有機酸の分離(1)
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- 婴侑 童
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1 生 物 大 分 子 层 析 工 艺 中 高 载 量 离 子 交 换 填 料 TOYOPEARL GigaCap TM 系 列 产 品 的 介 绍
2 主 要 内 容 TOYOPEARL 填 料 的 基 本 性 质 生 物 分 离 中 的 三 步 层 析 工 艺 法 简 介 离 子 交 换 填 料 中 离 子 交 换 官 能 基 团 的 修 饰 TOYOPEARL 离 子 交 换 填 料 的 产 品 链 TOYOPEARL GigaCap 系 列 产 品 TOYOPEARL GigaCap Q-650M TOYOPEARL GigaCap S-650M TOYOSCREEN 层 析 工 艺 研 发 及 筛 选 用 预 装 柱 用 户 评 价 反 馈 信 息 单 克 隆 抗 体 纯 化 中 TOYOPEARL 填 料 的 产 品 链
3 TOYOPEARL 填 料 的 基 本 性 质 良 好 的 刚 性 ( 填 料 硬 度 ) 可 应 用 于 大 型 制 备 层 析 柱 (2000L), 并 可 获 得 更 高 的 流 速. 填 料 粒 径 分 布 范 围 窄 峰 型 尖 锐, 分 离 效 果 更 好 低 压 降 ( 特 别 适 合 于 填 料 的 装 填 和 大 型 层 析 柱 的 操 作 使 用 ) 良 好 的 化 学, 物 理 稳 定 性 收 缩, 溶 胀 小 耐 高 盐, 有 机 溶 剂, 碱 洗, 酸 洗 及 高 压 灭 菌 无 特 异 性 吸 附 对 生 物 分 子 有 更 好 的 分 离 效 果 和 回 收 率 可 靠 的 填 料 生 物 负 载 (Bioburden): 内 毒 素 水 平 低, 细 菌 计 数 产 品 系 列 齐 全 分 子 尺 寸 排 阻 层 析 填 料 (SEC), 离 子 交 换 层 析 填 料 (IEC), 疏 水 反 应 层 析 填 料 (HIC), 亲 和 层 析 填 料 ( AFC) 填 料 产 能 有 保 证 ( 50,000L/Y) 产 品 保 证 / 高 品 质 可 提 供 GMP 审 查 ( 工 厂 按 ISO-9000 运 行 )
4 工 业 规 模 生 产 中 TOYOPEARL 及 TSK-GEL 填 料 的 实 际 应 用 举 例 生 物 医 药 Β 牛 乳 糖 (Beta-Galactosidase) 红 细 胞 生 成 素 (EPO) 八 因 子 (Factor VIII) 表 皮 生 长 因 子 (EGF) 生 长 激 素 (r-hgh) 胰 岛 素 (Insulin) β 干 扰 素 (Interferon beta) 白 介 素 II(Interleukin-2) 单 克 隆 抗 体 (Monoclonal Antibodies ) 多 肽 (Peptides) 组 织 血 浆 酶 原 活 化 剂 (Tissue Plasminogen Activator) 乙 肝 疫 苗 和 其 他 疫 苗 (Hepatitis B Vaccine and other vaccines) 合 成 低 聚 核 苷 酸 (Synthetic oligonucleotide) 其 他 工 业 酶, 食 品 添 加 剂 等 氨 基 肽 酶 K(Aminopeptidase K) 胰 肽 酶 阻 断 剂 (Elastase Inhibitor) 低 聚 糖 (Oligosaccharide ) 多 酚 (Polyphenol) 蛋 白 酶 K(Proteinase K) 尿 素 酶 (Urease) 其 他 生 产 规 模 :10 L--- 2,000 L / 层 析 柱
5 生 物 分 离 中 的 三 步 层 析 工 艺 法 简 介 发 酵 液 填 料 粒 径 的 变 化 捕 获 阶 段 大 型 层 析 柱 粗 分 离, 浓 缩 高 流 速 操 作 大 ( um) 中 间 纯 化 阶 段 去 除 主 要 杂 质 中 ( um) 精 制 阶 段 去 除 含 量 较 低 的 杂 质 及 多 聚 体 小 (20-50 um) 目 标 产 品 ( 纯 度 ; %)
