厦 门 大 学 学 位 论 文 原 创 性 声 明 本 人 呈 交 的 学 位 论 文 是 本 人 在 导 师 指 导 下, 独 立 完 成 的 研 究 成 果 本 人 在 论 文 写 作 中 参 考 其 他 个 人 或 集 体 已 经 发 表 的 研 究 成 果, 均 在 文 中 以 适 当 方
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1 学 校 编 码 :10384 分 类 号 : 密 级 : 学 号 : UDC: 硕 士 学 位 论 文 闽 南 地 区 慢 性 乙 肝 患 者 感 染 自 然 史 中 乙 肝 表 面 抗 原 与 前 S1 抗 原 水 平 The levels of hepatitis B surface antigen (HBsAg) and pres1 antigen (PreS1Ag) during the natural history of chronic hepatitits B virus infection in southeast China 卢 振 华 指 导 教 师 姓 名 : 刘 平 果 副 教 授 专 业 名 称 : 授 外 科 学 论 文 提 交 日 期 : 2011 年 4 月 论 文 答 辩 日 期 : 2011 年 5 月 2011 年 4 月 答 辩 委 员 会 主 席 : 评 阅 人 :
2 厦 门 大 学 学 位 论 文 原 创 性 声 明 本 人 呈 交 的 学 位 论 文 是 本 人 在 导 师 指 导 下, 独 立 完 成 的 研 究 成 果 本 人 在 论 文 写 作 中 参 考 其 他 个 人 或 集 体 已 经 发 表 的 研 究 成 果, 均 在 文 中 以 适 当 方 式 明 确 标 明, 并 符 合 法 律 规 范 和 厦 门 大 学 研 究 生 学 术 活 动 规 范 ( 试 行 ) 另 外, 该 学 位 论 文 为 ( ) 课 题 ( 组 ) 的 研 究 成 果, 获 得 ( 资 助, 在 ( ) 课 题 ( 组 ) 经 费 或 实 验 室 的 ) 实 验 室 完 成 ( 请 在 以 上 括 号 内 填 写 课 题 或 课 题 组 负 责 人 或 实 验 室 名 称, 未 有 此 项 声 明 内 容 的, 可 以 不 作 特 别 声 明 ) 声 明 人 ( 签 名 ): 年 月 日
3 厦 门 大 学 学 位 论 文 著 作 权 使 用 声 明 本 人 同 意 厦 门 大 学 根 据 中 华 人 民 共 和 国 学 位 条 例 暂 行 实 施 办 法 等 规 定 保 留 和 使 用 此 学 位 论 文, 并 向 主 管 部 门 或 其 指 定 机 构 送 交 学 位 论 文 ( 包 括 纸 质 版 和 电 子 版 ), 允 许 学 位 论 文 进 入 厦 门 大 学 图 书 馆 及 其 数 据 库 被 查 阅 借 阅 本 人 同 意 厦 门 大 学 将 学 位 论 文 加 入 全 国 博 士 硕 士 学 位 论 文 共 建 单 位 数 据 库 进 行 检 索, 将 学 位 论 文 的 标 题 和 摘 要 汇 编 出 版, 采 用 影 印 缩 印 或 者 其 它 方 式 合 理 复 制 学 位 论 文 本 学 位 论 文 属 于 : ( )1. 经 厦 门 大 学 保 密 委 员 会 审 查 核 定 的 保 密 学 位 论 文, 于 年 月 日 解 密, 解 密 后 适 用 上 述 授 权 ( )2. 不 保 密, 适 用 上 述 授 权 ( 请 在 以 上 相 应 括 号 内 打 或 填 上 相 应 内 容 保 密 学 位 论 文 应 是 已 经 厦 门 大 学 保 密 委 员 会 审 定 过 的 学 位 论 文, 未 经 厦 门 大 学 保 密 委 员 会 审 定 的 学 位 论 文 均 为 公 开 学 位 论 文 此 声 明 栏 不 填 写 的, 默 认 为 公 开 学 位 论 文, 均 适 用 上 述 授 权 ) 声 明 人 ( 签 名 ): 年 月 日
4 摘 要 乙 型 肝 炎 病 毒 (HBV) 是 一 种 最 常 见 的 人 类 致 病 体,HBV 感 染 及 其 相 关 疾 病 是 全 球 最 重 要 公 共 卫 生 问 题 之 一, 了 解 患 者 血 清 中 HBV-DNA 水 平 对 于 指 导 抗 病 毒 治 疗 评 价 药 物 的 疗 效 至 关 重 要, 然 而 由 于 HBV-DNA 的 检 测 步 骤 复 杂 费 用 较 高, 至 今 还 没 有 广 泛 应 用 近 年 来 有 学 者 研 究 发 现 患 者 其 血 清 中 HBsAg 水 平 可 以 评 价 药 物 疗 效, 然 而 我 们 对 慢 性 乙 肝 感 染 自 然 史 中 HBsAg 水 平 的 分 布 情 况 还 不 是 太 了 解, 这 方 面 的 研 究 目 前 还 比 较 少, 国 外 有 相 关 报 道, 国 