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谢管
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1 中国科学 : 生命科学 203 年第 43 卷第 4 期 : 32 ~ 38 SCIENTIA SINICA Vitae life.scichina.com SCIENCE CHINA PRESS 论文沙眼衣原体 porf5 质粒蛋白经 TLR2 激活 MAPKs 信号通路诱导人单核细胞产生前炎症细胞因子周辉 2, 黄秋林 3, 李忠玉 *, 吴移谋, 谢小兵 4 陆春雪, 钟光明 2, 马康康, 曹文娟南华大学医学院病原生物学研究所, 衡阳 4200; 2 湖南中医药大学第一附属医院, 长沙 40007; 3 南华大学第一附属医院, 衡阳 4200; 4 Department of Microbiology and Immunology, University of Texas Health Science Center, San Antonio, TX 78229, USA 同等贡献 * 联系人, lzhy023@hotmail.com 收稿日期 : ; 接受日期 : 国家自然科学基金 ( 批准号 : , ) 和湖南省高校科技创新团队项目 ( 批准号 : 湘教通 [200] 22 号 ) 资助 doi: 0.007/s , 周洲, 摘要沙眼衣原体 (Chlamydia trachomatis, Ct) 可引起泌尿生殖道感染, 导致不孕异位妊娠等严重并发症. 过度的炎症反应被认为是 Ct 感染造成机体生殖道免疫病理损伤的重要原因, 但其具体机制尚不清楚. 本研究旨在探讨 Ct 质粒蛋白 porf5 的潜在致炎活性, 以及与 TLR2 和丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 信号通路的关系. 结果表明, porf5 蛋白以剂量和时间依赖方式诱导 THP- 细胞产生 TNF-α, IL-β, IL-8 等前炎症细胞因子. 进一步研究表明, porf5 蛋白能激活 p38/mapk 和 ERK/MAPK, 但不能激活 JNK/MAPK; p38/mapk 和 ERK/MAPK 特异性抑制剂及 TLR2 抗体能降低前炎症细胞因子产生水平. 该研究初步证实, porf5 质粒蛋白经 TLR2 活化的 p38/mapk 和 ERK/MAPK 通路诱导 THP- 细胞产生前炎症细胞因子, porf5 质粒蛋白可能是 Ct 重要的致病因子, 参与 Ct 炎症病理过程. 关键词沙眼衣原体 porf5 质粒蛋白丝裂原活化蛋白激酶 TLR2 前炎症细胞因子沙眼衣原体 (Chlamydia trachomatis, Ct) 是引起沙眼和性传播疾病的常见病原体, 共有 9 个血清型, 其中 A, B, Ba 和 C 血清型可引起沙眼, 是感染性致盲的首要原因 [] ; D~K 血清型可通过性传播途径, 引起男性尿道炎前列腺炎附睾炎等 ; 女性则引起子宫颈炎子宫内膜炎和输卵管炎等疾病 [2,3] ; L, L2, L2a 和 L3 血清型引起性病淋巴肉芽肿. Ct 生殖道感染亦可增加 HIV 感染率和宫颈癌的发病率 [4~6]. Ct 感染病程隐匿, 多数患者常表现为无症状或轻微症状, 因此临床上该疾病往往不易被发现而得不到及时治疗, 引用格式 : 周辉, 黄秋林, 李忠玉, 等. 沙眼衣原体 porf5 质粒蛋白经 TLR2 激活 MAPKs 信号通路诱导人单核细胞产生前炎症细胞因子. 中国科学 : 生命科学, 203, 43: 英文版见 : Zhou H, Huang Q L, Li Z Y, et al. porf5 plasmid protein of Chlamydia trachomatis induces MAPK-mediated pro-inflammatory cytokines via TLR2 activation in THP- cells. Sci China Life Sci, doi: 0.007/s