6 三 步 层 析 工 艺 法 对 应 的 TOYOPEARL 离 子 交 换 填 料 Processstep Feedstock Beadsize Process media 200 m Toyopearl MegaCap SP-550EC Capture 100 m Toyopearl GigaCap Q-650M Toyopearl SuperQ-650C Toyopearl DEAE-650C Toyopearl QAE-550C Toyopearl GigaCap S-650M Toyopearl SP-650C Toyopearl SP-550C Toyopearl CM-650C 65 m Toyopearl GigaCap Q-650M Toyopearl SuperQ-650M Toyopearl DEAE-650M Toyopearl GigaCap S-650M Toyopearl SP-650M Toyopearl CM-650M Intermediate Purif ication 35 m Toyopearl SuperQ-650S Toyopearl DEAE-650S Toyopearl SP-650S Toyopearl CM-650S 30 m TSKgel SuperQ-5PW (30) TSKgel DEAE-5PW (30) TSKgel SP-5PW (30) Polishing 20 m TSKgel SuperQ-5PW (20) TSKgel DEAE-5PW (20) TSKgel SP-5PW (20) QC Same selectivity HPLC columns are available for most process media Pure Product 10 m TSKgel SuperQ-5PW7.5mmIDx7.5cm TSKgel DEAE-5PW7.5mmIDx7.5cm TSKgel SP-5PW7.5mmIDx7.5cm TSKgel CM-5PW7.5mmIDx7.5cm
7 产 品 的 连 续 性 (10 um-200 um)
8 生 物 分 离 中 的 离 子 交 换 层 析 工 艺 离 子 交 换 填 料 的 应 用 60% 的 层 析 工 艺 会 使 用 到 离 子 交 换 填 料 在 捕 获 这 一 步 可 以 大 量 处 理 进 料 ( 样 品 ) 价 格 ( 投 资 成 本 ) 远 比 疏 水 和 亲 和 填 料 便 宜 工 艺 中 在 位 清 洗 (GIP) 方 便 某 些 时 候 分 离 效 果 比 疏 水 和 亲 和 填 料 差 一 些 三 步 层 析 工 艺 :AIEC-HIC-SEC,AIEC-CIEC-HIC,AIEC-AFC- HIC 层 析 工 艺 中 阴 离 子 交 换 填 料 (AIEC) 更 受 欢 迎 可 以 直 接 从 捕 获 步 骤 进 入 最 后 的 精 制 步 骤 ( 即 可 以 省 去 中 间 一 步 的 纯 化 步 骤 ) 阴 离 子 交 换 填 料 (AIEC) 可 以 有 效 去 除 核 酸 和 内 毒 素 阳 离 子 交 换 填 料 (CIEC ) 可 以 有 效 去 除 细 胞 培 养 液 中 的 宿 主 细 胞 蛋 白 (HCP) 来 源 的 杂 质
9 填 料 中 离 子 交 换 官 能 团 的 多 种 修 饰 方 式 及 特 征 蛋 白 管 能 团 单 层 修 饰 嫁 接 式 修 饰 网 络 式 修 饰 官 能 团 : 单 层 修 饰 嫁 接 式 修 饰 网 络 式 修 饰 载 量 : 较 低 高 高 填 料 收 缩 性 : 不 明 显 明 显 明 显 柱 压 : 低 较 高 低