内 至 今 还 没 有 这 方 面 的 报 道 我 们 的 研 究 目 的 是 了 解 闽 南 地 区 慢 性 乙 肝 患 者 感 染 自 然 史 不 同 分 期 中 HBsAg 和 PreS1 水 平 及 基 因 型 和 变 异 体 的 分 布 情 况 本 研 究 共 分 析 402 例 HBV 感 染 者 ( 排 除 其 它 病 毒 的 感 染 者 酒 精 性 肝 病 自 身 免 疫 性 肝 病 及 代 谢 性 肝 病 ), 按 EASL 慢 性 乙 肝 临 床 管 理 指 南 的 建 议, 将 其 分 为 6 个 感 染 时 期 :HBeAg 阳 性 的 免 疫 耐 受 期 (IT,n=53), 免 疫 清 除 期 (IC, n=93), 低 复 制 期 (LR,n=65), HBeAg 阴 性 的 肝 炎 期 (ENH,n=74), 肝 硬 化 (LC,n=53) 和 肝 癌 (HCC,n=64) 随 后 对 患 者 血 清 中 HBsAg 和 PreS1 水 平 进 行 定 量 检 测, 同 时 定 量 检 测 血 清 中 HBV-DNA 水 平, 分 析 不 同 分 期 中 HBsAg 和 PreS1 水 平, 并 分 析 HBsAg 和 PreS1 水 平 与 HBV-DNA 水 平 的 相 关 性, 此 外 本 研 究 还 分 析 了 这 些 患 者 血 清 中 的 HBV 全 基 因 序 列, 以 生 物 信 息 学 方 法 研 究 慢 性 乙 肝 感 染 自 然 历 史 进 展 过 程 中 的 病 毒 进 化 特 征 本 研 究 发 现 HBsAg 和 PreS1 水 平 在 慢 性 肝 炎 的 各 个 分 期 中 有 明 显 的 差 异, 无 论 HBsAg 或 PreS1 均 在 IT 组 最 高, 在 LR 组 最 低, 其 他 组 介 于 两 者 之 间 ;B 基 因 型 和 C 基 因 型 患 者 的 HBsAg 和 PreS1 水 平 总 体 无 显 著 差 异, 但 在 LR 组 C 型 患 者 有 更 高 的 HBsAg 水 平,IT 组 C 型 感 染 者 有 更 高 的 PreS1 水 平,HCC 组 的 B 型 感 染 者 有 更 高 的 PreS1 水 平 无 论 HBsAg 或 PreS1, 在 IC,ENH 及 LC 组 与 HBV DNA 水 平 呈 正 相 关, 且 基 因 B 基 因 型 患 者 的 这 种 相 关 性 更 好 在 所 有 6 个 组 中,HBsAg 与 PreS1 水 平 总 是 呈 正 相 关 本 地 区 HBV 基 因 型 分 布 在 慢 性 肝 炎 组 与 终 末 期 肝 病 (LC&HCC) 组 中 有 显 著 的 差 异, 终 末 期 肝 病 (LC&HCC) 患 者 中 HBV C 基 因 型 的 频 率 显 著 高 于 单 纯 慢 乙 肝 患 者 (IT IC LR ENH) I
5 在 所 获 得 HBV 全 基 因 组 中 发 现 23 份 基 因 插 入 和 51 份 pres 基 因 缺 失,C 基 因 型 HBV pres 基 因 缺 失 率 要 显 著 高 于 B 基 因 型 本 研 究 的 结 果 为 了 解 闽 南 地 区 慢 性 乙 肝 患 者 感 染 自 然 史 不 同 分 期 中 HBsAg 与 PreS1 水 平 提 供 重 要 的 理 论 依 据 ; 同 时 发 现 HBsAg 与 PreS1 定 量 检 测 在 HBV 抗 病 毒 治 疗 疗 效 的 监 测 方 面 具 有 很 好 的 应 用 前 景 关 键 词 : 慢 性 乙 肝 ;HBsAg 水 平 ;PreS1 水 平 ;HBV DNA;HBV 基 因 型 II
6 Abstract Hepatitis B virus stands as one of the most common human pathogens and it causes significant public health problems. Quantitative measurement of HBV-DNA level in chronic hepatitis B patient s serum has been suggested as a guideline of treatment, which play a vital role in evaluating the efficacy of anti-viral therapy, but this assay is so expensive and complex that it cannot be used widely. During recent years, it is reported that the quantifiable level of HBsAg has been suggested as a predictor of treatment