96 第 35 卷 第 2 期 水 生 态 学 杂 志 2014 年 3 月 原 螯 虾 20 只, 每 平 行 重 复 2 组 每 24h 更 换 试 验 溶 液 1 次 以 维 持 药 物 浓 度 1.3 样 品 处 理 于 药 浴 后 d 分 别 从 每 处 理 组 随 机 取
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- 溢规 怀
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1 第 35 卷 第 2 期 2014 年 3 月 水 生 态 学 杂 志 JournalofHydroecology Vol.35,No.2 Mar 敌 百 虫 胁 迫 对 克 氏 原 螯 虾 免 疫 学 相 关 指 标 的 影 响 钟 君 伟, 朱 永 安, 孟 庆 磊, 张 龙 岗, 安 丽 ( 山 东 省 淡 水 渔 业 研 究 院, 山 东 省 淡 水 水 产 遗 传 育 种 重 点 实 验 室, 济 南 ) 摘 要 : 在 不 同 质 量 浓 度 ( mg/L) 敌 百 虫 胁 迫 条 件 下, 研 究 克 氏 原 螯 虾 (Procambarusclarki) 肝 胰 腺 T SOD CAT ACP AKP 及 肌 肉 Na +,K + ATPase TChE 的 活 性 变 化 结 果 表 明, 敌 百 虫 对 各 免 疫 因 子 影 响 各 异 ;0.132mg/L 和 0.528mg/L 浓 度 组 克 氏 原 螯 虾 的 肝 胰 腺 T SOD 活 性 分 别 于 药 浴 4d 和 1d 时 显 著 高 于 对 照 组 (P<0.05);0.132mg/L 和 0.264mg/L 浓 度 组 克 氏 原 螯 虾 的 CAT 活 性 于 药 浴 2d 后 显 著 高 于 对 照 组 (P<0.05); 12d 内 各 浓 度 组 ACP 及 AKP 活 性 随 药 浴 时 间 的 延 长 而 一 直 低 于 对 照 组, 其 中 ACP 在 4d 内 逐 渐 降 低 ; 肌 肉 TChE 在 0.132mg/L 和 0.264mg/L 浓 度 组 中 分 别 于 药 浴 1d 和 4d 后 活 性 显 著 高 于 对 照 组 (P<0.05); 而 Na +,K + ATPase 只 有 0.528mg/L 浓 度 组 在 2d 内 活 性 显 著 高 于 对 照 组 (P<0.05), 其 余 各 组 未 出 现 诱 导 现 象 ; 试 验 组 各 免 疫 因 子 活 性 在 药 浴 12d 时 均 显 著 低 于 对 照 组 (P<0.05); 表 明 敌 百 虫 胁 迫 并 非 仅 仅 作 用 于 TChE, 其 对 克 氏 原 螯 虾 机 体 T SOD CAT ACP AKP 及 Na +,K + ATPase 均 有 影 响,12d 后 各 免 疫 因 子 活 性 均 难 以 恢 复 至 对 照 水 平 关 键 词 : 克 氏 原 螯 虾 ; 敌 百 虫 ; 胁 迫 ; 免 疫 因 子 中 图 分 类 号 :Q355 文 献 标 志 码 :A 文 章 编 号 : (2014) 克 氏 原 螯 虾 (Procambarusclarki) 俗 称 淡 水 小 龙 虾, 分 类 学 上 属 节 肢 动 物 门 甲 壳 纲 软 甲 亚 纲 十 足 目 螯 虾 亚 目 蜊 蛄 科 原 螯 虾 属, 原 产 于 北 美 洲,20 世 纪 30 年 代 末 由 日 本 传 入 我 国, 由 于 其 繁 殖 能 力 极 强, 能 适 应 稻 田 池 塘 滩 地 等 多 种 水 域 环 境, 已 成 为 我 国 重 要 的 水 产 经 济 虾 类, 是 目 前 水 产 业 中 发 展 最 为 迅 速 最 具 特 色 的 养 殖 品 种 之 一 敌 百 虫 (trichlorfon) 作 为 有 机 磷 酸 脂 类 化 合 物, 是 一 种 高 效 低 毒 低 残 留 的 有 效 杀 虫 剂, 在 鱼 病 防 治 中 代 替 了 有 机 氯 农 药 六 六 六 等, 用 于 防 治 鱼 体 内 外 寄 生 的 吸 虫 线 虫 棘 头 虫 及 危 害 鱼 苗 鱼 卵 的 枝 角 类 桡 角 类 蚌 钩 介 幼 虫 和 水 蜈 蚣 等 病 害, 也 可 用 于 控 制 淡 水 中 的 浮 游 动 物 目 前, 敌 百 虫 对 水 生 生 物 的 影 响 较 多 地 集 中 在 鱼 类 研 究 方 面 ( 李 爱 景 等, 2009; 沈 美 芳 等,2009; 徐 维 娜,2009), 而 对 克 氏 原 螯 虾 的 相 关 报 道 较 少, 仅 见 其 对 敌 百 虫 的 急 性 毒 性 研 究 ( 沈 美 芳 等,2008), 未 涉 及 敌 百 虫 对 其 非 特 异 性 免 疫 因 子 的 影 响 本 试 验 在 沈 美 芳 等 (2008) 研 究 结 果 基 础 上, 以 不 同 浓 度 敌 百 虫 药 浴 克 氏 原 螯 虾, 观 察 其 