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1 硬 骨 魚 類 病 毒 學 病 毐 感 染 的 生 物 學 概 述 雲 林 縣 家 畜 疾 病 防 治 所 張 鴻 猷 病 毐 的 本 質 病 毐 是 極 小 的 感 染 源 且 僅 在 宿 主 細 胞 中 增 殖 其 不 似 細 菌 (bacteria) 立 克 次 氏 體 (rickettsiae) 披 衣 菌 (chlamydia) 及 黴 漿 菌 (mycoplasma) 般 有 細 胞 的 構 造, 它 們 沒 有 胞 器 也 沒 有 自 己 的 新 陳 代 謝 病 毒 是 嚴 格 的 細 胞 內 寄 生 體, 利 用 寄 主 細 胞 的 構 造 而 繁 衍 大 小 約 18~300nm 的 球 型 或 子 彈 型, 其 核 酸 為 DNA 或 RNA 病 毒 的 形 態 和 結 構 病 毒 體 (The virion) 由 核 酸 及 外 覆 稱 為 殼 體 (capsid) 的 蛋 白 質 外 殼 構 成 一 " 病 毒 體 "(VIRION), 某 些 病 毒 其 最 外 層 更 有 一 層 由 脂 質 及 醣 蛋 白 組 成 的 封 套 (envelop) 核 酸 (The nucleic acid) i 病 毒 的 基 因 組 由 單 股 或 雙 股 的 RNA 或 DNA 構 成 ii 病 毒 的 核 酸 有 些 可 再 分 為 片 段 或 成 環 狀 iii 最 小 的 病 毒 (picornaviruses) 其 質 量 (molecular mass) 為 daltons, 較 大 的 病 毒 (poxviruses) 其 質 量 為 daltons, 哺 乳 動 物 細 胞 則 大 於 daltons 蛋 白 質 外 衣 (The protein coat) 蛋 白 質 外 衣 由 稱 為 殼 粒 (capsomers) 的 單 元 成 對 稱 (symmetry) 的 以 二 十 面 體 (icosahedral) 螺 旋 體 (helical) 或 混 合 狀 (complex) 分 佈 構 成 病 毒 的 酵 素 (Viral enzymes) 某 些 病 毒 需 要 宿 主 細 胞 所 欠 缺 的 酵 素 i) 扮 演 雙 重 角 色 的 病 毒 結 構 蛋 白, 如 influenza virus 的 neuraminidase ii) 帶 有 特 定 密 碼, 如 retroviruses 的 反 轉 錄 (reverse transcriptase) 病 毒 的 抗 原 (Viral antigens) i) 病 毒 可 能 含 有 4~100 個 結 構 性 蛋 白 (structural proteins) 每 個 結 構 性 蛋 白 通 常 含 有 1~4 個 抗 原 決 定 位 (epitopes, 即 與 抗 體 結 合 的 位 置 )

2 ii) 抗 原 性 的 變 異 是 因 基 因 的 核 酸 的 中 的 核 甘 酸 序 (nucleotide sequence) 中 基 的 取 代 或 除 去 而 產 生 的 突 變 (mutation) 病 毒 的 分 類 脊 椎 動 物 的 病 毒 依 i) 基 因 組 (genome) 的 性 質 ii) 病 毒 顆 粒 (virion) 的 構 造, 被 分 為 二 十 科 (families)(mathews 1982) 脊 椎 動 物 病 毒 的 主 要 特 性 : For the genome DNA or RNA Molecular mass Single-stranded(ss) or double-stranded(ds) Linear or circular Polycistronic or segmented Polarity + or -(if ss) For the virion Size Shape symmetry of capsid The number of capsomeres for icosahedral viruses Enveloped or not Possession of transcriptase in virion 病 毒 的 複 製 附 著 (Attachement) 穿 入 (Penetration) 去 外 殼 (Uncoating) 轉 錄 (Transcription) 轉 譯 (Translation) 核 酸 的 複 製 (Repilcation of nucleic acid) 病 毒 的 組 合 (Assembly of virus) 病 毒 的 釋 放 (Release of virus) 缺 陷 複 製 (Defective replication) 潛 伏 (Latency) 變 形 (Transformation) 隨 著 病 毒 進 入 宿 主 細 胞 基 因 群 (genome) 進 行 的 整 合, 細 胞 有 生 長 性 狀 的 肉 眼 上 的 改 變 引 起 這 樣 改 變 的 病 毒 稱 致 癌 性 病 毒 (oncogenic virus) 及 (OMV,oncorhynchus masou virus)

3 病 毒 感 染 細 胞 後 的 影 響 1. 可 逆 的 變 化, 如 組 織 切 片 上 可 見 細 胞 的 混 濁 腫 脹 (cloudy swelling) 2. 導 致 死 亡 的 不 可 逆 變 化, 此 稱 之 為 CPE(cytopathic effect) 3. 特 定 功 能 的 喪 失 或 損 傷 的 不 可 逆 變 化, 如 荷 爾 蒙 的 分 泌 4. 變 成 腫 瘤, 如 OMV 5. 在 1 或 3 的 持 續 感 染 之 下 病 毒 的 核 酸 可 能 與 基 因 群 (genome) 整 合 在 一 起, 而 斷 續 的 排 出, 如 CCV 或 病 毒 也 可 能 持 續 的 複 製 並 排 出, 如 IPNV 不 論 最 後 的 結 果 如 何, 在 病 毒 感 染 初 期 細 胞 的 變 化 有 : 1. 組 織 學 上 可 見 到 有 染 色 性 的 改 變 2. 病 毒 性 抗 原 的 蓄 積 可 能 導 致 包 含 體 (inclusion bodies) 的 形 成, 此 於 組 織 切 片 以 光 學 顯 微 鏡 即 可 發 現, 如 淋 巴 囊 腫 病 毒 (lymphocystis virus) 3. 融 合 二 個 或 二 個 以 上 的 細 胞 變 成 多 核 的 巨 大 細 胞 (multinucleate giant cell) 或 合 胞 體 (syncytium) 就 分 子 的 層 級 來 說, 病 毒 引 起 CPE, 可 能 減 低 宿 主 細 胞 的 巨 分 子 合 成, 也 就 阻 止 蛋 白 質 及 核 酸 的 合 成 病 毒 殼 體 (capsid) 蛋 白 的 蓄 積 可 能 影 響 宿 主 細 胞 酵 素 的 作 用 魚 類 感 染 病 毒 後 的 影 響 依 宿 主 細 胞 對 病 毒 感 染 後 所 產 生 的 特 異 或 非 特 異 性 免 疫 反 應 的 程 度 i) 能 為 臨 床 醫 師 或 組 織 病 理 醫 師 辨 識 的 有 死 亡 的 臨 床 病 例 ii) 無 臨 床 病 狀 的 在 感 染 (silent infection), 此 類 的 感 染 通 常 只 能 從 證 明 病 毒 或 抗 原 的 存 在 著 手, 或 者, 以 其 他 實 驗 室 方 法, 如 特 定 病 毒 抗 體 的 檢 出 著 手 病 毒 毒 力 的 判 定 可 以 下 列 數 項 為 依 據 :( 但 並 不 僅 限 於 下 列 諸 項 ) i) 發 生 率 的 計 量 ii) 死 亡 率 iii) 組 織 的 損 傷 程 度 iv) 生 長 速 率 減 少 的 程 度 v) 細 胞 功 能 的 喪 失 的 程 度 病 毒 感 染 的 後 果 : i) 不 顯 現 症 狀, 而 排 毒 ii) 不 顯 現 症 狀 而 呈 帶 毒 感 染 狀 態 (carrier state) iii) 有 臨 床 病 狀 且 有 死 亡 iv) 顯 現 臨 床 症 狀 恢 復 而 持 續 排 毒 v) 顯 現 臨 床 症 狀 後 恢 復, 但 呈 帶 毒 感 染 狀 態 而 無 症 狀 (carrier state)