10 TOYOPEARL 离 子 交 换 填 料 的 产 品 链 GigaCap Q-650M 最 高 载 量, BSA (> 162 mg/ml) 适 用 于 各 种 分 子 量 的 蛋 白 捕 获 阶 段 高 分 离 效 果 ( 高 分 辨 率 ) SuperQ-650S,M,C 高 载 量 (-155mg/ml) OligoDNA, sirna 适 用 于 低 分 子 量 和 中 等 分 子 量 的 蛋 白 高 分 离 效 果 QAE-550C 高 载 量 (-78 mg/ml) 适 用 于 低 分 子 量 和 中 等 分 子 量 的 蛋 白 强 吸 附 能 力 DEAE-650S,M,C 载 量 ;-35mg/ml 高 分 离 效 果 适 用 于 中 等 分 子 量 和 高 分 子 量 的 蛋 白 GigaCap S-650M 高 载 量, IgG (>136mg/ml) 适 用 于 IgG 和 各 种 分 子 量 大 小 的 蛋 白 捕 获 阶 段 高 分 离 效 果 ( 高 分 辨 率 ) MegaCap SP-550EC 高 载 量 (-120mg/ml) 高 流 速 适 用 于 多 肽 ( 胰 岛 素 ) 及 小 分 子 量 的 蛋 白 捕 获 阶 段 SP-550C 高 载 量 (-120mg/ml) 多 肽, 小 分 子 量 的 蛋 白 强 吸 附 能 力 SP-650, CM-650S, M, C 载 量 ; -60mg/ml 高 分 离 效 果 适 用 于 中 等 分 子 量 和 高 分 子 量 的 蛋 白 我 们 还 可 以 提 供 粒 径 更 小 (20, 30 um), 可 适 用 于 高 分 离 效 果 的 中 高 压 制 备 型 TSK-GEL PW 系 列 的 散 装 填 料
11 TOYOPEARL GigaCap 系 列 填 料 的 应 用 血 清, 血 浆 蛋 白 生 产 厂 家 白 蛋 白,ϒ 球 蛋 白, 凝 血 因 子 等 生 物 制 药 企 业 单 克 隆 抗 体, 基 因 重 组 蛋 白, 胰 岛 素 等 诊 断 试 剂 公 司 单 克 隆 抗 体, 基 因 重 组 蛋 白, 酶, 多 肽 等 食 品 工 业 基 因 重 组 蛋 白, 酶, 多 肽 等 合 同 企 业 经 济 型 层 析 工 艺 高 性 价 比 工 艺
12 TOYOPEARL GigaCap Q-650M 基 本 物 性 主 要 特 点 及 其 他 公 司 同 类 产 品 的 比 较
13 Toyopearl GigaCap Q-650M 的 基 本 物 性 蛋 白 载 量 ; 牛 血 清 白 蛋 白 (BSA) 静 态 吸 附 载 量 (SBC); >162 g/l ( in 50 mmol/l Tris-HCl (ph 8.5)) GigaCap Q-650M 填 料 的 静 态 吸 附 载 量 高 于 SuperQ-650M 填 料 动 态 吸 附 载 量 (DBC); >150 g/l 离 子 交 换 容 量 mequiv./ml 填 料 粒 径 分 布 um (>80%) 生 物 负 载 (Bioburden) 细 菌 记 数 ;<100 CFU/mL 内 毒 数 ;<10 EU/mL 不 溶 性 物 质 提 取 物 ; < 0.2 % 杂 质 < 6 颗 粒 /100 ml 产 品 规 格 与 其 他 类 型 的 Toyopearl 填 料 相 似. 碱 性 稳 定 性 与 其 他 阴 离 子 交 换 填 料 相 似 至 少 可 以 在 0.5 N NaOH 中 保 存 两 周 而 无 变 化
14 主 要 特 点 及 其 他 公 司 同 类 产 品 的 比 较 GigaCap Q-650M 填 料 具 有 更 好 的 机 械 稳 定 性, 更 高 的 蛋 白 载 量 和 更 好 的 选 择 性, 洗 脱 峰 型 尖 锐. 静 态 吸 附 载 量 (SBC);BSA > 162 g/l ( 实 测 结 果 ; 191 g/l) 动 态 吸 附 载 量 (DBC);BSA > 150 g/l ( 实 测 结 果 ;175 g/l) Q Sepharose XL (GE) 多 交 联 琼 脂 糖 类 填 料 相 似 的 载 量 和 选 择 性 缺 点 : 由 于 填 料 基 质 较 软, 不 适 用 于 使 用 大 型 层 析 制 备 柱, 同 样 也 不 适 于 在 高 流 速 下 使 用. Capto Q (GE) 高 多 交 联 琼 脂 糖 类 填 料 : 较 Q Sepharose XL 的 刚 性 好, 硬 度 与 Toyopearl 填 料 相 似 载 量 与 GigaCap Q-650M 填 料 相 似 缺 点 : 由 于 填 料 粒 径 分 布 范 围 较 宽, 填 料 的 分 离 效 果 稍 差. 由 于 质 量 迁 移 较 低, 洗 脱 峰 形 展 宽. 这 可 能 与 填 料 上 官 能 团 的 空 间 结 构 有 关.
