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1 附 件 五 : 用 鱼 和 海 水 双 壳 类 软 体 动 物 进 行 生 物 浓 缩 试 验 ( 征 求 意 见 稿 ) 编 制 说 明 用 鱼 和 海 水 双 壳 类 软 体 动 物 进 行 生 物 浓 缩 试 验 编 制 组 二 一 二 年 六 月

2 目 录 1 项 目 背 景 任 务 来 源 工 作 过 程 标 准 制 修 订 的 必 要 性 分 析 国 内 外 相 关 分 析 方 法 研 究 标 准 制 订 的 基 本 原 则 和 技 术 路 线 方 法 研 究 报 告 方 法 研 究 的 目 的 方 法 原 理 试 剂 和 材 料 仪 器 和 设 备 分 析 步 骤 标 准 主 要 技 术 内 容 的 解 释

3 用 鱼 和 海 水 双 壳 类 软 体 动 物 进 行 生 物 浓 缩 试 验 编 制 说 明 1 项 目 背 景 1.1 任 务 来 源 本 标 准 列 入 环 境 保 护 部 计 划 为 2007 年, 计 划 编 号 为 T-467, 项 目 统 一 编 号 为 , 下 达 计 划 的 文 件 号 为 环 办 函 号 本 标 准 的 承 担 单 位 为 深 圳 出 入 境 检 验 检 疫 局 国 家 环 境 保 护 总 局 环 境 标 准 研 究 所 1.2 工 作 过 程 2007 年 9 月 26 日, 根 据 全 国 环 境 监 测 方 法 标 准 化 技 术 委 员 会 的 要 求, 中 华 人 民 共 和 国 深 圳 出 入 境 检 验 检 疫 局 ( 以 下 简 称 深 圳 检 验 检 疫 局 ) 负 责 承 担 用 鱼 和 海 水 双 壳 类 软 体 动 物 进 行 生 物 富 集 试 验 的 标 准 起 草 工 作, 国 家 环 境 保 护 总 局 环 境 标 准 研 究 所 参 与 标 准 的 起 草 深 圳 检 验 检 疫 局 组 织 有 关 制 标 单 位 成 立 了 标 准 起 草 小 组, 制 定 标 准 的 实 施 方 案 先 后 召 开 2 次 会 议, 对 试 验 标 准 方 法 的 框 架 内 容 进 行 了 讨 论 形 成 初 稿 后 又 请 深 圳 检 验 检 疫 局 对 标 准 ( 草 案 ) 稿 进 行 认 真 的 修 改, 最 终 形 成 了 标 准 的 征 求 意 见 稿 2 标 准 制 修 订 的 必 要 性 分 析 随 着 我 国 改 革 开 放 的 不 断 深 入, 国 际 贸 易 不 断 发 展, 国 外 化 学 品 的 进 口, 国 内 化 学 品 的 出 口, 都 需 要 国 际 认 可 的 毒 性 鉴 定 资 料 长 期 以 来, 我 国 化 学 品 毒 性 鉴 定 机 构 采 用 的 实 验 方 法 大 多 沿 用 早 期 俄 日 美 欧 洲 的 实 验 方 法 近 十 年 来, 随 着 国 际 上 新 方 法 新 技 术 的 应 用, 极 大 的 提 高 了 化 学 品 毒 性 鉴 定 的 科 学 性 可 行 性 和 方 法 的 规 范 化 等 国 内 的 许 多 化 学 品 毒 性 鉴 定 机 构 也 借 鉴 学 习 了 不 少 国 外 的 先 进 技 术 和 方 法, 但 由 于 没 有 统 一 要 求 的 试 验 标 准 方 法, 互 相 之 间 存 在 着 不 少 差 异, 造 成 在 评 价 化 学 品 毒 性 时 往 往 因 采 用 方 法 不 一 致, 造 成 鉴 定 与 评 价 结 果 的 偏 差, 极 大 地 阻 碍 了 我 国 化 学 品 的 市 场 竞 争 力 和 开 拓 国 际 市 场 的 发 展 为 规 范 我 国 化 学 品 毒 性 鉴 定 工 作, 提 高 化 学 品 毒 性 鉴 定 的 质 量 水 平, 使 我 国 化 学 品 毒 性 鉴 定 工 作 与 国 际 接 轨, 根 据 中 华 人 民 共 和 国 职 业 病 防 治 法 危 险 化 学 品 管 理 条 例 化 学 品 毒 性 鉴 定 管 理 规 范 ( 卫 法 监 发 [2000]420 号 ) 规 定, 参 考 了 ASTM 制 定 的 相 关 文 件, 结 合 我 国 开 展 化 学 品 毒 性 鉴 定 工 作 的 实 际 情 况, 特 制 定 本 标 准

4 3 国 内 外 相 关 分 析 方 法 研 究 当 前 生 物 浓 缩 试 验 的 主 要 标 准 方 法 有 OECD TG :BIOCONCENTRATION: FLOW-THROUGH FISH TEST, 以 及 依 据 该 标 准 形 成 的 国 标 GB/T : 化 学 品 生 物 富 集 流 水 式 鱼 类 试 验,GB/T : 化 学 品 生 物 富 集 半 静 态 式 鱼 类 试 验 ASTM E (Reapproved 2007):Standard Guide forconducting Bioconcentration Tests with Fishes andsaltwater Bivalve Mollusks 上 述 几 个 标 准 的 试 验 原 理 基 本 是 一 致 的, 主 要 为 在 吸 收 阶 段, 试 验 动 物 暴 露 在 有 意 添 加 了 一 些 特 定 浓 度 受 试 物 的 稀 释 水 中, 直 至 达 到 表 观 稳 定 态 ; 在 清 除 阶 段, 试 验 动 物 暴 露 于 无 添 加 任 何 受 试 物 的 稀 释 水 中 试 验 的 两 个 阶 段 中, 试 验 动 物 和 水 样 品 定 时 从 试 验 槽 中 移 出 并 进 行 分 析, 从 而 通 过 组 织 液 和 水 样 品 中 的 受 试 物 的 浓 度 计 算 得 到 表 观 稳 定 态 和 预 期 稳 定 态 的 生 物 浓 缩 系 数 (BCF) 以 及 吸 收 和 清 除 速 率 常 数 其 区 别 主 要 在 于 OECD TG 是 经 济 合 作 与 发 展 组 织 化 学 品 测 试 的 导 则 ( 英 文 版 ), 主 要 是 利 用 鱼 类 作 为 生 物 浓 缩 试 验 的 动 物, 进 行 浓 缩 试 验 的 研 究 国 标 GB/T 和 GB/T 基 本 是 等 同 采 用 其 方 法, 只 是 使 用 了 流 水 式 和 半 静 态 式 两 种 方 式 ASTM E1022 是 利 用 海 水 鱼 淡 水 鱼 以 及 双 壳 类 软 体 动 物 作 为 试 验 动 物, 进 行 生 物 浓 缩 试 验, 相 比 而 言, 其 原 理 类 似, 但 内 容 更 全 面 4 标 准 制 订 的 基 本 原 则 和 技 术 路 线 本 标 准 的 制 定 是 通 过 生 物 浓 缩 试 验 积 累 受 试 物 从 而 获 得 关 于 受 试 物 和 水 生 物 种 的 信 息 其 基 本 路 线 包 括 : 试 验 条 件 的 控 制 - 包 括 稀 释 水 的 盐 度 硬 度 ph 值 溶 解 氧 离 子 氨 浓 度 以 及 不 同 试 验 动 物 的 温 度 条 件 光 照 条 件 等 试 验 动 物 的 选 择 和 喂 养 - 依 据 不 同 的 试 验 目 的, 选 择 合 适 的 试 验 动 物, 进 而 根 据 其 不 同 的 特 点 进 行 喂 养 疾 病 的 处 理 等 受 试 物 的 选 择 - 根 据 试 验 的 目 的, 选 择 适 当 的 受 试 物, 并 根 据 预 试 验 或 者 其 它 依 据 选 择 合 适 的 试 验 浓 度 试 验 结 果 的 分 析 - 准 确 判 断 其 吸 收 阶 段 和 清 除 阶 段 的 时 间, 按 要 求 分 析 对 照 组 和 试 验 组 试 验 溶 液 的 浓 度 以 及 动 物 组 织 数 据 处 理 - 对 试 验 中 得 到 的 多 个 数 据 进 行 分 析, 对 其 有 效 性 进 行 判 定 5 方 法 研 究 报 告 5.1 方 法 研 究 的 目 的 2

