方 式, 故 急 需 找 出 抑 制 肝 癌 惡 化 或 轉 移 的 藥 物 根 據 文 獻 資 料, 草 藥 具 有 抗 癌 潛 力 的 成 分, 同 時 亦 具 低 副 作 用 的 特 性, 在 傳 統 醫 學 上 已 被 廣 泛 應 用 因 此 我 們 將 利 用 細 胞 培 養 和 動 物
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1 草 藥 對 癌 症 轉 移 之 影 響 368 研 究 者 : 曾 馨 逸 藺 品 曄 指 導 者 : 李 明 學 教 授 林 玟 娟 老 師 摘 要 癌 轉 移 是 大 部 分 癌 症 治 療 失 敗 的 主 因 癌 細 胞 轉 移 首 先 涉 及 由 癌 細 胞 不 正 常 地 活 化 其 周 圍 相 關 蛋 白 水 解 酶 並 將 細 胞 外 基 底 膜 基 質 (ECM) 降 解, 讓 細 胞 得 以 侵 襲 周 圍 組 織 或 進 而 轉 移 至 其 他 器 官 因 此 本 研 究 聚 焦 於 研 發 可 以 阻 止 癌 細 胞 侵 襲 其 他 組 織 或 轉 移 的 藥 物, 並 期 望 能 以 藥 物 控 制 蛋 白 水 解 酶 的 活 性, 進 而 達 到 降 低 癌 症 轉 移 的 機 會 藉 由 體 外 細 胞 移 動 侵 襲 力 實 驗, 我 們 從 二 十 二 種 草 藥 萃 取 物, 除 了 薑 黃 外 並 找 到 其 他 兩 種 草 藥 萃 取 物 (MSL-G 和 MSL-H) 可 有 效 地 抑 制 肝 肺 和 攝 護 腺 癌 細 胞 的 移 動 侵 襲 力 進 而 利 用 MTT 實 驗, 得 知 此 兩 種 萃 取 物 對 肝 癌 細 胞 (Huh7) 的 半 抑 制 率 濃 度 (IC50) 我 們 的 研 究 結 果 顯 示, 此 二 草 藥 萃 取 物 可 有 效 抑 制 基 質 金 屬 蛋 白 酶 (matrix metalloproteinase 2 and 9 (MMP2/9)) 的 活 性, 並 且 利 用 RT-PCR 發 現 草 藥 萃 取 物 可 促 進 金 屬 蛋 白 酶 抑 制 蛋 白 (TIMP1) 的 表 現 綜 合 以 上 結 果 顯 示 並 建 議 此 兩 種 草 藥 萃 取 物 可 能 促 使 TIMP1 的 表 現 進 而 抑 制 MMP2/9 的 活 性, 或 同 時 具 抑 制 MMP2/9 的 蛋 白 酶 活 化 機 制 實 驗 結 果 並 指 出 此 兩 種 萃 取 物 具 有 開 發 為 抗 癌 藥 物 之 潛 力, 並 計 畫 將 利 用 動 物 實 驗 進 一 步 驗 證 此 藥 物 對 癌 細 胞 轉 移 的 效 用 壹 研 究 動 機 癌 症 死 亡 率 位 居 全 球 第 三 (1), 在 臺 灣 則 高 居 第 二 位 人 類 肝 細 胞 癌 是 世 界 上 最 常 見 的 腫 瘤 之 一, 雖 然 外 科 手 術, 如 肝 切 除 和 肝 移 植 仍 是 肝 癌 的 第 一 線 治 療, 但 整 體 而 言, 超 過 80% 的 患 者 不 適 合 進 行 手 術 或 當 患 者 接 受 根 治 性 手 術 切 除 後, 其 高 腫 瘤 復 發 率 和 轉 移 率 仍 然 是 造 成 病 人 預 後 差 及 高 死 亡 率 的 主 因 (2) 其 他 治 療 法, 如 血 管 栓 塞 法 雖 可 減 輕 病 人 的 痛 苦, 但 做 完 會 有 發 燒 腹 痛 的 現 象, 且 須 做 多 次 才 可 完 全 殺 死 癌 細 胞 ; 電 燒 療 法 復 原 快, 治 療 時 卻 易 局 部 疼 痛, 且 並 非 適 合 所 有 病 人 使 用 ; 至 於 藥 物 療 法, 目 前 唯 一 證 實 有 效 的 標 靶 藥 物 是 蕾 沙 瓦, 但 副 作 用 大 藥 價 昂 貴, 平 均 僅 能 延 長 壽 命 兩 個 多 月 (3) 草 藥 歷 史 悠 久, 作 用 溫 和, 並 具 有 廣 泛 的 調 理 範 圍 其 中 不 乏 具 有 保 肝 (4) 抗 肝 癌 作 用 的 藥 材 (5-8), 適 合 用 來 開 發 抗 肝 癌 的 藥 物 草 藥 療 法 在 東 方 醫 學 中 被 廣 泛 的 使 用, 而 在 西 方 醫 學 中, 由 於 過 往 缺 乏 實 證 科 學 之 系 統 化 資 料 與 客 觀 證 據 可 以 驗 證 中 草 藥 對 於 癌 症 治 療 的 效 用, 大 多 是 被 視 為 營 養 補 充 劑, 對 於 中 草 藥 運 用 在 臨 床 醫 學 上 造 成 限 制 在 癌 症 患 者 中, 草 藥 療 法 屬 非 常 規 藥 品 治 療, 其 使 用 率 約 為 5~60%(9, 10) 本 研 究 企 圖 透 過 嚴 謹 的 實 驗 設 計, 找 尋 中 草 藥 萃 取 物 中 具 有 效 抑 制 癌 症 細 胞 移 轉 之 成 