肝 胰 腺 中 过 氧 化 氢 酶 (CAT) 总 超 氧 化 物 歧 化 收 稿 日 期 : 基 金 项 目 : 山 东 省 科 技 发 展 计 划 项 目 (2010GCG20901); 山 东 省 海 洋 与 渔 业 厅 科 技 计 划 项 目 通 讯 作 者 : 朱 永 安 E mail:zhuyongan1965@163.com 作 者 简 介 : 钟 君 伟,1984 年 生, 男, 助 理 研 究 员, 主 要 从 事 水 产 动 物 病 原 学 与 免 疫 学 研 究 E mail:yemaochuanqi@gmail.com 酶 (T SOD) 酸 性 磷 酸 酶 (ACP) 碱 性 磷 酸 酶 (AKP) 以 及 肌 肉 Na +, K + ATPase 和 乙 酰 胆 碱 酯 酶 (TChE) 活 性 的 变 化, 旨 在 进 一 步 探 究 克 氏 原 螯 虾 受 到 敌 百 虫 胁 迫 后 相 关 免 疫 因 子 的 变 化 1 材 料 与 方 法 1.1 试 验 材 料 试 验 用 克 氏 原 螫 虾 体 重 为 (21.64±0.57)g, 取 自 山 东 省 东 平 县 第 一 淡 水 养 殖 试 验 场, 在 室 内 暂 养 7d 暂 养 和 试 验 容 器 均 为 装 有 20L 水 的 塑 料 水 族 箱 (57cm 40cm 34cm); 试 验 前 24h 停 食, 并 从 中 选 择 体 质 健 壮 体 色 一 致 活 动 性 强 和 附 肢 完 整 的 成 虾 作 为 试 验 用 虾 试 验 在 山 东 省 淡 水 水 产 研 究 所 国 家 级 水 产 良 种 场 温 室 中 进 行, 水 源 为 玉 景 矿 泉 水 厂 700m 深 井 水, 水 温 (24.9 ± 2.7),pH 7.86,DO (5.24± 0.63)mg/L,TDS(0.44±0.05) mg/l;nh 4 N mg/L;NO 2 N - 未 检 出 24h 连 续 充 气 增 氧, 试 验 期 间 不 控 温, 根 据 需 要 进 行 适 量 投 喂 1.2 试 验 方 法 根 据 安 全 浓 度 ( 沈 美 芳 等,2008) 和 生 产 中 常 用 浓 度 ( 杨 先 乐,2005), 设 置 mg/L 共 3 个 敌 百 虫 浓 度 组 和 1 个 对 照 组 (0mg/L) 根 据 设 定 的 质 量 浓 度, 准 确 称 量 含 量 为 90% 的 晶 体 敌 百 虫, 放 入 装 有 20L 水 的 塑 料 水 族 箱 溶 解 完 全 后, 每 个 试 验 组 随 机 放 入 活 力 旺 盛 的 克 氏
2 96 第 35 卷 第 2 期 水 生 态 学 杂 志 2014 年 3 月 原 螯 虾 20 只, 每 平 行 重 复 2 组 每 24h 更 换 试 验 溶 液 1 次 以 维 持 药 物 浓 度 1.3 样 品 处 理 于 药 浴 后 d 分 别 从 每 处 理 组 随 机 取 出 3 只 虾, 在 冰 上 迅 速 采 集 腹 部 肌 肉 及 肝 胰 腺 组 织 样 品, 分 别 加 9 倍 质 量 0.86% 预 冷 无 菌 生 理 盐 水 制 备 成 10% 的 组 织 匀 浆, 匀 浆 过 程 在 冰 浴 条 件 下 进 行 匀 浆 液 经 3000r/min 4 离 心 15min, 吸 取 上 清 液 于 洁 净 的 离 心 管 中 -20 保 存 备 用, 并 于 24h 测 试 完 毕 1.4 指 标 检 测 使 用 南 京 建 成 生 物 技 术 有 限 公 司 生 产 的 试 剂 盒 测 定 CAT T SOD ACP AKP Na +,K + ATPase TChE 活 性 和 总 蛋 白 含 量, 按 说 明 书 进 行 操 作, 每 个 样 品 重 复 2 次 T SOD 定 义 为 每 1mg 组 织 蛋 白 在 1mL 反 应 液 中,SOD 抑 制 率 达 50% 时 所 对 应 的 量 为 1 个 SOD 活 性 单 位 (U/mg); 组 织 中 CAT 以 1mg 蛋 白 1s 分 解 1μmolH 2 O 2 的 量 为 1 个 活 性 单 位 (U/mg);ACP 定 义 为 每 1g 组 织 蛋 白 在 37 与 基 质 作 用 30min 产 生 1mg 酚 为 1 个 活 性 单 位 (U/g); AKP 定 义 为 每 1g 组 织 蛋 白 在 37 与 基 质 作 用 15min 产 生 1mg 酚 为 1 个 活 性 单 位 (U/g);Na +, K + ATPase 定 义 为 每 1h 每 1mg 组 织 蛋 白 的 组 织 中 ATP 酶 分 解 产 生 1μmol 无 机 磷 为 1 个 ATP 酶 活 性 单 位 [μmol/(mg h)];tche 活 性 定 义 为 每 1mg 组 织 蛋 白 在 37 保 温 6min, 水 解 反 应 体 系 中 1μmol 基 质 为 1 个 活 性 单 位 (U/mg); 考 马 斯 亮 蓝 显 色 法 测 