5 通 过 生 物 浓 缩 试 验 可 以 直 接 从 水 中 积 累 受 试 物 从 而 获 得 关 于 水 生 物 种 的 信 息 这 个 指 南 本 标 准 为 设 计 测 试 材 料 化 学 品 性 能 的 生 物 富 集 生 物 浓 缩 试 验 提 供 指 导, 以 便 于 每 种 材 料 化 学 品 都 能 低 本 高 效 地 进 行 测 试 5.2 方 法 原 理 实 验 分 为 两 个 阶 段 : 吸 收 阶 段 和 清 除 阶 段 两 组 同 种 生 物 体 试 验 动 物 的 一 组 作 为 处 理 对 照 组, 放 在 一 个 没 有 测 定 物 质 但 其 他 条 件 都 和 两 组 实 验 组 相 同 的 环 境 下, 用 来 作 为 背 景 两 个 阶 段 中 的 生 物 体 试 验 动 物 暴 露 在 没 有 添 加 任 何 受 试 物 的 稀 释 水 中, 这 种 处 理 方 法 提 供 了 可 以 得 到 实 验 生 物 体 试 验 动 物 的 质 量 的 可 行 性 试 验 方 法, 并 且 提 供 合 适 的 稀 释 水 食 物 测 试 条 件 处 理 程 序 方 法 等 在 另 一 种 处 理 中, 生 物 体 试 验 动 物 (a) 吸 收 阶 段 的 生 物 体 试 验 动 物 暴 露 在 有 意 添 加 了 一 些 特 定 浓 度 受 试 物 的 稀 释 水 中, 至 少 达 到 表 观 稳 定 态 或 是 28 天 后 ;(b) 清 除 阶 段 的 生 物 体 试 验 动 物 暴 露 于 无 添 加 任 何 材 料 受 试 物 的 稀 释 水 中 试 验 的 两 个 阶 段 中, 典 型 的 生 物 体 试 验 动 物 和 水 样 品 定 时 从 每 个 试 验 槽 中 移 出, 并 作 为 测 试 材 料 受 试 物 进 行 分 析 表 观 稳 定 态 和 预 期 稳 定 态 的 生 物 富 集 生 物 浓 缩 系 数 (BCF) 以 及 吸 收 和 清 除 速 率 常 数 通 常 可 以 由 组 织 液 和 水 样 品 中 的 受 试 物 中 测 量 到 的 浓 度 计 算 得 到 假 如 想 判 断 生 物 富 集 生 物 浓 缩 系 数 和 速 率 常 数 是 否 和 水 中 的 受 试 物 浓 度 有 关, 就 要 在 吸 收 阶 段 中 使 用 不 同 浓 度 的 受 试 物 作 额 外 处 理 5.3 试 剂 和 材 料 该 试 验 用 到 的 主 要 试 剂 和 材 料 为 : 稀 释 水 受 试 物 试 验 动 物, 具 体 而 言, 其 要 求 为 : 稀 释 水 要 求 稀 释 水 应 (a) 供 应 充 足 ;(b) 能 被 实 验 生 物 体 试 验 动 物 接 受 ;(c) 性 质 一 致 ; 并 且 不 会 不 必 要 能 地 对 试 验 结 果 造 成 影 响 稀 释 水 应 不 会 对 生 物 体 试 验 用 动 物 有 不 利 影 响, 对 生 物 富 集 生 物 浓 缩 试 验 来 说, 稀 释 水 用 于 生 物 体 试 验 动 物 可 接 受 的 最 小 准 则 是 生 物 体 在 健 康 试 验 中 生 物 体 试 验 动 物 在 适 应 环 境 和 试 验 期 间 能 够 幸 存, 并 没 有 受 到 刺 激 惊 扰 的 征 兆, 如 变 色 或 有 不 同 寻 常 的 行 为 另 外, 水 不 应 影 响 生 物 体 试 验 动 物 吸 收 和 清 除 受 试 物 的 能 力 因 此, 接 受 稀 释 水 用 于 生 物 体 试 验 动 物 试 验 的 一 个 较 好 准 则 则 是 至 少 有 一 种 水 生 动 物 物 种 能 够 在 其 中 满 意 地 生 存 成 长 和 繁 殖 除 非 稀 释 水 的 可 接 受 性 已 经 在 之 前 数 年 被 证 明, 稀 释 水 应 在 试 验 期 间 证 明 有 以 下 表 现, 要 么 (a) 至 少 一 种 水 生 动 物 物 种 能 够 在 实 验 室 环 境 或 在 生 命 周 期 毒 性 试 验 ( 见 指 南 E 1191, E 1193, E 1295) 中 能 够 生 存 成 长 和 繁 殖, 要 么 (b) 至 少 一 种 鱼 类 将 在 部 分 生 命 周 期 或 早 期 生 命 阶 段 毒 性 试 验 ( 见 指 南 E 1241) 中 表 现 出 可 接 受 性 3

6 稀 释 水 不 应 因 为 如 吸 附 或 络 合 受 试 物 等 原 因 不 必 要 地 影 响 生 物 富 集 生 物 浓 缩 试 验 结 果 因 此, 除 非 如 所 述, 总 有 机 碳 量 (TOC) 和 颗 粒 物 质 的 浓 度 在 鱼 的 试 验 中 不 应 超 过 5 mg/l, 海 盐 水 双 壳 软 体 动 物 的 试 验 不 应 超 过 20 mg/l 稀 释 水 的 品 质 在 试 验 中 应 保 持 一 致 在 淡 水 中 进 行 实 验 时, 水 的 硬 度 范 围 不 应 超 过 5 mg/l 或 平 均 水 平 的 10%, 无 论 哪 一 个 更 高 在 盐 水 中 进 行 实 验 时, 盐 度 不 应 超 过 2 g/kg 或 平 均 水 平 的 20%, 无 论 哪 一 个 更 高 如 果 想 在 生 物 富 集 生 物 浓 缩 试 验 结 果 中 研 究 环 境 因 素 的 影 响 如 TOC 颗 粒 物 质 或 溶 解 氧, 需 要 使 用 自 然 或 人 工 的 高 TOC 或 颗 粒 物 质 或 低 溶 解 氧 的 水 如 果 使 用 这 种 水, 对 水 的 特 性 进 行 适 当 的 分 析 就 用 于 描 述 水 的 特 性 是 非 常 重 要 的, 并 且 通 过 应 用 或 实 施 与 更 多 的 稀 释 水 的 对 比 试 验, 促 进 得 到 特 殊 用 水 结 果 的 解 释 来 源 虽 然 可 以 使 用 再 生 水 ( 见 指 南 E 729), 但 一 般 不 在 生 物 富 集 生 物 浓 缩 试 验 中 使 用, 因 为 需 要 的 水 量 很 大 另 外, 当 再 生 水 使 用 时, 再 生 水 很 难 提 供 盐 海 水 双 壳 软 体 动 物 足 够 数 量 的 可 接 受 食 物 如 果 使 用 天 然 水, 天 然 水 应 从 未 受 污 染 质 量 保 持 一 致 的 的 水 源 获 得 对 淡 水 来 说, 井 水 和 泉 水 优 于 地 表 水 如 果 使 用 地 表 水 作 为 淡 水 或 盐 海 水, 取 水 位 置 应 将 质 量 波 动 和 受 污 染 的 可 能 性 降 至 最 小, 使 得 硫 化 物 和 铁 的 浓 度 最 大 对 海 水 双 壳 类 软 体 动 物 生 物 富 集 生 物 浓 缩 试 验 来 说, 需 要 在 浮 游 生 物 最 多 的 位 置 取 水 以 维 持 生 物 的 生 长 和 生 存 不 能 使 用, 或 准 备 使 用 氯 化 的 水 作 为 稀 释 水, 因 为 所 有 的 余 氯 和 氯 产 生 的 氧 化 剂 对 水 生 动 物 的 毒 性 很 大 脱 氯 水 应 仅 作 为 不 得 已 的 选 择 最 终 手 段 使 用, 因 为 脱 氯 通 常 都 不 会 完 全 亚 硫 酸 氢 钠 在 用 于 水 脱 氯 时 好 于 亚 硫 酸 钠, 但 两 者 都 比 碳 过 滤 器 更 可 靠, 尤 其 是 在 除 氯 胺 的 时 候 一 些 有 机 氯 胺, 无 论 如 何 都 会 缓 慢 地 与 亚 硫 酸 氢 钠 反 应 除 了 余 氯 以 外, 市 政 饮 用 水 通 常 含 有 无 法 接 受 的 高 浓 度 铜 铅 锌 和 氟 化 物, 而 且 质 量 易 变 当 必 要 时, 额 外 浓 度 的 大 多 数 金 属 离 子 通 常 需 要 用 螯 合 树 脂 去 除 如 果 脱 氯 水 用 于 稀 释 水 或 在 其 中 作 为 预 备 水 使 用, 则 那 要 么 (1) 稀 释 水 的 可 接 受 性 在 试 验 中 必 须 被 得 到 证 明, 或 者 要 么 (2) 它 必 须 在 每 一 周 在 不 连 贯 续 的 时 间 天 数 内 3 次 中 展 示 满 足 (a) 或 (b)3 次, 在 稀 释 水 中 的 新 鲜 样 品 是 (a) 指 的 是 在 稀 释 水 中 的 新 的 ) 汤 氏 纺 锤 水 蚤, 糖 虾 ( 一 种 动 物 释 放 不 超 过 30h, 能 够 在 没 有 食 物 时 存 活 48 小 时 ), 双 壳 类 软 体 动 物 幼 虫, 或 第 一 龄 期 水 蚤 在 没 有 食 物 时 存 活 48 小 时 或 是 (b) 是 所 有 余 氯 在 淡 水 中 浓 度 或 氯 产 生 的 氧 化 剂 在 盐 水 中 浓 度 小 于 8 μg/l 4

7 处 理 稀 释 水 在 加 入 试 验 物 之 前 应 使 用 气 泡 石 表 面 曝 气 机 或 体 积 曝 气 机 集 中 曝 气 足 够 的 曝 气 将 提 高 ph 值, 使 和 溶 解 氧 浓 度 和 其 他 气 体 达 到 成 为 平 衡 态 空 气, 并 将 氧 和 挥 发 物 浓 度 降 到 最 小 稀 释 水 中 溶 解 氧 浓 度 的 饱 和 度 应 在 % 之 间, 这 将 帮 助 确 保 试 验 池 试 验 槽 中 溶 解 氧 浓 度 是 可 接 受 达 到 适 宜 的 值 的 应 避 免 溶 解 气 体 的 过 度 饱 和 导 致 稀 释 水 发 热, 这 将 防 止 气 泡 病 的 发 生 在 双 壳 类 软 体 动 物 试 验 双 壳 类 软 体 动 物 时, 通 常 使 用 未 过 滤 和 未 杀 菌 过 的 天 然 海 水 通 常 被 使 用, 以 尽 可 能 多 地 提 供 天 然 浮 游 生 物 食 品 除 除 可 能 的 双 壳 类 软 体 动 物 试 验 之 外, 其 他 试 验 可 以 通 过 使 用 沙 短 袜 袋 子 深 入 型 套 筒 过 滤, 保 持 颗 粒 物 质 在 可 接 受 适 宜 的 较 低 浓 度 并 作 为 通 过 紫 外 杀 菌 或 通 过 一 个 出 色 好 的 过 滤 器 过 滤 的 预 处 理, 或 两 者 都 都 适 使 用 除 双 壳 类 软 体 动 物 试 验 之 外 除 可 能 的 双 壳 类 软 体 动 物 试 验, 其 他 试 验 可 能 需 要 地 表 水 源 的 盐 水 通 过 一 个 15μm 或 更 小 的 过 滤 器 进 行 有 效 过 滤, 以 除 去 寄 生 虫 除 可 能 的 双 壳 类 软 体 动 物 试 验 之 外, 其 他 试 验 用, 稀 释 水 可 能 被 不 需 要 的 微 生 物 污 染, 这 就 可 能 需 要 一 个 通 过 合 适 的 并 配 备 强 度 计 和 流 量 对 照 的 紫 外 杀 菌 器, 或 通 过 一 个 0.22 μm 或 小 于 该 孔 径 的 过 滤 器 如 添 加 物 证 明 对 生 物 体 试 验 动 物 没 有 有 害 影 响, 通 过 添 加 适 当 的 试 剂 级 化 学 品 海 盐 酸 碱 和 去 离 子 水 或 蒸 馏 水, 可 以 对 硬 度, 盐 度,pH 值 进 行 调 节 表 征 - 下 述 的 项 目 每 年 应 测 量 两 次 或 两 次 以 上, 其 前 提 就 是 如 果 使 用 了 地 表 水 或 两 年 内 这 些 中 以 下 项 目 没 有 测 量 没 有 隔 半 年 进 行 测 定 一 次 或 使 用 了 地 表 水 : 以 下 项 目 每 年 应 至 少 测 量 两 次 : 所 有 的 水 - 碱 度,pH 值, 电 导 率, 颗 粒 物 质, 总 有 机 碳, 总 有 机 磷 农 药, 有 机 氯 剂 ( 或 总 有 机 磷 农 药 加 多 氯 联 苯 ), 氯 化 苯 氧 除 草 剂, 氨, 氰 化 物, 硫 化 物, 溴, 氟, 碘 化 物, 硝 酸 盐, 磷 酸 盐, 硫 酸 盐, 钙, 镁, 钾, 铝, 砷, 铍, 硼, 镉, 铬, 钴, 铜, 铁, 铅, 锰, 汞, 钼, 镍, 硒, 银 和 锌 淡 水 - 硬 度, 氯 化 物 和 钠 盐 水 - 盐 分 对 每 种 使 用 的 方 法, 检 测 限 应 低 于 (a) 在 稀 释 水 中 的 浓 度, 或 是 (b) 已 证 明 对 实 验 生 物 体 试 验 动 物 有 不 利 影 响 的 最 低 浓 度 受 试 物 5