com SCIENCE CHINA PRESS 论文沙眼衣原体 porf5 质粒蛋白经 TLR2 激活 MAPKs 信号通路诱导人单核细胞产生前炎症细胞因子周辉 2, 黄秋林 3, 李忠玉 *, 吴移谋, 谢小兵 4 陆春雪, 钟光明 2, 马康康, 曹文娟南华大学医学院病原生物

2 中国科学 : 生命科学 203 年第 43 卷第 4 期导致病原体在机体内持续存在, 引起不孕异位妊娠等严重并发症. 然而, 迄今为止 Ct 致病机制仍未明确, 因此寻找 Ct 毒力因子并阐明其致病机制, 对于预防与控制 Ct 感染有重要意义. Ct 感染可诱导 IL-6, IL-8, TNF-α 等多种炎症细胞因子的产生 [7~9], 一方面可促进免疫反应, 清除 Ct 感染以保护机体, 另一方面参与 Ct 免疫病理反应导致炎症性损伤 [0]. 然而, Ct 如何启动炎症反应, 哪些衣原体蛋白参与炎症因子的诱生过程目前尚不清楚. 除染色体 DNA 外, Ct 还具有约 7.5 kb 的隐蔽性质粒 [], 质粒共有 8 个开放阅读框 (ORF), 编码 8 种 [2] 质粒蛋白 (porf~porf8). O Connell 等人研究发现, 质粒缺失株能抑制 TLR2 依赖的炎症细胞因子的产生, 不引起生殖道病变, 提示质粒蛋白与衣原体炎症反应直接相关. porf5 作为唯一一种 Ct 质粒编码的胞浆分泌性蛋白, 在衣原体的致病过程中可能发挥重要作用. 为探讨 porf5 质粒蛋白在 Ct 感染过程中的潜在炎症活性及其诱导前炎症因子与 TLR2 和丝裂原活化的蛋白激酶 (mitogen activated protein kinase, MAPK) 信号通路的关系, 本研究克隆表达了 porf5 重组蛋白, 重组蛋白经蛋白酶剪切 GST 标签后体外刺激 THP- 细胞, ELISA 检测 TNF-α, IL-8 和 IL-β 等前炎症因子的产生水平, Western blotting 鉴定 ERK, p38 和 JNK/MAPK 的活化情况 ; 进一步用 TLR2 抗体, ERK, p38 特异性抑制剂分析 porf5 对 MAPK 激活及 IL-8, IL-β 和 TNF-α 产生的影响, 为深入了解 Ct 与宿主的相互作用, 全面认识和探索 porf5 在 Ct 炎症反应中的作用提供实验依据. 材料与方法. GST-pORF5 融合蛋白的表达与纯化将已构建好的 pgex-6p/porf5 重组质粒转化 XL-Blue 大肠杆菌, 200 μmol/l IPTG(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)37 诱导 3 h 后, 低速离心集菌, 加入 Triton-X00 裂解液超声破菌后高速离心, 将上清加入 Glutathione Sepharose 4B Beads(Amersham Pharmacia Biotech, Inc, Piscataway, NJ) 纯化 GSTpORF5 融合蛋白. 融合蛋白经 prescission 蛋白酶 (Pharmacia) 酶切后得到不含 GST 标签的 porf5 蛋白, porf5 蛋白经超滤管 Centricon YM-0(Millipore, Billerica, MA, USA) 浓缩和多黏菌素 B(Sigma, St. Louis, MO) 去内毒素处理后, 80 保存备用..2 细胞培养和蛋白刺激 THP- 细胞 (TIB-202; ATCC) 用含 0% 胎牛血清 (FBS; GIBCO BRL, Rockville, MD, USA) 的 RPMI640 培养基 (GIBCO BRL) 在 37, 5% CO 2 培养箱中培养. 