4 持 續 感 染 病 毒 可 潛 藏 相 當 長 的 時 間, 可 能 終 該 動 物 之 一 生 持 續 感 染 相 當 難 作 精 確 的 分 類, 但 為 方 便 仍 分 為 下 列 三 類 i) 持 續 感 染 而 有 一 或 更 多 的 臨 床 症 狀 上 的 急 性 期, 除 此 時 外 病 毒 通 常 不 能 被 證 明 如 鮭 科 的 IHN 病 毒 感 染 ii) 持 續 感 染 而 病 毒 一 直 可 被 測 得 及 排 出, 但 臨 床 上 並 不 顯 現 病 徵 或 僅 有 生 理 學 的 描 述 的 異 狀 - 慢 性 感 染 如 鮭 科 的 IPNV iii) 持 續 相 當 長 的 時 間 而 有 慢 性 漸 進 性 的 臨 床 症 狀 ( 通 常 可 見 死 亡 的 情 況 )- 慢 性 感 染 界 定 魚 類 慢 性 染 的 日 期 尚 未 有 記 述 潛 伏 感 染 發 生 的 原 因 就 現 今 而 言, 魚 類 病 毒 潛 伏 感 染 發 生 的 原 因 所 知 有 限, 但 參 照 過 去 於 哺 乳 動 物 和 鳥 類 所 做 的 研 究 得 知, 可 能 與 下 列 各 項 有 關 : i) 生 長 在 有 保 護 的 部 位 如 神 經 系 統 類 淋 巴 組 織 上 皮 表 面 細 胞 ii) 基 因 群 (genome) 的 整 合, 病 毒 的 基 因 群 (genome) 整 合 到 宿 主 的 基 因 群 (genome) 中 如 鯰 魚 的 CCV iii) 沒 有 免 疫 反 應 且 沒 有 誘 導 出 宿 主 的 非 特 異 性 保 護 機 制 沒 有 抗 體 及 干 擾 素 的 產 生 iv) 非 中 和 性 的 抗 體 (non-neutralizing antibodies), 宿 主 細 胞 可 能 產 生 出 非 中 和 性 的 抗 體, 使 病 毒 免 於 中 和 抗 體 及 CMI( 細 胞 媒 介 反 應 ) 的 作 用 年 齡 和 抵 抗 力 與 病 毒 感 染 對 病 毒 的 反 應 各 動 物 間 有 相 當 大 的 差 異, 魚 類 也 不 例 外 在 幼 年 期 的 影 響 特 別 令 人 注 目 魚 類 病 毒 的 實 際 狀 況 病 毒 性 疾 病 的 診 斷 i) 培 養 a. CPE b. 主 要 的 變 化, 圓 形 化 (rounding) 皺 縮 (retraction) 壞 死 (necrosis) 合 胞 體 形 成 (syncytial formation) 脫 落 (detachment) c. 不 同 的 病 毒 有 不 同 的 CPE ii) 顯 微 鏡 a. 僅 有 少 數 病 毒 可 藉 染 色 而 以 光 學 顯 微 鏡 觀 察 得 到, 如 病 毒 性 紅 血 球 壞 死 病 毒 (viral erythrocytic necrosis virus) b. 病 毒 的 包 含 體 (inclusion bodies) 可 以 光 學 顯 微 鏡 藉 由 經 特 殊 染 色 的 組 織 切 片 塗 抹 片 中 發 現 c. 電 子 顯 微 鏡 也 可 用 來 觀 察 病 毒 及 其 形 態

5 iii) 檢 出 病 毒 的 特 殊 成 份 a. 病 毒 蛋 白 的 檢 出 - 多 株 或 單 株 抗 體 的 應 用 FAT(fluorescent antibody technique, 螢 光 抗 體 技 術 ) b. 病 毒 核 酸 的 檢 出 病 毒 的 不 活 化 i) 物 理 方 法 a. 溫 度 -- 於 56 加 熱 1-2 小 時 可 殺 死 大 部 份 病 毒, 溫 度 更 高 則 還 可 縮 短 時 間 4 時 感 染 力 的 下 降 速 度 很 慢, 且 視 介 質 而 定 -10 至 -25 間 即 使 同 樣 的 病 毒 也 因 病 毒 株 的 不 同 感 染 力 也 有 不 同 在 非 常 低 的 溫 度 如 -70 或 更 低 溫 則 存 活 力 會 提 高 b. 放 射 線 -- 離 子 射 線, 如 X- 及 γ- 射 線 可 以 很 快 的 不 活 化 病 毒, 短 波 長 的 光 線 如 UV 亦 同 直 射 的 陽 光 可 以 不 活 化 大 部 份 的 病 毒, 特 別 是 存 在 於 乾 燥 表 面 的 病 毒 ii) 化 學 方 法 a. ph-- 多 數 病 毒 於 近 中 性 時 較 安 定 少 數 則 於 低 ph 時 較 安 定 ( 如 IPNV 較 適 合 於 ph 3) 因 為 強 烈 的 蛋 白 質 變 性 作 用 所 以 大 多 數 的 病 毒 在 低 於 ph 3 或 高 於 ph 11 時 很 快 的 就 被 不 活 化 所 以 2 % 的 氫 氧 化 鈉 對 塑 膠 玻 璃 纖 維 及 混 凝 土 的 表 面 有 消 毒 效 果, 但 不 可 用 於 金 屬 ( 有 腐 蝕 作 用 ) 與 前 面 相 似 的 作 用,CaO 對 排 去 水 的 泥 土 有 不 錯 的 消 毒 效 果, 若 能 犛 過 則 效 果 更 佳 b. 氧 化 劑 -- 鹵 素, 例 如 次 氯 酸 鹽 或 碘 的 水 溶 液 或 碘 酊 (KI+I2) 或 碘 仿, 可 不 活 化 所 有 的 病 毒 即 使 有 有 機 物 存 在 其 效 果 亦 可 維 持 數 小 時 碘 仿 的 腐 蝕 性 刺 激 性 最 小, 更 重 要 的 是 有 界 面 活 性 作 用 ( 如 清 潔 劑 般 ) 在 縫 隙 及 粗 糙 表 面 有 很 好 的 穿 透 效 果 鹵 素, 特 別 是 碘 仿 常 用 來 消 毒 水 池 管 路 腳 的 浸 漬 車 輛 輪 胎 網 及 其 他 用 具 但 可 能 需 要 事 先 清 洗, 以 獲 得 較 佳 的 效 果 臭 氧 被 廣 泛 應 用 於 水 族 箱 來 不 活 化 病 毒 及 細 菌, 其 作 用 相 當 有 效, 但 在 較 大 的 空 間 應 用 則 相 當 昂 貴 c. 烴 化 物 -- 甲 醛 和 glutaraldehyde 溶 液 是 因 蛋 白 質 的 交 鍵 (cross-link) 和 穿 透 到 核 酸 中 心 的 雙 重 作 用 d. 清 潔 劑 -- 雖 然 它 們 因 可 溶 解 脂 質 而 對 有 封 套 (envelop) 的 病 毒 有 消 毒 效 果, 但 大 體 上 來 講 清 潔 的 效 果 仍 大 於 消 毒 的 效 果 甲 醛 和 glutaraldehyde 和 碘 仿 併 用 可 加 強 穿 透 效 果 病 毒 的 保 存 a. 病 毒 可 保 存 於 -70 或 更 低 的 溫 度

6 b. 細 胞 培 養 則 需 dimethylsuphoxide(10%) 及 serum(10%) 或 以 glyceral(50%) 替 代 c. 病 毒 於 含 10% 胎 牛 血 清 中 冷 涷 乾 燥 後 存 於 4 也 是 一 項 成 功 的 保 存 方 法 魚 類 病 毒 性 疾 病 的 預 防 及 控 制 i) 隔 離 (avoidance) ii) 疫 苗 iii) 化 學 治 療 劑 iv) 基 因 選 別 病 毒 感 染 及 疾 病 的 流 行 病 學 i) 傳 播 (transmission) 水 平 感 染 垂 直 感 染 ii) 保 毒 (reservoirs infection)

7 魚 類 的 病 毒 感 染 魚 類 的 病 毒 - 以 科 (families) 來 區 分 病 毒 種 類 分 離 得 僅 見 於 電 子 顯 微 鏡 總 計 DNA Herpesviruses Iridoviruses Adenoviruses RNA Caliciviruses Rhabdoviruses Birnaviruses Reoviruses Orthomyxoviruses Paramyxoviruses Retroviruses Ungrouped DNA 病 毒 Herpesvirus 特 性 I. 本 科 病 毒 含 有 大 的 封 套 (envelop), 且 為 影 響 感 染 力 的 重 要 性 部 份 II. 直 徑 130 nm 的 DNA-containing viruses III. 具 有 龐 大 的 (176 kilobase pair) 雙 股 DNA 基 因 組 IV. 49 種 不 同 的 細 胞 溶 解 蛋 白 以 為 感 染 V. 病 毒 於 核 內 繁 殖, 但 其 先 於 質 內 出 現 再 移 入 核 內 VI. 多 數 的 Herpesviruses 可 於 宿 主 體 內 潛 伏, 再 伺 機 回 復 感 染 VII.Herpes simplex virus(hsv-1) 及 Epstein-Barr virus(ebv) 被 發 現 在 培 養 的 環 境 中 會 感 染 激 有 絲 分 裂 淋 巴 球 (mitogen-stimulated

8 lymphocytes), 淋 巴 球 的 感 染 可 能 就 是 此 病 毒 降 低 免 疫 力 而 潛 伏 的 關 鍵 VIII. 此 科 的 某 些 病 毒 事 實 己 被 證 明 有 致 癌 性 如 i.ebv 與 Burkitt 氏 淋 巴 瘤 和 鼻 咽 癌 (nasopharyngeal carcinoma) 有 關 ii. 人 類 的 HSV-1 則 引 起 口 唇 的 冷 痛 (cold sores) 魚 類 的 Herpesvirus 病 毒 名 稱 宿 主 狀 態 報 告 者 Channel catfish Channel catfish I Fijan(1986) virus(ccv) (Ictalurus punctatus) Herpesvirus cyprini Carp I Sano et al.(1985) (Cyprinus carpio) Herpesvirus salmonis Rainbow trout I Wolf & Tayler (Salmo gairdneri) (1975) Oncorhynchus masou Masou salmon I Kimura et al. virus (Oncorhynchus masou) (1981) Ne-VTA KoKanee salmon I Sano(1976) (Oncorhynchus nerka) Walleye herpesvirus Walleye I Kelly et al. (Stizostedino vitreum) I (1980) YTV Masou salmon I Sano et al. (Oncorhynchus masou) I (1983) Herpesvirus Turbot EM Buchanan & scophthalmi (Scophthalmus maximus) Madeley (1978) Pike herpesvirus Pike EM Yamamoto et al. (EHV-1) (Esox lucius) (1984) Sheatfish herpesvirus Sheatfish EM Bekesi et al. (Silurus glanis) (1984) Pacific cod Pacific cod EM McArn et al. herpesvirus (Gadus macrocephalus) (1978) I= 分 離 到, EM= 以 電 子 顯 微 鏡 觀 察 到

