欧 阳斌 等 期 荧 光 物 质 浸 泡 标 记 稀 有如 卿 和 彭 泽 卿仔 稚 鱼 投 喂 在 池 塘 中捞 取 的 浮 游 生 物 及 人 工 孵 化 的 卤 虫 各 次 投 饵 略 有 剩 余 标记 前 将实 验 鱼 移 至 直 径 为 结 晶皿 尾 注 曝 气 自来 水 稀 有 的卿 为

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1 第 卷 第 期 年 月 水生生物学报 丁 玉 珍 无 荧光物质浸泡标记稀有绚螂 和彭泽螂仔 稚 鱼 欧阳斌 常剑波 中国科学院水生生物研究所 武汉! 摘要 效果 研究了茜素络合物和盐酸四环素对稀有鱼毛卿和彭泽卿仔稚鱼进行浸泡标记的方法和 茜素络合物在浸泡浓度 浸泡时间持续 的范围内对两种鱼都有 很好的标记效果盐酸四环素在浸泡浓度 浸泡时间 的范围内对彭 泽卿有较好的标记效果 但对稀有的卿有极高的致死率 在荧光显微镜下观察茜紊络合物 呈橘红色 盐酸四环素标记区呈金黄色荧光反应 关键词 茜素络合物盐酸四环素标记仔稚鱼 常用的荧光标记化合物有茜素络合物 四环素 和 钙黄绿素 等 的选择 对小而娇嫩的仔 稚鱼进行浸泡需要解决的关键问题是标记物质 能够产生标记又没有致死影响的浸泡浓度和浸泡时间的确定 这些都因鱼类的 种类 个体大小规格和实验条件不同而异 客观来说 对鱼类仔 稚鱼的大规模浸泡标记 大多数还停留在实验阶段 尽管许多学者都作了在鱼类早期生活史阶段使用荧光化合物 浸泡成功标记耳石等靶器官的报道 会浸泡导致仔 稚鱼的死亡率上升 提出了慎重应用的建议 低的致死率 但针对荧光化合物浸泡标记存在的缺陷 如四环素 以及同化合物对不同种类标记的效果不致等 认为对香鱼而言 都 使用茜素络合物比四环素有更 等则提出使用钙黄绿素标记可能比茜素络合物或四环素更好 国内除少数研究者曾应用荧光浸泡标记以 确证日轮外 尚未见对鱼类荧光浸泡方 法和标记效果的研究 故此本文报道以稀有如卿 和彭泽卿 的仔 稚鱼为材料 利用茜素络合物和盐酸四环素对鱼类 进行荧光浸泡的研究结果 以推进我国类似研究的深人开展 材料和方法 材料稀有如螂和彭泽螂的仔 稚鱼均由中国科学院水生生物研究所有关实验室提 供 仔稚鱼孵出后暂养在 的水族箱中每日换水约 清除脏物 每日 国务院三峡办和中国长江三峡工程开发总公司资助 三环科 刃 稀有鲍卿由王剑伟博士提供 刃 刃 收到 司 修回 彭泽卿由曾志强博士提供 在此并致谢