分, 並 進 一 步 探 討 其 分 子 作 用 機 制 癌 症 最 主 要 的 致 死 原 因 是 癌 細 胞 轉 移 癌 轉 移 涉 及 細 胞 外 基 底 膜 基 質 (ECM) 被 各 式 蛋 白 水 解 酶 所 降 解 因 此 我 們 希 望 從 草 藥 萃 取 物 中 找 出 可 有 效 抑 制 蛋 白 水 解 酶 活 性 的 成 分, 以 期 望 對 肝 癌 轉 移 的 治 療 有 所 貢 獻 貳 研 究 目 的 轉 移 是 癌 症 惡 化 的 指 標, 而 且 通 常 是 造 成 病 人 死 亡 的 主 因 (11) 當 細 胞 表 面 蛋 白 水 解 作 用 失 調, 常 使 癌 細 胞 獲 得 轉 移 能 力 (12-15) 目 前 針 對 復 發 轉 移, 尚 未 有 良 好 的 治 療
2 方 式, 故 急 需 找 出 抑 制 肝 癌 惡 化 或 轉 移 的 藥 物 根 據 文 獻 資 料, 草 藥 具 有 抗 癌 潛 力 的 成 分, 同 時 亦 具 低 副 作 用 的 特 性, 在 傳 統 醫 學 上 已 被 廣 泛 應 用 因 此 我 們 將 利 用 細 胞 培 養 和 動 物 實 驗 研 究 方 式, 分 析 草 藥 萃 取 物 中 具 潛 力 的 抗 癌 藥 物, 找 出 能 有 效 抑 制 蛋 白 水 解 酶 活 性 的 成 分, 進 而 降 低 肝 癌 細 胞 侵 襲 和 轉 移 的 能 力 目 前 文 獻 指 出 基 質 金 屬 蛋 白 酶 (matrix metalloproteinase, mmp) 與 惡 性 腫 瘤 的 侵 襲 和 轉 移 有 極 密 切 的 關 聯 高 表 達 的 MMP2 與 MMP9 高 度 關 聯 著 腫 瘤 的 惡 化 程 度 與 患 者 的 不 良 生 存 率 其 中 在 人 類 肝 細 胞 癌 的 研 究 比 較 分 析 發 現 MMP9 的 表 達 對 肝 癌 細 胞 的 侵 襲 力 和 進 展, 扮 演 關 鍵 性 的 角 色 (16-21) 肝 癌 患 者 在 手 術 切 除 後, 腫 瘤 復 發 和 在 生 存 預 估 上,MMP9 表 達 量 亦 較 MMP2, 有 高 度 相 關 (22-24) 然 而, 有 些 研 究 亦 表 明,MMP2 的 活 化 也 與 肝 癌 進 展 有 關 (25-28) 因 為 草 藥 具 有 抗 癌 潛 力 的 成 份, 同 時 亦 具 低 副 作 用 的 特 性, 本 計 劃 將 利 用 細 胞 培 養 和 動 物 實 驗 研 究 方 式, 分 析 找 出 具 潛 力 的 抗 肝 癌 藥 物, 以 期 能 篩 選 出 有 效 抑 制 蛋 白 水 解 酶 活 性, 特 別 針 對 基 質 金 屬 蛋 白 酶 MMP2 和 MMP9 的 活 性, 以 及 基 質 金 屬 蛋 白 酶 抑 制 蛋 白 TIMP1 與 TIMP2 的 表 達, 並 計 畫 探 討 TIMP1/2 對 蛋 白 酶 活 性 之 影 響 參 研 究 設 備 及 器 材 一 Polymerase chain reaction (PCR) machine-astec PC320 Target Gene Primer 序 列 (5 3 ) 26S Forward CCG TGC CTC CAA GAT GAC AAA G (A house-keeping gene) Reverse ACT CAG CTC CTT ACA TGG GCT T mmp2 Forward AAG TCT GGA GCG ATG TGA CCC CA Reverse CTT CAC ACG GAC CAC TTG GCC TTC T mmp9 Forward TTG ACA GCG ACA AGA AGT GG (179bp) Reverse GCC ATT CAC GTC GTC CTT AT TIMP1 Forward ACC ACC TTA TAC CAG CGT TAT GA Reverse GGT GTA GAC GAA CCG GAT GTC TIMP2 Forward GCT GCG AGT GCA AGA TCA C Reverse TGG TGC CCG TTG ATG TTC TTC 二 垂 直 型 蛋 白 質 電 泳 槽 mini western electrophoresis blotting system with transfer tank(hoefer, USA) 三 DNA 電 泳 槽 mini gel DNA electrophoresis(hoefer, USA) 肆 研 究 過 程 或 方 法 本 計 畫 之 細 胞 為 Huh-7 肝 癌 細 胞, 來 自 57 歲 日 本 男 性 Huh-7 是 一 種 上 皮 細 胞 狀 的 致 瘤 性 細 胞 一 以 水 萃 的 方 式 萃 取 草 藥 : 代 號 MSL-G 和 MSL-H 之 草 藥 萃 取 物 二 我 們 首 先 分 析 草 藥 萃 取 物 對 Huh7 細 胞 之 毒 性 為 了 達 到 此 一 目 標 我 們 將 利 用 MTT 分 析 法 及 直 接 計 數 細 胞 數 目, 分 析 每 一 種 草 藥 萃 取 物 抑 制 細 胞 增 生 50% 之 濃 度 (IC50) ( 一 ) 直 接 計 數 細 胞 數 目 : 1. 將 個 肝 癌 細 胞 培 養 於 12-well 的 孔 盤 內 2. 約 24 小 時 隔 夜 培 養 後, 加 入 不 同 濃 度 草 藥 萃 取 物 處 理 3. 培 養 及 72 小 時 後, 以 trypsin-edta 溶 液 作 用 369