9 己 分 離 得 的 魚 類 herpesvirus CCV(CHANNEL CATFISH VIRUS) 是 美 國 地 區 唯 一 己 知 的 暖 水 魚 病 毒 性 疾 病 病 毒 形 態 此 CCV 為 典 型 的 Herpesvirus I. 含 DNA 的 核 殼 體 (nucleocapsid) 直 徑 100 nm II. 含 包 被 的 封 套 則 直 徑 為 nm III. 封 套 於 核 殼 體 (nucleocapsid) 成 熟 而 以 出 芽 的 方 式 經 核 膜 至 細 胞 質 時 形 成 病 毒 存 活 I. 此 病 毒 於 25 的 水 中 不 易 存 活, 在 22 的 魚 組 織 內 也 很 快 不 活 化 II. -20 至 -80 間 可 保 有 感 染 力 III. 故 在 實 際 應 用 上,CCV 的 病 材 的 輸 送 以 冷 凍 的 方 式 為 最 佳, 冷 藏 則 為 次 佳 選 擇 CCV 於 不 同 條 件 下 存 活 的 情 形 條 件 25 /water 14 days /fish tissue 2 days /fish tissue 8 days days days days days %ether 24 hours 100 5%chloroform 5 minutes 100 培 養 檢 出 及 診 斷 I. CCV 可 生 長 在 brown bullhead(bb) 及 channel catfish ovary(cco) 細 胞 株, 最 好 在 30 下 培 養 II.CCO 較 BB 敏 感

10 III.CCV 在 培 養 下 可 引 起 細 胞 融 合, 呈 現 典 型 的 合 胞 體 (syncytia) IV. 垂 直 感 染 的 檢 出 以 於 卵 巢 組 織 中 發 現 病 毒 及 病 毒 抗 原 為 準 臨 床 症 狀 肉 眼 病 變 及 疾 病 狀 況 I. 頭 浮 於 水 面 的 垂 直 螺 旋 游 姿 II. 感 染 的 魚 可 能 有 如 下 的 一 或 數 種 臨 床 症 狀 : i. 鰭 及 腹 部 的 出 血 ii. 腹 部 膨 脹 iii. 鰓 蒼 白 出 血 iv. 單 側 或 雙 側 的 眼 球 突 出 (exophthalmos) III. 內 臟 病 變 包 括 : i. 腎 蒼 白 腫 大 ii. 肌 肉 肝 腎 及 脾 出 血 iii. 肝 腎 及 脾 腫 大 iv. 胃 內 充 滿 黏 液 樣 分 泌 物 v. 腹 膜 水 腫, 腹 腔 內 充 滿 黃 色 滲 出 物 IV. 本 病 發 現 於 夏 季 水 溫 時 channel catfish 的 魚 苗 (fry) 及 仔 魚 (fingerlings) V. 殘 存 的 魚 成 為 潛 伏 感 染 而 為 帶 毒 者 組 織 病 理 學 I. 實 驗 感 染 病 例 的 特 微 病 變 是 大 部 份 內 臟 器 官 的 壞 死 及 出 血 II. 後 腎 是 感 染 最 嚴 重 的 器 官, 其 次 依 序 (descending) 為 spleen liver gastrointestinal tract III. 腎 臟 可 見 類 淋 巴 細 胞 增 加, 近 端 曲 尿 管 的 明 顯 壞 死 IV. 以 電 顯 在 腎 細 胞 中 可 發 現 大 量 病 毒, 脾 及 肝 臟 內 的 病 毒 量 較 少, 但 腸 道 的 細 胞 則 無 法 發 現 病 毒 地 理 分 佈 及 宿 主 範 圍 此 病 毒 在 美 國 南 部 地 區 的 鯰 魚 (channel catfish) 養 殖 場 中 廣 泛 分 佈 傳 播 水 平 傳 播 主 要 來 自 罹 病 的 瀕 死 魚 (moribund diseased fish) 排 出 的 病 毒 控 制 使 用 經 walking catfish 的 KLK 細 胞 株 繼 代 的 弱 毒 疫 苗 可 保 護 channel catfish fingerlins 對 抗 野 外 型 產 毒 株 的 致 命 攻 擊 Koment(1978) 報 告 Phosphonoacetic acid(paa) 可 抑 制 組 織 培 養 中 的 CCV, 但 其 應 用 於 預 防 CCV 則 尚 未 有 報 告 HERPESVIRUS CYPRINI

11 鯉 魚 痘 (carp pox) 是 公 認 最 早 的 魚 類 病 毒 性 疾 病, 早 在 四 百 年 前 就 被 描 述 外 觀 上 身 體 各 部 可 見 乳 白 色 的 疣 狀 物 鏡 下 則 僅 見 表 皮 部 增 生 許 多 mucous cell 且 增 生 的 表 皮 細 胞 可 見 質 內 包 含 體 來 自 日 本 鯉 papilloma 組 織 的 CHV(cyprinid herpesvirus I) 可 生 長 於 如 下 之 細 胞 : fathead minnow(fhm) epithelioma papulosum of carp(epc) mirror carp tail (MCT) Asagi carp embryo(ce-1) 在 時 最 大 力 價 為 TCID50/ml 此 病 毒 可 在 感 染 細 胞 形 成 Cowdray type A 的 核 內 包 含 體, 且 以 負 染 色 可 呈 現 herpesvirus 的 典 型 形 狀 CHV 不 活 化 的 性 質 為 典 型 的 herpesvirus, 如 : sensitivity to ether sensitivity to heat sensitivity to acid ph sensitivity to the inhibitor IUDR HERPESVIRUS SALMONIS 本 病 毒 乃 Wolf & Taylor 於 1975 年 在 美 國 華 盛 頓 州 的 Winthrop National Fish Hatchery 分 離 自 外 觀 正 的 rainbow trout 的 ovinary fluids 而 得 本 病 毒 (H.salmonis or HPV) 可 生 長 於 如 下 之 細 胞 : Chinook salmon embryo (CHSE-214) KF-1(uncharacterized from koknee salmon) RTF-1(uncharacterized from rainbow trout fry) RTG-2(rainbow trout gond) 在 細 胞 形 成 核 內 包 含 體, 且 以 有 合 胞 體 (syncytium) 的 產 生, 為 典 型 的 herpesvirus 本 病 毒 為 嗜 冷 性 (psychrophilic) 或 者 說 對 冷 有 適 應 性 (cold-adapate) 可 在 介 於 5-10 間 增 殖 合 胞 體 (syncytium) 的 形 成 則 在 0-15 間, 超 過 15 則 不 形 成 合 胞 體 CHV 不 活 化 的 性 質 為 典 型 的 herpesvirus, 如 : sensitivity to ether sensitivity to heat sensitivity to acid ph

12 sensitivity to the inhibitor IUDR ONCORHYNCHUS MASOU VIRUS(OMV) OMV 是 第 一 被 證 實 的 致 癌 性 魚 類 病 毒 (Kimura et al. 1981), 其 產 生 口 部 周 圍 的 腫 瘤 (perioral tumor) 類 似 於 HPV,OMV 亦 分 離 自 蓄 養 的 健 康 masou salmon 的 ovarian fluid 在 RTG-2(rainbow trout gond) 於 15 可 產 生 CPE 而 有 典 型 的 圓 形 化 及 有 合 胞 體 (syncytium) 的 形 成 某 些 鮭 科 魚 類 可 能 感 染 本 病 毒, 包 括 : coho kokanee rainbow trout 組 織 病 理 學 上 可 於 肝 見 嚴 重 多 發 性 局 部 壞 死 灶 WALLEYE HERPESVIRUS-I(HERPESVIRUS VITREUM) Kelly et al.(1983) 報 告 發 現 生 於 加 拿 大 薩 克 斯 其 萬 省 (Saskatchewan)Hanson Lake walleye( 突 眼 河 鱸 ) 表 皮 增 生 性 疾 病 的 一 種 herpesvirus WHV-1 僅 生 長 於 walleye 的 細 胞 (WO,ovary;WC-1,fibroblastic and We-2,embryonic), 在 4-15 時 可 見 融 合 型 的 CPE,14 天 後 可 見 溶 解 性 CPE YAMAME TUMOR VIRUS(YTV) Sano et al.(1983) 於 日 本 Niigata Preferture 的 養 殖 yamame 中 的 下 顎 (mandible) 腫 瘤 中 發 現 (YTV) 較 之 於 chum salmon fry YTV 對 yamame 的 fry 特 別 有 致 命 性 ( 以 注 射 法 攻 毒 死 亡 率 可 達 65%) 臨 床 上 垂 死 的 (moribund) 魚 會 有 凸 眼 (exophthalmos) 的 症 狀 及 腹 部 腫 大 肛 門 充 血 有 一 隻 感 染 後 殘 存 的 魚 於 十 個 月 後 見 有 下 顎 腫 瘤 YTV 及 OMV 尚 未 作 血 清 學 比 對, 兩 者 之 間 可 能 有 某 種 程 度 的 相 關, 但,Sano et al.(1983) 指 出 兩 者 有 二 點 不 同 : 來 源 不 同 :YTV 來 自 養 殖 yamame 魚 的 下 顎 腫 瘤,OMV 則 來 自 健 康 masou salmon 的 卵 巢 液 性 質 不 同 :YTV 以 未 成 熟 的 上 皮 細 胞 出 現,OMV 腫 瘤 則 是 一 種 成 熟 型 的 上 皮 細 胞 乳 頭 瘤 僅 由 EM 辨 識 的 魚 類 herpesvirus HERPESVIRUS SCOPHTHALMI(HVS) Richards & Buchana(1978) 於 4-5 月 齡 及 有 高 死 亡 率 的 養 殖 鮭 魚 皮 膚 和 鰓 發 現 有 Novel ginat cell ginat cell 可 在 背 部 的 皮 膚 及 鰓 發 現