15 对 牛 血 清 白 蛋 白 (BSA) 的 动 态 吸 附 载 量 (DBC) 离 子 交 换 填 料 粒 径 分 布 离 子 交 换 容 量 DBC (BSA) 回 收 率 (μm) (meq/ml) (mg/ml-gel) (%) Toyopearl GigaCap Q-650M Toyopearl SuperQ-650M Toyopearl QAE-550C Q Sepharose XL NA Capto Q 90 NA Fractogel TMAE HiCap NA Eluent;50 mmol/l Tris-HCl (ph 8.5) Flow rate; 212 cm/hr, DBC calculated by capacity at 10%Breakthrough curve.
16 动 态 吸 附 载 量 (DBC) 与 流 速 的 依 存 关 系 对 牛 血 清 白 蛋 白 (BSA) 的 动 态 吸 附 载 量 (DBC) (g/l-gel) 线 性 流 速 212 cm/hr 500 cm/hr 800 cm/hr 1060 cm/hr GigaCap Q-650M NA Capto Q NA Fractogel TMAE Hicap(M) 138 NA 120* 106 *: 测 定 Fractogel TMAE Hicap(M) 填 料 对 牛 血 清 白 蛋 白 的 动 态 吸 附 载 量 时, 使 用 了 636 cm/hr 的 线 性 流 速 ( 代 替 500 cm/hr 的 线 性 速 度 ). 数 据 表 明 : GigaCap Q-650M 填 料 在 高 流 速 下 具 有 高 的 动 态 吸 附 载 量. Fractogel TMAE Hicap (M) 填 料 在 高 流 速 下 使 用 时 动 态 吸 附 载 量 相 对 较 低.
17 对 多 种 蛋 白 静 态 吸 附 载 量 (SBC) 的 比 较 大 豆 胰 蛋 白 酶 抑 制 剂 (Mw: 22KDa) (pi 4.5) 静 态 吸 附 载 量 (g/l-gel) 牛 血 清 白 蛋 白 (Mw: 66KDa) (pi 4.9) 伽 玛 球 蛋 白 (Mw: 160KDa) (pi ) 甲 状 腺 球 蛋 白 (Mw: 660KDa) (pi 4.5) GigaCap Q-650M Capto Q NA Q-Sepharose XL NA NA 吸 附 条 件 (Binding conditions); 大 豆 胰 蛋 白 酶 抑 制 剂 (STI); 15 mmol/l Tris-HCl (ph 9.0) 牛 血 清 白 蛋 白 (BSA); 15 mmol/l Tris-HCl (ph 9.0) + 15 mmol/l NaCl 伽 玛 球 蛋 白 (IgG); 15 mmol/l Tris-HCl (ph 8.7) 甲 状 腺 球 蛋 白 (Thy); 15 mmol/l Tris-HCl (ph 8.7) mmol/l NaCl 对 蛋 白 的 静 态 吸 附 载 量 是 会 随 着 蛋 白 分 子 量 大 小, 淋 洗 液 的 ph 值 及 离 子 强 度 ( 如 盐 浓 度 ) 变 化 而 变 化 的.
18 蛋 白 吸 附 载 量 与 蛋 白 分 子 量 大 小 的 相 关 关 系 BSA (MW: 66,000) IgG (MW: 160,000) Thyroglobulin (MW: 660,000) GigaCap Q-650M SBC 191 g/l 138 g/l 95 g/l DBC 175 g/l 108 g/l 49 g/l Capto Q SBC 179 g/l 139 g/l 89 g/l DBC 166 g/l 95 g/l 7 g/l 动 态 吸 附 载 量 (DBC) 测 定 所 使 用 的 线 性 流 速 为 212 cm/hr. 随 着 蛋 白 分 子 量 的 增 大, 不 同 填 料 的 吸 附 载 量 (SBC&DBC) 的 差 别 趋 于 明 显. 对 于 大 分 子 量 的 甲 状 腺 球 蛋 白,CaptoQ 填 料 的 静 态 吸 附 载 量 (SBC) 虽 然 较 高, 但 动 态 吸 附 载 量 (DBC) 很 低.