2 欧 阳斌 等 期 荧 光 物 质 浸 泡 标 记 稀 有如 卿 和 彭 泽 卿仔 稚 鱼 投 喂 在 池 塘 中捞 取 的 浮 游 生 物 及 人 工 孵 化 的 卤 虫 各 次 投 饵 略 有 剩 余 标记 前 将实 验 鱼 移 至 直 径 为 结 晶皿 尾 注 曝 气 自来 水 稀 有 的卿 为 虫 卵 来 自天 津 塘 沽 无 节 幼 体 的 圆 形 结 晶 皿 中 暂养 实 验 期 间 不 控 温 水 温 自然 变 幅 为 日龄 体 长 用 彭 泽卿 每个 浸泡时 日龄 体 长 试 剂浸 泡 液配 制 盐 酸 四 环 素 和 茜 素 络 合 物分 别 为 德 国 和 上 海 试 剂 三 厂 生 产 均 为 分 析纯粉剂 先 将 盐 酸 四 环 素 和 茜 素 络合 物 溶 于 蒸 馏 水 中 分 别 配 成 和 母 液 然 后 用 母 液 加 曝 气 的 自来 水 按 实 验 方 案 稀 释 配 制 成 不 同浓 度 的 浸 泡 液 溶液 的 值用 缓冲 液 调 节 至 接 近 于 中 性 的 过 程 中要 加 温 才 能完 全 溶 解 实 验 方案 茜 素络 合 物 不 易 溶 于 水 在 配 制 溶 液 体 积均 为 浸泡数 量为 尾 浸 泡 密度 为 尾 的酒 精 中 实 验 完 成 后 将 鱼 移 回 原 暂养 的 结 晶 皿 养 殖 的 酒 精 保存 标 记溶液 的 浸 泡 过 程 中 的死 亡 个 体 及 时 取 出保 存 在 茜素 络 合 物 浸 泡 液 设 置 和 盐 酸 四 环 素 浸 泡 液 设 置 见 表 后 取样 也 用 由于 实 验 材 料 所 限 每 种 鱼 没 有 进 行 浸 泡 浓度 梯度 的 试验 剖 针 摘 出 微耳 石 矢 耳 石 和 星 耳 石 甲 苯 透 明 中性 树 胶包 埋 将实 验 鱼 体 置 于 载玻 片 上 在 双 筒 解 剖镜 下 用 两 根 解 耳 石 制 备 和 荧 光 标 记 的检 测 用 蒸馏 水 清 洗 干净 酒 精脱 水 干 燥 置 荧光 显微 镜 下 用 紫 外 激 发 光 源 观 察 然后用 二 结果 浸 泡液 的安 全 浓度 茜 素络 合 物浸 泡 液 的 浓 度 为 浓度 为 时间 成 活 浓 度为 成 活 率大 多 达 到 彭 泽 螂在 时 稀 有 鲜碑 和 彭 泽 螂 均 出现 浸泡 均 出现 成 活率 为 的死亡率 成 活率 为 浸 泡 后 养殖 期 间 均 无 死 亡 现 象发 生 只 有 稀 有鱼诚 在 的死 亡 率 浸泡 成 活率 用 盐 酸 四 环 素 浸 泡 稀有 鱼 确 而 浸 泡 彭 泽 鲤 时 浓度 浓度 浓 度大 于 时 死亡 率 为 标记 效果 茜 素 络 合物 除浸泡浓 度 为 的 鱼 全 部 在 浸 泡 过 程 中死 亡 没 有 检 测 外 在 荧 光 显 微 镜 下 用 紫外 光 观 察 浸 泡 浓 度 各 组 的微 耳 石 均 被 不 同 程 度 的 标 记 标 记 区 在 耳 石 中心 区 呈 橘 红 色 其 外 围 为 标 记 后 养 殖 期 间 耳 石 新 生 长 部 分 呈 绿 色 泡 液 浓 度 增 高 浸 泡 时 间 延 长 标 记 逐 渐 明显 图 浸泡 浓度 随着 浸 浸 泡时 间 均 有标 记 但非常 微 弱 不 同浸 泡 时 间其标 记 强 度 的 差 异 不 明 显 浸 泡 浓度 泡 时间 浓度 醒目 表 明 显 但 不 同 浸 泡 时 间 的 标 记 强 度 仍 没 有 很 大 差 异 浸泡 不 同 浸泡 时 间均 可 见 明显 的标 记 但 浸 泡 时间 浸泡 浓度 浸 标 记较 的标 记 强 度 明显 高 于 不 同 浸 泡 时 间均 可 见 非常 明 显 的标 记 浸 泡 时 间 越 长 标 记 越 茜素 络合 物对 两种 鱼 的标 记效果 没 有差 异 此 外 当浸 泡 浓 度 超 过 光 学显 微 镜 检 测 可 看 到 些 微 耳 石 和 矢 耳 石 上 有 条紫 红 色 标记 带 图 时 用

3 水生生物学报 卷 表 茜素络合物 标记结果! 实验鱼 稀有鱿细 G o b lo 仔尹 r zs ra FU S 浸泡浓度 30 父 浸泡时间 们口! 养殖时间! # % &!! # ( ) 成活率 (% ) S u rv i va l 标记率 (% ) R a tio o f m a rki g 1 U 曰 CU 八曰 U U 0 o0 标记效果 M a rki g fl 七 ts + 十 十 彭泽娜 G Zr as s fus aura 扭 s P g 淤 V a r CQ J 声咤曰戈悦曰 十十 十十十 十 因实验鱼死亡而没有取样检测 ; 十 ; 微弱 + + 较明显 ; 十十十明显 ; 十 + 非常明显 裹 2 盐酸四环 t 标记 ( C llt C ) 结果 T 妞 b 2 M ar ki g 比 s ul t o f C 为 1 0 由 y d ra t o f t t 农 K y li 实验鱼 R S h 浸泡浓度 ( mg /L) 浸泡时间 (h) L 川 m rs ig d 璐 lir U rs i g d U 花 ti o 养殖时间 (d) C 冶 t 切吧 ti m a ft r i r m rs i lg 成活率 ( % ) S lfv I V al 标记率 (% ) R 冶 d o o f m ar ki g 标记效果 M ar ki g fl 七 ts 彭泽细 h r 口 s s i u s a u r a 匆 P g 契 V ar 曰 月峥 r 哎心气月呼哎曰 十件 -+-+-干 注 标记效果同表