13 其 因 以 下 六 項 特 徵 被 認 為 是 herpesvirus: 1. 形 成 巨 大 細 胞 且 其 核 是 由 數 個 核 融 合 而 成 2. 形 成 胞 內 及 核 內 包 含 體 3. 複 製 過 程 中 在 細 胞 質 內 有 具 封 套 的 顆 粒 在 核 內 有 清 楚 可 見 直 徑 約 100 nm 的 不 成 熟 的 nucleocapsids( 核 殼 體 ) 4. 此 病 毒 的 釋 出 與 一 般 的 herpesvirus 同 樣 經 核 周 邊 的 小 管 再 經 細 胞 質 的 管 道 以 達 細 胞 膜 5. 聚 集 於 細 胞 外 的 病 毒 合 形 成 與 細 胞 膜 結 合 的 團 塊 (membrance-bound clumps) 6. 負 染 色 可 見 中 心 直 徑 約 nm 的 顆 粒 外 觀 為 六 邊 的 殼 體 (capsid) 中 空 的 殼 粒 (hollow capsomeres) 及 外 層 為 穗 狀 層 (spike layer) 的 雙 層 的 封 套 (bilaminar envelop) PIKE EPIDERMAL PROLIFERATION HERPESVIRUS (ESOCID HERPESVIRUS I,EHV-I) EHV-I 為 一 由 Yamamoto et al.(1984) 經 EM 發 現 的 病 毒 發 生 在 加 拿 大 薩 克 斯 其 萬 省 (Saskatchewan) 和 曼 尼 托 巴 省 (Manitoba) 的 northern pike ( 梭 子 魚 的 一 種 ) 感 染 的 魚 體 可 見 顆 粒 狀 病 變 病 灶 部 直 徑 約 3-10 mm, 厚 約 0.25 mm, 呈 藍 白 色 且 變 平 (flattened), 正 常 組 織 呈 顆 粒 狀 不 透 明 (opaque) 明 顯 的 可 與 平 滑 半 透 明 (translucent) 無 顆 粒 的 病 灶 區 別 在 EM 下 巨 大 細 胞 的 細 胞 質 內 可 見 許 多 內 含 濃 染 的 病 毒 顆 粒 的 包 含 體 SHEATFISH HERPESVIRUS Bekesi et al.(1984) 於 檢 驗 sheatfish 的 頭 部 病 變 時 以 EM 在 表 皮 的 hypertrphied cell 見 到 herpesvirus-like particles 以 光 學 顯 微 鏡 在 某 些 細 胞 的 核 內 可 見 到 有 Cowdray-type A 的 嗜 酸 性 包 含 體 PACIFIC COD HERPESVIRUS McArn et al.(1978) 以 EM 發 現 於 Pacific cod 皮 膚 病 灶 的 herpesvirus-like 病 毒 Iridovirus 特 徵

14 本 科 病 毒 為 直 徑 nm 的 雙 股 DNA 分 子 量 dalton, 的 等 長 的 (isometric) 的 對 稱 二 十 面 體 (icosahedral symmetry), 僅 在 質 內 增 殖 特 點 : 無 封 套 ether-resistant grow to very high dconcentration 形 成 多 面 (polyhedra) and paracrystalline array 本 病 毒 於 高 等 脊 椎 動 物 通 常 較 大 型 且 可 能 有 封 套, 如 豬 的 Aferican swine fever 病 毒 (Hess 1971) 在 魚 類 有 五 種 分 離 得 及 兩 種 見 於 EM 者 魚 類 的 虹 彩 病 毒 (Fish iridoviruses) Virus name Origine Status Author Lymphocystis 142 species of marine and Isolated Wolf(1962) fresh-water teleost Goldfish Goldfish(Carassius auratus) Isolated Berry et al. iridovirus (1983) Cod iridovirus Atlantic cod(gadus morhua) Isolated Jensen et al. (1979) Carp gill necrosis Carp(Cryprinus carpio) Isolated Shchelkunov & iridovirus Shchelkunova (1984) Redfin perch Redfin perch(perca Isolated Langdon et iridovirus fluviatilis) al.(1986) Cichild Ramirez dwarf cichlid EM Leibovitz iridovirus (1980) Erythrocytic Marine teleosts(21 species) EM Appy et al. necrosis virus (1976) (ENV) 分 離 到 的 魚 類 iridovirus LYMPHOCYSTIS DISEASE VIRUS(LDV) 本 病 廣 泛 發 生 於 淡 水 半 淡 鹹 水 海 水 魚 臨 床 上 於 皮 膚 可 見 結 節 早 在 1874 Lowe 即 提 出 發 生 於 flounder( 鰈 形 目 魚 ) 的 報 告

15 Virus survival LDV is stable to ultrasonication 故 易 自 感 染 細 胞 中 抽 出 (Walker & Hill 1980) ph 逾 6-9 的 界 限 則 敏 感 可 保 存 於 -70, 雖 可 藉 血 清 以 減 少 感 染 力 的 降 低 但 4 及 25 的 保 存 仍 不 佳 保 存 於 50%glycerol( 甘 油 ) 可 被 不 活 化 病 毒 的 培 養 檢 測 及 診 斷 來 自 bluegill sunfish 的 LDV 可 於 式 管 內 的 centrarchid cell line BF-2 中 生 長 (wwolf et al.1966) 被 感 染 的 細 胞 增 大 至 40-90μm, 有 明 顯 的 核 及 核 仁 (nucleoli) 且 呈 封 入 狀 態 (encapsulated), 故 可 藉 計 算 變 大 的 細 胞 來 估 計 病 毒 的 力 價 於 BF-2,BF-W,MCT cell line 可 見 細 胞 的 增 大 臨 床 症 狀 當 全 身 性 感 染 時 於 外 觀 可 見 皮 膚 及 鰭 的 外 表 可 見 小 的 乳 酪 色 樣 結 節, 內 臟 器 官 則 可 見 於 腸 繫 膜 (mesenteries) 及 腹 膜 (peritoneum) 有 結 節 於 naked eye 結 節 使 個 別 的 淋 巴 囊 腫 細 胞 或 淋 巴 球 增 大 到 直 徑 1 mm 組 織 病 理 學 雖 然 淋 巴 囊 腫 結 痂 及 回 復 的 時 間 頗 不 一 致 ( 如 bluegill 於 25 時 需 28 天,plaice( 歐 洲 產 的 孫 鰈 ) 於 10 需 三 個 月 ) 但 以 下 的 過 程 是 可 確 認 的 : 1.Fibroblast-like cell 的 增 大 內 含 嗜 鹼 性 的 cytoplasm 並 且 具 有 明 顯 的 細 胞 核 及 核 仁 (nucleoli) 2. 於 擴 大 的 細 胞 可 於 細 胞 質 內 見 光 環 狀 (halo-like) 的 包 含 體, 此 包 含 體 可 染 出 DNA, 也 就 是 說 其 對 Feulgen,acridine orange 反 應 均 為 陽 性 3. 在 半 成 熟 的 階 段 可 被 HE 染 色 染 出 清 楚 的 hyaline capsule 且 細 胞 質 內 的 包 含 體 變 得 片 段 狀 4. 緊 接 而 來 的 即 是 變 性 期 核 及 核 仁 變 得 緻 密 而 且 不 易 界 定, 包 含 體 停 留 於 周 邊 且 hyaline capsule 也 開 始 變 性, 巨 噬 細 胞 和 吞 噬 性 細 胞 集 中 到 變 性 中 的 淋 巴 細 胞 附 近 並 開 始 擊 淋 巴 細 胞, 崩 解 的 淋 巴 細 胞 可 能 導 致 鄰 近 的 fibroblast( 成 纖 維 細 胞 ) 更 進 一 步 的 " 重 新 感 染 "(de novo infection) 在 孫 鰈 (plaice) 於 感 染 後 三 個 月 可 見 明 顯 的 炎 症 反 應 而 有 證 據 證 明 有 CMI 及 沈 澱 素 抗 體 (precipitin antibody)