19 mv 不 同 填 料 的 分 离 选 择 性 及 分 离 效 果 的 比 较 Transferrin 2. Ovalbumin 3. Trypsin Inhibitor Q Sepharose XL Rs TF/OV OV/TI GigaCap Q-650M SuperQ-650M Capto Q QAE-550C Capto Q Q Sepharose XL GigaCap Q-650M SuperQ-650M QAE-550C Elution time (min) GigaCap Q-650M 填 料 同 时 具 有 较 高 的 载 量 和 较 高 的 分 离 效 果.
20 mv 牛 血 清 白 蛋 白 (BSA) 阶 段 性 洗 脱 的 峰 宽 比 较 GigaCap Q-650M Capto Q Time(min.) Elution started GigaCap Q-650M 填 料 的 洗 脱 峰 峰 形 较 Capto Q 填 料 的 洗 脱 峰 峰 形 尖 锐 (>2 倍 ), 这 表 明 在 工 业 层 析 工 艺 中 使 用 GigaCap Q-650M 填 料 时 可 以 获 得 更 高 的 生 产 效 率. 对 于 IgG 或 更 高 分 子 量 的 蛋 白,GigaCap Q-650M 填 料 可 以 获 得 更 为 尖 锐 的 洗 脱 峰.
21 SBC[mg/mL-gel] 淋 洗 液 中 盐 浓 度 与 填 料 对 高 分 子 量 蛋 白 ( 甲 状 腺 球 蛋 白 ) 的 静 态 吸 附 载 量 之 关 系 GigaCap Q Capto Q Q Sepharose XL Conductivity [ms/cm] Comparison of SBC (protein : Thyroglobulin) 比 起 不 含 盐 的 淋 洗 液,GigaCap Q-650M 填 料 在 下 列 条 件 下 [ mol/l in 15 mmol/l Tris-HCl (ph 8.7)], 对 蛋 白 的 静 态 吸 附 载 量 更 高. 对 大 分 子 量 的 蛋 白, 当 缓 冲 液 中 含 有 0.1 mol/l 的 盐 时, 有 利 于 加 强 蛋 白 与 GigaCap Q-650M 和 其 他 离 子 交 换 填 料 间 的 吸 附 力.
22 Pressure drop (MPa) 不 同 离 子 交 换 填 料 压 降 与 流 速 的 关 系 ( 填 料 刚 性 比 较 ) SuperQ-650M Capto Q Q-Sepharose XL GigaCap Q-650M GigaCap S-650M 填 料 有 更 低 的 压 降, 可 以 使 用 于 大 型 层 析 柱 并 获 得 高 流 速 当 线 性 流 速 达 到 600 cm/hr 时,Q-Sepharose XL 填 料 将 可 能 会 发 生 柱 床 蹋 陷 的 现 象. 这 限 制 了 此 种 填 料 使 用 于 大 型 层 析 柱 的 可 能 性 Linear velocity (cm/hr)
23 Degradation rate GigaCap Q-650M 填 料 碱 性 条 件 下 的 保 存 稳 定 性 GigaCap Q (0.1N) GigaCap Q (0.5N) GigaCap Q (1.0N) Storage(days) 当 GigaCap Q 填 料 保 存 在 0.1 N, 0.5 N, 1.0 N 的 NaOH 中 35 天 后, 填 料 的 载 量 分 别 会 下 降 5 %, 20 %, 和 29 %.