response in chronic hepatitis B. However, the dynamic level of HBsAg during the natural history of chronic hepatitis B infection remains largely unknown. This study aimed to determine the HBsAg and PreS1-Ag levels genotype and mutants distribution in the different phases of chronic HBV infection HBsAg-positive patients from southeast China. 402 HBV-monoinfected patients were analyzed in a cross-sectional study. Patients were categorized according to the phase of HBV-infection: HBeAg(+) immune tolerance phase(it, n=53), immune clearance phase (IC, n=93), HBeAg(-) low-replicative phase (LR, n=65), HBeAg(-) hepatitis (ENH, n=74), liver cirrhosis(lc, n=53) and hepatocarcinoma (HCC,n=64). HBsAg and pres-ag was quantified and correlated with HBV-DNA, HBV-genotypes and clinical parameters. In addition, HBV full sequence of total patients were amplified and sequenced so as to analysis the HBV genome heterogenicity with indicated genotype in the different phases of HBV infection. This study demonstrated significant differences in HBsAg and PreS1 level across the different phases of CHB. Either HBsAg or PreS1 level is highest in IT group, and lowest in LC group, while exhibited moderate in other groups. There were no significant differences in overall HBsAg and PreS1 level between individuals infected with HBV genotype B and C. However, in the LR group, HBsAg level of genotype C patients were slightly higher than those of genotype B patients. In the IT group, PreS1 level were higher in genotype C patients than genotype B patients, but showed III
7 opposite results in HCC group. HBsAg and pres-ag showed a strong correlation with HBV-DNA during IC,ENH and LC group. Associations between HBsAg/preS-Ag and HBV-DNA were observed better in HBV genotype B patients than genotype C patients. In all six groups, HBsAg always exhibited a strong correlation with PreS1-Ag. HBV Genotype distribution was significant difference between chronic hepatitis B infection and advanced liver diseases. 