16 在 早 期 的 病 變 中 淋 巴 球 的 巨 噬 細 胞 浸 潤 很 輕 微, 但 感 染 後 大 約 六 週 即 可 見 約 30nm 的 炎 症 環 (inflammatory collar) 包 圍 著 cyst 未 期 的 病 變, 在 三 個 月 時 藉 由 微 血 管 及 漿 細 胞 對 inflammatory collar 提 供 血 管 的 基 質 供 應 而 此 時 淋 巴 囊 腫 也 出 現 地 理 分 佈 及 宿 主 範 圍 本 病 被 敘 述 發 生 於 42 個 科 的 125 種 (species) 分 別 分 佈 次 海 水 半 淡 鹹 水 淡 水 環 境 的 魚 (Andess,1984) 最 常 見 感 染 的 科 有 :.Centrarchidae.Percidae.Sciaenidae.Pleuronectidae 傳 染 淋 巴 囊 腫 破 裂 時 釋 出 病 毒 而 經 寄 生 蟲 或 捕 撈 時 g 表 皮 的 損 傷 處 或 交 配 行 為 而 感 染 控 制 本 病 沒 有 好 的 治 療 方 法 在 養 殖 池 可 隔 離 感 染 魚 避 免 交 叉 感 染, 並 讓 病 變 自 然 痊 癒 GOLDFISH IRIDOVIRUS Berry et al.(1983) 於 外 觀 正 常 金 魚 的 鰾 中 分 離 得 二 種 病 毒 稱 之 為 goldfish virus-1(gfv-1) 及 goldfish virus-2(gfv-2) ATLANTIC COD IRIDOVIRUS Cod iridovirus 是 由 Jensen et al.(1979) 由 感 染 ulcus syndrome( 皮 膚 可 見 小 丘 疹,papuls) 的 cod 中 分 離 得 本 病 毒 以 生 長 於 EPC 為 佳 在 EM 可 見 巨 大 的 包 含 體 幾 乎 佔 據 半 個 細 胞 CARP GILL NECROSIS IRIDOVIRUS 在 蘇 聯 gill necrosis of carp 是 一 個 重 要 的 問 題,Shchelkunov & Schelkunova 於 1984 年 發 現 以 FHM 細 胞 於 28 分 離 出 兩 株 病 毒 臨 床 症 狀 鰓 腫 脹 被 覆 黏 液 鰓 薄 板 褪 色 有 馬 賽 克 樣 斑 內 臟 見 肝 呈 灰 黃 樣 的 壤 土 色 可 見 於 細 胞 核 及 質 呈 嗜 鹼 性 可 見 核 內 包 含 體 本 病 毒 對 酸 及 氯 仿 敏 感 但 對 ether 有 抗 性 於 EM 下 不 見 封 套

17 REDFIN PERCH IRIDOVIRUS(EPIZOOTIC HAEMATOPOIETIC NECROSIS VIRUS) Langdon et al.(1986) 自 維 多 利 亞 州 (Victoria state) 的 redfin perch 分 離 到 的 病 毒 可 能 是 澳 洲 魚 第 一 個 分 離 到 的 病 毒 臨 床 上 見 有 高 死 亡 率 及 肝 和 頭 腎 的 局 部 壞 死 灶 於 RTG-2 cell 可 見 圓 形 化 的 CPE Langdon & Humphrey(1987) 對 本 病 的 臨 床 症 狀 有 更 完 整 的 描 述 高 達 100% 的 死 亡 率 可 發 生 於 各 年 齡 感 染 早 期 呈 現 共 濟 失 調 (ataxia), 緩 慢 游 動 沈 於 底 部 的 病 魚 可 能 有 偶 發 "head-standing" 鰭 基 部 出 血 肝 出 現 1-3mm 的 多 發 性 局 部 壞 死 灶 脾 見 稍 腫 大 及 膠 樣 (gelatinous) 鰓 可 能 鬱 血 或 正 常 肝 腎 脾 特 別 是 renal haematopoietic tissue 的 壞 死 是 主 的 組 織 病 變, 胃 腸 並 沒 有 病 變 Fish iridovirus characterized by EM only CICHLID IRIDOVIRUS( 慈 鯛 虹 彩 病 毒 ) Leibovita & Riis(1980) 描 述 一 個 發 生 於 Ramirez' Dwarf Cichlid 或 稱 "ram" 的 病 毒 性 疾 病 本 病 在 3-5 cm 的 ram 可 呈 現 inappetance( 無 食 慾 ) respiratory distress( 呼 吸 困 難 ) generalized paleness( 全 身 蒼 白 ) uncoordinates swimming movement( 不 協 調 的 游 泳 運 動 ) 皮 膚 特 別 是 眼 的 出 血 本 病 病 程 持 續 約 在 3-4 週, 發 生 率 達 100% 死 亡 率 約 40-80% 組 織 學 上 可 見 spleen, intestine,,liver, kidney, pancreas and eyes 有 局 部 的 壞 死 及 出 血 的 變 化 在 感 染 早 期 的 spleen cell 可 見 包 含 體 CERYTHROCYTIC NECROSIS VIRUS(ENVS) 本 病 (VEN) 為 魚 類 紅 血 球 被 ENVs 感 染 而 發 生 的 疾 病 本 病 以 前 稱 之 為 魚 類 紅 血 球 壞 死 症 (PEN,piscine erythrocytic necrosis) 細 胞 質 的 包 含 體 是 本 病 的 特 徵 病 毒 形 態 本 病 毒 依 宿 主 不 同 而 病 毒 顆 粒 大 小 亦 有 大 中 小 之 區 分 細 胞 學

18 VEN 可 於 細 胞 質 內 形 成 1-4μm 嗜 伊 紅 性 而 可 被 Giemsa's or Wright's stain 染 成 明 亮 的 紅 紫 色 (bright magenta pink) 的 質 內 包 含 體 細 胞 病 理 學 及 血 液 學 本 病 毒 可 感 染 成 熟 與 未 成 熟 的 紅 血 球, 且 均 可 見 包 含 體 芽 細 胞 (blast cells) 的 感 染 可 能 會 導 致 無 法 有 正 常 的 成 熟 過 程, 而 有 不 成 熟 紅 血 球 的 蓄 積 ENV 可 能 會 殺 死 成 熟 與 未 成 熟 的 類 紅 血 球 細 胞 (erythroid cells) Reno et al.(1986) 證 明 Atlantic cod 感 染 ENV 首 先 為 不 成 熟 的 紅 血 球 接 著 才 是 成 熟 的 紅 血 球 Haematocrit 的 值 降 至 10% 左 右 凝 血 時 間 增 加 對 低 氧 環 境 的 耐 受 性 降 低 地 理 分 佈 本 病 毒 可 見 於 美 國 東 北 岸 21 種 海 水 及 溯 河 產 卵 (anadromous) 的 魚 可 感 染 成 熟 與 未 成 熟 的 紅 血 球, 且 均 可 見 包 含 體 傳 佈 及 宿 主 不 同 的 ENV 間 可 能 並 沒 有 所 謂 的 種 別 特 異 性 (species-specific) 本 病 可 見 於 鮭 科 魚 類 控 制 感 染 本 病 後 無 法 有 效 的 控 制 預 防 交 叉 感 染 最 為 重 要, 尤 其 於 循 環 式 養 殖 場 更 應 特 別 注 意 Adenovirus 特 徵 adenovirus 是 無 封 套, 具 雙 股 DNA, 分 子 量 dalton, 的 等 長 的 (isometric) 的 對 稱 病 毒 第 一 個 腺 病 毒 是 分 離 自 人 類 的 adenoid tissue( 本 病 毒 亦 因 之 得 名 ), 本 病 毒 於 人 類 對 上 呼 吸 道 及 眼 的 感 染 為 主 某 些 人 類 的 adenovirus 對 年 幼 的 倉 鼠 (baby hamsters) 有 致 癌 性 (oncogenic) adenovirus 可 見 於 mammals,birds,reptiles( 爬 蟲 類 ) 及 amphibians( 兩 棲 類 )

19 Fish adenovirus Virus name Origin Status Authors Cod adenovirus Atlantic cod EM Jensen & Bloch(1980) (Gadus morhua) White sturgeon White sturgeon EM Hedrick et al.(1985) adenovirus (Acipenser transmontanus) Dab adenovirus Dab EM Bloch et al.(1986) (Limanada limanada) Fish adenovirus identified by EM only COD ADENOVIRUS Jensen & Bloch(1980) 於 EM 下 見 到 發 生 於 Atlantic cod 的 adenovirus, 臨 床 上 見 表 皮 增 生 表 皮 細 胞 見 變 厚 而 無 mucus cell STURGEN ADENOVIRUS( 鱘 魚 的 adenovirus) Hedrick et al.(1985) 於 加 州 的 養 殖 sturgen 發 現 的 新 疾 病 (novel disease) 於 spiral valve 及 straight intestine 的 上 皮 細 胞 可 見 核 的 增 大 DAB ADENOVIRUS( 黃 蓋 鰈 的 adenovirus) Bloth et al.(1986) 報 告 關 於 dab 的 一 種 可 能 與 adenovirus 有 關 的 上 皮 增 生 性 疾 病