3 4. 取 出 細 胞 並 加 入 trypan blue 染 劑, 利 用 細 胞 計 數 器, 算 出 活 的 細 胞 數 目 ( 二 ) MTT 分 析 法 : ( 此 方 法 可 用 以 分 析 活 的 細 胞 數 目 ) 1. 當 細 胞 培 養 及 72 小 時 後, 另 外 每 一 孔 盤 內 加 入 8μl 之 MTT (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 2. 反 應 2 小 時 之 後, 將 培 養 液 吸 出, 再 加 入 100μl DMSO 混 均 勻 3. 溶 出 成 結 晶 狀 的 深 紫 色 產 物 formazan, 以 OD 570 測 其 吸 光 值 4. 以 空 的 well( 含 MTT) 數 值 為 零 校 正 並 以 不 含 藥 物 溶 劑 為 控 制 組 三 利 用 RT-PCR(Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction, 逆 轉 錄 PCR, 或 稱 反 轉 錄 PCR), 以 偵 測 基 質 金 屬 蛋 白 酶 之 RNA 表 現 量 ( 一 ) 以 TRIzolTM (Invitrogen) 試 劑 萃 取 細 胞 或 組 織 之 total RNA ( 二 ) 以 RNase-free DNase I 處 理 以 去 除 DNA ( 三 ) 以 SuperScriptTM II Reverse Transcriptase kit 將 RNA 反 轉 錄 成 cdna ( 四 ) 取 1μl cdna 至 PCR 反 應 溶 液 中, 利 用 Taq polymerase 進 行 30 cycles PCR 反 應 ( 五 ) 其 產 物 再 以 2 % agarose 膠 電 泳 分 離, 以 ethidium bromide 染 色 並 顯 像 選 出 target cell 選 出 target gene 作 為 primer PCR 配 方 Huh7 細 胞 分 別 作 control ( 不 加 藥 ) 加 入 MSL-G 或 MSL-H 的 處 理 26S (a house-keeping gene) MMP2 與 MMP9 ( 基 質 金 屬 蛋 白 酶 ) TIMP1 與 TIMP2 ( 基 質 金 屬 蛋 白 酶 抑 制 蛋 白 ) 先 將 primer(target gene) taq premix D.D.water 混 勻 再 加 入 相 同 體 積 至 各 反 應 管 內 加 入 template, 並 做 不 加 template 的 對 照 組 混 勻 後, 進 行 PCR 反 應 四 明 膠 酶 譜 分 析 Gelatin-zymography (gelatinase 活 性 測 試 ) ( 一 ) 將 Huh7 細 胞 培 養 於 直 徑 6 cm 的 培 養 皿 中 ( 二 ) 使 用 serum-free 的 培 養 液, 一 天 後 即 可 收 培 養 液 ( 三 ) 以 1000rpm 離 心 5min, 將 細 胞 碎 片 去 除 ( 四 ) 將 上 清 液 吸 起 後, 再 以 3000rpm 離 心 10min ( 五 ) 將 上 清 液 吸 起 後, 使 用 centrifugal filter 濃 縮 至 少 50X ( 六 ) 定 量 (mmp protein) ( 七 ) 配 製 sample( 加 入 不 含 還 原 劑 的 電 泳 緩 衝 液, 且 不 能 煮 沸 ) ( 八 ) 製 備 0.1 % gelatin-8 % SDS-PAGE 電 泳 膠 片, 置 於 電 泳 槽 中, 並 加 入 電 泳 緩 衝 液 ( 九 ) 取 蛋 白 樣 品 ( 蛋 白 總 量 10μg), 加 入 loading buffer 後, 將 樣 品 注 入 到 電 泳 片 中, 以 120V 進 行 電 泳 分 離 370