8 概 要 - 受 试 物 应 为 试 剂 级 或 更 高 级 别, 除 非 是 特 定 需 要 的 试 验 研 究, 才 会 使 用 商 用 产 品, 或 技 术 等 级 或 使 用 级 物 质 试 验 开 始 前, 要 了 解 关 于 受 试 物 的 以 下 信 息 内 容 应 已 知 : 主 要 成 分 和 主 要 杂 质 的 特 性 和 浓 度, 例 如, 杂 质 构 成 超 过 约 1% 的 物 质 在 稀 释 水 中 的 溶 解 性 和 稳 定 性 预 期 稳 定 状 态 的 BCF 这 可 能 从 具 有 相 同 或 不 同 的 物 种 的 相 同 或 类 似 物 质 的 试 验 结 果 中 得 到 作 为 有 机 化 学 品, 这 些 可 以 从 已 报 导 的 稳 定 状 态 BCFs 和 这 些 物 理 化 学 性 质 如 辛 醇 - 水 分 配 系 数 和 水 中 溶 解 度 之 间 的 相 关 性 得 到 表 观 稳 定 状 态 的 评 估 时 间 实 验 生 物 体 试 验 动 物 的 急 性 毒 性 ( 需 要 慢 性 毒 性 的 测 量 和 评 估 ) 计 划 用 水 浓 度 和 预 期 的 稳 定 状 态 组 织 中 的 浓 度, 其 中 的 十 分 之 一 预 期 的 稳 定 状 态 组 织 中 的 浓 度 的 分 析 方 法 的 精 度 和 偏 差 放 射 性 同 位 素 示 踪 实 验 原 料 - 放 射 性 同 位 素 示 踪 实 验 原 料 偶 尔 在 努 力 简 化 分 析 试 验 溶 液 和 实 验 生 物 体 试 验 动 物 时 用 到 这 些 物 质 的 有 效 性 极 大 地 被 两 个 严 重 大 的 复 杂 情 况 所 限 制 :(a) 许 多 放 射 性 同 位 素 原 料 包 含 超 过 1% 的 放 射 性 同 位 素 杂 质, 少 量 的 杂 质 具 有 很 高 的 BCF, 这 将 极 大 地 影 响 具 有 较 低 BCF 的 化 学 品 的 表 观 BCF, 并 且 (b) 放 射 性 同 位 素 化 学 品 充 分 地 在 实 验 生 物 体 试 验 动 物 内 彻 底 产 生 代 谢 变 化, 一 种 或 多 种 代 谢 物 会 有 放 射 性, 化 学 品 的 表 观 BCF 将 会 非 常 高 克 服 这 两 个 难 题 的 唯 一 方 法 是 验 证 验 证 在 组 织 中 和 水 中 的 放 射 性 性 与 母 化 学 品 相 联 合 关 象 薄 层 色 谱 这 样 的 技 术 在 证 明 放 射 性 与 母 化 学 品 未 联 合 不 相 关 上 比 验 证 代 谢 物 与 母 化 学 品 相 联 合 相 关 更 有 用 通 常 需 要 使 用 气 相 色 谱 进 行 检 测 核 查 通 常 需 要 使 用 气 相 色 谱, 这 意 味 着 在 决 确 定 有 关 的 BCF 时, 长 远 而 言, 使 用 放 射 性 同 位 数 素 示 踪 试 验 原 料 并 不 节 省 资 源 储 备 溶 液 - 在 一 些 情 况 中, 试 验 系 统 中 受 试 物 能 被 直 接 添 加 入 稀 释 水, 但 通 常 受 试 物 都 是 溶 解 在 溶 剂 中 以 形 成 储 备 溶 液, 之 后 再 在 试 验 系 统 中 加 入 稀 释 水 如 果 使 用 了 储 备 溶 液, 受 试 物 在 溶 液 中 的 浓 度 和 稳 定 性 应 在 开 始 试 验 之 前 就 已 决 确 定 了 如 果 受 试 物 会 发 生 光 分 解, 储 备 溶 液 应 避 光 除 了 分 析 可 能 试 验 可 水 解 性 易 氧 化 性 可 还 原 的 物 质 外 材 料, 试 验 中 首 选 溶 剂 是 稀 释 水, 虽 然 可 试 验 能 中 需 要 过 滤 或 除 菌 ( 或 是 两 者 都 需 要 ), 首 选 溶 剂 是 稀 释 水 如 果 稀 释 水 的 硬 度 或 盐 分 不 受 影 响, 可 使 用 蒸 馏 水 和 去 离 子 水 已 经 特 别 开 发 了 几 种 技 术 用 于 准 备 微 溶 性 材 质 的 水 性 储 备 溶 液 在 准 备 水 性 储 备 溶 液 时, 可 以 使 用 最 少 量 的 强 酸 和 碱, 但 这 些 试 剂 可 能 对 试 验 液 的 ph 有 一 点 影 响 使 用 更 多 的 可 溶 性 受 试 物, 如 氯 化 物 或 硫 酸 盐 的 有 机 6

9 胺, 钠 或 钾 盐 的 酚 类 和 有 机 酸, 金 属 的 氯 化 物 或 硝 酸 盐 ( 而 非 碳 酸 盐 或 氢 氧 化 物 ), 可 能 对 ph 值 的 影 响 超 过 使 用 所 需 最 少 剂 量 的 强 酸 或 碱 如 果 使 用 除 稀 释 水 以 外 的 溶 剂, 其 浓 度 在 试 验 液 中 应 保 持 最 小 并 不 应 降 低 试 验 物 种 的 生 长 和 生 存 三 甘 醇 因 为 其 对 水 生 动 物 的 低 毒 性 低 波 动 性 和 对 有 机 化 学 品 的 强 溶 解 能 力, 在 准 备 储 备 溶 液 时 往 往 是 一 个 很 好 的 有 机 溶 剂 其 他 与 水 混 溶 的 有 机 溶 剂, 如 甲 醇, 乙 醇 丙 酮 也 可 以 使 用, 但 它 们 可 能 会 刺 激 生 长 不 良 的 微 生 物, 并 且 丙 酮 也 相 当 不 稳 定 如 果 使 用 一 种 有 机 溶 剂, 应 使 用 试 剂 级 或 更 高 级 别, 其 浓 度 在 任 何 试 验 液 中 不 应 超 过 0.1mL/L 在 准 备 储 备 溶 液 时 不 能 使 用 表 面 活 性 剂, 因 为 它 们 可 能 会 影 响 受 试 物 在 试 验 液 中 的 形 态 ( 这 些 限 制 并 不 适 用 于 任 何 成 分 的 混 合 物, 配 方 设 计 物 质, 或 商 业 产 品, 除 非 这 一 额 外 数 量 的 溶 剂 是 用 来 准 备 储 备 溶 液 ) 如 果 使 用 除 稀 释 水 以 外 的 溶 剂, 可 以 操 作 同 时 用 两 种 无 不 相 关 关 的 化 学 溶 剂 或 两 种 不 同 浓 度 的 同 一 溶 剂 进 行 试 验, 以 获 得 溶 剂 对 试 验 结 果 可 能 影 响 的 信 息 试 验 浓 度 - 几 种 因 素 可 能 影 响 到 试 验 浓 度 的 选 择 : 受 试 物 在 试 验 液 中 的 浓 度 必 须 不 能 使 生 物 体 试 验 动 物 受 到 会 应 力 刺 激, 否 则 会 对 试 验 期 间 生 物 体 试 验 动 物 试 验 期 间 有 不 利 影 响 通 过 一 个 适 当 的 急 性 - 慢 性 速 率, 最 好 可 接 受 高 可 接 受 试 验 浓 度 通 常 通 过 调 节 适 当 的 急 - 慢 性 比 值 能 够 评 估 得 到, 对 鱼 类 来 说,96-h LC50, 对 双 壳 类 软 体 动 物,48-h EC50, 这 个 数 值 是 基 于 晶 胚 和 幼 虫 的 存 活 和 发 展 生 长 得 出 的, 有 通 常 能 够 区 别 评 估, 对 鱼 类 来 说,96-h LC50, 对 双 壳 类 软 体 动 物,48-h EC50 一 些 材 料 化 学 品 的 速 率 值 是 3 左 右, 但 也 有 少 数 在 100 以 上 为 了 在 吸 收 阶 段 和 在 90% 被 清 除 后 的 实 验 生 物 体 试 验 动 物 中, 溶 液 中 受 试 物 的 浓 度 在 试 验 溶 液 中 能 被 精 确 的 测 量, 试 验 浓 度 必 须 足 够 高 因 此, 试 验 溶 液 的 浓 度 应 等 于 或 高 于 最 高 的 (a) 稀 释 水 背 景 的 3 倍 ;(b) 在 稀 释 水 中 分 析 方 法 检 测 限 的 3 倍 ;(c) 除 以 预 期 稳 定 状 态 的 BCF 实 验 生 物 体 试 验 动 物 中 的 背 景 的 30 倍 ; 以 及 (d) 除 以 预 期 稳 定 状 态 的 BCF 组 织 中 的 分 析 方 法 检 测 限 的 30 倍 受 试 物 应 溶 解 在 试 验 液 中 ; 受 试 物 不 应 该 存 在 其 他 一 些 形 式, 如 胶 体, 颗 粒, 或 乳 化 除 非 这 些 都 是 试 验 物 的 内 在 性 质 因 为 在 接 近 饱 和 溶 液 时 通 常 会 遇 到 这 些 问 题, 试 验 浓 度 通 常 不 应 超 过 试 验 物 在 稀 释 水 中 溶 解 性 度 的 一 半 如 果 能 够 评 估 起 在 天 然 水 中 的 预 期 浓 度, 并 能 如 其 满 足 以 上 条 件 时, 应 使 用 其 此 浓 度 作 为 试 验 浓 度 如 果 需 要 确 定 是 否 吸 收 清 除 和 BCF 与 水 的 浓 度 无 关, 应 在 试 验 浓 度 进 行 生 物 富 集 7