23 insertions and 51 pres deletions were depicted in HBV full genome, and the frequencies of pres deletion was significant higher in genotype C patients than genotype B patients (AOR=3.11, p=0.003). HBsAg and pres-ag levels show significant differences during the natural course of HBV-infection and between HBV-genotypes. These findings may have important implications for understanding the natural history of HBV-infection from southeast China and provide insightful perspective for using quantitative HBsAg and pres-ag as a diagnostic tool, i.e. as a predictor for antiviral therapy. Key words:chronic hepatitis B; HBsAg level;pres1 level;hbv genotype; HBV DNA IV
8 缩 写 符 号 表 英 文 缩 写 英 文 全 称 中 文 全 称 HBV Hepatitis B virus 乙 型 肝 炎 病 毒 CHB HBsAg HBsAb HBcAg HBcAb HBeAg HBeAb HBV-DNA ALT AST ALP GGT TBIL DBIL PT AFP IT IC Chronic hepatitis B Hepatitis B surface antigen Hepatitis B surface antibody Hepatitis B core antigen Hepatitis B core antibody Hepatitis B e antigen Hepatitis B e antibody Hepatitis B virus deoxyribonucleic acid Alanine aminotransferase Aspartate aminotransferase Alkaline phosphatase γ-glutamyl transferase total bilirubin direct bilirubin prothrombin time alpha-fetoprotein immune tolerance phase immune clearance phase 慢 性 乙 型 肝 炎 乙 肝 表 面 抗 原 乙 肝 表 面 抗 体 乙 肝 核 心 抗 原 乙 肝 核 心 抗 体 乙 肝 e 抗 原 乙 肝 e 抗 体 乙 型 肝 炎 病 毒 脱 氧 核 苷 酸 丙 氨 酸 氨 基 转 移 酶 天 门 冬 氨 酸 转 移 酶 碱 性 磷 酸 酶 γ - 谷 氨 酰 转 肽 酶 总 胆 红 素 直 接 胆 红 素 凝 血 酶 原 时 间 甲 胎 蛋 白 免 疫 耐 受 期 免 疫 清 除 期 LR low-replicative phase 低 病 毒 复 制 期 ENH HBeAg(-) hepatitis phase e 抗 原 阴 性 肝 炎 期 V
9 目 录 第 一 章 前 言... 1 一 HBV 生 物 学 特 征... 1 二 HBV 的 复 制 和 生 活 史... 7 三 HBV 流 行 病 学... 9 四 自 然 感 染 史 五 实 验 室 检 查 六 HBV 感 染 的 防 治 七 HBV 感 染 者 的 转 归 八 研 究 目 的 思 路 和 意 义 第 二 章 研 究 对 象 一 确 定 研 究 对 象 二 样 本 采 集 三 样 本 背 景 的 收 集 和 整 理 四 样 本 的 分 组 第 三 章 材 料 与 方 法 第 一 部 分 血 清 学 检 测 一 材 料 二 操 作 步 骤 三 结 果 分 析 第 二 部 分 基 因 组 学 检 测 一 材 料 二 操 作 步 骤 第 三 部 分 统 计 分 析 方 法 第 四 章 结 果 与 分 析 一 研 究 样 本 的 筛 选 与 临 床 特 征 二 HBsAg 水 平 的 分 布 三 PreS1 水 平 的 分 布 VI
10 四 HBsAg 水 平 与 HBV DNA 的 相 关 性 五 PreS1 水 平 与 HBV DNA 的 相 关 性 六 HBsAg 水 平 与 PreS1 水 平 的 相 关 性 七 病 毒 基 因 组 异 质 性 八 HBV 基 因 组 中 的 插 入 变 异 九 HBV 基 因 组 中 的 缺 失 变 异 十 基 因 型 B&C 间 的 突 变 率 差 异 第 五 章 讨 论 第 六 章 结 论 与 展 望 参 考 文 献 致 谢 VII