20 RNA 病 毒 Calicviruses 特 徵 caliciviruses 是 無 封 套, 具 單 股 RNA, 分 子 量 daltons, 對 ether 有 抗 性 於 ph 5 以 上 之 環 境 安 定, 但 低 於 ph 3 則 不 安 定 本 病 毒 僅 於 細 胞 質 內 增 殖 本 病 毒 不 僅 見 於 人 類 嬰 兒 的 下 痢 便 中, 亦 可 見 於 牛 及 禽 類 SAN MIGUEL SEALION VIRUS(SMSV) SMSV 是 一 種 感 染 加 州 海 獅 (Zalophus californianus) 海 洋 的 calicivirus 共 有 七 種 血 清 型, 其 中 5 至 7 型 也 發 現 於 opaleye( 加 州 的 一 種 潮 間 帶 魚 ) Rhabdoviruses 特 徵 rhabdovirus 為 子 彈 型 的 病 毒, 長 約 nm, 寬 約 60-95nm, 有 封 套, 封 套 上 有 長 5-10nm 的 棘 (spike) 其 與 感 染 力 有 關 被 分 離 的 魚 類 rhabdovirus 有 十 種 不 同 species 的 魚 類 rhabdovirus 被 分 離 出 ( 包 括 歸 於 Rhabdovirus anguilla 下 的 七 種 ) RHABDOVIRUS ANGUILLA Hill et al.(1980) 建 議 以 此 名 來 命 名 一 群 分 離 自 不 見 stomatopapilloma 的 鰻 魚, 五 個 被 分 類 於 vesi-culovirus 屬, 二 個 被 分 類 於 lyssavirus 屬 VESICULOVIRUS GENUS Eel virus A(EVA) Sano(1976) 報 告, 分 離 自 發 生 過 流 行 病 的 美 洲 鰻 fry 本 病 歷 感 染 於 自 古 巴 進 口 至 日 本 體 長 6-7 cm, 飼 養 於 的 fry 本 病 毒 可 以 RTG-2 分 離, 培 養 於 20,7 天 可 見 圓 形 化 的 CPE, 不 形 成 質 內 或 核 內 包 含 體

21 以 脂 肪 溶 劑 可 減 EVA 的 感 染 力, 對 甘 油 保 存 及 解 凍 (freeze-thawing) 敏 感 EVA 對 虹 鱒 fry 的 感 染 力 與 溫 度 有 關,20 時 死 亡 率 為 26 %15 時 0%10 時 2% 組 織 病 理 學 上 可 見 腎 有 廣 泛 性 的 壞 死 和 出 血, 肝 胰 和 脾 有 輕 度 壞 死 Eel virus Europe X(EVEX or EVX) EVX rhabdovirus 是 由 Sano(1977) 報 告 分 離 自 由 歐 洲 輸 入 至 日 本 的 歐 洲 鰻 的 幼 鰻 分 離 得 本 病 毒 似 EVA, 於 可 以 RTG-2 於 15, 有 圓 形 化 的 CPE, 不 形 成 內 或 質 內 包 含 體 EVX 的 感 染 於 鮭 科 魚 類 仔 魚 可 見 高 死 亡 率,20 時 死 亡 率 接 近 100%,15 時 70%,10 時 30% EVX 的 感 染 可 見 前 腎 嚴 重 的 壞 死 和 一 些 肌 肉 的 出 血, 肝 和 pancreas 亦 有 輕 度 壞 死 在 法 國 於 歐 洲 鰻 分 離 到 的 病 毒 在 法 國 Loire( 羅 亞 爾 河 ) 河 口 於 歐 洲 鰻 分 離 到 的 三 種 分 別 稱 之 為 C30,B44, 及 D13 的 vesiculovirus 病 毒 (Castric & Chastel 1980;Castric et al. 1984) 這 些 病 毒 以 浸 浴 或 腹 腔 內 注 射 對 鮭 魚 和 歐 洲 鰻 都 不 能 致 病 LYSSAVIRUS GENUS 在 法 國 Loire( 羅 亞 爾 河 ) 河 口 於 歐 洲 鰻 分 離 到 的 二 種 lyssavirus genus 分 別 稱 之 為 C26,B12 (Castric & Chastel 1980;Castric et al. 1984) C26,B12 病 毒 僅 可 在 EPC cell 發 育 而 不 在 RTG-2 生 長, 生 長 溫 度 介 於 之 間,20 以 上 則 不 生 長 C26,B12 對 VHS 鱸 魚 的 rhabdovirus 或 EVX 並 沒 有 中 和 反 應 PERCH PHABDOVIRUS(PRV) 本 病 毒 由 Dorson et al. (1984) 在 幼 鱸 離 得, 臨 床 上 見 有 泳 姿 不 協 調 僅 由 腦 組 織 在 ph 7.6,14 下 的 RTG-2 cell 上 成 功 分 離 得, 在 primary culture 接 種 後 9 天 可 見 壞 死 小 斑 (plaque) 血 清 學 上 的 研 究 顯 示 其 與 其 他 的 rhabdovirus 並 不 相 關 兔 的 抗 PRV 血 清 並 不 對 IHNV 或 VHS 產 生 中 和 反 應, 且 抗 血 清 對 EVA,IHNV or VHSV 也 沒 有 明 顯 的 中 和 抗 體 反 應 PRV 於 時 以 intracranial injection( 顱 內 注 射 ) 對 年 幼 的 鱸 魚 有 輕 度 的 病 原 性, 而 浸 浴 或 腹 腔 內 注 射 則 否

22 RIO GRANDE PERCH PHABDOVIRUS Malsberger & Lautenslager(1984) 在 有 症 狀 並 見 死 亡 的 Rio Grande perch( 里 約 格 蘭 德 河 鱸 ; 或 稱 Mexican cichild, 墨 西 哥 慈 鯛 ) 分 離 得 RHABDOVIRUS SALMONIS 本 病 毒 分 離 自 可 見 肝 炎 (hepatitis) 的 juvvenile rainbow trout(osadchaya & Nakonechnaya,1981) 本 病 毒 可 以 EPC cells 在 分 離 得, 在 感 染 後 48 小 時 可 見 脫 落 的 CPE 其 於 甘 油 保 存 十 天 後 不 活 化, 但 冷 凍 後 仍 具 感 染 力, 是 典 型 的 魚 類 rhabdovirus 於 感 染 本 病 的 trout( 鱒 魚 ) 見 有 肝 炎 (hepatitis) 死 亡 率 達 80% STRIPED SNAKEHEAD RHABDOVIRUS 本 病 毒 為 Frerichs et al.(1981) 自 泰 國 Burma ( 緬 甸 ) 和 Sri Lanka( 斯 里 蘭 卡 ) 的 striped snakehead 和 鯰 魚 分 離 得 臨 床 上 見 有 嚴 重 的 皮 膚 潰 瘍, 盛 行 於 數 種 野 生 和 養 殖 的 魚 本 病 毒 是 以 一 種 鱺 魚 苗 的 非 株 化 細 胞 於 28 分 離 得, 接 種 後 3-14 天 可 見 CPE RHABDOVIRUS OLIVACEUS 本 病 毒 為 Kimura et al.(1986) 自 日 本 Hyogo Prefecture 發 現 於 垂 死 的 養 殖 hirame(japanese flounder) 和 ayu 的 仔 魚 於 hirame 臨 床 上 見 有 生 殖 腺 的 瘀 血, 骨 骼 肌 和 鰭 的 出 血 和 腹 水 的 蓄 積 HRV(hirame rhabdovirus) 可 生 長 於 5-20 間 的 RTG-2 及 多 達 十 種 細 胞 株, 但 鮭 魚 的 細 胞 株 CHSE-214,KO-6 AND CHH-1( 分 別 來 自 chinook, kokanee 及 chum salmon) 者 則 否 在 RTG-2 上 的 CPE 與 IHNV 相 似, 但 不 生 長 於 CHSE-214 的 性 質 則 可 與 IHNV 區 別 HRV 僅 與 同 質 抗 血 清 (homologus antiserum) 有 中 和 反 應, 與 不 同 質 的 抗 血 清 (IHNV, VHSV, SVCV, PFRV, EVA or EVX) 則 否 在 以 少 量 魚 作 試 驗 的 情 形 下 見, 鮭 科 魚 類 中 僅 虹 鱒 (rainbow trout) 於 仔 魚 期 (fry stage) 有 感 受 性,ayu 則 有 抵 抗 性, 在 16 以 下 幼 魚 期 (juvenile stage) 的 hirame 則 可 見 有 輕 度 感 染 ( 死 亡 率 20%), 但 在 低 水 溫 (2-5 ) 的 自 然 感 染 下, 體 重 約 700g 的 hirame 則 曾 見 有 高 達 90% 的 死 亡 率 組 織 病 理 學 上, 虹 鱒 的 HRV 並 未 被 描 述 到, 但 與 鮭 魚 VHS 感 染 相 似 的 有 肌 肉 的 出 血

23 HRV 可 適 應 海 水 PIKE FRY RHABDOVIRUS 本 病 毒 分 離 自 荷 蘭 (Holland) 的 northern pike fry 的 red disease( 或 稱 hrdrocephalus)(de Kinkelin et al.) 本 病 的 特 徵 為 : petechial haemorrhageon the trunk( 軀 幹 見 出 血 斑 ), 於 仔 魚 則 見 全 身 通 紅 頭 部 見 腫 脹 的 膨 出 病 毒 形 態 子 彈 型 長 nm 直 徑 72-88mm 病 毒 存 活 特 性 本 病 毒 於 4 時 不 安 定, 但 於 -80 安 定 於 分 鐘 喪 失 98% 的 力 價 對 低 ph 敏 感 本 病 毒 很 快 的 即 可 為 iodophor wescodyne 不 活 化, 暴 露 於 25 ppm 的 iodine solution 30 秒 病 毒 的 感 染 力 即 下 降 % 的 感 染 力 培 養 檢 測 及 診 斷 PFRV 僅 生 長 於 14 的 FHM cells 接 種 後 40 小 時 可 見 圓 形 化 的 CPE 及 monolayer destruction 臨 床 症 狀 及 肉 眼 病 變 在 春 季 引 起 養 殖 northen pike fry 及 fingerlin 的 大 量 死 亡 罹 病 魚 常 可 見 平 衡 感 消 失 (loss of equilibrium) 浮 游 水 面 大 部 份 可 見 cranial distension( 頭 蓋 骨 腫 大 ) 皮 膚 出 血 鰓 出 血 深 及 肌 肉 的 出 血 斑 本 病 又 red disease 組 織 病 理 變 化 肌 束 間 可 見 明 顯 的 出 血 斑 出 血 斑 亦 見 於 spinal cord, spleen, pancreas 及 腎 臟 的 造 血 組 織 腎 小 管 變 性 及 壞 死, 腎 小 管 中 可 能 可 見 Hyaline casts 或 血 球