24 TOYOPEARL GigaCap S-650M 基 本 物 性 主 要 特 点 及 与 其 他 公 司 同 类 产 品 的 比 较
25 TOYOPEARL GigaCap S-650M 的 基 本 物 性 对 IgG 的 吸 附 载 量 静 态 吸 附 载 量 (SBC): 136 g/l 176 g/l 动 态 吸 附 载 量 (DBC): 122 g/l 165 g/l 离 子 交 换 容 量 mequiv./ml 填 料 粒 径 分 布 um (>=80%) 生 物 负 载 (Bioburden) 细 菌 计 数 : <= 100 CFU/mL 内 毒 素 : <=10 EU/mL 不 溶 性 物 质 提 取 物 :<=0.2 % 杂 质 <= 6 颗 粒 /100 ml 产 品 规 格 与 其 他 类 型 的 Toyopearl 填 料 相 似 ( 除 了 对 蛋 白 有 更 高 的 吸 附 载 量 )
26 主 要 特 点 及 与 其 他 公 司 同 类 产 品 的 比 较 TOYOPEARL GigaCap S-650M 填 料 具 有 良 好 的 选 择 性 和 刚 性, 对 IgG 具 有 更 高 的 载 量. 动 态 吸 附 载 量 (DBC) : IgG(140 g/l); lysozyme(190 g/l): insulin(130 g/l) SP Sepharose XL (GE) 多 交 联 琼 脂 糖 类 填 料 相 似 的 载 量 和 选 择 性 缺 点 : 由 于 刚 性 较 弱, 不 可 以 在 大 型 层 析 制 备 柱 或 柱 床 较 高 的 层 析 柱 条 件 下 进 行 高 流 速 的 操 作. Capto S (GE) 高 多 交 联 琼 脂 糖 类 填 料, 克 服 了 SP Sepharose XL 填 料 刚 性 差 的 弱 点 相 似 的 选 择 性 和 刚 性 缺 点 : 由 于 填 料 粒 径 分 布 范 围 宽, 致 使 峰 型 展 宽 ; 对 CHOP 表 达 的 单 克 隆 抗 体 选 择 性 较 差. Fractogel SE HiCap (Merck) 相 似 的 填 料 基 质 和 刚 性 缺 点 : 载 量 仅 为 GigaCap S-650M 填 料 的 一 半 ; 选 择 性 较 差 使 用 含 盐 的 淋 洗 液 时 填 料 易 发 生 收 缩, 限 制 了 其 在 大 型 层 析 制 备 柱 或 柱 床 较 高 的 层 析 柱 条 件 下 的 使 用.
27 单 克 隆 抗 体 的 层 析 工 艺 简 介 Protein A 亲 和 层 析 工 艺 常 用 工 艺 (70% 单 克 隆 抗 体 层 析 工 艺 采 用 ProteinA 亲 和 层 析 ) 优 点 ; 在 捕 获 阶 段 便 可 获 得 高 纯 度 的 单 克 隆 抗 体 产 品. 缺 点 : 填 料 昂 贵 ; 亲 和 填 料 不 是 很 稳 定 Protein A 亲 和 填 料 的 价 格 :;$5,000 12,000/L 层 析 工 艺 举 例 : AFC-CIEC-AIEC, AFC-HIC-CIEC 非 Protein A 亲 和 层 析 工 艺 优 点 : 填 料 投 资 成 本 低 ; 填 料 碱 洗 稳 定 IEC/HIC 填 料 的 价 格 : $500 2,000/L 缺 点 : 需 要 多 步 才 能 获 得 高 纯 度 的 单 克 隆 抗 体 产 品 层 析 工 艺 举 例 :CIEC-AIEC-HIC, CIEC-HIC-AIEC-SEC, CIEC-HAC- HIC, HCIC-CIEC-HIC-HAC 备 注 CHO 宿 主 蛋 白 (CHOP) 和 单 克 隆 抗 体 的 多 聚 体 需 要 使 用 IEC 和 HIC 层 析 填 料 去 除 其 他 还 有 HCIC 类 ( 混 合 模 式 ; Pall), 羟 基 磷 灰 石 (Bio-Rad) 等 填 料 可 以 应 用 在 单 克 隆 抗 体 的 纯 化 工 艺 中
28 对 ϒ 球 蛋 白 (ϒ IgG) 的 动 态 吸 附 载 量 (DBC) 离 子 交 换 填 料 粒 径 分 布 离 子 交 换 容 量 动 态 吸 附 载 量 (IgG) 回 收 率 (μm) (meq/ml) (mg/ml-gel) (%) TOYOPEARL GigaCap S-650M TOYOPEARL SP650C TOYOPEARL SP550C SP Sepharose XL Capto S (90) NA Fractogel SE HiCap Flow rate; 212 cm/hr, DBC was calculated by 10 % height of Breakthrough curve.
29 动 态 吸 附 载 量 (DBC) 与 流 速 的 依 存 关 系 动 态 吸 附 栽 量 (DBC) (human IgG, g/l) 线 性 流 速 212 cm/hr 424 cm/hr 636 cm/hr 1060 cm/hr GigaCap S-650M SP Sepharose XL 138 NA SP Sepharose FF 21 NA 8 5 Fractogel SE Hicap(M) 69 NA GigaCap S-650M 和 SP Sepharose XL 填 料 在 高 于 600 cm/hr 的 线 性 流 速 下 仍 然 可 以 获 得 很 高 的 载 量, 然 而 对 于 SP Sepharose XL 填 料 来 讲 在 大 型 的 层 析 柱 下 是 很 难 获 得 如 此 高 的 线 性 流 速 的, 其 他 填 料 在 高 线 性 流 速 下 对 IgG 的 动 态 吸 附 载 量 是 很 低 的.