4 ( 十 ) 大 約 3 小 時 之 後, 將 膠 拆 下, 加 入 50 ml 的 washing buffer (0.05 M Tris-HCl ph 8.8, 2.5% Triton X-100), 在 室 溫 下 洗 30 分 鐘, 共 兩 次 ( 十 一 ) 倒 掉 washing buffer 後, 加 入 50 ml 的 reaction buffer (0.05 M Tris-HCl ph 8.8, 5 mm CaCl2, 0.02% NaN3), 於 37 C 恆 溫 箱 中 反 應 16 小 時 ( 十 二 ) 將 反 應 完 後 的 gel, 以 staining buffer 染 色 30 min 後, 再 以 退 色 液 退 染 並 照 相 五 細 胞 侵 襲 實 驗 (invasion assay) 利 用 Boyden chamber 測 試 細 胞 爬 行 能 力 作 為 判 定 腫 瘤 細 胞 侵 襲 能 力 的 指 標 ( 一 ) 於 上 層 chamber 鋪 上 100μl 的 3% matrigel (Invitrogen), 用 來 模 擬 人 類 細 胞 外 基 質 的 環 境 下 層 well 置 入 750μl 的 含 10%FBS 之 培 養 液 ( 二 ) 上 下 層 先 加 入 萃 取 草 藥 三 十 分 鐘 之 後 ( 三 ) 再 將 細 胞 置 入 上 層 ( 培 養 液 不 含 血 清 ) ( 四 ) 移 入 培 養 箱 16 小 時 ( 五 ) 用 3.7% formaldehyde 將 貼 附 於 下 層 濾 膜 細 胞 固 定 ( 六 ) 再 利 用 0.2% 結 晶 紫 染 色, 次 以 棉 花 將 上 層 細 胞 抹 除, 於 顯 微 鏡 下 照 相 並 觀 察 計 算 細 胞, 分 析 細 胞 轉 移 能 力 伍 研 究 結 果 圖 一
5 圖 一 -2 圖 一
6 圖 一 -4 圖 一 IC50 測 量 草 藥 致 使 細 胞 死 亡 率 到 達 一 半 之 濃 度 在 草 藥 對 細 胞 毒 性 方 面,IC50 較 高 的 MSL-H 為 較 佳 的 草 藥 假 如 是 要 以 殺 死 細 胞 為 目 的, 那 IC50 低 一 點 比 較 符 合 效 益, 但 本 實 驗 是 要 找 抑 制 轉 移 的 草 藥, 所 以 要 找 不 傷 害 正 常 細 胞, 即 IC50 要 高, 卻 又 能 以 低 濃 度 有 效 抑 制 癌 細 胞 轉 移 如 此, 對 病 人 毒 性 低, 但 又 可 抑 制 癌 轉 移, 以 利 後 續 治 療 圖 二 分 析 十 一 種 草 藥 對 高 侵 襲 力 Huh7 細 胞 的 影 響 我 們 分 析 這 些 藥 物 對 高 侵 襲 力 肝 癌 細 胞 Huh7 的 效 用 利 用 細 胞 外 間 質 塗 抹 的 容 器 分 析, 將 Huh7 細 胞 培 養 於 容 器 上 層, 並 加 入 其 IC50 一 半 劑 量 的 草 藥, 讓 其 爬 行 16 小 時 結 果 顯 示 薑 黃 MSL-G MSL-H 萃 取 物 對 高 轉 移 性 的 肝 癌 細 胞 侵 襲 力, 有 明 顯 的 抑 制 作 用 373
7 圖 三 分 析 在 不 同 濃 度 下,MSL-G MSL-H 草 藥 萃 取 物 對 Huh7 細 胞 株 轉 移 之 影 響 結 果 顯 示,MSL-G 之 最 低 有 效 濃 度 可 達 0.4mg/ml,MSL-H 之 最 低 有 效 濃 度 可 達 2mg/ml 兩 種 草 藥 在 適 當 濃 度 下 可 有 效 抑 制 癌 細 胞 的 轉 移 374
8 圖 四 利 用 gelatin-zymography 測 試 細 胞 gelatinase(mmp2) 之 活 性 圖 五 利 用 gelatin-zymography 測 試 細 胞 gelatinase(mmp2) 之 活 性 之 量 化 圖 表 本 方 法 將 鑑 定 MSL-G, MSL-H 草 藥 萃 取 物 對 Huh7 細 胞 株 之 MMP2 蛋 白 質 活 性 之 影 響 結 果 顯 示, 此 二 種 草 藥 萃 取 物 可 有 效 抑 制 MMP2 蛋 白 質 之 活 性 375
9 圖 六 用 RT-PCR 實 驗 分 析 兩 種 草 藥 (MSL-G, MSL-H) 對 金 屬 間 質 蛋 白 酶 (MMP2/9) 及 其 抑 制 蛋 白 (TIMP1/2) 之 基 因 表 現 量 之 影 響 376
10 圖 七 用 RT-PCR 實 驗 分 析 兩 種 草 藥 (MSL-G, MSL-H) 對 金 屬 間 質 蛋 白 酶 (MMP2/9) 及 其 抑 制 蛋 白 (TIMP1/2) 之 基 因 表 現 量 之 影 響 之 量 化 圖 表 結 果 顯 示, 草 藥 萃 取 物 對 於 金 屬 蛋 白 酶 MMP2 之 基 因 表 現 量 沒 有 抑 制 能 力, 但 對 於 其 抑 制 蛋 白 TIMP1 之 基 因 表 現 量 有 明 顯 之 增 強 的 能 力 26S 基 因 表 現 量 為 對 照 組 377
