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1 光 学 - 生 命 科 学 若 干 交 叉 课 题 的 介 绍 杨 国 桢 中 国 科 学 院 物 理 研 究 所 2006 年 7 月 31 日 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 1

2 Coherent Radiation Sources for Small Laboratories CW: Tunability: IR Visible Linewidth: 1 Hz Intensity: μw 10W Pulsed: Tunabality: THz Soft X-ray Pulse width: ns, ps, fs Linewidth: Transform limited Intensity: up to TW for fs pulses Quasi-cw: ~100 MHz mode-locked pulses Tunability: IR Visible Frequency Comb: Periodic fs pulses 2

3 一 光 反 射 差 法 二 光 镊 三 超 快 光 谱 四 拉 曼 散 射 五 近 场 光 学 六 纳 米 光 学 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 3

4 用 斜 入 射 光 反 射 差 技 术 进 行 生 物 分 子 无 标 记 研 究 中 国 科 学 院 物 理 研 究 所 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 4

5 薄 膜 的 斜 入 射 光 反 射 差 λ 检 测 原 理 θ 环 境 (ε 0 ) 膜 层 (ε 1 ) d 基 片 (ε 2 ) 物 质 参 数 ( ε ε )( ε ε ) δρ 4πε sinθ tanθ d i 2 ρo ( 0)( ε2 ε0 tan θ) ε0 ε2 ε ε1 λ Film Properties 5

6 扫 描 斜 入 射 光 反 射 差 显 微 镜 激 光 器 (λ) I Ω I 2Ω 偏 振 器 光 弹 偏 振 调 制 器 (Ω) 相 移 器 θ d 分 析 器 检 测 器 样 品 层 精 密 二 维 移 动 平 台 基 底 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 光 反 射 差 信 号 : Δ p Δ s Δr r p Δrs r p0 s0 ( r E ) p rp () i E p ( r E ) s rs () i E s I Ω Im{ Δ Δ } I Re{ Δ Δ } p s 2Ω p s 6

7 thickness of 84nm. APL 75 (1999), 3464 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 7

8 Simultaneously measured RHEED (blue) and RD (red) intensity for interrupted growth of SrTiO 3 homoepitaxy. PHYS REV B 57, 1998; PHYS REV B 61,

9 特 点 : 具 有 极 高 灵 敏 度 (10e-5) 可 以 检 测 单 个 原 胞 或 单 分 子 层 变 化 (1/20) 9 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会

10 用 斜 入 射 光 反 射 差 技 术 探 测 生 物 样 品 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 10

11 原 位 检 测 生 物 分 子 反 应 玻 璃 片 θ 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 11

12 12

13 斜 入 射 光 反 射 差 技 术 应 用 的 可 能 性 DNA-DNA 反 应 : DNA-DNA 杂 交 蛋 白 质 - 蛋 白 质 反 应 : 抗 原 - 抗 体 俘 获 蛋 白 质 -DNA 反 应 : 可 用 于 生 物 分 子 反 应 的 基 础 研 究 和 制 药 也 可 以 开 发 新 的 应 用! 13

14 特 点 : 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 斜 入 射 光 反 射 差 法 与 荧 光 标 记 法 比 较 斜 入 射 光 反 射 差 法 无 需 荧 光 标 记 物, 工 艺 更 简 单 斜 入 射 光 反 射 差 法 所 用 光 源 功 率 较 低 (mw 级 ) 波 长 较 长 ( 通 常 为 632.8nm), 无 漂 白 作 用 斜 入 射 光 反 射 差 法 灵 敏 度 高 于 荧 光 标 记 法 14

15 抗 原 - 抗 体 俘 获 检 测 Before Reaction After Reaction Difference Cy3 Fluorescence Im{ Δp Δs } θ = 45º Cy3-Labeled goat anti-rb 15 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会