30 mau 分 离 选 择 性 和 分 离 效 果 比 较 (1) 160 Cyto C Lysozyme 120 RNase A 80 GigaCap S-650M 40 0 SP Sepharose XL 1. リボヌクレアーゼA 2. シトクロムc Fractogel SE HiCap 3. リゾチーム Retention time[min.] GigaCap S-650M 填 料 的 分 离 选 择 性 与 SP Sepharose XL 填 料 相 似.
31 Peak(mV) Elu. B (%) 分 离 选 择 性 和 分 离 效 果 比 较 (2) 490 Lysozyme 390 Cyt. c RNase 290 SP Seph XL 190 Capto S 90 GigaCap S-650M Elu. Time (min) GigaCap S-650M 填 料 的 洗 脱 峰 型 较 为 尖 锐.
32 圧 損 [MPa] Pressure drop (Mpa) 不 同 离 子 交 换 填 料 压 降 与 流 速 的 关 系 ( 填 料 刚 性 比 较 ) SP Sepharose XL 線 速 [cm/h] Linear velocity (ch/hr) SP-650M GigaCap S-650M 在 这 一 部 分, 琼 脂 糖 凝 胶 基 质 的 填 料 有 很 大 的 背 压, 这 最 终 会 造 成 层 析 柱 柱 床 塌 陷 层 析 柱 尺 寸 :22 mmid x 20 cm GigaCap S-650M 填 料 有 最 低 的 压 降, 可 使 用 于 大 型 层 析 制 备 柱, 并 可 以 获 得 更 大 的 操 作 流 速.
33 GigaCap S-650M 填 料 碱 性 条 件 下 的 保 存 稳 定 性 使 用 1.0 N NaOH 保 存 周 0 1 周 3 周 5 周 离 子 交 换 容 量 meq/ml 动 态 吸 附 载 量 (DBC) (IgG, 10%breakthrough) mg/mlgel IgG 的 回 收 率 % GigaCap S-650M 可 以 保 存 于 1.0 N 的 NaOH 中 一 个 月 而 保 持 稳 定, 对 蛋 白 的 离 子 交 换 容 量 和 载 量 均 可 保 持 不 变.
34 mv 对 溶 菌 酶 及 ϒ 球 蛋 白 阶 段 式 洗 脱 时 的 峰 宽 比 较 Protein recovery curve Time(min.) GigaCap S-650M(Lysozyme) Capto S(Lysozyme) GigaCap S-650M(hIgG) Capto S(hIgG) GigaCap S-650M 填 料 对 ϒ 球 蛋 白 阶 段 式 洗 脱 时 峰 形 更 尖 锐, 峰 宽 较 窄.
35 ToyoScreen TM 层 析 工 艺 研 发 及 筛 选 用 预 装 柱 方 便 选 择 最 有 效 的 层 析 工 艺 填 料 ( 填 料 筛 选 ) 方 便 进 行 选 择 性, 纯 度, 回 收 率, 载 量 的 确 认 和 洗 脱 条 件 的 优 化 ( 条 件 优 化 ) 有 阴 离 子 交 换, 阳 离 子 交 换, 疏 水 和 亲 和 填 料 的 套 装 及 各 种 填 料 的 单 一 包 装 可 提 供 1 ml 和 5 ml 两 种 包 装 规 格 可 以 与 HPLC 和 / 或 Bio-LC 系 统 相 连 ( 如 :AKTA Prime 系 统 )
36 用 户 评 价 反 馈 信 息 即 使 从 细 胞 培 养 液 中 直 接 进 行 单 克 隆 抗 体 的 纯 化, GigaCap S-650M 填 料 也 会 具 有 更 高 的 载 量, 对 CHOP 杂 质 具 有 很 好 的 选 择 性, 峰 形 尖 锐 ( 美 国 客 户 ) 即 使 在 很 高 的 流 速 下,GigaCap S-650M 填 料 对 单 克 隆 抗 体 具 有 更 高 的 载 量, 可 以 替 代 Protein-A 亲 和 填 料. ( 美 国 客 户 ) 在 市 场 上 可 以 获 得 的 7 种 离 子 交 换 填 料 中 ( 如 : SP Sepharose XL, Capto S, Fractogels 等 ), GigaCap S-650M 填 料 具 有 更 高 的 吸 附 载 量. ( 欧 洲 客 户 ) 对 于 小 分 子 物 质 如 胰 岛 素,GigaCap S-650M 填 料 同 样 具 有 很 高 的 载 量. ( 欧 洲 客 户 ) 胰 岛 素 层 析 工 艺 中 的 注 意 点 GigaCap S-650M 具 有 较 小 的 填 料 粒 径 ( 微 米 ), 即 使 与 专 门 为 胰 岛 素 纯 化 工 艺 中 用 于 捕 获 阶 段 而 设 计 的 TOYOPEARL MegaCap SP-II 550EC 离 子 交 换 填 料 相 比 也 具 有 更 高 的 吸 附 载 量. 由 于 MegaCap SP-II 550 EC 填 料 粒 子 径 更 大 ( 微 米 ), 其 更 容 易 操 作, 更 可 以 使 用 在 大 型 层 析 制 备 工 艺 中 的 捕 获 阶 段, 可 获 得 更 高 的 线 性 流 速. 如 果 需 要 获 得 更 高 的 分 离 效 果, 也 可 以 使 用 粒 径 更 小 (20, 30 微 米 ), 分 辨 率 更 高 的 TSK-GEL PW 类 型 的 散 装 离 子 交 换 填 料.