10 生 物 浓 缩 试 验, 其 覆 盖 范 围 因 子 将 至 少 是 因 子 为 生 物 体 试 验 动 物 物 种 只 要 可 能 和 合 适, 试 验 应 使 用 表 1 所 列 物 种 进 行 选 择 这 些 物 种 是 基 于 以 下 因 素 : 其 易 得 ; 商 业, 娱 乐 和 生 态 的 重 要 性 ; 过 去 的 成 功 运 用, 以 及 在 实 验 室 中 便 于 处 理 鼓 励 使 用 这 些 物 种 以 增 加 结 果 的 可 比 较 性, 以 及 少 量 物 种 具 有 的 较 多 信 息 而 不 是 许 多 物 种 具 有 的 少 量 信 息 的 实 用 性 如 果 所 需 物 种 难 以 获 得, 应 使 用 表 中 所 列 的 物 种 仅 当 特 别 关 注 时 才 使 用 特 殊 种 属 品 系 物 种 使 用 物 种 的 学 名 应 使 用 合 适 的 分 类 学 索 引 进 行 核 实 如 果 淡 水 鱼 材 料 的 结 果 可 行, 同 时 需 要 海 水 动 物 的 结 果, 通 常 用 一 只 海 水 鱼 类 试 验 时 有 一 只 海 水 双 壳 类 软 体 动 物 会 更 好, 因 为, 与 双 壳 类 软 体 动 物 和 两 者 任 一 种 类 鱼 类 之 间 相 比,BCFs 将 更 近 似 于 淡 水 鱼 和 海 水 鱼 类 之 间 淡 水 类 : A 物 种 表 1 物 种 和 试 验 温 度 试 验 温 度, 虹 鳟 鱼,Salmo gairdneri Richardson 12 黑 头 呆 鱼,Pimephales promelas Rafinesque 17,22 斑 点 叉 尾 鮰,Ictalurus punctatus (Rafinesque) 17,22 蓝 鳃 太 阳 鱼,Lepomis macrochirus Rafinesque 17,22 海 水 类 : 紫 贻 贝,Mytilus edulis Linnaeus 环 境 温 度 扇 贝,Pecten spp. 环 境 温 度 牡 蛎,Crassostrea gigas Thunberg C. virginica Gmelin 环 境 温 度 杂 色 鳉,Cyprinodon variegatus Lacepede 22 底 鳉,Fundulus heteroclitus (Linnaeus) 22 小 鳍 底 鱂,Fundulus parvipinnis Girard 17 三 刺 鱼,Gasterosteus aculeatus Linnaeus 17 钉 头 鱼,Lagodon rhomboides (Linnaeus) 22 斑 鱼,Leiostomus xanthurus Lacepede 22 海 鱮,Cymatogaster aggregata Gibbons 12 A 使 用 物 种 的 学 名 应 使 用 合 适 的 分 类 学 索 引 进 行 核 实 尺 寸 - 所 有 在 试 验 中 使 用 的 生 物 体 试 验 动 物 尺 寸 的 和 年 龄 应 一 致 鱼 - 除 非 需 要 特 殊 生 命 阶 段 的 数 据, 应 使 用 幼 鱼 进 行 试 验, 确 切 地 说, 幼 年 后 期 或 更 大 大 一 点 些 的 会 积 极 进 食 的, 但 未 不 是 性 成 熟 产 卵 或 最 近 产 了 卵 的 鱼 在 任 一 单 一 试 验 中, 所 有 的 鱼 都 是 应 来 自 统 同 一 年 龄 段, 最 长 的 鱼 的 标 准 体 长 ( 嘴 尖 至 有 尾 部 肉 柄 ) 不 超 过 最 短 的 鱼 的 2 倍 这 有 利 于 用 相 对 较 小 的 鱼 ( 小 于 10 克 ), 在 惯 用 尺 寸 正 常 大 小 的 试 验 8

11 池 槽 中 要 容 纳 所 需 数 量 的 鱼, 用 相 对 较 小 的 鱼 ( 小 于 10 克 ) 是 有 利 的 中 容 纳 所 需 数 量 的 鱼 鱼 实 验 生 物 体 可 接 受 的 最 小 尺 寸 决 定 于 其 试 验 物 组 织 中 试 验 物 的 测 量 定 能 力, 因 为 鱼 需 要 足 够 大 达 到 以 允 许 满 足 在 每 一 生 物 体 条 鱼 中 能 进 行 受 试 物 的 测 定, 甚 至 和 如 有 必 要 时 还 要 在 其 肌 肉 组 织 中 进 行 测 定 测 量 受 试 物 同 一 物 种 的 成 年 雌 鱼 或 雄 鱼 有 时 具 有 不 同 的 脂 肪 含 量 因 此, 在 利 用 有 机 化 学 品 试 验 中 有 机 化 学 品 或 要 求 (a) 鱼 在 试 验 期 间 任 何 时 候 都 未 性 成 熟, 或 (b) 在 分 析 的 任 何 时 候, 每 种 鱼 的 性 别 都 应 决 定 和 记 录, 并 且 雌 性 和 雄 性 两 者 的 脂 肪 含 量 度 应 单 独 分 别 测 量 通 常 可 通 过 降 低 温 度 和 缩 短 日 长 光 周 期 或 两 者 种 方 式 都 使 用 来 防 止 性 成 熟 的 过 程 双 壳 类 软 体 动 物 - 使 用 相 对 较 大 的 软 体 动 物 ( 壳 嘴 尖 部 到 远 端 瓣 边 缘 距 离 大 于 60mm) 会 造 成 正 常 大 小 的 试 验 池 试 验 槽 很 难 中 容 纳 所 需 数 量 的 软 体 动 物 的 困 难 但 软 体 动 物 也 应 足 够 大 ( 壳 嘴 的 尖 端 到 远 端 瓣 的 边 缘 的 距 离 大 于 40mm), 能 达 到 在 动 物 体 中 使 得 测 定 受 试 物 的 要 求, 深 圳 能 够 在 生 物 体 单 体 中 和 如 需 要 的 话, 还 要 在 扇 贝 闭 壳 肌 中 能 够 测 量 在 任 何 单 一 试 验 中, 所 有 软 体 动 物 应 来 自 统 同 一 年 龄 段, 同 时 最 大 的 软 体 动 物 壳 嘴 尖 部 到 远 端 瓣 边 缘 距 离 应 不 超 过 最 小 的 软 体 动 物 的 1.5 倍 备 注 1: 壳 嘴 的 尖 端 到 远 端 瓣 的 边 缘 的 距 离 是 最 客 观 的 定 义, 通 常 会 在 生 物 浓 缩 实 验 中 使 用 到 这 个 参 数, 也 容 易 测 试 双 壳 类 软 体 动 物 物 种 活 体 具 有 易 于 进 行 测 量 的 有 用 特 点 的 话, 通 常 会 在 生 物 富 集 实 验 中 使 用 一 些 物 种 可 能 需 要 三 维 测 量 最 需 要 测 量 的 是 软 组 织 的 重 量, 但 在 试 验 前 不 能 测 量, 应 在 试 验 结 束 后 进 行 在 试 验 期 间 应 禁 止 双 壳 类 软 体 动 物 产 卵 使 用 性 未 成 熟 动 物 和 已 知 抑 制 产 卵 的 试 验 温 度 都 是 可 接 受 用 的 预 防 措 施 应 每 天 检 查 试 验 池 试 验 槽 的 底 部 是 否 有 如 白 色 晶 胚 膜 的 产 卵 迹 象 来 源 - 试 验 中 所 有 生 物 动 物 应 为 同 一 来 源 实 验 室 培 养 的 诸 如 黑 头 呆 鱼 和 杂 色 鳉 通 常 提 供 的 背 景 资 料 年 龄 大 小 性 质 应 是 众 所 周 知 的, 并 在 所 有 实 验 室 是 类 似 的 其 它 淡 水 鱼 一 般 来 源 于 私 人 或 国 家 联 邦 孵 化 所 任 何 时 候 使 用 的 鲑 鱼 或 鳟 鱼, 他 们 应 证 明 已 证 明 无 病, 例 如 传 染 性 的 传 染 性 胰 脏 坏 死, 疥 疮 病, 肾 脏 疾 病, 肠 遭 红 嘴 病, 眩 转 病 证 明 认 证 的 要 求 各 个 地 方 不 同, 各 个 物 种 也 不 同 其 它 推 荐 的 物 种 通 常 从 相 对 无 污 染 的 野 生 群 体 中 获 得 进 口 和 收 集 允 许 证 从 当 地 和 政 府 机 构 获 得 照 顾 和 处 理 - 生 物 应 该 妥 善 照 管 和 处 理, 使 它 们 免 受 惊 扰 刺 激 每 当 水 生 试 验 动 物 被 带 入 一 个 设 施, 它 他 们 必 须 被 隔 离 14 天, 或 更 长 时 间, 直 至 它 他 们 至 少 看 起 来 来 无 任 何 疾 病 生 物 体 试 验 动 物 或 水 从 一 台 隔 离 箱 向 其 他 箱 体 转 移 时 应 不 可 9

