数分 个 时 期 受 精 卵 期 二 细 胞 Modifications PTMs 尤 其 和蛋白的表达的这种方法可用 在胚胎发育的早期有可能发挥 裂 受精卵不能进行第二次卵 期 那 么 LSD1 对 染 色 质 修 是赖氨酸的甲基化修饰动态 裂 为 进 一 步 明 确 LSD1 在 这 饰状态的改变是否会造成转 的 调 节 组 蛋 白 上 不 同 位 置 一过程中的作用 研究人员利 录 组 的 改 变 呢 为 此 研 究 赖氨酸的甲基化以及甲基化 用 LSD1 的酶活性抑制剂帕吉 者利用单细胞转录组测序的 状 态 一 甲 基 化 二 甲 基 林 Pargyline 处 理 野 生 型 受 方 法 对 卵 子 受 精 卵 及 二 细 化 三 甲 基 化 会 产 生 不 同 精卵 结果发现 在抑制 LSD1 胞 期 进 行 研 究 结 果 表 明 的生物学效应 例如 组蛋白 的 酶 活 性 后 与 LSD1 敲 除 胚 在 二 细 胞 期 敲 除 LSD1 后 H3K4 的甲基化通常与转录激 胎表型一致 受精卵被阻滞在 有 约 45% 的 基 因 表 达 水 平 发 活相关 而 H3K9 得甲基化通 第 二 次 卵 裂 阶 段 提 示 LSD1 生 显 著 变 化 其 中 约 21% 上 常伴随转录抑制 异常的组蛋 的酶活性对受精卵及二细胞阶 调 24% 下 调 基 因 表 达 水 白修饰会导致胚胎发育早期严 段具有重要调控作用 平的聚类分析及主成分分析 LSD1 具 有 H3K4me1/2 及 重受阻 然而 目前关于胚胎 均发现 LSD1 敲除胚胎和野生 H3K9me1/2 去 甲 基 化 酶 活 性 型 胚 胎 在 二 细 胞 期 明 显 分 为 发育早期组蛋白修饰的动态调 节机制及具体功能尚未阐明 受 精 之 后 母 源 的 RNA 图 两组早期胚胎发育状况 然而 研究者通过免疫荧光实 下转第 7 版

7 F7 责任编辑 张 哲 男科研究 Andrology Research mtor 信号通路对 Sertoli 细胞的重要意义 据 Fertility and Sterility 子 生 成 的 正 常 过 程 此 外 时它也是环境变化 如生长因 Sertoli 细胞的氧化还原平衡产 粒体复合物 3 的产生但增加 2015 年 12 月报道 题 哺乳 Sertoli 细 胞 也 为 精 子 的 发 生 子 营 养 物 质 感 受 和 整 合 生 了 影 响 来 自 葡 萄 牙 Abel 了 其 脂 质 过 氧 化 Sertoli 细 动物雷帕霉素靶蛋白控制着人 提 供 物 理 和 营 养 支 持 被 称 的重要调节因子 mtor 可形 Salazr 生物医学科学院的研究 胞内的其他氧化应激标志物 Sertoli 细胞的葡萄糖消耗和氧 为 营养细胞 在精子发生 成 两 个 复 合 体 mtorc1 和 团 队 对 此 展 开 了 研 究 研 究 均 无 明 显 变 化 该 研 究 还 发 化还原平衡 作者 Tito T. Jesus 的 过 程 中 生 精 细 胞 不 能 利 mtorc2 分别结合不同的受 者 收 集 了 六 例 射 精 正 常 生 现 雷 帕 霉 素 抑 制 了 Sertoli 等 用葡萄糖进行能量代谢而主 体行使不同的功能 mtorc1 理 血管和神经系统均正常 细 胞 mtor 丝 氨 酸 2448 在精子发生的精小管上 要 依 赖 于 Sertoli 细 胞 产 生 的 可调节蛋白合成并对雷帕霉 和生精功能正常的睾丸组织 的 磷 酸 化 水 平 说 明 了 在 皮 中 Sertoli 细 