24 中 腦 室 可 見 充 滿 液 體 而 擴 張 地 理 分 佈 及 宿 主 範 圍 本 病 毒 最 早 在 1972 年 發 現 於 荷 蘭 的 一 個 大 spike 養 殖 場, 但 迅 即 被 發 現 許 多 種 類 均 可 感 染 包 括 : 草 魚 (grass carp)(ahne 1975) tench and white bream( 鯛 )al.1982) 以 上 於 德 國 分 離 自 健 康 的 魚 brown trout rainbow trout 不 引 起 死 亡 傳 播 經 水 於 病 魚 和 健 康 魚 間 感 染 介 卵 傳 染 控 制 PFR 並 無 疫 苗 可 用 最 佳 的 預 防 方 法 是 隔 離 (avoidance) 卵 的 消 毒 則 以 ph7.4 的 25 ppm wescodyne 中 浸 泡 30 秒, 可 除 去 附 於 卵 表 面 的 病 毒 發 病 魚 應 予 銷 毀 殘 骸 應 消 毒 SPRING VIRAEMIA OF CARP VIRUS( 春 季 病 毒 血 症 ) 此 species 的 病 毒 包 含 兩 個 subtype i.spiring viraemia of carp(rhabdovirus carpio) - 鯉 魚 (common carp) 的 SVC 的 病 原 (Fijan et al.1971) ii.swim bladder imflammation(sbi, 或 稱 aero-cystitis) - 鯉 魚 (common carp) 的 SBI 的 病 原 SVC 和 SBI 這 兩 毒 個 病 毒 混 合 感 染 於 鯉 魚 產 生 傳 染 性 水 腫 (infectious dropsy) 或 水 腫 徵 候 群 (dropsical syndrom) 病 毒 的 特 徵 SVC and SBI 都 是 子 彈 型 的 顆 粒 負 染 色 測 得 的 大 小 為 長 120nm, 寬 60-90nm 病 毒 存 活 特 性 SVC and SBI 對 脂 質 溶 劑 低 ph(ph 3,60 分 鐘 ) 及 熱 (56,30 min) 不 安 定 (labile) 冷 凍 保 存 於 -80 仍 可 保 有 感 染 能 力 培 養 檢 測 及 診 斷 SVC and SBI 可 於 (20-22 最 佳 ) 的 FHM 對 propagated 脂 質 溶 劑 低 ph(ph 3,60 分 鐘 ) 及 熱 (56,30 min) 不 安 定 (labile)

25 冷 凍 保 存 於 -80 仍 可 保 有 感 染 能 力 血 清 學 的 關 係 (serological relationship) SVC 及 SBI 兔 的 抗 血 清 並 沒 有 交 叉 中 和 反 應 對 PFRV and IHNV 亦 無 中 和 反 應, 顯 示 其 與 其 他 魚 類 的 rhabdovirus 在 抗 原 性 上 有 些 差 異 肉 眼 病 變 及 臨 床 症 狀 SVC 行 為 上 可 見 異 常, 包 括 i. 呼 吸 速 率 降 低 ii. 平 衡 感 消 失 iii. 泳 姿 不 協 調 iv. 集 聚 於 出 水 口 病 變 上 可 見 i. 腹 部 膨 大 ii. 偶 見 眼 球 凸 出 (exophthalmos) iii. 體 色 變 黑 iv. 肛 門 周 圍 炎 症 及 附 著 有 黏 液 v. 鰓 絲 蒼 白 並 有 斑 狀 出 血 vi. 身 體 可 見 出 血 斑 SBI 於 第 一 或 第 二 年 鯉 於 夏 季 外 觀 可 見 異 常, 包 括 i. 體 重 下 降 ii. 腹 部 膨 大 iii. 凸 眼 iv. 反 應 遲 鈍 v. 泳 鰾 發 炎 以 上 除 泳 鰾 的 發 炎 外 大 部 份 與 SVC 相 似 組 織 病 理 及 致 病 機 序 SVC 常 見 的 病 理 變 化 包 括 腹 膜 炎 (peritonitis) 腹 水 (ascites) 卡 他 或 出 血 性 腸 炎 臟 器 的 水 腫 心 肝 腎 腸 泳 鰾 內 壁 及 骨 骼 肌 見 出 血 斑 二 次 性 細 菌 自 腸 道 入 侵

26 Ahne(1978a) 以 恢 復 的 魚 來 作 致 病 機 序 的 研 究 指 出,SVCV 是 經 水 自 鰓 進 入 並 鰓 增 殖, 再 經 血 液 廣 散 到 其 他 標 的 器 官 SBI 內 臟 病 變 包 括 血 管 擴 張 鰾 內 壁 和 心 肌 斑 狀 出 血 腦 血 管 可 能 可 見 阻 塞 並 佔 滿 血 液 腹 腔 內 可 能 可 見 腹 水 鰾 的 微 微 血 管 可 見 瘀 血, 化 生 (metaplasia) 及 壞 死, 脫 落 至 腔 內 地 理 分 佈 及 宿 主 範 圍 SVC 歐 洲 各 國 ( 南 斯 拉 夫 德 國 英 國 ) 宿 主 範 圍 可 能 不 止 鯉 科 野 生 鯉 的 感 受 性 大 於 養 殖 鯉 SBI 本 病 發 生 於 數 個 歐 洲 養 殖 鯉 魚 的 國 家 但 對 宿 主 範 圍 的 資 料 仍 嫌 不 足 傳 播 SVC 排 出 的 糞 便 ( 可 能 包 括 尿 ) 經 水 傳 染 吸 血 性 寄 生 蟲, 如,leech(Piscicola geometria), carp louse(argulus foliaceus), 的 機 械 性 傳 播 ( 雖 然 仍 欠 缺 病 毒 於 它 們 組 織 中 增 殖 的 証 據 ) SBI 傳 播 途 徑 並 未 確 立, 但 從 它 快 速 的 傳 播 推 測 應 與 水 有 關 控 制 SVC 幼 鯉 感 染 10 3 TCID 的 SVC virulent strain 保 持 於 15 ( 最 好 ), 死 亡 率 相 當 低, 但 對 可 能 使 未 免 疫 魚 帶 來 高 死 亡 率 的 virulent strain SVCV 的 攻 毒 有 保 護 效 果 SBI 抗 生 素 的 使 用 可 以 減 少 因 二 次 性 細 菌 感 染 而 致 的 損 失 與 SVC 相 似 的 以 immunoprophylaxis 可 能 有 效 INFECTIOUS HAEMATOPOIETIC NECROSIS IHNV 包 含 至 少 三 株 分 離 自 North American salmonids 的 病 毒 i.oregon sockeye disease virus(ruker et al.1953) - 引 起 sock eye salmone 巨 大 的 損 失

27 ii.sacromento River chinook salmon disease virus (Ross et al.1960) iii. 虹 鱒 的 infectious haematopoietic necrosis virus(amend et al. 1969) 以 上 三 株 僅 能 於 形 態 上 區 另 而 無 法 以 多 株 抗 體 的 中 和 反 應 區 分 病 毒 的 形 態 此 三 株 病 毒 都 是 子 彈 型 大 小 nm 病 毒 生 化 性 狀 不 同 strain 的 IHNV 可 以 五 項 主 要 的 蛋 白 在 電 泳 上 的 運 動 性 來 區 別 (Leong et al.1981,1985) L(polymemase) G(glycoprotein N(nucleocapside) M(matrix phosphoprotein) M2(matrix protein) 病 毒 的 存 活 特 性 對 脂 質 溶 劑 ( 如,ether) 敏 感 於 甘 油 中 保 存 效 果 不 佳 超 過 6-8 的 範 圍 則 對 ph 的 改 變 很 敏 感, 尤 其 是 對 低 ph 病 毒 於 -70 及 -20 時 存 活 良 好, 但 昇 高 4 則 存 活 力 便 大 大 的 降 低 若 保 存 於 10% 的 蛋 白 質 內 可 提 高 存 活 力, 故 保 存 時 的 狀 況 多 為 -70 並 加 10% 胎 牛 血 清 血 清 學 的 關 係 不 同 來 源 分 離 得 的 IHNV 無 法 以 多 株 抗 體 區 分 培 養 檢 測 及 診 斷 病 毒 的 分 離 幾 乎 可 由 罹 病 魚 的 任 一 組 織 獲 得, 但 種 魚 的 檢 測 則 以 卵 巢 內 的 液 體 為 第 一 選 擇 (Mulcahy & Batts 1987) 以 下 五 種 細 胞 對 大 部 份 IHNV 敏 感 CHSE-214 STE-137 RTG-2 EPC FHM 而 以 FHM,EPC 產 生 的 CPE 最 早 生 長 溫 度 自 4-18 而 以 最 佳 CPE 主 要 為 圓 化, 及 聚 成 簇 (clustering)