12 使 用 抄 网 清 洁 用 品 及 其 它 设 备 生 物 体 或 水 从 一 台 隔 离 箱 向 其 他 箱 体 转 移 保 持 试 验 水 生 动 物 状 况 良 好, 避 免 受 到 不 必 要 的 惊 扰 刺 激, 它 们 不 应 拥 挤 或 承 受 温 度 或 水 质 的 快 速 变 化 一 般 来 说, 在 12 小 时 内 水 温 改 变 不 应 超 过 3 C 以 上, 最 好 是 72 小 时 内 变 化 不 超 过 3, 浓 解 氧 的 浓 度 应 保 持 60 和 100 % 饱 和 度 之 间, 更 理 想 的 是 加 上 连 续 轻 柔 曝 气 总 溶 解 气 体 浓 度 的 应 少 小 于 105% 饱 和 度 可 能 除 双 壳 类 软 体 动 物 外, 被 某 些 微 生 物 污 染 的 水 可 经 过 合 适 的 并 配 备 强 度 计 和 流 量 对 照 的 紫 外 杀 菌 器, 或 通 过 一 个 0.22 μm 或 小 于 该 孔 径 的 过 滤 器 在 放 置 及 适 应 箱 体 中 非 离 子 氨 浓 度 应 小 于 20μg/L 放 置 及 适 应 箱 应 该 按 需 要 擦 洗 或 刷 涂 不 同 组 别 试 验 生 动 物 使 用 之 间, 箱 体 应 用 碘 消 灵 载 体 消 毒 或 者 用 200mg 毫 克 /L 的 次 氯 酸 的 消 毒 1 h, 一 个 小 时 内 刷 洗 完, 然 后 冲 洗 干 净 好 生 物 体 试 验 动 物 应 尽 量 少 处 理 当 必 须 处 理 时, 应 该 轻 柔, 小 心, 并 要 求 快 速, 以 免 生 物 体 试 验 动 物 受 到 惊 扰 在 处 理 过 程 中 生 物 有 受 伤 或 跌 落, 鱼 有 接 触 到 干 面 时, 都 应 该 抛 弃 处 理 大 于 0.5 克 鱼 的 最 好 的 方 式 是 抄 网 这 种 鱼 网 是 商 业 市 场 现 有 的, 也 可 从 小 型 网 状 尼 龙 网 尼 龙 或 蚕 丝 ( 绢 ) 筛 布 浮 游 生 物 网 或 类 似 无 结 材 料 织 成 处 理 鲶 鱼 时 网 最 好 涂 敷 聚 氨 酯 树 脂 用 来 处 理 鱼 设 备 的 在 使 用 之 期 间 间 应 用 蒸 汽 或 碘 消 灵 或 者 200mg 毫 克 / 升 L 次 氯 酸 钠 消 毒 处 理 或 喂 养 之 前 应 该 洗 手 在 隔 离, 放 置 和 适 应 期 间, 每 日 应 仔 细 观 察 生 物 体 试 验 动 物, 观 察 其 受 扰 受 刺 激, 物 理 损 害, 死 亡 率, 疾 病 和 外 来 寄 生 虫 的 迹 象 损 伤 至 死 的 异 常 的 个 体 都 应 该 抛 弃 用 探 头 接 触 打 开 的 双 壳 类 软 体 动 物 而 它 不 关 闭 时 应 该 抛 弃 这 些 动 物 双 壳 类 软 体 动 物 从 未 打 开 或 不 存 没 有 粪 便 或 类 似 粪 便 物 时 也 应 该 抛 弃 如 果 肉 眼 可 见 鱼 有 不 进 食 或 者 翻 动 闪 动 不 规 律 游 动 瘦 弱 在 水 面 气 喘 吁 吁 过 度 换 气, 出 血, 产 生 过 量 粘 液, 或 显 示 不 正 常 颜 色 等 这 些 行 为 和 外 部 表 象, 其 导 致 原 因 应 被 排 除 查 明 如 果 生 物 体 试 验 动 物 表 示 出 任 何 的 疾 病 或 有 外 部 寄 生 虫 病, 应 采 取 适 当 措 施 喂 食 : 应 确 定 受 试 物 在 食 物 中 的 浓 度 鱼 类 至 少 每 天 喂 食 一 次, 以 供 其 生 存, 生 长 和 繁 殖 食 物 必 须 达 到 以 下 要 求 才 能 使 用 在 本 试 验 中,( 一 a) 一 批 食 物 能 维 持 至 少 一 种 水 产 动 物 的 生 存, 生 长 和 繁 殖, 或 (b) 有 机 氯 的 浓 度 不 超 过 0.15 μg/g 的 ( 湿 重 ), 或 有 机 氯 农 药 ( 含 多 氯 联 苯 ) 的 总 浓 度 不 超 过 0.3 μg/g 的 ( 湿 重 ) 10

13 对 于 双 壳 类 软 体 动 物, 应 提 供 含 有 充 足 食 物 的 足 量 的 水, 以 维 持 其 生 存 和 生 长 如 果 使 用 未 加 入 海 藻 的 未 经 消 毒 和 未 经 过 滤 的 天 然 海 水, 至 少 每 小 时 每 只 动 物 需 要 有 1 升 水, 这 通 常 是 壳 嘴 的 尖 端 到 远 端 瓣 的 边 缘 的 距 离 为 40 至 60 毫 米 的 软 体 动 物 所 需 要 的 最 小 量, 如 果 流 速 或 食 物 浓 度 过 低, 或 两 者 都 过 低, 稀 释 水 中 可 添 加 海 水 绿 藻, 如 巴 夫 金 藻 或 等 鞭 金 藻, 或 硅 藻 如 海 链 藻 可 添 加 到 稀 释 水 中 疾 病 处 理 - 鱼 可 能 是 经 过 化 学 处 理 治 疗 或 使 用 适 当 的 方 法 ( 见 ( 28 ) 和 指 南 E729) 来 预 防 某 些 疾 病 如 果 他 们 都 受 到 严 重 病 变, 更 好 的 是 立 即 丢 弃 整 批 鱼 有 其 他 疾 病 的 鱼 和 其 他 所 有 患 病 动 物 应 立 即 丢 弃, 因 为 系 统 的 细 菌 感 染 通 常 不 能 有 效 治 愈, 没 有 深 入 的 治 疗 内 部 寄 生 虫 不 能 除 去, 病 毒 性 传 染 病 就 也 不 能 得 到 治 疗, 而 且 无 脊 椎 动 物 几 乎 不 可 能 得 到 有 效 的 处 理 诊 疗 后 至 少 10 天 之 内 不 能 进 行 试 验, 试 验 中 生 物 体 试 验 动 物 不 允 许 进 行 治 疗 一 般 来 说, 因 为 在 收 集 或 运 输 期 间 的 可 能 受 到 刺 激 或 药 物 处 理 的 缘 故, 生 物 体 试 验 动 物 不 应 将 在 到 达 一 个 设 备 头 之 前 的 16 小 时 进 行 处 理, 这 是 因 为 在 收 集 或 运 输 期 间 的 可 能 受 扰 或 药 物 处 理 然 而 在 某 些 情 况 下, 有 必 要 立 即 进 行 预 防 性 治 疗 是 必 要 的, 如 在 热 天 时 治 疗 蓝 鳃 太 阳 鱼 的 柱 状 病 放 置 - 试 验 动 生 物 应 被 置 于 未 被 污 染 的, 温 度 恒 定 水 质 恒 定 的 并 水 汽 不 断 的 水 中, 水 处 于 流 动 系 统 中, 鱼 每 天 至 少 补 充 两 次 大 量 的 水, 每 个 双 壳 类 软 体 动 物 ( 壳 嘴 的 尖 端 到 远 端 瓣 的 边 缘 的 距 离 为 40 至 60 毫 米 ) 要 补 充 1 升 水 / 小 时 ; 如 果 流 速 更 快 将 更 理 想 实 验 生 物 体 试 验 动 物 应 置 于 该 稀 释 水 中, 设 置 温 度 为 处 于 接 受 试 验 的 温 度 上 表 1 所 列 温 度 对 放 置 各 物 种 总 体 上 是 好 的 但 是 对 于 长 时 间 放 置, 一 般 而 言 来 说, 保 持 低 于 表 1 的 温 度 将 会 更 容 易 和 更 安 全, 因 为 其 代 谢 率 和 数 量 以 及 疾 病 暴 发 程 度 就 会 降 低 适 应 - 防 止 测 试 生 物 体 试 验 动 物 因 为 试 验 室 中 水 质 或 温 度 的 瞬 时 变 化 而 受 扰 受 刺 激, 开 始 试 验 前 几 天, 适 当 数 量 的 类 似 大 小 的 生 物 应 当 从 放 置 箱 转 移 到 适 应 池, 适 应 池 中 鱼 每 天 至 少 补 充 两 次 大 量 的 水, 每 个 双 壳 类 软 体 动 物 ( 壳 嘴 的 尖 端 到 远 端 瓣 的 边 缘 的 距 离 为 40 至 60 毫 米 ) 要 补 充 1 升 水 / 小 时 水 在 适 应 箱 体 也 应 逐 步 改 变, 两 天 或 两 天 以 上 时 间 内 从 100% 放 置 水 到 100% 稀 释 水 同 样 地, 水 温 也 应 逐 步 改 变, 以 72 h 内 之 内 不 超 过 3 C 的 速 度 变 化, 直 至 最 后 达 到 试 验 温 度 所 有 动 生 物 在 放 到 试 验 室 之 前 必 须 喂 养 在 稀 释 水 中, 在 试 验 温 度 下 保 持 至 少 48 小 时 倘 若 未 得 到 充 分 的 实 验 确 定, 适 应 期 可 能 要 花 更 长 的 时 间 因 此, 可 能 时 使 用 长 于 最 低 指 定 值 的 适 应 期 性 质 - 所 有 用 在 测 试 中 的 生 物 体 试 验 动 物 应 在 可 接 受 的 性 质 范 围 内 损 伤 死 亡 异 常 及 生 病 的 动 生 物 应 按 照 和 处 置 11