定 总 蛋 白 含 量 (g/l) 1.5 数 据 处 理 试 验 数 据 采 用 SPSS19.0 软 件 处 理, 并 用 ANO VA 方 差 分 析 和 Duncan s 多 重 比 较 进 行 组 间 平 均 值 的 差 异 显 著 性 检 验, 试 验 结 果 数 据 取 平 均 数 ± 标 准 差 (M±SD), 以 P 0.05 作 为 差 异 显 著 标 准 2 结 果 与 分 析 2.1 毒 性 症 状 试 验 发 现, 在 敌 百 虫 高 浓 度 组 (0.528mg/L), 第 6 天 受 试 虾 摄 食 能 力 差, 尝 试 少 量 投 喂 饵 料 时 需 直 接 投 于 其 上 方, 落 下 触 动 虾 体 时 才 勉 强 摄 食, 至 第 10~11 天 基 本 不 进 食 ; 其 部 分 个 体 反 应 愈 显 迟 钝 僵 硬, 游 泳 能 力 差, 常 聚 于 气 头 附 近, 且 游 动 缓 慢, 螯 足 变 得 无 力, 易 出 现 脱 落 试 验 结 束 时 高 浓 度 暴 露 组 共 计 死 亡 6 尾, 平 均 死 亡 率 为 15%; 而 对 照 组 和 低 浓 度 暴 露 组 的 虾 游 泳 正 常, 主 动 摄 食 能 力 较 强, 试 验 中 未 出 现 死 亡 2.2 抗 氧 化 酶 活 性 水 体 中 敌 百 虫 胁 迫 对 克 氏 原 螯 虾 亲 虾 肝 胰 腺 抗 氧 化 酶 类 活 性 随 时 间 变 化 见 图 1 可 以 看 出, 各 时 间 点 试 验 组 与 对 照 组 T SOD 活 性 均 有 差 异 经 敌 百 虫 药 浴 1d 后,0.528mg/L 浓 度 组 T SOD 活 性 明 显 升 高, 较 对 照 组 和 0.132mg/L 和 0.264mg/L 浓 度 组 差 异 显 著 (P<0.05); mg/L 浓 度 组 与 对 照 组 相 比,T SOD 活 性 无 明 显 差 异 (P>0.05); 第 2 天,0.264mg/L 和 0.528mg/L 浓 度 组 T SOD 活 性 明 显 受 到 抑 制, 二 者 之 间 无 明 显 差 异 (P>0.05), 但 与 0.132mg/L 及 对 照 组 差 异 显 著 (P<0.05),0.132mg/L 浓 度 组 与 对 照 组 相 比 T SOD 活 性 无 明 显 变 化 (P>0.05); 第 4 天, 与 对 照 组 相 比,0.132 mg/l 浓 度 组 T SOD 活 性 上 升 了 31.23%(P<0.05), 其 他 各 浓 度 组 间 T SOD 活 性 无 明 显 变 化 (P>0.05); 第 12 天, 对 照 组 T SOD 活 性 明 显 升 高, 试 验 组 T SOD 活 性 虽 较 前 期 有 所 升 高, ( 柱 形 图 上 标 不 同 小 写 字 母 表 示 差 异 显 著,P<0.05; 相 同 小 写 字 母 表 示 差 异 不 显 著,P>0.05;n=3) 图 1 敌 百 虫 胁 迫 对 克 氏 原 螯 虾 抗 氧 化 酶 活 性 的 影 响 (Barswithdiferentsmalletersmeansignificantdiferences,P<0.05;thesamesmalletersmeannosignificantdiferences,P>0.05;n=3) Fig.1 EfectsoftrichlorphononT SODandCATactivitiesinhepatopancreasofProcambarusclarki
3 2014 年 第 2 期 钟 君 伟 等, 敌 百 虫 胁 迫 对 克 氏 原 螯 虾 免 疫 学 相 关 指 标 的 影 响 97 但 仍 分 别 较 对 照 组 下 降 16.51% 28.48% 和 26.70% (P<0.05) 在 肝 胰 腺 CAT 活 性 方 面, 经 敌 百 虫 药 浴 1d 后,0.264mg/L 和 0.528mg/L 浓 度 组 CAT 活 性 差 异 不 显 著 (P>0.05), 但 较 0.132mg/L 浓 度 组 和 对 照 组 明 显 受 到 抑 制 (P<0.05); 第 2 天,0.132mg/L 和 0.264mg/L 浓 度 组 与 对 照 组 相 比,CAT 活 性 分 别 上 升 84.54% 和 72.25% (P<0.05), 也 明 显 高 于 0.528mg/L 浓 度 组 (P<0.05); 第 4 天,0.132mg/L 浓 度 组 与 对 照 组 相 比 CAT 活 性 仍 高 46.77%, 0.264mg/L 和 0.528mg/L 浓 度 组 CAT 活 性 明 显 受 到 抑 制 (P<0.05); 第 12 天, 与 对 照 组 相 比, 和 0.528mg/L 浓 度 组 CAT 活 性 分 别 下 降 33.21% 49.85% 和 64.05%(P<0.05); 且 敌 百 虫 浓 度 越 高,CAT 活 性 下 降 越 明 显 (P<0.05) 在 整 个 试 验 过 程 中,0.528mg/L 浓 度 组 CAT 活 性 均 明 显 低 于 对 照 组 和 其 他 低 浓 度 组 (P<0.05) 以 上 试 验 表 明, 长 期 处 于 饥 饿 状 态 的 克 氏 原 螯 虾 T SOD 和 CAT 活 性 在 复 投 喂 ( 第 10~11 天 ) 条 件 下 能 够 顺 利 激 活, 以 应 对 饥 饿 胁 迫, 高 浓 度 敌 百 虫 对 CAT 活 性 的 抑 制 程 度 更 强, 而 低 浓 度 对 其 诱 导 效 果 较 T SOD 明 显 ;12d 后, 经 敌 百 虫 药 浴 后 的 克 氏 原 螯 虾 T SOD 和 CAT 活 性 难 以 恢 复 到 对 照 组 水 平 2.3 酸 碱 磷 酸 酶 活 性 敌 百 虫 胁 迫 对 克 氏 原 螯 虾 酸 碱 磷 酸 酶 活 性 的 影 响 见 图 2 试 验 组 敌 百 虫 胁 迫 12d 内 肝 胰 腺 ACP 和 AKP 活 性 与 对 照 组 相 比 均 显 著 降 低 (P<0.05) 各 试 验 组 肝 胰 腺 ACP 活 性 在 第 4 天 时 降 到 最 低, 其 中 对 照 组 肝 胰 腺 ACP 活 性 为 (88.67±4.16)U/g, 试 验 组 比 对 照 组 分 别 降 低 17.38% 39.63% 和 44.44% (P<0.05), 且 相 互 间 差 异 显 著 (P<0.05),4d 内 各 试 验 组 ACP 活 性 逐 渐 降 低 ; 第 12 天, 对 照 组 肝 胰 腺 ACP 活 性 达 到 (103.55± 5.94)U/g, 而 试 验 组 与 对 照 组 相 比, 分 别 降 低 27.10% 33.45% 和 37.24%(P<0.05) 敌 百 虫 药 浴 1d 后, 试 验 组 肝 胰 腺 AKP 活 性 即 分 别 下 降 28.81% 25.96% 和 36.90%(P<0.05); 此 后 试 验 组 肝 胰 腺 AKP 活 性 抑 制 受 到 抑 制, 而 对 照 组 肝 胰 腺 AKP 活 性 在 第 12 天 可 以 恢 复 至 (22.83 ± 1.32)U/mg 以 上 结 果 说 明, 敌 百 虫 药 浴 后 肝 胰 腺 ACP 和 AKP 活 性 均 受 到 抑 制, 未 有 被 激 活 现 象 发 生, 且 未 观 察 到 剂 量 依 赖 效 应 2.4 乙 酰 胆 碱 酯 酶 及 Na +,K + ATPase 活 性 敌 百 虫 胁 迫 对 克 氏 原 螯 虾 乙 酰 胆 碱 酯 酶 及 Na +,K + ATPase 活 性 的 影 响 见 图 3 第 1 天, 0.132mg/L 浓 度 组 肌 肉 TChE 活 性 迅 速 升 高 至 (0.69±0.05)U/mg, 高 出 对 照 组 76.72%, 其 诱 导 作 用 达 到 显 著 水 平 (P<0.05), 而 其 余 各 试 验 组 及 对 照 组 之 间 差 异 不 显 著 (P>0.05); 药 浴 2d 后, 0.264mg/L 浓 度 组 肌 肉 TChE 活 性 显 著 下 降 (P<0.05),0.132mg/L 和 0.528mg/L 浓 度 组 与 对 照 组 相 比 无 显 著 差 异 (P>0.05); 第 4 天, 0.264mg/L 浓 度 组 肌 肉 TChE 活 性 逐 渐 上 升 达 到 (0.38 ±0.02)U/mg, 较 对 照 组 高 出 41.15% (P<0.05), 其 余 各 浓 度 组 肌 肉 TChE 活 性 显 著 降 低 (P<0.05); 第 12 天, 对 照 组 肌 肉 TChE 活 性 较 第 4 天 上 升 16.56%, 而 各 浓 度 组 均 受 到 显 著 抑 制 (P<0.05) ( 柱 形 图 上 标 不 同 小 写 字 母 表 示 差 异 显 著,P<0.05; 相 同 小 写 字 母 表 示 差 异 不 显 著,P>0.05;n=3) 图 2 敌 百 虫 胁 迫 对 克 氏 原 螯 虾 酸 碱 磷 酸 酶 活 性 的 影 响 (Barswithdiferentsmalletersmeansignificantdiferences,P<0.05;thesamesmalletersmeannosignificantdiferences,P>0.05;n=3) Fig.2 EfectsoftrichlorfononACPandAKPactivitiesinhepatopancreasofProcambarusclarkia