在细胞刺激实验中, THP- 细胞以 0 5 个 /ml 的浓度接种于 24 孔细胞培养板中, 为检测不同浓度 porf5 蛋白对前炎症细胞因子产生的影响, 分别用 2~8 μg/ml 的 porf5 蛋白刺激 THP- 细胞 ; 为检测 porf5 蛋白在不同时间对前炎症细胞因子产生的影响, 分别用 porf5 蛋白刺激细胞 6, 2, 24 和 36 h. 实验过程中用 00 ng/ml LPS 做阳性对照组, 用 PBS 做阴性对照组, 各组均设 3 个平行孔. 同时, 为评价 TLR2, MAPKs 信号通路对前炎症因子产生的影响, 分别用不同浓度的 ERK 特异性抑制剂 PD98059(Sigma), p38 特异性抑制剂 SB203580(Sigma) 和 TLR2 抗体 (Abcam, Cambridge, UK) 预处理 THP- 细胞 30 min, 然后用 6 μg/ml porf5 蛋白刺激 THP- 细胞 2 h..3 ELISA 测定细胞因子水平收集经上述处理后的 THP- 细胞培养上清及细胞裂解液, 采用 ELISA 检测试剂盒 (R&D Systems, Inc., Minneapolis, MN, USA) 测定 TNF-α, IL-β 和 IL-8 水平. 方法如下 : TNF-α, IL-β 和 IL-8 等细胞因子包被抗体包被 96 孔酶标板, 4 过夜 ; % BSA 室温封闭 2 h; 加入待测标本和标准品, 37 2 h 后, 依次加入生物素标记的细胞因子抗体辣根过氧化物酶标记的二抗和底物 ABTS(Sigma), 最后 2 mol/l 硫酸终止反应, 酶标仪 (Molecular Devices Corporation, Sunnyvale, CA, USA) 读取 405 nm 波长的 A 值. 根据标准曲线和样本稀释度计算 TNF-α, IL-β 和 IL-8 浓度..4 SDS-PAGE 和 Western blotting 收集细胞标本, 并加入 2% SDS 上样液, 00 加热 5 min 后, 离心后取上清进行 2% SDS-PAGE 凝胶电泳, 然后转移至 NC 膜上, 5% 脱脂牛奶封闭后, 分别加入磷酸化的兔抗 ERK, JNK 和 p38 抗体 (Cell Signaling Technology, Beverly, MA, USA) 以及鼠抗 33

然而, Ct 如何启动炎症反应, 哪些衣原体蛋白参与炎症因子的诱生过程目前尚不清楚. 除染色体 DNA 外, Ct 还具有约 7.5 kb 的隐蔽性质粒 [], 质粒共有 8 个开放阅读框 (ORF), 编码 8 种 [2] 质粒蛋白 (porf~porf8).

3 周辉等 : 沙眼衣原体 porf5 质粒蛋白经 TLR2 激活 MAPKs 信号通路诱导人单核细胞产生前炎症细胞因子 JNK, p38, ERK 抗体 (Santa Cruz Biotechnology Inc., Santa Cruz, CA, USA), 室温孵育 2 h, 0.05% PBST 洗涤后加入 HRP 标记的羊抗兔或抗鼠抗体 (Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc, West Grove, PA, USA), 最后加底物 ECL(Santa Cruz Biotech) 显色, X 片曝光显影观察结果..5 统计学分析采用 Student s t-test 和单因素方差分析对数据进行统计学分析. 