14 动 生 物 应 该 (a) 用 水 和 食 物 来 养 殖, 食 物 至 少 能 支 持 试 验 动 物 种 水 生 物 的 生 存, 生 长, 繁 殖 ; (b) 从 未 排 放 加 料 和 化 学 处 理 的 水 体 中 获 得 以 及 用 满 足 以 上 要 求 的 水 和 实 食 物 喂 养 ; 或 (c) 分 析 表 明 :(1) 不 含 有 高 浓 度 的 化 学 物 质, 这 些 化 学 物 是 它 们 可 能 接 触 的 (2) 或 者 有 机 氯 的 浓 度 不 超 过 0.15 μg/g 的 ( 湿 重 ) 或 有 机 氯 农 药 总 浓 度 ( 含 多 氯 联 苯 ) 不 超 过 0.3μg/g 的 ( 湿 重 ) 对 (c) 来 说, 一 批 生 物 中 分 析 几 个 有 代 表 性 的 生 动 物 足 够 了 ; 不 必 要 分 析 每 一 批 生 动 物 物 或 者 每 一 个 试 验 前 都 分 析 对 于 试 验 材 料 化 学 品, 应 分 析 几 个 代 表 性 的 生 物 体 试 验 动 物 如 果 测 试 样 品 浓 度 超 过 10% 的 预 期 稳 定 状 态 的 浓 度, 生 物 体 试 验 动 物 在 稀 释 用 水 中 保 持 一 段 时 间 或 使 用 得 到 供 其 他 测 试 用 其 它 生 物 体 试 验 动 物 可 能 是 合 适 可 取 的 到 达 实 验 室 后, 软 体 动 物 至 少 4 天 鱼 类 至 少 14 才 能 用 于 试 验 试 验 动 物 一 组 生 物 如 果 有 个 别 看 起 来 是 染 病 的 或 以 其 他 方 式 显 示 异 常, 或 者 在 测 试 前 48 小 时 之 内 超 过 3% 的 生 物 立 即 死 亡, 那 么 这 组 动 物 应 弃 而 不 用 如 果 某 一 生 动 物 种 群 不 能 符 合 这 些 标 准, 所 有 动 物 个 体 都 不 能 使 用 应 弃 而 不 用, 或 进 行 进 行 了 额 外 的 10 天 处 理, 有 必 要 的 时 候 再 进 行 适 应 试 验 5.4 仪 器 和 设 备 设 备 : 流 动 储 水 池 应 有 利 于 待 测 生 物 体 试 验 动 物 驯 养, 放 置, 适 应 抬 高 装 稀 释 水 的 水 箱 或 流 浆 箱, 或 两 者 均 抬 高, 稀 释 水 可 由 无 压 给 料 进 入 保 持 适 应 水 池 或 测 量 系 统, 这 一 系 统 用 于 准 备 测 试 液 和 将 测 试 液 转 送 至 测 试 槽 供 水 系 统 应 带 有 过 滤 器 和 鼓 气 装 置 试 验 槽 应 置 于 恒 温, 循 环 水 条 件 下 流 浆 箱, 放 置 驯 养 适 应 水 箱 需 要 通 风, 控 温 通 风 的 空 气 应 无 油 烟 水, 需 过 滤 去 除 油 和 水, 最 好 使 用 0.22μm 细 菌 过 滤 器 过 滤 空 气 在 放 置, 适 应, 测 试 期 间, 应 使 用 遮 挡 物 或 分 割 区 保 护 生 物 体 试 验 动 物 免 受 干 扰, 防 止 不 必 要 的 惊 扰 实 验 室 必 须 通 风 良 好, 空 气 无 烟 为 了 进 一 步 降 低 测 试 材 料 化 学 品 和 其 他 物 质, 特 别 是 挥 发 性 物 质 对 实 验 生 物 体 试 验 动 物 的 污 染, 放 置 驯 养 适 应 水 箱 不 能 放 置 于 进 行 生 物 富 集 生 物 浓 缩 或 毒 性 试 验 的 房 间, 也 不 能 置 于 准 备 储 备 液, 测 试 液 以 及 设 备 清 洗 的 场 所 16 小 时 光 照,8 小 时 黑 暗 的 光 照 周 期 通 过 计 时 设 备 可 方 便 控 制, 但 更 理 想 的 是 12 小 时 光 照 -12 小 时 黑 暗 或 者 14 小 时 光 照 -10 小 时 黑 暗 的 光 照 周 期, 因 为 这 样 会 延 缓 生 物 体 试 验 动 物 的 生 长 当 光 开 启 时, 最 好 有 分 钟 的 过 渡 期, 以 降 低 生 物 体 试 验 动 物 因 突 然 的 光 照 而 受 到 惊 扰 刺 激 ; 当 光 关 闭 时 也 最 好 有 过 渡 期 构 架 材 料 一 : 可 能 接 触 储 备 液, 测 试 液 以 及 生 物 用 水 的 设 备 或 设 施 不 能 含 有 化 学 物, 这 些 化 学 物 可 能 是 通 过 水 溶 液 渗 透 或 溶 解 进 入, 进 而 反 作 用 于 生 物 体 试 验 动 物 另 外, 这 些 12

15 设 备 和 设 施 应 选 择 能 减 少 受 试 物 从 水 中 的 吸 附 的 材 料 优 先 选 择 使 用 玻 璃 316 号 不 锈 钢 尼 龙 和 氟 塑 料 等 材 料, 以 尽 量 减 少 物 质 的 渗 透 稀 释 吸 附, 有 一 个 特 例 就 是 在 海 水 下 测 试 金 属 时 不 应 使 用 不 锈 钢 混 泥 土 和 硬 塑 胶 ( 未 添 加 增 塑 剂 ) 可 用 来 制 作 成 驯 养, 放 置, 适 用 环 境 的 水 箱 和 再 生 水 系 统, 在 使 用 前 须 用 流 动 的 稀 释 水 浸 泡 数 天 再 生 水 系 统 不 应 该 在 海 水 条 件 下 使 用 铸 铁 管, 因 为 胶 体 铁 将 被 加 入 到 稀 释 水, 滤 网 需 要 清 除 铁 锈 粒 子 特 别 设 计 系 统 通 常 是 从 天 然 水 源 中 取 得 海 水 ( 见 指 南 E 729), 在 储 备 液 和 待 测 液 测 试 之 前 或 测 试 过 程 中, 紫 铜 黄 铜 铅 镀 锌 金 属 和 天 然 橡 胶 不 应 接 触 稀 释 水 氯 丁 橡 胶 及 以 上 没 有 提 及 的 材 料 不 应 该 被 使 用, 除 非 是 一 个 敏 感 水 产 品 种, 生 存 时 间 为 48 或 96 个 小 时 ( 见 指 南 E 729), 在 使 用 那 些 材 料 前 应 在 静 水 中 浸 泡 测 量 体 系 统 测 量 系 统 必 须 有 测 试 类 别 测 试 浓 度 测 试 流 速 的 设 计 ; 系 统 可 以 重 复 提 供 待 测 物 质 的 选 定 浓 度 的 设 计 组 合 各 种 洗 涤 器 " 浸 渍 鸟 " 虹 吸 管 泵 螺 线 管 阀 等 的 各 种 测 量 系 统 已 成 功 被 使 用 ( 见 指 南 E 729) 由 于 生 物 富 集 生 物 浓 缩 试 验 通 常 有 一 个 对 照 处 理 和 受 试 物 的 浓 缩, 测 试 系 统 通 常 由 以 下 部 分 组 成, 一 个 测 量 受 试 物 溶 液 的 设 备, 两 个 测 定 稀 释 水 的 装 置 和 两 个 小 型 混 合 槽 ( 或 分 离 槽, 如 果 需 要 使 用 两 个 试 验 槽 ), 混 合 槽 用 于 在 进 入 试 验 槽 前 混 合 各 自 的 测 试 溶 液 在 每 个 试 验 前, 测 试 系 统 应 该 进 行 校 准, 校 准 通 过 测 试 经 过 每 个 试 验 槽 的 流 速 和 测 量 在 每 个 槽 中 受 试 物 的 浓 度 或 在 测 量 系 统 中 每 个 部 分 的 体 积 进 行 在 整 个 测 试 过 程 中, 应 该 每 天 上 下 午 目 测 测 量 系 统 运 转 情 况 必 要 的 时 候 在 测 试 期 间 要 调 整 测 量 系 统 每 个 试 验 槽 中 的 流 速 至 少 要 达 到 每 24 小 时 5 体 倍 体 积 增 加 物, 根 据 容 纳 量 的 情 况 可 能 更 大 在 双 壳 类 软 体 动 物 的 试 验 中, 最 小 必 须 流 速 还 取 决 于 在 稀 释 水 中 食 物 供 给 的 数 量 通 常 使 用 至 少 每 24 小 时 10 倍 体 积 增 加 物 的 流 速 比 较 理 想, 尤 其 在 试 验 的 初 始 阶 段 当 吸 收 最 大 的 时 候, 但 是 较 高 的 流 速 会 增 加 稀 释 水 和 使 用 的 受 试 物 的 数 量 如 果 由 微 生 物 降 解 水 解 氧 化 光 解 还 原 吸 附 或 挥 发 作 用 使 得 受 试 物 快 速 流 失, 达 到 使 用 一 个 较 高 的 流 速 也 是 比 较 理 想 的 在 试 验 的 任 一 特 定 时 间 里, 通 过 任 两 个 试 验 槽 的 流 速 差 别 不 能 超 过 10% 假 如 相 同 数 量 的 实 验 生 物 体 试 验 动 物 从 所 有 的 容 器 中 移 出, 在 所 有 试 验 槽 中, 只 要 流 速 保 持 在 至 少 每 24 小 时 5 个 倍 体 积 增 加 物, 而 且 容 纳 量 和 温 度 保 持 在 合 理 范 围, 溶 液 的 深 度 或 者 流 速, 或 者 两 者 会 等 量 减 少 试 验 槽 在 一 个 对 水 生 物 的 毒 性 测 试 中, 一 个 试 验 槽 应 是 一 个 最 小 的 物 理 单 元 场 所, 并 且 要 13