16 斜 入 射 光 反 射 差 法 检 测 少 数 核 苷 酸 杂 交 Before Hybridization After Hybridization Difference Im{ Δ p Δ s } θ = 45º [Opt. Lett. 29, 581 (2004)] Unlabeled Complement Cy5-Labeled Complement Cy5 Fluorescence 16

17 斜 入 射 光 反 射 差 法 展 望 Real-time OI-RD microscopy contrasts for protein function study Volume density of molecular complexes (ρ) Temporal profiles and rate constants of reactions (k) (Transient effects, intermediate kinetic steps, etc.) 实 时 多 通 道 高 速 检 测 Δ p - Δ s ρ ~ Δ p - Δ s k ~ d{δ p - Δ s }/dt 17

18 OIRD 方 法 对 神 经 细 胞 的 初 步 检 测 结 果 ( 与 生 物 物 理 所 何 士 刚 教 授 合 作 ) 无 细 胞 点 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 Im{Δp-Δs} A B C 1 1 B A C Time(s) 样 品 1: 两 个 空 白 处 的 信 号 差 ~ 空 白 与 有 细 胞 的 信 号 差 ~ 或 有 细 胞 点 18

19 Im{Δp-Δs} A B C D 2 A B C D 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 无 细 胞 点 Time(s) 有 细 胞 点 样 品 2: 两 个 空 白 处 的 信 号 差 ~ 两 个 有 细 胞 处 的 信 号 差 ~ 空 白 与 有 细 胞 的 信 号 差 分 别 为 ~ 或

20 0.045 无 细 胞 点 Im{Δp-Δs} A B C 3 B 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 A C Time(s) 有 细 胞 点 样 品 3: 两 个 有 细 胞 处 的 信 号 差 ~ 空 白 与 有 细 胞 的 信 号 差 ~ 或

21 结 论 : 有 细 胞 的 地 方 与 没 细 胞 的 地 方 的 信 号 强 度 差 要 远 远 大 于 多 处 没 细 胞 间 的 信 号 强 度 差 或 多 处 有 细 胞 间 的 信 号 强 度 差 OIRD 这 种 新 型 方 法 在 神 经 细 胞 检 测 甚 至 细 胞 活 动 方 面 具 有 潜 在 应 用 的 可 能 21

22 两 种 蛋 白 质 样 品 1 ( 与 上 海 生 化 细 胞 所 阮 康 成 教 授 合 作 ) A 空 白 ( 只 有 凝 胶 ) B Biotin-anti-IgG / avidin /streptokinase( 链 激 酶 ) 三 种 蛋 白 质 Im{Δp-Δs} C B A C Biotin-anti-IgG( 生 物 素 抗 免 疫 球 蛋 白 ) 一 种 蛋 白 质 Time(s) 两 种 样 品 中 心 位 置 信 号 变 化 不 同 样 品 ( 既 不 同 蛋 白 质 ) 的 信 号 强 度 存 在 差 值, 变 化 出 现 在

23 不 同 浓 度 各 种 单 一 蛋 白 质 样 品 2 IgG: 免 疫 球 蛋 白 (immmunoglobulin-g) Cytc: 细 胞 色 素 (cytochrom) 浓 度 分 别 为 5 50 和 500 µg/ml Im{Δp-Δs} 2.4x x x x x x x10-1 IgG Cytc Concentration ( μg/ml) 采 用 该 方 法 可 以 对 不 同 蛋 白 质 分 子 样 品 进 行 监 测 采 用 该 方 法 可 以 对 蛋 白 质 分 子 不 同 浓 度 样 进 行 监 测 进 而 可 望 监 测 蛋 白 质 反 应 过 程 23

24 一 光 反 射 差 法 二 光 镊 三 超 快 光 谱 四 拉 曼 散 射 五 近 场 光 学 六 纳 米 光 学 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 24