实验重复 3 次, 实验数据以 x ±SD 表示, 以 P<0.05 视为有统计学差异. 2 结果 2. porf5 蛋白的表达与纯化 IPTG 诱导 XL-Blue 大肠杆菌表达 GST-pORF5 融合蛋白, 融合蛋白经 Glutathione Sepharose 4B beads 纯化后再经蛋白酶酶切, 酶切产物和纯化产物经 2% SDS-PAGE 电泳分析, 发现在 54( 酶切前 ) 和 28 kd( 酶切后 ) 位置处有一明显蛋白条带 ( 图 A). 进一步以抗 porf5 单克隆抗体为一抗 HRP 标记的羊抗鼠为二抗进行 Western blot 分析, 结果显示在 28 kd 处出现亦阳性反应带 ( 图 B). 2.2 porf5 蛋白诱导 THP- 细胞产生前炎症细胞因子用浓度为 2~8 μg/ml porf5 蛋白刺激 THP- 细胞, ELISA 分别检测 TNF-α, IL-β 和 IL-8 前炎症细胞因子产生水平 ; 由图 2A 可见, 前炎症细胞因子产生水平与 porf5 蛋白浓度呈明显的剂量依赖性, 当 porf5 浓度为 6 μg/ml 时, TNF-α, IL-β 和 IL-8 产生水平最高, 当 porf5 蛋白浓度高于 6 μg/ml 时, TNF-α, IL-β 和 IL-8 的产生水平反而下降. 同时, porf5 蛋白能以时间依赖方式诱导 THP- 细胞产生 TNF-α, IL-β 和 IL-8; 由图 2B 可见, 当用 6 μg/ml porf5 蛋白刺激细胞 6 h 时, TNF-α 产生水平达到高峰, 持续到 2 h 后逐渐下降. IL-β 和 IL-8 在细胞刺激 6 h 时可检测其表达, 随着刺激时间的延长, 其产生量逐渐增加, 2 h 达到峰值. 实验过程中, 为去除样本中由于 LPS 的污染给实验带来的影响, porf5 蛋白与 50 g/ml 多黏菌素 B 37 孵育 h 后再刺激 THP- 细胞, ELISA 方法测定 TNF-α 产生水平. 结果发现, porf5 未处理组与处理组无显著性差异 (P>0.05), LPS 处理组细胞所产生的细胞因子 TNF-α 显著低于未处理组 (P<0.0)( 图 2C). 2.3 porf5 激活 ERK 和 p38/mapk 信号通路分别收集 6 μg/ml porf5 蛋白刺激 THP- 细胞 0, 5, 30, 60 min 的细胞, Western blotting 检测 JNK, p38 和 ERK 的磷酸化水平, 结果见图 3. porf5 蛋白刺激 THP- 细胞 5 min 后可见磷酸化条带, 其中 ERK 的磷酸化水平在 5 min 达到高峰, 随后逐渐下降, 持续 60 min 以上, p38 的磷酸化水平在 30 min 达到高峰, 随后下降, 而 SAPK/JNK 未检测到磷酸化反应. 图 porf5 蛋白的纯化与鉴定 A: SDS-PAGE 分析 ; : 蛋白标准分子量 ; 2: 纯化的 GST-pORF5 融合蛋白 ; 3: GST-pORF5 融合蛋白酶切后 beads; 4: GST-pORF5 融合蛋白酶切后上清 ; 5~6: GST-pORF5 酶切后 beads 洗脱液 ; B Western blotting 分析 ; : XL-Blue 大肠杆菌裂解液 ; 2: GST-pORF5 酶切后 beads 洗脱液 ; 3: GST-pORF5 酶切后上清 34

.5 统计学分析采用 Student s t-test 和单因素方差分析对数据进行统计学分析. 实验重复 3 次, 实验数据以 x ±SD 表示, 以 P<0.05 视为有统计学差异. 2 结果 2.