16 无 水 源 不 过, 每 个 试 验 槽 里 面 可 以 用 屏 风 和 杯 子 来 制 造 两 个 或 两 个 以 上 的 隔 间 这 样 溶 液 就 可 以 从 一 个 隔 间 流 到 另 一 个 隔 间, 为 了 保 证 精 确 度, 不 能 从 一 个 试 验 槽 到 另 一 个 试 验 槽 因 为 试 验 中 溶 液 可 以 在 同 一 个 试 验 槽 内 的 不 同 隔 间 中 流 动, 这 些 同 一 试 验 槽 的 隔 间 中 的 溶 液 温 度 试 剂 的 浓 度 病 原 菌 含 量 和 外 界 污 染 情 况 就 会 比 同 样 试 验 条 件 下 不 同 试 验 槽 的 隔 间 之 间 的 情 况 更 相 近 试 验 槽 应 该 被 保 护 起 来, 这 样 才 可 以 防 止 外 来 细 菌 以 及 降 低 试 剂 和 受 试 物 的 蒸 发 在 测 试 中, 所 有 的 试 验 槽 和 隔 间 必 须 完 全 一 致 试 验 槽 通 常 由 焊 接 的 ( 非 软 焊 ) 不 锈 钢 或 胶 合 双 倍 强 度 或 更 强 的 含 有 机 硅 粘 合 剂 的 窗 户 玻 璃 构 成 塞 子 和 硅 树 脂 粘 合 剂 会 吸 附 一 些 很 难 去 除 的 有 机 氯 和 有 机 磷 农 药 因 此, 试 验 溶 液 应 尽 可 能 避 免 与 塞 子 和 胶 粘 剂 接 触 如 果 实 在 需 要 额 外 的 胶 粘 剂, 它 们 也 应 位 于 容 器 之 外, 而 不 是 容 器 内 部 最 小 尺 寸 的 试 验 槽 和 最 小 深 度 的 试 验 溶 液 依 赖 于 各 试 验 生 物 的 规 模 及 容 纳 量 试 验 槽 的 最 小 的 横 向 尺 寸 应 至 少 是 最 大 的 试 验 生 物 的 最 大 横 向 尺 寸 的 1.5 倍 鱼 的 试 验 溶 液 的 深 度 应 该 至 少 是 最 大 的 实 验 生 物 体 试 验 动 物 高 度 的 3 倍 ; 此 外, 对 于 超 过 0.5 克 ( 湿 重 ) 的 鱼, 试 验 溶 液 的 深 度 至 少 应 为 150 毫 米, 对 于 较 小 的 鱼, 试 验 溶 液 的 深 度 至 少 应 为 50 毫 米 对 于 扩 充 至 150 毫 米 的 容 器, 顶 部 有 时 需 要 加 盖, 以 防 止 鱼 跳 出 对 于 双 壳 类 软 体 动 物, 在 整 个 试 验 过 程 中 试 验 溶 液 应 该 彻 底 淹 没 该 生 物 对 于 壳 嘴 的 尖 端 到 远 端 瓣 的 边 缘 的 距 离 小 于 60 毫 米 双 壳 类 软 体 动 物 的 试 验, 以 及 对 于 小 鱼 ( 少 于 10 克 ) 的 试 验 也 常 常 使 用 300 毫 米 深 的 全 玻 璃 试 验 槽 以 及 30 升 的 溶 液 在 试 验 槽 中 使 用 了 过 量 的 溶 液 将 不 必 要 地 增 加 稀 释 水 和 试 验 使 用 的 材 料 受 试 物 的 量 或 者 平 均 保 持 时 间, 或 两 者 都 不 必 增 加 清 洗 测 量 系 统, 试 验 槽 以 及 用 于 准 备 和 贮 存 稀 释 水 储 藏 溶 液 以 及 试 验 溶 液 的 设 备 应 清 洗 后 才 能 使 用 新 的 设 备 应 该 用 洗 涤 剂 冲 洗, 用 水 水 混 溶 的 有 机 溶 剂 酸 的 水 溶 液 ( 如 10% 的 浓 盐 酸 ) 漂 洗, 并 至 少 两 次 由 蒸 馏 水 去 离 子 水 稀 释 水 漂 洗 ( 某 些 有 机 溶 剂, 可 能 留 下 不 溶 于 水 的 薄 膜 ) 重 铬 酸 钾 硫 酸 清 洁 液, 可 用 于 同 时 含 有 有 机 溶 剂 和 酸 的 地 方, 但 它 也 可 能 会 损 坏 有 机 硅 粘 合 剂, 因 此 需 要 特 殊 的 处 理 技 巧 在 每 次 试 验 结 束 后, 所 有 设 备 若 要 再 次 使 用, 应 立 即 (a) 清 空,(b) 用 水 漂 洗,(c) 按 适 当 的 程 序 清 洗, 以 去 除 受 试 物 ( 如, 使 用 酸 以 消 除 金 属 及 碱 ; 使 用 洗 涤 剂 有 机 溶 剂 或 活 性 炭 以 去 除 有 机 化 学 品 ),(d) 用 蒸 馏 水 去 离 子 水 或 稀 释 水 冲 洗 至 少 两 次 酸 用 于 去 除 矿 物 质, 每 升 200 毫 克 的 次 氯 酸 用 于 去 除 有 机 物 和 消 毒 ( 含 有 每 升 200 毫 克 的 OCl 可 通 过 通 过 将 6 毫 升 液 体 家 用 含 氯 漂 白 剂 加 1 升 的 水 中 获 得 的 氯 酸 盐 对 于 大 部 分 水 产 动 物 来 说 是 有 毒 的 (14), 并 且 其 它 很 难 从 材 料 上 冲 洗 掉 这 它 常 常 是 通 过 与 硫 代 硫 酸 钠 亚 硫 酸 钠 或 亚 硫 酸 氢 钠 反 应, 或 通 过 在 蒸 馏 水 中 14

17 20 分 钟 的 高 温 消 毒, 或 通 过 干 燥 设 备 并 放 置 至 少 24 小 时 后 才 开 启 使 用 来 去 除 ) 测 量 系 统 和 试 验 槽 应 在 使 用 之 前 用 稀 释 水 清 洗 可 接 受 性 新 的 放 置 适 应 以 及 试 验 设 施 应 进 行 毒 性 试 验 后 才 能 开 启 使 用 5.5 分 析 步 骤 试 验 的 主 要 步 骤 包 括 试 验 设 计 预 试 验 试 验 的 吸 收 阶 段 清 除 阶 段 以 及 分 析 阶 段 进 行 一 个 预 备 实 验 去 完 善 决 定 性 实 验 的 实 验 条 件 是 很 有 好 处 的, 比 如, 选 择 测 定 物 质 的 浓 度, 聚 集 阶 段 和 释 放 阶 段 的 持 续 时 间, 但 预 试 验 非 必 须 步 骤 其 具 体 说 明 如 下 : 试 验 条 件 溶 解 氧 浓 度 保 持 在 60% 到 100% 饱 和 度 之 间 离 子 氨 的 浓 度 不 应 超 过 20μg/L; 温 度 : 推 荐 研 究 者 选 择 表 1 所 列 温 度 作 为 鱼 浓 缩 试 验 的 试 验 温 度, 在 测 试 过 程 中, 温 差 不 超 过 2 海 水 双 壳 类 软 体 动 物 生 物 富 集 生 物 浓 缩 试 验 一 般 温 度 控 制 在 8-28 C 之 间, 温 差 必 须 小 于 10, 并 保 持 尽 可 能 低 的 温 度 以 抑 制 产 卵 容 纳 量 : 容 纳 量 用 试 验 槽 每 升 溶 液 中 的 生 物 体 试 验 动 物 的 克 数 ( 鱼 类 的 全 身, 双 壳 类 软 体 动 物 的 整 个 软 组 织 ; 体 湿 需 吸 干 ) 表 示 鱼 类 和 软 体 动 物 双 壳 类 的 生 物 浓 缩 试 验, 低 容 纳 量 和 高 流 速 是 比 较 合 适 的 鱼 类 容 纳 量 在 24 小 时 内 不 超 过 1 克 /L 升, 且 测 试 期 间 任 何 时 候 都 不 能 超 过 10 克 /L 升 双 壳 类 软 体 动 物 的 最 大 容 纳 量 主 要 取 决 于 在 稀 释 水 中 食 物 的 数 量, 通 常 如 果 补 充 的 海 水 藻 类 不 会 添 加 到 稀 释 水 中, 其 从 壳 嘴 的 尖 端 到 远 端 瓣 的 边 缘 的 距 离 为 40 至 60 毫 米 距 离, 容 纳 量 为 每 小 时 通 过 试 验 槽 的 每 升 溶 液 应 不 超 过 一 个 生 物 体 试 验 动 物 试 验 设 计 生 物 浓 缩 试 验 设 计 的 重 点 包 括 每 一 次 处 理 的 的 试 验 池 试 验 槽 的 数 目, 吸 收 和 清 除 阶 段 的 持 续 时 间, 每 个 阶 段 采 样 点 的 数 目 和 间 隔, 每 个 采 样 点 样 本 数 量 和 分 析 的 样 本 数 量 适 当 的 采 样 程 序 可 参 见 表 2 设 立 同 种 生 物 体 试 验 动 物 的 处 理 对 照 组, 包 括 一 个 吸 收 阶 段 和 一 个 清 除 阶 段, 在 对 照 处 理 中, 两 个 阶 段 中 的 生 物 体 试 验 动 物 暴 露 在 没 有 添 加 任 何 受 试 物 的 稀 释 水 中 15

18 表 2 最 少 生 物 采 样 程 序 物 质 Log K ow A B S C (days) B D 吸 收 阶 段 Initial S/ S/ S/ S/ E 附 加 S S+1 F or S + S/12 G H U=S+2 F or S+S/6 G H 清 除 阶 段 U+D/ J U+D/ J U+3D;/r J U+D J A K ow = 辛 醇 - 水 分 配 系 数 B 或 更 高 C S= 预 计 表 观 稳 定 状 态 的 天 数 ( 在 这 些 例 子 中,S 从 K ow 估 算 出 ) D U 吸 收 阶 段 长 E 额 外 中 期 采 样 点, 使 任 何 两 个 连 续 的 点 多 余 七 天 F 当 S 少 于 12 天 时 G 当 S 在 12 至 24 天 之 间 H 吸 收 阶 段 不 超 过 28 天 D 清 除 阶 段 =S 的 长 度 J D=S=U=28 天 吸 收 时 间 的 选 择 吸 收 时 间 应 该 持 续 至 达 到 表 观 稳 定 状 态 或 到 了 28 天, 实 现 表 观 稳 态 的 标 准 就 是 采 取 适 当 的 间 隔 的 三 套 样 本 ( 鱼 的 全 身 及 双 壳 类 软 体 动 物 的 总 软 组 织 ) 的 BCFs 无 显 著 差 异 (a = 0.05) 16

19 以 S 表 示 表 观 稳 定 状 态 的 天 数 吸 收 阶 段 生 物 体 的 采 样 方 法 除 对 照 组 外, 吸 收 阶 段 至 少 有 5 个 采 样 时 间 点,5 个 采 样 点 应 接 近 s/16,s/ 8,s/4,s/2 和 s 经 过 S/4 时 间, 测 试 样 品 的 浓 度 不 应 低 于 20% 清 除 时 间 的 选 择 清 除 阶 段 应 该 持 续 至 测 试 生 物 体 试 验 动 物 样 品 中 受 试 物 浓 度 小 于 百 分 之 十 的 稳 定 状 态 浓 度 或 低 于 检 出 限 清 除 阶 段 的 生 物 体 抽 样 方 法 除 对 照 组 外, 清 除 阶 段 至 少 有 4 个 采 样 点, 四 个 取 样 点 依 次 为 D/4 D/2 3D/4 和 D 水 样 的 采 样 方 法 清 除 阶 段 采 集 生 物 体 试 验 动 物 样 品 时, 至 少 采 集 两 个 样 本, 样 品 的 测 试 溶 液 也 应 在 清 除 阶 段 开 始 的 24 和 48 小 时 之 前 进 行 收 集, 并 在 清 除 阶 段 至 少 每 三 天 收 集 一 次 对 照 组 - 对 照 组 生 物 体 试 验 动 物 的 取 样 应 在 清 除 阶 段 开 始 和 结 束 的 时 候, 对 照 处 理 的 溶 液 样 品 也 是 如 此 试 验 将 测 试 生 物 体 试 验 动 物 放 置 在 已 达 到 稳 定 浓 度 的 测 试 溶 液 中, 客 观 随 机 地 分 布 在 各 试 验 槽 中 鱼 至 少 每 天 喂 食 一 次, 试 验 槽 每 天 抽 吸 清 洗 一 次 测 试 期 间 每 天 都 应 该 观 察 每 次 处 理 生 物 体 试 验 动 物 后 其 患 病 受 扰 受 刺 激 刺 痛 和 其 他 不 利 影 响 等 的 迹 象 试 验 动 物 的 取 样 按 要 求 采 集 试 验 动 物 的 样 品 鱼 样 以 其 不 受 影 响 的 方 式 取 走, 每 一 次 处 理 使 用 一 个 不 同 的 网 鱼 样 取 出 后, 用 蒸 馏 水 漂 洗, 如 有 杂 质 污 染 需 吸 干, 用 解 剖 针 插 入 大 脑 杀 死 或 用 剪 刀 切 断 脊 髓 以 上 区 域 鱼 的 重 量 ( 体 湿 需 吸 干 ) 和 标 准 长 度 ( 从 嘴 尖 到 尾 椎 蒂 ) 应 该 在 取 样 后 15 分 钟 内 测 定, 如 果 鱼 性 成 熟, 则 要 确 定 雌 雄 整 个 身 体 的 分 析 应 在 8 小 时 完 成, 否 则 用 适 合 受 试 物 的 方 式 保 存 双 壳 类 软 体 动 物 取 样 后 要 测 量 从 壳 嘴 的 尖 端 到 远 端 瓣 的 边 缘 的 距 离 贝 壳 要 通 过 切 断 闭 壳 肌 打 开, 不 切 开 动 物, 摇 动 软 体 动 物 3 次, 以 消 除 多 余 的 水, 并 去 除 顶 部 壳 余 下 的 闭 壳 肌, 应 从 下 面 壳 上 所 有 软 组 织 完 好 无 损 地 切 断 拆 去 除 称 重 整 个 软 组 织, 并 且 在 8 小 时 内 分 析, 否 则 用 适 合 受 试 物 的 方 式 保 存 在 鱼 类 和 扇 贝 测 试 中,4 个 肌 肉 的 样 品 ( 有 或 没 有 皮 肤 ) 或 内 收 肌 从 其 它 生 物 体 试 验 动 物 的 可 食 性 组 织 中 获 得, 取 样 时 间 是 在 吸 收 阶 段 结 束 时 鱼 性 成 熟 或 者 有 双 壳 类 软 体 动 物 产 生, 应 对 雄 性 和 雌 性 的 脂 肪 含 量 分 别 测 量 对 照 生 物 17