11 圖 八 進 一 步 分 析 MSL-G,MSL-H 對 於 肺 癌 細 胞 以 及 攝 護 腺 癌 細 胞 之 影 響 結 果 顯 示, 草 藥 萃 取 物 可 有 效 抑 制 肺 癌 細 胞 A549 以 及 攝 護 腺 癌 細 胞 PC3 之 轉 移 能 力 陸 討 論 由 gelatin-zymography 結 果 得 知, 兩 種 草 藥 萃 取 物 可 以 有 效 抑 制 MMP2 之 活 性 ; 但 由 RT-PCR 結 果 得 知,MSL-G 可 促 進 MMP2 和 TIMP1 基 因 表 現 量 (RNA) 因 此 MSL-G 可 能 誘 發 TIMP1 的 表 達 程 度 高 於 MMP2, 進 而 抑 制 MMP2 的 活 性 另 一 可 能 的 原 因 是 兩 種 草 藥 萃 取 物 可 直 接 或 間 接 抑 制 MMP2 的 活 化 機 制 性 或 活 性, 其 分 子 機 制 需 進 一 步 加 以 探 討 柒 結 論 本 研 究 計 畫 發 現 草 藥 萃 取 物 MSL-G 和 MSL-H 可 有 效 抑 制 肝 癌 細 胞 Huh7, 肺 癌 細 胞 A549, 以 及 攝 護 腺 癌 細 胞 PC3 之 移 動 侵 襲 能 力, 利 用 RT-PCR 方 法 得 出 此 兩 種 草 藥 萃 取 物 並 不 會 抑 制 細 胞 株 金 屬 間 質 蛋 白 酶 MMP2 之 基 因 表 現 量, 但 可 有 效 促 進 其 抑 制 蛋 白 TIMP1 之 表 現 量, 此 外 利 用 gelatin zymography 分 析 發 現 此 兩 草 藥 萃 取 物 有 明 顯 抑 制 間 質 蛋 白 酶 活 性 之 能 力 經 由 上 述 結 果 推 論, 草 藥 萃 取 物 MSL-G 和 MSL-H 可 透 過 增 加 抑 制 金 屬 間 質 蛋 白 酶 蛋 白 之 表 現, 進 而 抑 制 金 屬 間 質 蛋 白 酶 之 活 性 此 兩 種 草 藥 萃 取 物 具 有 發 展 為 抗 癌 藥 物 之 潛 力, 我 們 將 使 用 動 物 模 式, 研 究 其 對 於 腫 瘤 生 成 及 轉 移 之 影 響, 並 進 一 步 地 分 離 其 378
12 有 效 成 分 捌 參 考 資 料 及 其 他 1. Jemal, A., Bray, F., Center, M.M., Ferlay, J., Ward, E., and Forman, D. (2011). Global cancer statistics. CA Cancer J Clin 61: Tang, Z.Y., Ye, S.L., Liu, Y.K., Qin, L.X., Sun, H.C., Ye, Q.H., Wang, L., Zhou, J., Qiu, S.J., Li, Y., et al. (2004). A decade's studies on metastasis of hepatocellular carcinoma. J Cancer Res Clin Oncol 130: 聯 合 新 聞 網 健 康 醫 藥 4. Luk, J.M., Wang, X., Liu, P., Wong, K.F., Chan, K.L., Tong, Y., Hui, C.K., Lau, G.K., and Fan, S.T. (2007). Traditional Chinese herbal medicines for treatment of liver fibrosis and cancer: from laboratory discovery to clinical evaluation. Liver Int 27: Ruan, W.J., Lai, M.D., and Zhou, J.G. (2006). Anticancer effects of Chinese herbal medicine, science or myth? J Zhejiang Univ Sci B 7: Qi, F., Li, A., Inagaki, Y., Gao, J., Li, J., Kokudo, N., Li, X.K., and Tang, W. (2010). Chinese herbal medicines as adjuvant treatment during chemo- or radio-therapy for cancer. Biosci Trends 4: Lee, K.W., Bode, A.M., and Dong, Z. (2011). Molecular targets of phytochemicals for cancer prevention. Nat Rev Cancer 11: Konkimalla, V.B., and Efferth, T. (2008). Evidence-based Chinese medicine for