11 Content Chapter 1 Preface... 1 Ⅰ. Biological properties of HBV... 1 Ⅱ.Replication and life cycle of HBV... 7 Ⅲ. Epidemiology of HBV... 9 Ⅳ. Natural infection history of HBV Ⅴ. Laboratory diagnosis of HBV Ⅵ. Prevention and treatment of HBV Ⅶ. Prognosis of HBV Ⅷ. Purpose and significance of this research Chapter 2 Objects for this research Ⅰ. Determination of study object Ⅱ. Collection of samples Ⅲ. Background of samples Ⅳ. Classification of samples Chapter 3 Materials and Methods Part 1 Serological testing Ⅰ. Materials Ⅱ. Methods Ⅲ. Analysis Part 2 Genomic testing Ⅰ. Materials Ⅱ. Methods Part 3 Statistical analysis Chapter 4 Results and Analysis VIII
12 Ⅰ. Clinical features of patients infected with HBV Ⅱ. Distribution of HBsAg levels Ⅲ. Distribution of PreS1 levels Ⅳ. Correlation between HBsAg and HBV DNA Ⅴ. Correlation between PreS1 and HBV DNA Ⅵ. Correlation between HBsAg and PreS Ⅶ. Genome heterogeneity of HBV Ⅷ. Insert variation of HBV genomes Ⅸ. Missing variation of HBV genomes Ⅹ. Differences of mutation frequency between genotype B and C Chapter 5 Discussions Chapter6 Conclusion and prospect References Acknowledgement IX
13 第 一 章 前 言 第 一 章 前 言 乙 肝 病 毒 (HBV) 作 为 最 常 见 的 人 类 病 原 体 之 一, 引 发 严 重 的 公 共 健 康 问 题, 全 球 约 20 亿 人 曾 经 感 染 过 HBV, 其 中 亿 人 为 慢 性 HBV 感 染 者 (CHB), 每 年 约 有 100 万 人 死 于 HBV 感 染 所 致 的 肝 衰 竭 肝 硬 化 和 原 发 性 肝 细 胞 癌 (HCC) [1-3] [4] 我 国 是 HBV 感 染 的 高 流 行 区, 约 1.2 亿 人 为 慢 性 HBV 携 带 者 据 2006 年 全 国 乙 型 肝 炎 流 行 病 学 调 查 显 示, 我 国 一 般 人 群 HBsAg 携 带 率 为 7.18% 由 此 推 算 我 国 目 前 有 慢 性 HBV 感 染 者 约 9300 万 人, 其 中 慢 性 乙 肝 患 者 (CHB) 约 3000 万 人, 每 年 因 HBV 感 染 引 起 的 慢 性 进 展 性 肝 病 ( 乙 肝 肝 硬 化 原 发 性 肝 癌 ) 的 死 亡 人 数 就 超 过 30 万 人, 并 且 每 年 约 有 50~100 万 的 新 增 病 例 [5], 在 这 种 情 况 下, 迫 切 需 要 深 入 研 究 乙 型 肝 炎 的 自 然 感 染 过 程, 以 利 于 了 解 疾 病 发 展 过 程 中 HBV 病 毒 学 和 血 清 学 的 变 化, 发 现 诊 断 标 志 物 和 治 疗 靶 标, 提 高 治 疗 预 期 一 HBV 生 物 学 特 征 ( 一 )HBV 一 般 性 状 和 理 化 性 质 乙 型 肝 炎 病 毒 (HBV ) 是 一 种 DNA 病 毒, 属 于 嗜 肝 DNA 病 毒 科 (hepadnavividae) 该 病 毒 具 有 严 格 的 种 属 特 异 性 和 组 织 特 异 性, 根 据 目 前 所 知, HBV 就 只 对 人 和 猩 猩 有 易 感 性, 引 发 乙 型 病 毒 性 肝 炎 疾 病 完 整 的 乙 肝 病 毒 成 颗 粒 状, 即 Dane 颗 粒, 由 丹 娜 在 1965 年 发 现 完 整 的 病 毒 颗 粒 呈 球 形, 直 径 为 42 纳 米, 负 染 后 在 电 镜 下 有 双 层 外 壳 