37 Attention to TOYOPEARL GigaCap Series Different type of functional group from SuperQ type Different spacer/extender from SuperQ-650M Capture resin but with smaller particle size Capture resin has micron (i.e. EC grade), but GigaCap Q- 650M has relatively smaller micron particles. Described as 650M grade, but the actual particle size on GigaCap Q-650M has slightly larger than regular M grade (40-90 um), which enables to operate at higher flow rate with lower pressure drop. Packed-bed use only GigaCap Q-650M is not applicable to fluidized bed nor suspended resin chromatography, due to smaller particles and light density of the resin. Explain to customers that this resin performs high chromatographic properties on packed column conditions. The product label and Handling Manual describe as PACKED BED USE ONLY, and/or applied to packed column use.
38 单 克 隆 抗 体 纯 化 中 TOYOPEARL 填 料 的 产 品 链 离 子 交 换 填 料 GigaCap S-650M 在 TOYOPEARL 系 列 填 料 中 对 1gG 有 最 高 的 载 量.. 疏 水 反 应 填 料 疏 水 填 料 对 单 克 隆 抗 体 及 其 多 聚 体 有 很 好 的 分 离 效 果. PPG-600M 对 单 克 隆 抗 体 有 中 等 强 度 的 吸 附 能 力 和 较 高 的 回 收 率, 这 可 以 大 大 提 高 生 产 效 率 ( 纯 化 工 艺 经 济 性 ). Butyl-600M 对 单 克 隆 抗 体 有 更 高 的 吸 附 载 量, 适 用 于 低 疏 水 性 单 克 隆 抗 体 的 纯 化 制 备. Phenyl-600M 对 单 克 隆 抗 体 有 更 高 的 吸 附 载 量 和 更 高 的 回 收 率.
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- 1 - - 2 - - 3 - - 4 - - 5 - 做 四 个 全 面 的 宣 传 者 实 践 者 - 6 - - 7 - - 8 - - 9 - - 10 - - 11 - - 12 - - 13 - - 14 - - 15 - - 16 - - 17 - - 18 - - 19 - - 20 - 创 新 调 处 新 机 制 构 筑 稳 定 防 火 墙 - 21 - - 22 - - 23
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附 件 4: 药 品 补 充 申 请 注 册 事 项 及 申 报 资 料 要 求 一 注 册 事 项 ( 一 ) 国 家 食 品 药 品 监 督 管 理 局 审 批 的 补 充 申 请 事 项 : 1. 持 有 新 药 证 书 的 药 品 生 产 企 业 申 请 该 药 品 的 批 准 文 号 2. 使 用 药 品 商 品 名 称 3. 增 加 中 药 的 功 能 主 治 天 然 药 物 适 应 症
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