胞 与 发 育 中 乳 酸 因 此 Sertoli 细 胞 正 常 素 敏 感 主 要 由 于 雷 帕 霉 素 该研究发现雷帕霉素可以提 Sertoli 细 胞 中 mtorc1 的 部 的 生 精 细 胞 直 接 接 触 代谢对精 可作为变构抑制剂调节调节 高 Sertoli 细 胞 的 葡 萄 糖 消 耗 分 抑 制 作 用 但 mtor 下 游 Sertoli 细 胞 组 成 的 血 子发生的 其 构 象 而 mtorc2 对 雷 帕 率 可以维持生精细胞的乳酸 的 p-4e-bp1 蛋 白 水 平 没 有 睾屏障为生精小管 顺利进行 霉 素 不 敏 感 最 近 有 研 究 者 需 求 和 能 量 代 谢 但 雷 帕 霉 明 显 影 响 可 能 在 雷 帕 霉 素 有着重要 发现雷帕霉素在男性生殖系 提供了一个密闭 素对葡萄糖转运体蛋白的表 处 理 后 mtor 的 磷 酸 化 在 某 的 管 型 环 境 作用 统 中 有 着 重 要 作 用 在 生 精 达 无 明 显 影 响 雷 帕 霉 素 可 些机制的调节下又重新恢复 以保障精 哺乳动物雷帕霉 上皮周期过程中它能够参与 降 低 了 Sertoli 细 胞 丙 氨 酸 的 了 正 常 这 项 研 究 发 现 了 雷 到血睾屏障的重塑 产 生 从 而 导 致 了 Sertoli 细 帕 霉 素 和 mtor 对 Sertoli 细 为了探索雷帕霉素在 胞内的氧化还原系统的平衡 胞的糖代谢和氧化还原状态 它在许多细胞的生长和增殖 Sertoli 细 胞 代 谢 和 精 子 发 生 状 态 此 外 雷 帕 霉 素 的 处 均产生了重要影响 过 程 中 都 起 着 重 要 作 用 同 中的作用和雷帕霉素是 否 对 理 还 可 降 低 Sertoli 细 胞 内 线 素 靶 蛋 白 mtor 是 一 种丝氨酸 / 苏 氨 酸 蛋 白 激 酶 北医三院 张哲 报道 反应性氧化物与 DNA 碎片化相关 据 Asian Journal of Andrology 2016 年 1 月 报 道 题 精 索 静 脉 平衡 由于染色质重组机制的缺陷导致组装过程中鱼精蛋白作用效 曲 张 与 反 应 性 氧 化 物 和 精 子 DNA 碎 片 间 关 联 的 新 视 点 作 者 Timothy G. 率降低 从而使得染色质 DNA 更易受活性过氧化物攻击并最终导 Jenkins 等 致精子成熟过程中的异常死亡 不育是世界范围内的常见病 每 100 对夫妇中就有 13~15 对存在此类问题 精索静脉曲张同男性生殖能力损害有潜在关联 本文回顾 男性因素占其中的 50%~60% 精索静脉曲张又占男性不育病例中的 35% 是目前 了氧化应激在精索静脉曲张相关男性不育中的作用机制及其 男性继发性不育的主要诱因 与 DNA 碎片化之间的关系 认为借助细胞生物学手段 目 精索静脉曲张表现为睾丸静脉系统 包括蔓状静脉从或提睾肌静脉丛的异 前已经能够更好地了解由精索静脉曲张引起的睾丸损害的 常性扩张迂曲 目前关于精索静脉曲张引起男性不育的机制主要包括静脉瓣膜 相关机制 虽然具体机制仍不清楚 但近期有证据表明 缺失理论 局部过热理论 氧化应激理论等 该文通过对氧化应激在精索静脉 活性氧 ROS 和由其引起的氧化应激 OS 在精索 曲张导致男性不育机制中的研究将精索静脉曲张 氧化应激和 DNA 碎片化三 静脉曲张的病理发生过程中扮演着核心角色 过量 者联系起来 的 ROS 与 DNA 碎片化有关 后者可 人类精子通过有氧代谢产生反应性过氧化物 当生精过程障碍或精子形 能参与调节精索静脉曲张相关的 