4 中国科学 : 生命科学 203 年第 43 卷第 4 期图 2 porf5 蛋白对前炎症细胞因子的诱生作用 A: porf5 蛋白以剂量依赖方式诱导 THP- 细胞产生 TNF-α, IL-β 和 IL-8; 2~8 μg/ml porf5 蛋白刺激 THP- 细胞 2 h, 收集细胞培养上清和裂解液, ELISA 检测 TNF-α, IL-β 和 IL-8, 同时以 PBS 和 00 ng/ml LPS 作为阴性和阳性对照 ; 以上结果为 3 次独立实验的平均值 ; B: porf5 蛋白以时间依赖方式诱导 THP- 细胞产生 TNF-α, IL-β 和 IL-8; 6 μg/ml porf5 刺激细胞 0, 6, 2, 24 和 36 h, 收集不同时间点细胞, 经裂解后 ELISA 检测 TNF-α, IL-β 和 IL-8; 以上结果为 3 次独立实验的平均值 ; C: 多黏菌素 B 去内毒素处理后对 TNF-α 产生水平的影响 ; 50 g/ml 多黏菌素 B 处理 porf5, LPS 后刺激 THP- 细胞, ELISA 方法测定 TNF-α 产生水平 ; 以上结果为 3 次独立实验的平均值 35

赖方式诱导 THP- 细胞产生 TNF-α, IL-β 和 IL-8; 6 μg/ml porf5 刺激细胞 0, 6, 2, 24 和 36 h, 收集不同时间点细胞, 经裂解后 ELISA 检测 TNF-α, IL-β 和 IL-8; 以上结果为 3 次独立实验的

5 周辉等 : 沙眼衣原体 porf5 质粒蛋白经 TLR2 激活 MAPKs 信号通路诱导人单核细胞产生前炎症细胞因子图 3 Western blotting 鉴定 MAPKs 通路的活化 6 μg/ml porf5 刺激 THP- 细胞 0( 阴性对照 ), 5, 30 和 60 min, 收集细胞并用细胞裂解液裂解细胞提取蛋白, Western blotting 鉴定 JNK, p38 和 ERK 通路的活化情况 2.4 p38/mapk 和 ERK/MAPK 通路参与 porf5 蛋白对前炎症因子的诱生作用为进一步分析 p38/mapk, ERK/MAPK 通路与 porf5 蛋白诱导 THP- 细胞产生 TNF-α, IL-β 和 IL-8 前炎症细胞因子的关系, THP- 细胞预先用不同浓度 (, 0, 30 μmol/l) 的 p38mapk 信号通路抑制剂 SB20290 和 ERK/MAPK 信号通路抑制剂 PD98059 预处理 30 min 后, 再加入 6 μg/ml porf5 刺激细胞 2 h, ELISA 结果发现, p38/mapk 和 ERK/MAPK 通路特异性抑制剂能明显抑制 TNF-α, IL-β 和 IL-8 产生水平, 并以剂量依赖的方式抑制前炎症因子的产生. 当 SB20290 和 PD98059 抑制剂的浓度为 30 μmol/l 时, TNF-α, IL-β 和 IL-8 分别下降至 22.4%, 27.6%, 22.8% 和 60.3%, 58.8%, 45.7%. 与未处理组比较具有显著性差异 (P<0.05)( 图 4). 2.5 TLR2 参与 porf5 蛋白诱导前炎症细胞因子的产生为分析 TLR2 是否参与了 porf5 蛋白诱导 TNF-α, 图 4 MAPKs 特异性抑制剂对 porf5 蛋白诱生前炎症细胞因子的影响 THP- 细胞用不同浓度 (, 0, 30 μmol/l) 的 p38/mapk 信号通路抑制剂 SB20290(A), ERK/MAPK 信号通路抑制剂 PD98059(B) 和 DMSO 预处理 30 min 后, 再加入 6 μg/ml porf5 刺激细胞 2 h, ELISA 方法测定 TNF-α, L-β 和 IL-8 产生水平 ; 以上结果为 3 次独立实验的平均值 IL-β 和 IL-8 前炎症因子过程, 用 0 μg/ml TLR2 抗体预处理 THP- 细胞 30 min 后, 再加入 6 μg/ml porf5 刺激细胞 2 h, 同时加入鼠 IgG 为同型对照, ELISA 检测 TNF-α, IL-β 和 IL-8 产生水平. 结果如图 5 所示, TLR2 抗体能明显抑制前炎症因子的产生 (P<0.0), 而对照鼠 IgG 对 TNF-α, IL-β 和 IL-8 前炎症因子基本无影响 (P>0.05). 3 讨论 Ct 为专性细胞内寄生菌, 为维持在细胞内的正常生长和代谢, 衣原体必须分泌效应分子到包涵体 [3~5] [6~8] 膜或宿主细胞胞浆并主动操纵宿主信号通路 [9~2]. 作为 Ct 与宿主相互作用的结果, 宿主细胞编码多种细胞因子和趋化因子的基因被激活. 体内外实验已证实, Ct 可诱导上皮细胞产生 IL-α, IL-6, 36

4 p38/mapk 和 ERK/MAPK 通路参与 porf5 蛋白对前炎症因子的诱生作用为进一步分析 p38/mapk, ERK/MAPK 通路与 porf5 蛋白诱导 THP- 细胞产生 TNF-α, IL-β 和 IL-8 前炎症细胞因子的关系, THP- 细胞预先用不同浓度 (, 0, 30