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5 对仔 稚 鱼有较大的影响阵 ] 不能用来对其进行标记 水生生物学报 23 卷 各个浸泡浓度组的浸泡均造成了稀有如卿的全部死亡 但盐酸四环素标记对彭泽卿仔稚鱼的影响很小 显然 浸泡浓度低于 30 0m g/ L 且浸泡时间在 1Zh 以内时 具有 1 0 % 的存活率 用盐酸四环素标记彭泽螂在 浓度 m g/ L 的范围内 浸泡持续 12h 即可有效的标记 由于盐酸四环素的价格远 远低于茜素络合物显然对彭泽螂选择其作为浸泡液较为理想 3 2 关于可见光标记和荧光标记的可见光观察 荧光化合物通常价格较高并且对检测标记的设备要求也较高因此 等提出直接用茜素红 (Al iza ri r d s) 对仔稚鱼进行标记可能更为简捷实用 [7] Vi gh of a 则报 道用荧光化合物茜素络合物 (2 o om g / L) 标记三种牙绸类稚鱼后在可见光下也可以检测 到紫红色的标记纹 l8] 用茜素络合物浸泡的仔稚鱼耳石在普通光学显微镜下观察发现 浸泡浓度在 loom g/ L 时有些微耳石和矢耳石上也可检测到条紫红色环纹由于荧光 显微镜下不能检测日轮这种可见光的标记对于验证日轮是直接而有效的 络合物而言在可见光下 远不如荧光显微镜下鲜明 但是 就茜素 标记的检出率远远低于用荧光显微镜下观察而且标记纹也远 因此 对鱼类仔 幼鱼的大规模判标记 泡并用荧光显微镜检测较好因 B c kl a 的论文没有提供彩色图片 红的可见光标记效果究竟如何只好留待进步的研究了 还是采用荧光试剂浸 在此不能断定茜素 川 [2] [7][8l H 川 r 滩斤盖 r i a t tlac y li to W E N la r ki g o tol i ths 子 i s h r i s 肠 i 印 参 考 文 勿 i u rs i o o f m ari fi s h l arv a i t t y li Tr IC r r ts 田 山 份 t o f ic r m t i o to lith s fo rl ati o 献 l a rv al S 从 J 百 o a l J uv i l fi s h b y 几盛通 r i F i s h r t s a s a 万 o s of I llll 巧 IO th I 反 rvi F is h 叮 Bu l o M ass 呱肛匕 g of ay u gg s a d larv a by t tm c y li ta g g i o o s g f to lith ll t i Bu J a s ap 肠 ic 印 of 及 i 叨月 3h r i s l s o C A B c 匆 m a D W 氏 a J M C al i as a fl uo r s t m ar k r o f l al a l d J uv i l arv Tr asa 万 o s of lh 月 l r i ca 月 s h r c ls 肠 i 印 670 T s o uk az to K o to lith ta ggig o f 即 u m bry o w ith fl uo r sc t su b stas 刀矽尸口翻 ls a G a 丸切 is h i 弓月 董双林 王志余 4 l 5 8 ( ) 62 B c k l a D W 万 o s of th J 如犯 r i c a v ig li o l a L M di t 习 a 于信勇等鲤鱼仔稚和幼鱼早期耳右上日轮的初步观察 V al i da d o o f s 几 Jo u r a l of 月 j h d a i l y 声站 h 勘 论印 大连水产学院学报 g fi s h o to lith s w ith al i z a ic r m t fo rm ati o i o to l 及 o lo gy 360 ths fo r th r D 切 l o du o m po 爪 th 瓦 u ds s s p i s i th

6 期 欧阳斌等荧光物质浸泡标记稀有的卿和彭泽纫仔稚鱼 3 29 U S I N G F L U O R E S C E N I I 刀叹 IS R 月 R /S A N D C 咬丑月及熨 沼月 服月了刃万尸忍脚吞 Z E V A R O u ya g B i a d Ch a g Ji a bo (I s 万栩阳 of 脚 dr o bioto 舒 肠 Ch i s 月 ca d 叮 of 及 i s 肠 ha ) A bstr at T 七 P r s t P a p r d al s w ith m th od s a d f ts o f u s i g al i z ari o m P l x o (A L Q a d hi o ry d ra t o f t tra c y li (C H T C) to m a r k l a rv al a d juv i l G o b to 尹 r is ra ru s a d m g / L A L C s oluti os fo r h Ca ra ss i u s a u ra lu s P g z V a r T o i rs th tw o s p i s i m d fi a r o o d m k to lith w as i d uc d A w ll fi d m ark o o to lith w as al so o bs rv d w h i rrrs i g l 脚 al Ca rassius aura tu s P g z V ar i Om g/ L C H T C sol u ti o s fo r 12 24h HO w vr d m o 川 a li ty w as o b s rv d i G ra r u s w h im m rs d i C H T C aus s o l u ti o 几 s ug g s ti g th a t T C m a y o t s b tu ta b l fo r b i g u s d as m a r ki g so l u ti o U d r t V lig h 仁 th m a r k o f A L C i th o to lith s 1 5 a s a ri t- P i k fl u o r sc t z o

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