25 基 于 会 聚 光 束 形 成 的 光 阱 对 光 阱 中 客 体 的 光 梯 度 力 来 束 缚 及 操 控 客 体 的 运 动 F F r 3, n r, δi 定 量 测 定 分 子 的 纳 米 量 级 移 动 及 皮 牛 顿 量 级 作 用 力 特 点 : 把 操 控 与 定 量 测 量 结 合 起 来 无 直 接 接 触, 非 侵 入 性, 活 体 测 量 25

26 26

27 我 们 光 镊 的 主 要 指 标 : 位 置 分 辨 : 1nm 测 力 分 辨 : ~ 0.1pN 测 量 时 间 响 应 : 0.3ms 测 量 范 围 : 100 pn (Single optical trap) 27

28 与 若 单 明 和 生 物 素 相 连 的 微 管 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 用 双 光 镊 系 统 研 究 微 管 拉 伸 及 断 裂 的 示 意 图 - 与 中 国 农 大 袁 明 教 授 合 作 Trap B 移 动 光 阱 Trap A 固 定 光 阱 与 抗 生 物 素 相 连 的 小 球 28

29 29

30 8 Force(pN) Tubulin labeling ration 57% Excitation intensity 100% Ascorbic acid 8mM Extension of microtubule (%) 微 管 的 伸 长 和 所 加 力 的 关 系 微 管 断 裂 的 力 为 6.6 pn, 微 管 的 拉 伸 约 为 30%. 根 据 此 曲 线 可 以 获 得 微 管 的 杨 氏 模 量 0.3MPa. 30

31 微 管 断 裂 的 动 态 过 程 F=10.13 pn Force(pN) pN F=5.55 pn F=4.15 pn 2 F=2.15 pn time(s) 在 外 力 作 用 下 微 管 断 裂 的 动 态 过 程. 从 图 中 可 以 看 出 组 成 微 管 的 原 丝 的 断 裂 不 是 同 时 发 生, 而 是 逐 步 完 成 的. 力 的 步 矩 约 为 2 pn 31

32 微 管 与 微 管 结 合 蛋 白 相 互 作 用 测 量 - 与 中 国 农 大 袁 明 教 授 合 作 在 高 等 植 物 中, 细 胞 不 同 分 裂 期, 微 管 排 列 成 不 同 的 结 构. 现 在 普 遍 认 为 微 管 结 合 蛋 白 对 于 微 管 的 组 织 和 动 态 调 控 起 着 关 键 性 作 用 然 而, 对 于 微 管 结 合 蛋 白 在 形 成 不 同 的 微 管 阵 列 中 起 什 么 样 的 作 用 还 不 十 分 清 楚 32

33 AtMAP65-1 被 双 光 阱 操 纵 的 聚 苯 乙 烯 小 球 微 管 电 镜 图 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 33

34 定 量 测 量 的 AtMAP65-1 微 管 和 蛋 白 之 间 作 用 力 pN Force(pN) 10 5 NaCl:50mM Time(ms) 结 合 力 14.7pN, 作 用 距 离 3nm, 结 合 能 44 pn nm~25kj (1pN nm mol=0.6kj) 34

35 pN 13.4pN 12 Unbinding force(pn) Time(ms) 微 管 结 合 蛋 白 先 后 发 生 两 次 分 离, 每 次 分 离 的 力 约 为 14 pn, 提 示 我 们 在 微 管 束 之 间 有 两 个 结 合 蛋 白 35

36 counts (N) Unbinding force (pn) 微 管 和 结 合 蛋 白 联 结 力 统 计 图 50mMNaCl 存 在 的 条 件 下 出 现 的 峰 值 大 约 在 12.5 pn 的 整 数 倍 处, 这 表 示, 联 结 力 可 能 为 12.5 pn 36

37 非 编 码 RNA 和 蛋 白 相 互 作 用 的 测 量 - 与 生 物 物 理 所 陈 润 生 研 究 员 合 作 我 们 测 量 了 人 类 非 编 码 Y1 RNA 和 La/SS-B Antigen 之 间 的 相 互 作 用 力, 大 小 约 为 13.4pN 工 作 刚 开 始 pn 10 Force (pn) Time (ms) 37