6 中国科学 : 生命科学 203 年第 43 卷第 4 期图 5 TLR2 参与 TNF-α, IL-β 和 IL-8 炎症因子诱生过程 THP- 细胞经 0 μg/ml TLR2 抗体鼠 IgG 预处理后, 加入 6 μg/ml porf5 蛋白刺激, ELISA 方法测定 TNF-α, IL-β 和 IL-8 产生水平 ; 以上结果为 3 次独立实验的平均值 IL-8, TNF-α 等多种炎症细胞因子和趋化因子 [7~9], 介导 Ct 感染后炎症病理反应 [0]. 然而衣原体有哪些物质具有炎症因子活性以及其诱生炎症因子的机制目前尚不清楚. Ct 的 9 个血清型几乎都含有个约 7.5 kb 的隐蔽性质粒 [], 质粒与 Ct 引起的免疫病理和感染密切相关 [22~24]. porf5 是唯一一种分布于宿主细胞胞浆的分泌性蛋白 [7], 推测 porf5 可能参与介导 Ct 与宿主细胞的相互作用, 在衣原体的致病过程中发挥重要作用. 为此, 本研究利用 pgex-6p 原核表达系统表达 GST-pORF5 融合蛋白, 融合蛋白经 Glutathione Sepharose 4B 进行亲和层析纯化后, 进一步经 PreScission 蛋白酶切割, 制备不含 GST 标签的 porf5 蛋白. porf5 蛋白体外刺激 THP- 细胞, 结果发现, 该蛋白以剂量依赖的方式诱导 THP- 细胞产生 TNF-α, IL-β 和 IL-8 等炎症因子, 当 porf5 浓度为 6 μg/ml 时, TNF-α, IL-β 和 IL-8 产生水平最高, 当 porf5 蛋白浓度高于 6 μg/ml 时, TNF-α, IL-β 和 IL-8 的产生水平反而下降. 可能是由于高浓度的 porf5 影响 THP- 细胞正常的生物学功能, 导致细胞因子分泌量减少 ; 同时 porf5 蛋白以时间依赖的方式诱导 THP- 细胞产生 TNF-α, IL-β 和 IL-8 等炎症因子, 当用 6 μg/ml porf5 蛋白刺激细胞 6 h 时, TNF-α 产生水平达到高峰, 持续到 2 h 后逐渐下降. IL-β 和 IL-8 在细胞刺激 2 h 达到峰值, 提示 porf5 蛋白具有潜在的致炎活性, 可能参与 Ct 炎症病理发生过程. MAPKs 是一类广泛存在于真核细胞内的丝氨酸 / 苏氨酸蛋白激酶, 主要包括 ERK, p38 和 JNK 家族成员, 该信号通路能将细胞外刺激信号转导至细胞内, 参与细胞分化炎症凋亡等多种生理活动的调节. 已有研究证实, Ct 感染可活化宿主细胞 MAPKs 信号通路, 介导多种炎症因子的产生 [25,26]. 为分析 MAPKs 通路是否参与 porf5 对 TNF-α, IL-β 和 IL-8 等炎症因子的诱生作用, 本研究分析了 MAPKs 磷酸化状态蛋白表达情况, 结果发现 ERK 和 p38 出现了磷酸化反应, 但 JNK 未出现磷酸化反应. 进一步使用 p38 和 ERK 特异性抑制剂阻断其相应的信号通路, 结果发现 p38 和 ERK 特异性抑制剂均不同程度地降低了 TNF-α, IL-β 和 IL-8 等炎症因子的产生水平, 充分说明 porf5 可激活 p38 和 ERK 通路, 活化的 p38 和 ERK 通路参与了 porf5 对前炎症细胞因子 IL-8, IL-β 和 TNF-α 的诱生作用. TLR2 在 Ct 诱导炎症反应的信号转导过程中发挥重要作用 [27,28], 质粒缺失菌株体内外均不能激活 TLR2 依赖的免疫反应 [29], 提示质粒是 Ct 活化 TLR2 通路的关键, Ct 通过质粒调节 TLR2 通路介导机体免疫病理的发生与发展. 本研究发现, TLR2 抗体能明显抑制 IL-8, IL-β 和 TNF-α 的产生, 说明 TLR2 通路可能参与了 porf5 对炎症反应的诱生过程. 综上所述, 本研究初步证实 porf5 能够诱导 THP- 细胞产生 IL-8, IL-β 和 TNF-α 等前炎症细胞因子, 前炎症细胞因子的产生与 porf5 活化 TLR2 和 ERK, p38 MAPKs 信号通路相关, 但 ERK, p38 MAPKs 活化后最终会启动下游哪些分子参与 porf5 对前炎症因子的诱生作用尚有待进一步探讨和证实. 本研究为深入研究衣原体与宿主细胞间的相互作用, 阐明衣原体致病机制提供了重要实验依据. 参考文献 Mabey D C, Solomon A W, Foster A. Trachoma. Lancet, 2003, 362: Brunham R C, Rey-Ladino J. Immunology of Chlamydia infection: implications for a Chlamydia trachomatis vaccine. Nat Rev Immunol, 2005, 5: Belland R, Ojcius D M, Byrne G I. Chlamydia. Nat Rev Microbiol, 2004, 2:

Ct 的 9 个血清型几乎都含有个约 7.5 kb 的隐蔽性质粒 [], 质粒与 Ct 引起的免疫病理和感染密切相关 [22~24].