有 HBs 蛋 白 构 成 外 膜, 由 多 拷 贝 的 单 一 HBc 蛋 白 形 成 一 个 20 面 体 核 壳 核 心 颗 粒 的 直 径 为 34nm, 内 为 kb 的 环 形 部 分 双 链 DNA 基 因 组 和 病 毒 编 码 的 P 蛋 白 在 一 个 典 型 的 HBV 感 染 者 的 血 清 可 以 看 到 三 种 颗 粒 结 构 :Dane 颗 粒 球 形 颗 粒 和 管 形 颗 粒 乙 型 肝 炎 病 毒 的 抵 抗 力 较 强, 在 -20 条 件 下 其 活 性 可 保 存 20 年, 在 37 条 件 下 仍 可 存 活 7 天, 同 时 反 复 冻 融 次 其 抗 原 性 很 少 改 变, 但 小 时 煮 沸 10 分 钟 或 高 压 蒸 气 均 可 灭 活 HBV, 含 氯 制 剂 环 氧 乙 烷 戊 二 醛 过 氧 乙 酸 和 碘 伏 等 也 有 较 好 的 灭 活 效 果 1
14 闽 南 地 区 慢 性 乙 肝 患 者 感 染 自 然 史 中 乙 肝 表 面 抗 原 与 前 S1 抗 原 水 平 ( 二 ) 基 因 组 结 构 和 编 码 蛋 白 乙 肝 病 毒 是 目 前 已 知 的 感 染 人 类 最 小 的 双 链 DNA 病 毒, 要 在 有 限 长 度 的 基 因 组 中 容 纳 大 量 完 整 的 遗 传 信 息, 这 就 需 要 有 一 种 独 特 基 因 组 结 构 乙 型 肝 炎 病 毒 基 因 组 的 结 构 相 当 紧 密, 表 现 在 调 节 基 因 与 结 构 基 因 序 列 的 重 叠 不 同 结 构 基 因 区 段 之 间 的 重 叠 总 体 来 说 它 是 一 个 环 状 的 部 分 双 链 结 构 的 DNA 分 子, 长 约 3.2kb 其 中 的 2/3 为 双 螺 旋 结 构,1/3 为 单 链, 也 就 是 说,DNA 中 的 两 条 链 是 不 等 长 的, 长 链 的 5' 端 与 3' 端 无 共 价 键 连 接, 是 与 一 种 蛋 白 质 共 价 相 连, 长 链 的 5' 端 以 对 碱 基 互 补 结 合 长 链 为 负 链, 短 链 为 正 链 正 链 的 长 度 视 病 毒 而 异, 一 般 长 约 kb, 约 为 长 链 的 2/3, 正 链 之 间 的 空 隙 可 由 病 毒 颗 粒 中 的 DNA 聚 合 酶 充 填 HBVDNA 负 链 至 少 包 含 四 个 部 分 重 叠 的 开 放 读 码 框 架 (ORF), 分 别 称 为 S 区 C 区 P 区 和 X 区 ; 前 S / S 区 编 码 三 种 包 膜 蛋 白, 前 C / C 区 编 码 e 抗 原 (HBeAg) 和 核 心 抗 原 (HBcAg),P 区 和 X 区 分 别 编 码 聚 合 酶 和 X 蛋 白 ( 如 图 1-1) 图 1-1 HBV 病 毒 基 因 组 结 构 及 毒 粒 蛋 白 Fig1-1 Viral genome organization and virion protein of HBV 2
15 第 一 章 前 言 1 S-ORF S-ORF 分 为 三 段, 从 上 游 开 始 依 次 为 前 S1(Pre-S1) 区 前 S2(Pre-S2) 区 和 S 区, 各 有 其 起 始 密 码 ATG 前 S2 区 和 S 区 在 所 有 HBV 基 因 型 都 是 恒 定 的 长 度, 分 别 为 165bp 和 681bp(nt3205-nt155-nt835), 分 别 编 码 由 55 个 和 226 个 氨 基 酸 残 基 组 成 的 前 S2 蛋 白 和 S 蛋 白 ; 而 前 S1 区 的 5 端 则 因 基 因 型 的 不 同 而 异,B 和 C 基 因 型 均 始 于 nt2848; 该 区 的 长 度 在 bp 之 间, 编 码 的 前 S1 蛋 白 氨 基 酸 残 基 的 数 目 在 氨 基 酸 之 间 前 S 区 的 氨 基 酸 变 异 较 S 区 多 一 倍 (15%:7.5%), 提 示 S 蛋 白 比 前 S 蛋 白 对 病 毒 装 配 更 重 要 PreS1 和 PreS2 在 免 疫 应 答 中 起 着 相 当 重 要 的 作 用, 因 为 它 们 [6] 有 T 细 胞 或 B 细 胞 的 抗 原 表 位 S-ORF 编 码 HBV 的 外 膜 蛋 白, 外 膜 蛋 白 包 裹 毒 粒, 使 病 毒 能 够 附 着 和 侵 入 宿 主 的 肝 细 胞, 外 膜 蛋 白 特 异 性 抗 体 (HBs-Ab) 是 主 要 的 保 护 性 抗 体 外 膜 蛋 白 有 三 种 成 分, 主 蛋 白 中 蛋 白 和 大 蛋 白 主 蛋 白 即 HBsAg 由 226 个 氨 基 酸 组 成, 由 S 基 因 编 码, 是 病 毒 包 膜 及 亚 单 位 的 主 要 成 分, 由 于 其 分 子 量 最 小, 因 此 也 称 之 为 