38 用 光 镊 系 统 测 量 蛋 白 之 间 作 用 力 的 示 意 图 固 定 光 阱 移 动 光 阱 d 开 始 时, 两 个 小 球 分 别 位 于 光 阱 的 中 心 位 置 在 测 量 蛋 白 的 相 互 作 用 时, 我 们 移 动 可 移 动 的 光 阱, 这 时 小 球 就 会 偏 移 固 定 光 阱 的 中 心 从 移 动 距 离 d 就 可 推 导 出 作 用 力 38

39 一 光 反 射 差 法 二 光 镊 三 超 快 光 谱 四 拉 曼 散 射 五 近 场 光 学 六 纳 米 光 学 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 39

40 以 光 合 作 用 中 的 超 快 过 程 先 谱 为 例 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 40

41 进 化 链 上 的 不 同 植 物 低 等 植 物 : 光 合 细 菌 蓝 藻 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 海 藻 高 等 植 物 : 菠 菜 41

42 外 周 捕 光 天 线 0.5 ps 10 ps 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 超 快 光 谱 揭 示 的 细 菌 光 合 膜 蛋 白 传 能 过 程 1ps = 秒 3-5 ps 1-3 ps 35 ps 内 周 捕 光 天 线 反 应 中 心 42

43 应 用 超 快 时 间 分 辨 激 光 光 谱 研 究 细 菌 光 合 膜 蛋 白 与 纳 米 粒 子 相 互 作 用 引 起 的 膜 蛋 白 结 构 畸 变 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 43

44 Biophysics Journal, 86, 1082, 2004 应 用 高 能 所 同 步 辐 射 光 源 进 行 小 角 X- 射 线 散 射 实 验, 证 实 溶 液 单 分 子 状 态 下 外 周 捕 光 天 线 LH2 为 椭 圆, 而 非 晶 体 状 态 下 的 圆 对 称 结 构 小 角 X 射 线 散 射 实 验 LH2 晶 体 结 构 溶 液 中 LH2 膜 蛋 白 结 构 发 生 畸 变 溶 液 状 态 的 LH2 分 子 比 晶 体 结 构 少 胖 一 点 是 因 为 蛋 白 质 表 面 过 了 一 个 单 分 子 层 的 表 面 活 性 剂 分 子 44

45 结 构 畸 变 对 LH2 激 子 态 能 级 的 影 响 LH2 畸 变 后, 最 低 激 发 态 变 得 光 学 跃 迁 部 分 允 许, 激 发 态 寿 命 变 短 激 子 态 寿 命 可 成 为 蛋 白 质 畸 变 的 判 据 圆 形 LH2 激 发 态 寿 命 长 椭 圆 形 LH2 激 发 态 寿 命 短 45

46 纳 米 粒 子 诱 导 LH2 结 构 畸 变 的 超 快 光 谱 实 验 Biophysics Journal 88 (6), , 2005 纳 米 粒 子 与 LH2 的 自 组 装 46

47 飞 秒 瞬 态 吸 收 光 谱 仪 Near IR, 1.1μm, 1.4 μm OPA, Home-built 800 nm, 150 fs Hurricane IR 5-7 μm BBO Filter 1/2λ Delay line Shutter 2 Sapphire Shutter 1 Completed in Dec. 25,2001 Optical fiber Wedge Microscope CCD 47

48 ΔA (a.u.) 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 LH2 纳 米 粒 子 组 装 体 的 飞 秒 时 间 分 辨 瞬 态 吸 收 光 谱 试 验 试 验 表 明 组 装 后 寿 命 变 短, 通 过 精 心 的 试 验 设 计, 证 明 寿 命 变 短 由 于 LH2 结 构 畸 变 引 起 LH2(R26.1) LH2-Fit ΔA(a.u.) LH2(R26.1) LH2(R26.1)&TiO 2 Delayed at 2ps -0.9 LH2(R26.1)&TiO 2 LH2(R26.1)&TiO 2 -Fit Time delay (ps) Wavelength (nm) 无 β- 胡 萝 卜 素 分 子 的 LH2 突 变 体 TiO 2 组 装 体 激 子 态 的 瞬 态 吸 收 动 力 学 瞬 态 吸 收 光 谱 48