7 周辉等 : 沙眼衣原体 porf5 质粒蛋白经 TLR2 激活 MAPKs 信号通路诱导人单核细胞产生前炎症细胞因子 4 Cristina Ferreira Silva L, Espinosa Miranda A, Santos Batalha R, et al. Chlamydia trachomatis infection among HIV-infected women attending an AIDS clinic in the city of Manaus, Brazil Braz J Infect Dis, 202, 6: Verteramo R, Pierangeli A, Mancini E, et al. Human papilloma- viruses and genital co-infections in gynaecological outpatients. BMC Infect Dis, 2009, 9: Oh J K, Franceschi S, Kim B K, et al. Prevalence of human papillomavirus and Chlamydia trachomatis infection among women attending cervical cancer screening in the Republic of Korea. Eur J Cancer Prev, 2009, 8: Buchholz K R, Stephens R S. Activation of the host cell proinflammatory interleukin-8 response by Chlamydia trachomatis. Cell Microbiol, 2006, 8: Maxion H K, Kelly K A. Chemokine expression patterns differ within anatomically distinct regions of the genital tract during Chlamydia trachomatis infection. Infect Immun, 2002, 70: Gervassi A, Alderson M R, Suchland R, et al. Differential regulation of inflammatory cytokine secretion by human dendritic cells upon Chlamydia trachomatis infection. Infect Immun, 2004, 72: Stephens R S. The cellular paradigm of chlamydial pathogenesis. Trends Microbiol, 2003, : 44 5 Thomas N S, Lusher M, Storey C C, et al. Plasmid diversity in Chlamydia. Microbiology, 997, 43: O Connell C M, Ingalls R R, Andrews C W Jr, et al. Plasmid-deficient Chlamydia muridarum fail to induce immune pathology and protect against oviduct disease. J Immunol, 2007, 79: Li Z, Huang Q, Su S, et al. Localization and characterization of the hypothetical protein CT440 in Chlamydia trachomatis-infected cells. Sci China Life Sci, 20, 54: Li Z, Chen C, Chen D, et al. Characterization of fifty putative inclusion membrane proteins encoded in the Chlamydia trachomatis genome. Infect Immun, 2008, 76: Chen C, Chen D, Sharma J, et al. The hypothetical protein CT83 is localized in the Chlamydia trachomatis inclusion membrane and is immunogenic in women urogenitally infected with C. trachomatis. Infect Immun, 2006, 74: Zhong G. Chlamydia trachomatis secretion of proteases for manipulating host signaling pathways. Front Microbiol, 20, 2: 4 7 Li Z, Chen D, Zhong Y, et al. The chlamydial plasmid-encoded protein pgp3 is secreted into the cytosol of Chlamydia-infected cells. Infect Immun, 2008, 76: Lei L, Qi M, Budrys N, et al. Localization of Chlamydia trachomatis hypothetical protein CT3 in host cell cytoplasm. Microb Pathog, 20, 5: Greene