4 98 第 35 卷 第 2 期 水 生 态 学 杂 志 2014 年 3 月 ( 柱 形 图 上 标 不 同 小 写 字 母 表 示 差 异 显 著,P<0.05; 相 同 小 写 字 母 表 示 差 异 不 显 著,P>0.05;n=3) 图 3 敌 百 虫 胁 迫 对 克 氏 原 螯 虾 乙 酰 胆 碱 酯 酶 及 Na +,K + ATPase 活 性 的 影 响 (Barswithdiferentsmalletersmeansignificantdiferences,P<0.05;thesamesmalletersmeannosignificantdiferences,P>0.05;n=3) Fig.3 EfectsoftrichlorfononTChEandNa +,K + ATPaseactivitiesinmuscleofProcambarusclarki 从 图 3 可 以 看 出, 敌 百 虫 药 浴 2 d 后, 0.132mg/L 浓 度 组 与 对 照 组 肌 肉 Na +,K + ATPase 活 性 无 明 显 变 化 (P>0.05),0.264mg/L 浓 度 组 在 第 2 天 显 著 降 低 (P<0.05), 而 0.528mg/L 浓 度 组 肌 肉 Na +,K + ATPase 活 性 逐 渐 上 升, 分 别 较 对 照 组 高 出 62.24% 和 %(P<0.05); 在 第 4 天 和 第 12 天 各 浓 度 组 肌 肉 Na +,K + ATPase 活 性 性 均 低 于 对 照 组 (P<0.05) 从 整 个 试 验 过 程 看, 一 定 浓 度 敌 百 虫 在 初 期 会 诱 导 肌 肉 TChE 和 Na +,K + ATPase 活 性 水 平 的 提 高, 但 诱 导 作 用 强 弱 与 敌 百 虫 浓 度 之 间 并 无 明 显 规 律 随 着 敌 百 虫 作 用 时 间 的 增 加, 肌 肉 TChE 和 Na +,K + ATPase 活 性 均 会 受 到 明 显 抑 制 3 讨 论 3.1 敌 百 虫 胁 迫 对 克 氏 原 螯 虾 的 毒 副 作 用 敌 百 虫 是 水 产 养 殖 中 广 泛 应 用 的 一 种 有 机 磷 杀 虫 剂, 在 杀 灭 寄 生 虫 的 同 时, 也 能 对 水 体 中 的 鱼 类 产 生 毒 副 作 用 (Yehetal,2005;Changetal,2006; Guimar esetal,2007;hongetal,2007), 特 别 是 敌 百 虫 水 解 后 成 为 胆 碱 酯 酶 的 抑 制 剂, 使 其 失 去 分 解 乙 酰 胆 碱 的 活 性, 从 而 使 昆 虫 甲 壳 类 蠕 虫 等 动 物 谢, 可 以 使 H 2 O 2 发 生 歧 化 生 成 水 和 氧, 与 SOD 过 氧 化 物 酶 (POD) 等 共 同 组 成 了 生 物 体 内 的 活 性 氧 防 御 系 统, 在 清 除 超 氧 自 由 基 H 2 O 2 和 过 氧 化 物 以 及 阻 止 或 减 少 羟 基 自 由 基 形 成 等 方 面 发 挥 重 要 作 用, 是 虾 蟹 类 重 要 的 免 疫 因 子 ( 吴 坚,1991; 何 南 海, 2004; 肖 克 宇,2007) 第 1 天,0.528mg/L 组 的 肝 胰 腺 T SOD 活 性 明 显 上 升 ; 第 2 天,0.132mg/L 和 0.264mg/L 组 的 肝 胰 腺 CAT 活 性 明 显 上 升, 说 明 克 氏 原 螯 虾 机 体 在 短 时 间 内 可 以 通 过 提 高 CAT 活 性 应 对 低 浓 度 敌 百 虫 胁 迫 ; 而 高 浓 度 敌 百 虫 在 第 1 天 内 能 够 显 著 激 活 T SOD 活 性, 随 后 一 直 受 到 抑 制, 可 能 是 由 于 长 期 受 到 高 浓 度 敌 百 虫 胁 迫, 活 性 氧 产 生 超 出 了 T SOD 清 除 能 力, 发 生 氧 化 损 伤 ; 第 12 天, 各 试 验 组 T SOD 和 CAT 活 性 均 难 以 达 到 对 照 组 水 平, 导 致 其 清 除 自 由 基 的 能 性 下 降 可 以 看 出, 在 短 时 间 内 低 于 安 全 浓 度 的 敌 百 虫 并 不 能 完 全 抑 制 肝 胰 腺 T SOD 和 CAT 活 性, 而 超 出 安 全 浓 度 的 敌 百 虫 反 而 会 更 快 地 激 发 肝 胰 腺 T SOD 活 性 ; 但 随 着 胁 迫 时 间 的 延 长, 肝 胰 腺 T SOD 和 CAT 活 性 均 受 到 抑 制, 但 并 未 表 现 出 剂 量 依 赖 效 应 这 一 点 与 溴 氰 菊 酯 对 克 氏 原 螯 虾 的 氧 化 胁 迫 相 似 ( 魏 华 等,2010) 的 神 经 系 统 功 能 紊 乱 而 死 亡 因 此, 在 淡 水 养 殖 中, 肝 胰 腺 酸 碱 磷 酸 酶 活 性 AKP 和 ACP 是 敌 百 虫 的 应 用 会 对 克 氏 原 螯 虾 产 生 较 强 的 毒 副 作 用 沈 美 芳 等 (2008) 的 研 究 表 明, 体 重 (20.70± 1.07)g 的 克 氏 原 螯 虾 安 全 浓 度 为 0.264mg/L, 超 出 用 量 将 会 导 致 其 生 长 异 常 甚 至 死 亡 本 试 验 结 果 表 明, 在 敌 百 虫 安 全 浓 度 内 克 氏 原 螯 虾 无 死 亡 现 象, 