态异常时容易产生过量的反应性过氧化物 白细胞是反应性过氧化物的另一 精子功能和男性生育能力预后 来源 故当精液样本中白细胞计数增加 则提示存在反应性过氧化物含量超 检测 ROS/OS 比值及 DNA 碎片 标的可能 化可能有利于为精索静 氧化应激通过多种机制发挥作用 活性过氧化物作用于细胞膜的多聚不饱和 脉曲张的诊断和预 脂肪酸导致脂质过氧化 从而降低膜的流动性 破坏精子头部及中段细胞膜结构 后提供额外的参考 导致精子运动性降低并最终影响男性生育力 精子细胞核和线粒体 DNA 是活性过 信息 同传统的精 氧化物作用的另一靶点 DNA 的损害影响蛋白及细胞内网络的形成 同时也损害 液分析方法相比能够 精母细胞的自我修复机制 最终可能导致无精症 目前观点认为活性过氧化物是 为个体化的临床治疗提供 精子 DNA 碎片产生的主要原因 与核内 DNA 相比 线粒体 DNA 更容易受到活性 更为具体的参考 过氧化物的攻击 DNA 完整性的破坏是氧化应激和精子 DNA 损伤易感性二者间的 北医三院 吴寒 报道 者选择了 4 个特异表达的染 在胚胎发育早期及其植入过程 阻滞了胚胎的早期发育 随后 丝粒区域具有潜在的作用 值 两 类 进 一 步 研 究 者 根 据 色质相关基因 Atrx H2Az 发 挥 重 要 作 用 在 胚 胎 植 入 在 LSD1 敲除胚胎中通过检测 得未来更深入的探索 小鼠早期胚胎转录组数据库 Suv39h1 Klf4 证实了上述结 前 转 座 子 的 抑 制 被 认 为 与 γh2ax 焦点 DNA 损伤标志 Database of Transcriptome 上接第 6 版 综上所述 该研究结果表 论 差异基因的 GO 分析发现 H3K4me3 的去甲基化过程密切 证实了这一推测 此外 研究 明 LSD1/KDM1A 作为母源因子 inmouse Early Embryos LSD1 敲除胚胎上调的基因主 相 关 研 究 者 发 现 LSD1 敲 者还发现 LSD1 的缺失后使得 作用在生命伊始 并在早期胚 DBTMEE 对 二 细 胞 期 的 要 涉 及 蛋 白 转 运 定 位 和 细 除的胚胎 LINE-1 表达量显著 H3K9me3 异常富集在受精后假 胎的组蛋白甲基化和转录组的 RNA-seq 数据进行分类比较 胞 周 期 下 调 的 基 因 主 要 涉 升 高 并 推 测 LINE-1 可 能 通 定的臂间异染色质区 NLBs 塑造过程中起到了至关重要的 发现敲除 LSD1 影响了二细胞 及核糖体合成和蛋白翻译 过增加基因组的不稳定性以及 积聚的微核和卵子中的落后染 作用 活化了某些 DNA 损伤检查点 色体 提示 LSD1 可能在近着 期 基 因 的 表 达 随 后 研 究 早 期 研 究 发 现 转 座 子 北医三院 王洋 报道

8 F8 生殖伦理 Reproduction Ethics 责任编辑 杨 岑 育龄期女性癌症幸存者的不孕症问题 据 Cancer 2015 年 5 月 并没有按时与患者就生育力保 障育龄期患癌女性及时认识到 交流生育力保护之前 临床医 对于有意愿进行生育力保 报 道 题 育 龄 期 女 性 癌 症 存进行交流 对专科医生的培 治疗风险和保护措施的重要环 生需要作出一系列的评估和决 护方案的女性患者 采用夫精 幸 存 者 的 不 孕 症 问 题 作 者 训有助于改善这一状况 因为 节 策 如癌症治疗方案对患者生 或供精人工授精后胚胎冷冻或 Jennifer Levine 专业知识的缺乏往往被认为是 来自美国哥伦比亚大学的 育力的影响程度以及患者是否 卵母细胞冷冻保存是最佳的方 