cancer therapy. J Ethnopharmacol 116: Risberg, T., Lund, E., Wist, E., Kaasa, S., and Wilsgaard, T. (1998). Cancer patients use of nonproven therapy: a 5-year follow-up study. J Clin Oncol 16: Eisenberg, D.M., Kessler, R.C., Foster, C., Norlock, F.E., Calkins, D.R., and Delbanco, T.L. (1993). Unconventional medicine in the United States. Prevalence, costs, and patterns of use. N Engl J Med 328: Gupta, G.P., and Massague, J. (2006). Cancer metastasis: building a framework. Cell 127: Stetler-Stevenson, W.G., and Yu, A.E. (2001). Proteases in invasion: matrix metalloproteinases. Semin Cancer Biol 11: Westermarck, J., and Kahari, V.M. (1999). Regulation of matrix metalloproteinase expression in tumor invasion. FASEB J 13: Lee, M.S. (2006). Matrix-degrading type II transmembrane serine protease matriptase: Its role in cancer development and malignancy. J. Cancer Molecules 2: List, K., Bugge, T.H., and Szabo, R. (2006). Matriptase: potent proteolysis on the cell surface. Mol Med 12: Zhang, Q., Chen, X., Zhou, J., Zhang, L., Zhao, Q., Chen, G., Xu, J., Qian, F., and Chen, Z. (2006). CD147, MMP-2, MMP-9 and MVD-CD34 are significant predictors of recurrence after liver transplantation in hepatocellular carcinoma patients. Cancer Biol Ther 5: Yeh, H.C., Lin, S.M., Chen, M.F., Pan, T.L., Wang, P.W., and Yeh, C.T. (2010). Evaluation of serum matrix metalloproteinase (MMP)-9 to MMP-2 ratio as a biomarker in hepatocellular carcinoma. Hepatogastroenterology 57: Sakamoto, Y., Mafune, K., Mori, M., Shiraishi, T., Imamura, H., Mori, M., Takayama, T., 379
13 and Makuuchi, M. (2000). Overexpression of MMP-9 correlates with growth of small hepatocellular carcinoma. Int J Oncol 17: Jezierska, A., and Motyl, T. (2009). Matrix metalloproteinase-2 involvement in breast cancer progression: a mini-review. Med Sci Monit 15:RA Giannelli, G., Bergamini, C., Marinosci, F., Fransvea, E., Quaranta, M., Lupo, L., Schiraldi, O., and Antonaci, S. (2002). Clinical role of MMP-2/TIMP-2 imbalance in hepatocellular carcinoma. Int J Cancer 97: Bagnoli, F., Oliveira, V.M., Silva, M.A., Taromaru, G.C., Rinaldi, J.F., and