而 0.528mg/L 的 浓 度 胁 迫 下 克 氏 原 螯 虾 出 现 中 毒 症 状, 试 验 结 束 时 死 亡 率 达 到 15% 3.2 敌 百 虫 胁 迫 对 克 氏 原 螯 虾 免 疫 指 标 的 影 响 甲 壳 动 物 体 内 2 种 非 特 异 性 免 疫 因 子, 在 虾 蟹 类 免 疫 防 御 中 具 有 重 要 的 作 用 AKP 酶 对 钙 质 的 吸 收 磷 酸 钙 沉 积 骨 骼 形 成 甲 壳 素 分 泌 及 形 成 均 有 重 要 作 用, 该 酶 对 虾 蟹 类 的 生 存 和 生 长 有 特 别 重 要 的 意 义 ( 颜 思 旭 等,1996) ACP 是 巨 噬 细 胞 溶 酶 体 的 标 志 酶, 能 催 化 磷 酸 单 酯 水 解, 在 酸 性 条 件 下 作 用 于 磷 酸 苯 二 钠, 使 之 水 解 释 放 出 酚 和 磷 酸, 在 体 内 直 接 参 与 磷 酸 基 团 的 转 移 和 代 谢 ( 李 少 菁 等,2008) 肝 胰 腺 抗 氧 化 酶 活 性 CAT 参 与 活 性 氧 代 本 试 验 中, 敌 百 虫 胁 迫 下, 克 氏 原 螯 虾 肝 胰 腺
5 2014 年 第 2 期 钟 君 伟 等, 敌 百 虫 胁 迫 对 克 氏 原 螯 虾 免 疫 学 相 关 指 标 的 影 响 99 AKP 和 ACP 活 性 均 明 显 低 于 对 照 组, 且 ACP 活 性 远 远 高 于 AKP, 未 观 察 到 AKP 和 ACP 诱 导 激 活 现 象, 这 与 Cu 2+ Zn 2+ 单 独 胁 迫 对 拟 穴 青 蟹 (Scyla paramamosain)akp 和 ACP 存 在 激 活 现 象 完 全 不 同 ( 陈 宇 锋,2008); 而 与 氯 氰 菊 酯 和 吡 虫 啉 对 克 氏 原 螯 虾 肝 胰 腺 AKP 和 ACP 影 响 相 同 ( 黄 婷,2008) 说 明 敌 百 虫 胁 迫 能 够 破 坏 肝 胰 腺 酸 碱 平 衡, 抑 制 克 氏 原 螯 虾 肝 胰 腺 AKP 和 ACP 活 性, 导 致 代 谢 紊 乱, 损 伤 邻 近 组 织 细 胞, 大 大 降 低 其 抗 病 能 性 肌 肉 乙 酰 胆 碱 酯 酶 及 Na +,K + ATPase 活 性 乙 酰 胆 碱 酯 酶 (TChE) 在 完 成 神 经 冲 动 传 导 作 用 后, 迅 速 将 乙 酞 胆 碱 水 解 为 乙 酞 和 胆 碱, 保 持 神 经 冲 动 的 正 常 传 递 Na +,K + ATPase 是 一 类 膜 结 合 酶, 其 在 渗 透 调 节 物 质 运 输 能 量 转 换 以 及 信 息 传 递 等 方 面 发 挥 重 要 作 用 (Lucu&Towle,2003) 对 水 生 动 物 Na +,K + ATPase 的 研 究 主 要 集 中 在 的 温 度 盐 度 ph 值 等 条 件 的 变 化 上, 而 关 于 药 物 对 甲 壳 动 物 Na +,K + ATPase 的 研 究 报 道 并 不 多 见 ( 黄 婷, 2008) 本 试 验 第 1 天,0.132mg/L 浓 度 组 肌 肉 TChE 活 性 显 著 被 诱 导 激 活, 高 出 对 照 组 76.72%, 第 4 天 0.264mg/L 浓 度 组 出 现 诱 导 现 象, 直 至 第 12 天 各 试 验 组 肌 肉 TChE 活 性 才 显 著 低 于 对 照 组 虽 然 敌 百 虫 作 用 标 靶 为 胆 碱 酯 酶, 能 抑 制 其 活 性, 造 成 体 内 胆 碱 的 堆 积, 引 起 神 经 中 毒, 但 本 试 验 中 短 时 间 内 低 剂 量 的 敌 百 虫 对 克 氏 原 螯 虾 肌 肉 TChE 毒 害 作 用 并 不 明 显 ; 这 可 能 是 由 于 机 体 内 的 对 氧 磷 酶 磷 酸 酯 酶 等 能 水 解 部 分 磷 酰 化 胆 碱 酯 酶, 故 TChE 活 性 抑 制 不 明 显 顾 颖 等 (2005) 研 究 表 明, 乙 酰 甲 胺 磷 对 AChE 活 性 抑 制 率 随 着 浓 度 增 高 先 下 降 后 上 升 ; 黄 婷 (2008) 研 究 发 现, 在 氯 氰 菊 脂 和 吡 虫 啉 胁 迫 下, 受 试 克 氏 原 螯 虾 TChE 活 性 变 化 随 着 氯 氰 菊 脂 浓 度 的 升 高 呈 现 先 上 升 后 下 降 的 趋 势, 可 见 不 同 种 类 的 有 机 磷 农 药 对 TChE 活 性 影 响 存 在 差 异 本 次 试 验 中,2d 内 高 于 安 全 浓 度 的 敌 百 虫 胁 迫 对 肌 肉 Na +, K + ATPase 存 在 诱 导 激 活 现 象, 此 后 随 着 胁 迫 时 间 延 长, 其 活 性 不 断 降 低, 但 未 观 察 到 剂 量 依 赖 现 象, 说 明 敌 百 虫 损 害 了 其 细 胞 膜 功 能, 影 响 克 氏 原 鳌 虾 水 盐 代 谢 的 调 节 以 及 能 量 的 