每年有超过 35,000 名处于 提供生育力保护辅助的最大障 Jennifer Levine 认 为 对 于 被 在治疗后有生育一个或多个生 法 生育力保护方案的选择需 15 到 39 岁的育龄期妇女被诊 碍 但是 建立生育力保护的 诊断为癌症的年轻女性 知晓 物学上亲生孩子的意愿 如果 要考虑到患者在癌症治疗后婚 断癌症 治疗技术的不断进步 相关标准 包括专科医师采取 癌症治疗方案可以让她们了解 癌症治疗会损害患者的生育力 姻情况的变化 对于没有结婚 使越来越多的患者存活下来 生育力保护的相关方案 是保 不育症的后果 在与一位患者 并且患者在未来希望拥有生物 又不想采用供精者精子 或者 但这些幸存的患者却因治疗产 学上亲生的孩子 那么是否采 因宗教或伦理问题排斥胚胎冷 生了一系列并发症 包括不孕 取生育力保护还要考虑患者的 冻的患者更适合采用卵母细胞 症 对于癌症患者来说 失去 癌症治疗情况以及患者的社会 冷冻保存方案 生育能力是影响他们生活质量 经济情况 目前的研究发现采 胚胎的冷冻保存引起了 的重要原因 取生育力保护的患癌女性并不 许多伦理学上的争议 如 如 许多医疗机构 包括美国 多 但绝大部分患者希望能够 果目前的婚姻关系在治疗后破 临床肿瘤协会 美国生殖医学 了解治疗对她们生育力的影响 裂 是否允许女性使用胚胎 会 美国国家综合癌症网络都 以及生育力保护的方案 事实 如果配偶过世 胚胎该怎么处 针对女性癌症患者制定了相关 上 与临床医生讨论过生育力 理 存活者是否可以进行遗腹 的生育力保护指南 每一项指 保护方案的女性患者比没有进 生殖 未来的配偶可否接受前 南中都建议在治疗前尽早向患 行交流的患者在肿瘤治疗后有 一个配偶或供精者留下来的胚 者说明治疗对生育力的影响 更高的生活水平及较低的抑郁 胎 如果胚胎不能被使用 应 介绍可用的生育力保存方案 发 生 率 即 便 是 对 于 因 为 癌 该怎么处理 美国生殖医学会 向有意向采取生育力保存的患 者推荐合适的生殖内分泌专家 虽然有这些指南 但是在 对医生的调查发现临床上医生 症治疗时间及其他因素导致 认为在进行相关方案前就应就 图 卵巢储备消耗 follicle number: 卵泡数量 Age: 年龄 Acute 无法进行生育力保护的患者 这些问题进行讨论交流并签署 Ovarian Failure: 急性卵巢早衰 Premature Menopause: 闭经时 也希望了解有关治疗对生育 知情同意书 间提前 Normal: 正常 力的影响 是否应对子宫移植进行社会资助 据 Journal of Medical Ethics 2015 年 12 月报道 题 是否应对子宫移植进行社 北医三院 黄宁 报道 制定孕妇寨卡疫苗研发的 伦理纲要的重要性 会资助 作者 Balayla J 等 自 2000 年至今 在欧洲及亚洲已进行了 11 例子宫移植 至今 其中的 5 例已妊娠 并得到了 4 例活产儿 在全世界范围内 每 500 名生育年龄的女性中就有 1 人因显著 子宫因素 先天性无子宫 子宫切除 子宫畸形等 导致不孕 子宫移植是一种潜在 据 British medical Journal 2016 年 2 月报道 题 寨卡疫情突出了 制定孕妇专用疫苗研发的伦理纲要的重要性 作者 Gareth Iacobucci 近期寨卡病毒疫情的爆发彰显了孕妇专用疫苗的研发及评估的重要性 的获得生育的治疗手段 目前 限制子宫移植发展主要还是技术问题 但是当这些问 寨卡病毒是继 H1N1 流感和埃博拉病毒疫情之后 近期全球第三大传染性 题克服了之后 限制其发展的将是社会及经济条件 