W, Xiao Y, Huang Y, et al. Chlamydia-infected cells conti- nue to undergo mitosis and resist induction of apoptosis. Infect Immun, 2004, 72: Su H, McClarty G, Dong F, et al. Activation of Raf/MEK/ERK/ cpla2 signaling pathway is essential for chlamydial acquisition of host glycerophospholipids. J Biol Chem, 2004, 279: Xiao Y, Zhong Y, Greene W, et al. Chlamydia trachomatis infection inhibits both Bax and Bak activation induced by staurosporine. Infect Immun, 2004, 72: Russell M, Darville T, Chandra-Kuntal K, et al. Infectivity acts as in vivo selection for maintenance of the chlamydial cryptic plasmid. Infect Immun, 20, 79: O Connell C M, Nicks K M. A plasmid-cured Chlamydia muridarum strain displays altered plaque morphology and reduced infectivity in cell culture. Microbiology, 2006, 52: Carlson J H, Whitmire W M, Crane D D, et al. The Chlamydia trachomatis plasmid is a transcriptional regulator of chromosomal genes and a virulence factor. Infect Immun, 2008, 76: Srivastava P, Vardhan H, Bhengraj A R, et al. Azithromycin treatment modulates the extracellular signal-regulated kinase mediated pathway and inhibits inflammatory cytokines and chemokines in epithelial cells from infertile women with recurrent Chlamydia trachomatis infection. DNA Cell Biol, 20, 30: Vignola M J, Kashatus D F, Taylor G A, et al. cpla2 regulates the expression of type I interferons and intracellular immunity to Chlamydia trachomatis. J Biol Chem, 200, 285: Darville T, O Neill J M, Andrews C W Jr, et al. Toll-like receptor-2, but not Toll-like receptor-4, is essential for development of oviduct pathology in chlamydial genital tract infection. J Immunol, 2003, 7: He X, Nair A, Mekasha S, et al. Enhanced virulence of Chlamydia muridarum respiratory infections in the absence of TLR2 activation. PLoS ONE, 20; 6: e O Connell C M, AbdelRahman Y M, Green E, et al. Toll-like receptor 2 activation by Chlamydia trachomatis is plasmid dependent, and plasmid-responsive chromosomal loci are coordinately regulated in response to glucose limitation by C. trachomatis but not by C. muridarum. Infect Immun, 20, 79:

Human papilloma- viruses and genital co-infections in gynaecological outpatients. BMC Infect Dis, 2009, 9: 6 27 6 Oh J K, Franceschi S, Kim B K, et al.

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