传 递 4 结 论 机 体 应 对 外 界 环 境 因 子 ( 有 机 物 重 金 属 鱼 药 等 ) 的 强 烈 刺 激 是 所 有 免 疫 因 子 共 同 发 挥 作 用 的 结 果, 单 个 或 少 数 免 疫 因 子 活 性 的 变 化 不 足 以 充 分 反 映 免 疫 性 的 强 弱 本 次 研 究 表 明, 敌 百 虫 胁 迫 并 非 仅 仅 作 用 于 TChE, 其 对 克 氏 原 螯 虾 机 体 T SOD CAT ACP AKP 及 Na +,K + ATPase 均 有 影 响, 除 肝 胰 腺 ACP 和 AKP 活 性 受 到 抑 制 外, 其 他 各 免 疫 学 指 标 4d 内 均 出 现 诱 导 现 象, 但 受 诱 导 程 度 各 不 相 同,12d 后 各 免 疫 因 子 活 性 均 难 以 恢 复 至 正 常 水 平 因 此 克 氏 原 螯 虾 对 敌 百 虫 的 胁 迫 反 应 是 整 个 机 体 非 特 异 性 免 疫 因 子 共 同 参 与 的 结 果 参 考 文 献 陈 宇 锋.2008.Cu 2+ 或 Zn 2+ 及 Cu 2+ 与 Zn 2+ 交 互 胁 迫 对 拟 穴 青 蟹 (Scylaparamamosain) 生 理 生 化 的 影 响 [D]. 厦 门 : 厦 门 大 学. 顾 颖, 王 雨 轩, 王 斌, 等 六 种 农 药 对 乙 酰 胆 碱 酯 酶 活 性 的 体 外 毒 性 效 应 [J]. 农 村 生 态 环 境,21(2): 何 南 海 对 虾 免 疫 功 能 指 标 的 建 立 及 其 应 用 [J]. 厦 门 大 学 学 报 : 自 然 科 学 版,43(3): 黄 婷 氯 氰 菊 酯 和 吡 虫 啉 对 克 氏 原 螯 虾 的 毒 性 作 用 [D]. 南 昌 : 南 昌 大 学. 李 爱 景, 李 学 军, 乔 志 刚, 等 敌 百 虫 和 甲 醛 对 淇 河 鲫 仔 鱼 的 急 性 毒 性 研 究 [J]. 安 徽 农 业 科 学,37(22): 李 少 菁, 刘 建 国, 艾 春 香.2008.pH 胁 迫 下 拟 穴 青 蟹 体 内 腺 苷 三 磷 酸 酶 和 磷 酸 酶 活 性 的 响 应 [J]. 厦 门 大 学 学 报 : 自 然 科 学 版,47(5): 沈 美 芳, 彭 刚, 薛 晖, 等 三 种 杀 虫 剂 对 克 氏 原 螯 虾 急 性 毒 性 研 究 [J]. 水 产 养 殖,29(6): 沈 美 芳, 周 璇, 宋 红 波, 等 敌 百 虫 在 异 育 银 鲫 体 内 富 集 与 消 除 规 律 [J]. 淡 水 渔 业,39(1): 魏 华, 吴 楠, 沈, 等 溴 氰 菊 酯 对 克 氏 原 螯 虾 的 氧 化 胁 迫 效 应 [J]. 水 产 学 报,34(5): 吴 坚 微 量 金 属 对 海 洋 生 物 的 生 物 化 学 效 应 [J]. 海 洋 环 境 科 学,10(2): 肖 克 宇 水 产 动 物 免 疫 与 应 用 [M]. 北 京 : 科 学 出 版 社 : 徐 维 娜 敌 百 虫 对 异 育 银 鲫 抗 氧 化 应 激 系 统 的 影 响 及 抗 坏 血 酸 对 鱼 体 的 保 护 作 用 [D]. 南 京 : 南 京 农 业 大 学. 颜 思 旭, 陈 清 西, 陈 素 丽, 等 长 毛 对 虾 碱 性 磷 酸 酶 性 质 [J]. 厦 门 大 学 学 报 : 自 然 科 学 版,35(2): 杨 先 乐 新 编 渔 药 手 册 [M]. 北 京 : 中 国 农 业 出 版 社 : ChangC,LeeP,LiuCH,etal.2006.Trichlorfon,anorgano phosphorusinsecticide,depresestheimmuneresponses andresistancetolactococusgarvieaeofthegiantfreshwa terprawnmacrobrachium rosenbergi[j].fish& Shelfish
6 100 第 35 卷 第 2 期 水 生 态 学 杂 志 2014 年 3 月 Immunology,20(4): Guimar esa,silvadeasishc,boegerw.2007.theefect oftrichlorfononacetylcholinesteraseactivityandhistopa thologyofcultivatedfishoreochromisniloticus[j].ecotoxi cologyandenvironmentalsafety,68(1): HongX,QuJ,ChenJ,etal.2007.Efectsoftrichlorfonon progesteroneproductioninculturedhumangranulose lutein cels[j].toxicologyinvitro,21(5): LucuC,TowleDW.2003.Na +,K + ATPaseingilsofaquatic