28 於 CHSE-214 中 IHNV 曾 有 潛 在 感 染 的 報 告, 產 生 persistently infection(pi)cell, 外 觀 正 常 但 以 螢 光 染 色 則 可 染 出 抗 原 (Engelking & Leong 1981) 潛 伏 感 染 的 情 況 與 temperature-sensitive mutants,small plaque mutants 及 DI particles 有 關, 活 體 內 的 潛 伏 情 形 亦 與 上 述 三 因 子 有 關 臨 床 症 狀 及 肉 眼 病 變 行 為 上 的 改 變 包 括 : 昏 睡 (lethargy) 偶 發 的 迴 旋 運 動 (sporadic whirling) 外 觀 見 有 腹 部 膨 大 凸 眼 (exophthalmia,pop-eye) 鰓 絲 缺 血 而 呈 蒼 白 鰭 基 部 出 血 體 色 變 黑 拖 糞 (trailing faecal casts) 頭 顱 後 方 側 線 上 方 的 皮 膚 常 見 有 皮 下 出 血 內 臟 見 有 肝 腎 蒼 白 胃 部 充 滿 液 體 而 輕 度 膨 脹 腸 內 充 滿 黃 色 液 體 caecae 和 脂 肪 組 織 偶 可 見 出 血 斑, 特 別 在 較 大 的 魚 組 織 病 理 變 化 及 致 病 機 序 主 要 病 變 如 同 病 名 所 敘 垂 死 魚 (moribund fish) 常 可 見 後 腎 及 spleen 的 壞 死 骨 胳 肌 可 見 局 部 出 血 腸 道 黏 膜 下 層 的 嗜 伊 紅 性 顆 粒 細 胞 (EGCs, eosinophilic granular cell) 有 特 徵 性 的 嚴 重 壞 死 liver,pancreas 有 局 部 性 壞 死 垂 死 魚 可 見 renal sinuses 可 見 瘀 血, 死 因 可 能 是 腎 衰 竭 (Kidney failure) 罹 病 的 sockeye smolts( 兩 歲 之 小 鮭 ) 各 魚 之 間 頗 有 差 異, 而 沒 有 共 同 的 特 徵 (Burke & Grischkowsky), 但 可 觀 察 到 腎 臟 造 血 組 織 的 壞 死 肝 及 脾 可 見 pycnotic cell 有 些 於 胰 臟 可 見 變 性 及 出 血

29 於 鰓 見 大 量 病 毒 的 smolts 可 認 為 是 新 近 感 染 的 病 例 感 染 的 fry, 病 毒 幾 乎 可 自 任 何 內 臟 器 官 分 離 得 如 果 沒 有 致 死 的 病 魚 則 成 魚 ( 不 論 雌 雄 ) 可 自 生 殖 腺 的 液 體 中 分 離 出 高 力 價 的 病 毒 死 亡 率 潛 伏 期 及 水 溫 的 關 係 水 溫 對 本 病 有 相 當 大 的 影 響 於 10 時 本 病 的 發 生 相 當 嚴 重, 潛 伏 期 短 死 亡 率 高 低 於 10 時 潛 伏 期 變 長, 且 病 程 通 常 較 為 慢 性 高 於 10 時 潛 伏 期 更 短, 且 病 程 更 急 性, 但 死 亡 率 通 常 較 低 尚 未 有 15 以 上 發 病 的 自 然 感 染 病 例 地 理 分 佈 及 宿 主 範 圍 本 病 是 北 美 洲 太 平 洋 沿 岸 的 地 方 性 (endemic) 疾 病 coho 對 IHNV 有 扺 抗 性, 但 捉 回 加 州 Trinity River Hatchery 的 成 魚 曾 被 發 現 有 感 染 現 象 IHNV 在 流 入 美 洲 西 岸 各 河 流 域 的 孵 化 場 中 均 有 發 現, 特 別 是 哥 倫 比 亞 河 和 及 美 國 東 部 和 中 部 的 孵 化 場, 亦 因 魚 卵 的 運 輸 而 傳 染 Baudin-Laurencin(1987) 指 出 在 法 國 有 一 個 病 例 發 生 於 fry and fingerlin 其 死 亡 率 有 50% Bobo et al.(1987) 在 義 大 利 的 一 個 sac-fry 有 100% 的 死 亡 率 傳 播 病 毒 的 水 平 (lateral or horizontal) 感 染 可 由 感 染 的 水 尿 感 染 的 飼 料 糞 便 進 行 垂 直 (vertical) 感 染 則 由 " 生 產 線 "(germ-line) 己 被 確 立, 但 於 實 驗 室 的 小 規 模 感 染 則 不 易 進 行, 因 傳 染 率 相 當 低 病 毒 曾 自 死 亡 的 發 眼 卵 (eyed eggs) 中 離 得 (Mulcahy & Pascho 1985), 顯 示 病 毒 可 於 卵 內 發 育 及 增 殖, 並 殺 死 發 育 中 的 卵 並 非 所 有 的 感 染 雌 魚 都 會 將 病 毒 傳 到 卵, 也 並 不 是 所 有 的 卵 都 帶 有 致 死 量 的 病 毒 控 制 本 病 大 致 上 有 如 下 數 種 控 制 方 式 1. Extermination and quarantine( 檢 除 及 隔 離 ) 若 有 更 敏 感 的 檢 測 方 法 則 以 本 法 最 佳 2. Vaccination( 免 疫 ) a.live attenuated vaccine

30 b.subunit vaccine(glycoprotein only) 3. Changing host species 4. Elevated water temperature 提 高 水 溫 到 14 以 上 5. Limiting distribution VIRAL HAENORRHAGIC SEPTICEMIA VIRUS(VHSV) 型 態 VHS 是 子 彈 型 的 病 毒 不 同 的 研 究 對 其 大 小 有 不 同 的 報 告 nm(olberding & Frost 1975) nm(de Kinkelin & Scherrer 1970) 病 毒 存 活 特 性 VHSV 對 質 溶 劑 ph 溫 度 敏 感 不 同 的 不 活 化 條 件 請 參 看 課 本 表 6.10 病 毒 存 活 特 性 VHSV 對 質 溶 劑 ph 溫 度 敏 感 不 同 的 不 活 化 條 件 請 參 看 課 本 表 6.10 培 養 檢 測 及 診 斷 1. 病 毒 檢 測 本 病 毒 可 於 EPC,RTG-2 OR CHSE-214 上 發 育 RTG-2 上 的 CPE( 圓 型 化 ) 最 早 出 現 最 佳 的 培 養 條 件 是 14,pH 則 為 本 病 毒 可 於 6-18 發 育 VHSV 可 以 直 接 以 螢 光 抗 體 法 確 認 2. 抗 體 檢 測 中 和 抗 體 可 以 plaque neutrization 測 得 以 逆 電 流 電 泳 可 測 得 抗 體 臨 床 症 狀 和 肉 眼 病 變 於 trout 的 典 型 病 變 可 分 急 性 型 慢 性 型 和 神 經 型, 各 型 間 可 互 相 轉 換 各 型 的 特 微 請 參 看 課 本 表 6.11 組 織 病 理 學 各 型 的 特 微 請 參 看 課 本 表 6.12 主 要 的 病 變 有 大 區 域 的 出 血 水 腫 肌 肉 及 骨 膜 的 出 血 不 同 程 度 的 組 織 變 性 特 別 在 腎 和 脾

31 腎 及 肝 細 胞 的 可 見 包 含 體 到 細 胞 的 早 期 壞 死 肌 纖 維 的 溶 解 腎 小 管 上 皮 包 細 胞 可 見 有 明 顯 的 壞 死 和 腔 中 可 見 硫 璃 樣 物 質 (hyaline material) 致 病 機 序 於 實 驗 的 感 染 中, 經 水 的 管 道, 感 染 後 48 小 時 腎 及 脾 即 可 以 分 離 或 細 胞 學 的 方 式 檢 出 病 毒 感 染 後 72 小 時 鰓, 特 別 是 次 級 鰓 簿 板 中 有 支 持 作 用 的 柱 狀 細 胞 (pillar cell), 亦 可 檢 出 因 此 病 毒 最 初 進 入 的 門 戶 應 是 鰓 而 於 腎 及 脾 中 增 殖 感 染 和 免 疫 感 染 後 恢 復 的 魚, 病 毒 潛 存 於 體 內 的 時 間 隨 溫 度 而 有 不 同, 例 如 有 學 者 指 出 鮭 魚 於 4 經 一 年 仍 可 分 離 得 病 毒 Jorgensen(1982) 發 現 鱒 魚 於 10 下 低 毒 株 的 感 染 可 產 生 中 和 抗 體 地 理 學 上 的 分 佈 和 宿 主 範 圍 VHS 曾 於 歐 洲 各 國 引 起 嚴 重 的 傳 染 病, 諸 如 丹 麥 (Jensen 1963) 義 大 利 (Zanin et al. 1983) 德 國 瑞 士 西 班 牙 但 英 國 則 否, 美 洲 亦 無 VHSV 的 宿 主 範 圍 請 參 見 課 本 表 6.13 傳 播 本 病 的 傳 播 有 很 大 的 比 例 是 藉 含 高 病 毒 量 的 水 而 來 源 可 能 是 自 養 殖 池 中 逃 出 的 感 染 魚 罹 病 的 仔 魚 (fry) 或 感 染 的 卵 控 制 疫 苗 的 使 用 於 鱒 的 fry 及 較 大 的 魚 應 是 可 行 但 尚 未 有 商 品 化 的 疫 苗 出 現