包括患者的意愿及能力 医疗保 疾病爆发 寨卡病毒对孕妇以及胎儿都有着不容忽视的危害 Emory 大学 险及支付能力 因此 应该国家健康保障系统 UK s National Health Service NHS 全球健康学院的 SaadOmer 教授 以及匹兹堡大学 Magee- 最终会决定是否对于子宫移植进行支付 假定子宫移植足够安全和有效率 那么到底 妇女医院的 Richard Beigi 认为寨卡病毒可能对胎儿 是否对接受子宫移植的女性进行社会资助呢 发育产生危害 公共健康政策的制定以及科研 来自加拿大蒙特利尔大学的 Balayla 等主要从三个方面对子宫移植提供社会资助进 工作必须突破阻碍研发出孕妇及育龄期妇女 专用的疫苗 行反驳 第一 环境方面的争论 认为政府不应该对辅助生育进行社会资助 因为这与政 疫苗研发过程所面临的困难 包括如 府的减少气候变化与环境污染的政策不一致 这是从社会公平的角度来拒绝此项社会 何制定出被民众所接受的伦理纲要 并 资助 如果假设政府立法减少环境污染 那么减少或保持人口数量恒定是实现这一目 且精确定义出孕妇在临床研究中可能出 标的很重要的手段 现的风险 对此 两位学者认为 对学 第二 争论认为不孕是一个社会问题而不是一种疾病状态 因此拒绝对辅助生育 术和产业导向的临床实验都存在限制性作 进行社会资助 因为不孕 与其他残疾相同 具有一定的社会属性 但仍有充足的理 用 同时 他们也认为公共机构的审查 由将其视为一种善意的功能障碍 对于不准备孕育生命的女性来说 不孕反而成为某 委员会总是将与孕妇相关的科研工作判定为 种意义上的优势 使其不用担心意外妊娠的可能性 不孕并不是一种疾病 因为其是 高风险性 却不仔细平衡其中的风险与益处 需建立起所谓 妊娠特性伦理纲要 来规范科研 否造成伤害取决于是否想要有孕育生命的意愿 第三 争论认为不应该支持对子宫移植进行社会资助 因存在其他的更经济 更 有效率的方法帮助人们成为父母 收养和代孕 这个争论部分建立在如何更有效率的 使不孕夫妻成为父母方面 同时也仔细论证 足够好 的替代方法的代表 认为收养 人员以及审查委员会 此外 还需要足量的基线数据来判定疫苗在不同疫情区域的风险与益 处 比如疟疾之类与出生率相关的疾病的疫苗 不能使不孕夫妻体验妊娠过程及获得具有遗传学意义上的子代 因此不是 足够好 目前对于妊娠早期的疫苗反应的认识不足 第一 第二妊娠期产妇的 的替代方案 代孕能够使不孕夫妻获得具有遗传学意义的子代 因此在某些情况下 临床实验数据缺乏都是阻碍孕妇专用疫苗研发的堡垒 对此 作者认为增 更加符合 足够好 的标准 在实际情况下 代孕受到各种问题的困扰 在目前还不 加孕前或妊娠初期的疫苗注射实验对有助于寨卡疫苗的研发 因为寨卡病 能成为 足够好 的替代子宫移植的方案 毒的有害作用在这些期间会暴露出来 将子宫移植的社会资助排除在政府资助金之外的理由并不充分 但是这并不意味 另一难关则为疫苗标注和药物说明的不明确 以及缺失评价孕妇疫苗 着在当前的社会情况下 应对进行子宫移植的患者进行社会资助 与其他的疾病治疗 安全性结果的衡量标准 笔者认为这些难关可以通过统一意见而克服 策 一样 子宫移植首先必须是有效的 安全的与经济的 同样 代孕的司法改革仍有很 略性的计划和行动已经成功地推动了儿科药物研发的进步 这为孕妇专用 长一段路要走 使其成为 足够好 的替代方案 如果代孕的司法改革成功 子宫移 疫苗的开发提供了好的先例 疫情迫在眉睫 各方应该迅速行动 以避免 植患者获得社会资助的可能性则更小 下一次全球疫情造成重大伤亡 北医三院 杨岑 报道 北医三院 赖昱臣 报道