crustacea[j].compbiochemphysiolamolintegrphysi ol,135(2): YehS,SungT,ChangC,etal.2005.Efectsofanorgano phosphorusinsecticide,trichlorfon,onhematologicalpa rametersofthegiantfreshwaterprawn, Macrobrachium rosenbergi(deman)[j].aquaculture,243(1): ( 责 任 编 辑 万 月 华 ) EfectsoftheStresofTrichlorphononSomeImmuneParametersofProcambarusclarki ZHONGJun wei,zhuyong an,mengqing lei,zhanglong gang,anli (ShandongProvincialKeyLaboratoryofFreshwaterGeneticsandBreeding,FreshwaterFisheries ResearchInstituteofShandongProvince,Jinan ,P.R.China) Abstract:ToinvestigatetheinfluenceoftrichlorphonstresontheimmuneparametersofProcambarusclarki,Pro cambarusclarkifortheexperimentwererearedinthetestsolutionof0mg/l,0.132mg/l,0.264mg/land 0.528mg/Ltrichlorphonfor12days,respectively.Theactivitiesoffournonspecificimmuneparameters(T SOD, CAT,ACPandAKP)inhepatopancreasandtwoinmuscle(Na +,K + ATPaseandTChE)weremeasured.There sultsshowedthattheefectsoftrichlorphonontheimmuneparameterswerediferent.theactivityoft SODin creasedsignificantlyafterexposureto0.132mg/ltrichlorphonfor4daysand0.528mg/ltrichlorphonfor1day. TheactivityofCATwassignificantlyhighercomparedwiththecontrolgroupattheconcentrationof0.132mg/L and0.264mg/lafter2days.theactivitiesofacpandakpwerealwayslowerthanthoseofthecontrolgroup duringtheperiodof12daysinalgroups,andacpactivitydecreasedcontinuouslyfrom1dto4d.theactivityof TChEinmuscleincreasedattheconcentrationof0.132mg/Land0.264mg/Ltrichlorphonafter1dayand 4days,respectively. No diference in Na +,K + ATPase activity wasobserved exceptthe testgroupsof 0.528mg/LtrichlorphonwithNa +,K + ATPaseactivitysignificantlyhigherthanthatofthecontrolgroupwithin 2days(P<0.05).ThestudysuggestedthattheimmuneparametersofProcambarusclarkiaineachtestgroupwere significantlylowerthanthoseofthecontrolgroupsafter12days,andtheycouldn trestoretothenormallevel. Keywords:Procambarusclarki;trichlorphon;stres;immuneparameter
第十一章 颈部疾病病人的护理
第 十 一 章 颈 部 疾 病 病 人 的 护 理 学 习 目 标 1. 了 解 颈 部 常 见 肿 块 病 人 的 身 体 状 况 及 处 理 原 则 ; 能 提 出 甲 状 腺 肿 瘤 甲 状 腺 功 能 亢 进 病 人 的 护 理 诊 断 并 制 定 出 护 理 措 施 2. 熟 悉 甲 状 腺 肿 瘤 甲 状 腺 功 能 亢 进 病 人 的 身 体 状 况 手 术 适 应 证 3. 掌 握
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