20 体 试 验 动 物 中 的 脂 肪 含 量 以 及 受 试 物 浓 度 在 吸 收 开 始 和 结 束 阶 段 测 定 如 使 用 放 射 性 受 试 物 质, 有 时 需 要 分 析 组 织 样 本 所 有 被 测 试 生 物 体 试 验 动 物 应 该 在 测 试 结 束 时 销 毁 试 验 溶 液 的 测 量 : 水 质 在 测 量 开 始 时 进 行 中 和 完 成 时 需 检 测 稀 释 水 和 试 验 用 盐 水 的 硬 度 碱 度 ph 值 和 电 导 率 对 照 组 每 周 检 测 一 次 盐 水 的 盐 度 需 每 天 测 量 最 高 测 试 浓 度 时 的 碱 度 和 ph 值 需 测 定 在 双 壳 类 软 体 动 物 试 验 过 程 中, 应 该 每 周 测 试 试 验 槽 中 的 颗 粒 物 和 有 机 碳 总 量 ; 如 果 受 试 物 是 一 个 中 性 有 机 化 工 品, 其 log Kow 大 于 4, 应 该 每 周 测 量 溶 解 性 有 机 碳 温 度 - 温 度 至 少 每 小 时 监 控 一 次 或 者 每 天 测 定 一 次 最 大 和 最 小 温 度 此 外, 测 试 的 开 始 时 进 行 中 和 完 成 时 开 始, 期 间 和 结 束 时, 在 所 有 的 测 试 槽 中 必 须 调 节 温 度 受 试 物 : 按 要 求 对 溶 液 中 受 试 物 的 浓 度 进 行 测 量 水 样 应 从 测 试 槽 中 距 离 顶 部 底 部 和 侧 面 的 中 间 点 用 滴 管 或 虹 吸 管 或 氟 烃 塑 料 软 管 吸 取, 确 保 不 含 有 任 何 液 体 表 面 的 泡 沫 或 者 是 从 底 部 或 侧 面 搅 起 的 物 质 容 器 和 吸 管 或 虹 吸 管 应 该 在 收 集 样 品 前 用 试 验 溶 液 润 洗 水 样 应 该 收 集 在 合 适 大 小 的 容 器 内, 以 便 于 受 试 物 可 以 直 接 被 清 除 或 分 析 如 果 存 在 于 试 验 溶 液 的 固 体 颗 粒 含 量 大 于 5mg/L, 需 取 两 个 样 品, 一 个 样 品 做 上 述 处 理, 另 一 个 样 品 在 取 样 和 分 析 前 进 行 过 滤 或 者 离 心 处 理, 以 确 定 受 试 物 与 固 体 颗 粒 相 关 的 百 分 比 在 吸 收 阶 段 期 间 获 得 的 最 高 测 定 含 量 除 以 最 低 值 必 须 小 于 2 否 则, 测 量 系 统 应 被 校 正, 并 且 应 分 析 从 正 常 的 试 验 槽 得 到 的 其 他 样 品, 以 确 定 究 竟 是 抽 样 不 当 还 是 分 析 方 法 是 不 恰 当 分 析 除 了 母 材 受 试 物, 通 常 也 要 测 定 在 水 样 和 组 织 样 品 中 其 他 主 要 产 物 质 物 通 常 在 48 小 时 的 采 集 时 间 内 对 组 织 样 品 和 水 样 进 行 分 析 假 如 样 品 不 能 立 即 分 析, 它 们 应 该 作 适 当 的 处 理 和 储 存 各 数 据 的 获 取, 应 尽 可 能 依 据 相 关 的 国 家 标 准 当 测 量 项 目 没 有 相 关 的 国 家 标 准 或 标 准 不 够 充 分 详 细, 选 取 其 他 可 信 赖 的 来 源 非 离 子 化 的 氨 浓 度 可 以 从 ph 温 度 和 氨 的 浓 度 通 过 计 算 而 得 到 放 射 性 物 质 的 分 析 : 当 生 物 富 集 生 物 浓 缩 测 试 通 过 放 射 性 同 位 素 标 记 时, 组 织 样 品 可 以 通 过 使 用 一 种 组 织 增 溶 剂 来 制 备, 以 方 便 计 算 不 过 然 而, 通 常 通 过 燃 烧 样 品 后 捕 获 生 成 的 含 放 射 性 同 位 18

21 素 标 记 的 二 氧 化 碳, 这 种 方 法 更 为 简 单 当 生 物 富 集 生 物 浓 缩 测 试 通 过 放 射 性 同 位 素 标 记 有 机 物 质 时, 总 的 放 射 性 应 该 对 所 有 样 品 测 量 此 外, 所 选 的 水 样 和 组 织 样 品 应 该 被 检 测, 以 确 定 与 杂 质 反 应 和 生 物 降 解 产 物 有 关 的 放 射 性 的 百 分 率, 这 通 常 用 气 相 或 液 相 色 谱 的 方 法 6 标 准 主 要 技 术 内 容 的 解 释 为 叙 述 方 便, 本 标 准 将 试 验 中 所 用 试 剂 和 材 料 部 分 仪 器 和 设 备 部 分 作 为 附 录 列 在 标 准 中, 同 时 对 试 验 的 可 接 受 性 规 定 如 下 : 当 下 列 一 种 或 多 种 情 况 发 生 时, 一 个 生 物 富 集 生 物 浓 缩 测 试 通 常 应 被 认 为 是 无 效 的, 除 非, 例 如 温 度 被 测 量 了 无 数 次 只 出 现 高 于 6 的 一 次 温 差 的 情 况 可 以 例 外 但 是, 如 果 温 度 测 量 只 进 行 了 最 少 允 许 次 数 的 测 量, 有 一 次 高 于 6 的 温 差 一 次 温 差 就 可 能 表 明 意 味 着, 如 果 继 续 进 行 多 次 测 量, 就 会 有 更 多 的 这 种 温 差 情 况 已 经 被 检 测 了 6.1 测 试 进 行 时, 生 物 体 试 验 动 物 在 防 病 菌 处 理 或 治 疗 后 为 防 病 菌 放 置 时 间 在 10 天 内, 或 者 有 机 物 处 理 在 测 试 阶 段 试 验 开 始 进 行 6.2 在 它 们 试 验 动 物 被 放 置 于 试 验 槽 之 前, 最 后 的 48 小 时 内, 在 测 试 温 度 下 测 试 的 生 动 物 物 体 不 能 在 稀 释 的 水 溶 液 中 喂 养 至 少 48 小 时 6.3 吸 收 阶 段 在 明 显 到 达 平 衡 态 之 前 或 没 到 达 28 天 之 前 即 被 终 止 6.4 在 任 何 处 理 中, 超 过 10% 的 生 物 体 试 验 动 物 死 亡 或 者 出 现 明 显 症 状 的 疾 病 受 扰 受 刺 激 或 者 其 他 不 良 的 特 征 6.5 在 鱼 类 的 试 验 中 所 测 的 最 高 和 最 低 测 试 温 度 相 差 超 过 了 6, 或 者 在 双 壳 类 软 体 动 物 的 试 验 中 相 差 超 过 了 在 任 何 试 验 槽 中 测 量 溶 解 氧 浓 度 的 加 权 平 均 值 少 于 饱 和 值 的 60% 6.7 在 试 验 溶 液 中 溶 液 的 浓 度 没 有 按 的 要 求 测 试 6.8 在 吸 收 阶 段 中, 受 试 物 测 定 的 最 高 浓 度 达 到 了 同 一 试 验 槽 中 测 定 的 最 低 浓 度 的 2 倍 以 上 6.9 当 使 用 放 射 性 同 位 素 标 记 受 试 物 时, 水 样 和 组 织 样 品 中 与 杂 质 相 关 的 放 射 性 百 分 率 并 不 是 通 过 气 相 或 液 相 色 谱 确 定 的 6.10 需 要 对 生 物 体 试 验 动 物 和 对 照 试 验 中 的 水 以 及 ( 在 对 照 试 验 中 和 食 物 中 的 水, 中 受 试 物 的 浓 度 的 显 著 性 影 响 进 行 评 估 6.11 所 有 组 织 分 析 结 果 要 立 足 基 于 湿 组 织 重 量, 如 果 结 果 基 于 干 组 织 重 量, 要 确 定 干 湿 重 量 比 率 19

22 6.13 每 种 分 析 方 法 的 精 确 值 与 偏 差 应 该 由 恰 当 的 基 质 来 决 定, 即 那 就 是, 具 有 价 值 的 相 关 的 组 织, 即 从 含 有 测 试 生 物 体 试 验 动 物 的 稀 释 水 溶 液 中 提 取 的 样 品 以 及 食 物 在 适 当 的 时 候, 试 剂 空 白 回 收 率 和 认 证 的 相 关 标 准 应 该 在 分 析 样 品 时 被 考 虑 20