小 蛋 白 (small protein,sp); 中 蛋 白 由 pres2 和 HBsAg 组 成, 由 S 基 因 及 其 上 游 的 pres2 基 因 区 编 码, 由 281 个 氨 基 酸 组 成, 其 分 子 量 适 中, 因 此 称 为 中 蛋 白 (middle protein,mp); 大 蛋 白 由 pres1 pres2 和 HBsAg 组 成, 由 完 整 的 包 膜 蛋 白 基 因 (pres1+pres2+ S) 编 码, 由 个 氨 基 酸 组 成, 其 分 子 量 最 大, 因 此 称 之 为 大 蛋 白 (large protein,lp),3 种 蛋 白 插 在 宿 主 细 胞 膜 的 双 层 脂 质 中, 有 共 同 的 羧 基 端 和 各 自 的 氨 基 端 一 般 认 为 pres1 的 功 能 与 其 空 间 构 型 有 关,preS2 的 功 能 与 其 一 级 结 构 密 切 相 关, 此 外 pres1 和 pres2 序 列 中 均 不 含 半 胱 氨 酸 主 蛋 白 是 病 毒 膜 蛋 白 的 主 要 组 成 部 分, 是 一 种 疏 水 性 蛋 白, 包 括 糖 基 化 的 gp27 和 非 糖 基 化 的 p24 两 种 形 式 HBsAg 是 一 种 构 象 性 抗 原, 两 种 小 蛋 白 分 子 由 二 硫 键 连 在 一 起 形 成 一 个 二 聚 体, 形 成 一 个 具 有 完 整 HBsAg 活 性 的 结 构 单 位 ; 由 于 pres2 基 因 区 编 码 的 55 个 氨 基 酸 通 常 是 亲 水 性 的, 富 含 不 依 赖 二 硫 键 的 抗 原 决 定 簇, 因 而 中 蛋 白 具 有 比 主 蛋 白 更 强 的 免 疫 原 性, 中 蛋 白 以 三 种 形 式 存 在 : 非 糖 基 化 (p30) 单 糖 基 化 (gp33) 和 双 糖 基 化 (gp36); 大 蛋 白 也 有 两 种 不 同 的 形 式, 糖 基 化 的 gp42 和 非 糖 基 化 的 p39 [7] 外 膜 蛋 白 在 HBV 感 染 者 的 血 液 中 存 在 三 种 形 式 ( 如 图 1-2): 球 形 颗 粒 管 3
16 闽 南 地 区 慢 性 乙 肝 患 者 感 染 自 然 史 中 乙 肝 表 面 抗 原 与 前 S1 抗 原 水 平 状 颗 粒 和 Dane 颗 粒 ( 完 整 的 HBV 毒 粒 ) 球 形 颗 粒 和 管 状 颗 粒 仅 由 包 膜 蛋 白 组 成, 不 含 病 毒 的 其 它 成 分, 故 无 传 染 性 球 形 颗 粒 由 主 蛋 白 和 约 5% 中 蛋 白 组 成, 管 状 颗 粒 由 主 蛋 白 2-5% 中 蛋 白 和 5-10% 大 蛋 白 组 成,Dane 颗 粒 由 70-75% 的 主 蛋 白 5-10% 的 中 蛋 白 和 大 约 20% 的 大 蛋 白 组 成 一 个 病 毒 颗 粒 的 外 膜 约 含 个 主 蛋 白 分 子 个 中 蛋 白 和 大 蛋 白 分 子 病 毒 蛋 白 的 合 成 是 没 有 按 照 一 定 比 例 进 行 的, 是 不 平 衡 的, 即 使 在 病 毒 复 制 活 跃 的 状 态, 没 有 核 心 的 病 毒 颗 粒 较 有 核 心 的 病 毒 颗 粒 多 我 们 可 以 举 一 个 实 例 来 说 明 这 个 问 题, 在 一 个 HBsAg 和 HBeAg 双 阳 患 者 的 1ml 血 液 中 约 含 10 8 个 Dane 颗 粒 个 管 状 颗 粒 和 个 球 形 颗 [8] 粒, 这 可 能 是 由 于 病 毒 在 转 录 过 程 中 蛋 白 合 成 不 同 步 的 缘 故 图 1-2 Dane 颗 粒 及 HBV 亚 病 毒 颗 粒 Fig1-2 Dane particle and HBV subviral particle 4
17 Degree papers are in the Xiamen University Electronic Theses and Dissertations Database. Full texts are available in the following ways: 1. If your library is a CALIS member libraries, please log on and submit requests online, or consult the interlibrary loan department in your library. 2. For users of non-calis member libraries, please mail to etd@xmu.edu.cn for delivery details.
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