Aoki, T. (2010). The interaction between aromatase, metalloproteinase 2,9 and CD44 in breast cancer. Rev Assoc Med Bras 56: Hah, N., and Lee, S.T. (2003). An absolute role of the PKC-dependent NF-kappaB activation for induction of MMP-9 in hepatocellular carcinoma cells. Biochem Biophys Res Commun 305: Chen, J.S., Wang, Q., Fu, X.H., Huang, X.H., Chen, X.L., Cao, L.Q., Chen, L.Z., Tan, H.X., Li, W., Bi, J., et al. (2009). Involvement of PI3K/PTEN/AKT/mTOR pathway in invasion and metastasis in hepatocellular carcinoma: Association with MMP-9. Hepatol Res 39: Arii, S., Mise, M., Harada, T., Furutani, M., Ishigami, S., Niwano, M., Mizumoto, M., Fukumoto, M., and Imamura, M. (1996). Overexpression of matrix metalloproteinase 9 gene in hepatocellular carcinoma with invasive potential. Hepatology 24: Zhao, P., Zhang, W., Tang, J., Ma, X.K., Dai, J.Y., Li, Y., Jiang, J.L., Zhang, S.H., and Chen, Z.N. (2010). Annexin II promotes invasion and migration of human hepatocellular carcinoma cells in vitro via its interaction with HAb18G/CD147. Cancer Sci 101: Torimura, T., Ueno, T., Kin, M., Harada, R., Nakamura, T., Kawaguchi, T., Harada, M., Kumashiro, R., Watanabe, H., Avraham, R., et al. (2001). Autocrine motility factor enhances hepatoma cell invasion across the basement membrane through activation of beta1 integrins. Hepatology 34: Miyoshi, A., Kitajima, Y., Sumi, K., Sato, K., Hagiwara, A., Koga, Y., and Miyazaki, K. (2004). Snail and SIP1 increase cancer invasion by upregulating MMP family in hepatocellular carcinoma cells. Br J Cancer 90: Kohga, K., Tatsumi, T., Takehara, T., Tsunematsu, H., Shimizu, S., Yamamoto, M., Sasakawa, A., Miyagi, T., and Hayashi, N. (2010). Expression of CD133 confers malignant potential by regulating metalloproteinases in human hepatocellular carcinoma. J Hepatol 52:
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二 零 一 六 年 施 政 報 告 創 新 經 濟 促 進 和 諧 改 善 民 生 繁 榮 共 享 ( ) 1 5 ( ) 6 37 8 11 12 16 17 20 21 22 23 25 26 27 28 29 30 32 33 37 ( ) 38 66 42 48 49 51 52 56 57 59 60 65 66 ( ) 67 89 75 76 79 80 83 84 86 87 88 89
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