49 Biophysics Journal, 86, 1082, 2004 应 用 高 能 所 同 步 辐 射 光 源 进 行 小 角 X- 射 线 散 射 实 验, 证 实 溶 液 单 分 子 状 态 下 外 周 捕 光 天 线 LH2 为 椭 圆, 而 非 晶 体 状 态 下 的 圆 对 称 结 构 小 角 X 射 线 散 射 实 验 LH2 晶 体 结 构 溶 液 中 LH2 膜 蛋 白 结 构 发 生 畸 变 溶 液 状 态 的 LH2 分 子 比 晶 体 结 构 少 胖 一 点 是 因 为 蛋 白 质 表 面 过 了 一 个 单 分 子 层 的 表 面 活 性 剂 分 子 49

50 LH2 膜 蛋 白 与 一 系 列 尺 寸 不 同 的 带 负 电 SiO 2 纳 米 粒 子 组 装, 通 过 瞬 态 光 谱 实 验 证 实 蛋 白 质 畸 变 与 纳 米 粒 子 尺 寸 之 间 存 在 匹 配 关 系, 即 两 者 尺 度 相 近 时 引 起 的 畸 变 效 应 最 大 (a) (b) (c) (d) 50

51 蛋 白 质 纳 米 粒 子 相 互 作 用 尺 度 匹 配 效 应 的 科 学 意 义 纳 米 毒 理 : 尺 寸 效 应 纳 米 药 物 : 抗 爱 滋 病 药 物 HIV 病 毒 蛋 白 活 性 腔 C 60 分 子 通 过 尺 度 匹 配 占 据 空 腔 病 毒 蛋 白 失 活 揭 示 纳 米 尺 度 相 关 的 毒 性 药 物 设 计 51

52 一 光 反 射 差 法 二 光 镊 三 超 快 光 谱 四 拉 曼 散 射 五 近 场 光 学 六 纳 米 光 学 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 52

53 光 在 介 质 中 的 传 播 和 散 射 图 1. 光 在 介 质 中 的 传 播 和 散 射 当 频 率 为 ω 0 激 光 束 射 入 介 质 后, 除 了 被 介 质 吸 收 的 光 之 外, 大 部 分 仍 以 频 率 为 的 ω 0 光 沿 入 射 方 向 穿 过 介 质, 还 有 一 小 部 分 光 被 介 质 散 射 到 四 面 八 方, 并 且 改 变 了 方 向 散 射 光 中 不 仅 有 频 率 为 ω 0 的 入 射 光 而 且 还 包 含 有 频 率 为 的 ω s 散 射 光 散 射 光 的 频 谱 如 图 1 所 示 53

54 光 子 与 元 激 发 粒 子 碰 撞 示 意 图 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 54

55 光 散 射 的 微 观 描 述 光 散 射 的 微 观 过 程 55 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会

56 拉 曼 光 谱 测 量 技 术 的 优 越 性 1 拉 曼 光 谱 提 供 快 速 简 单 可 重 复 更 重 要 的 是 无 损 伤 的 定 性 定 量 分 析 2 由 于 水 对 拉 曼 散 射 的 干 扰 很 弱, 拉 曼 光 谱 是 研 究 水 溶 液 中 的 生 物 样 品 和 化 学 化 合 物 的 理 想 工 具 3 显 微 拉 曼 可 将 激 光 束 聚 焦 至 1 微 米 甚 至 更 小 4 表 面 增 强 拉 曼 散 射 (SERS) 可 以 将 被 吸 附 在 某 些 粗 糙 金 属 表 面 上 的 分 子, 使 它 们 的 拉 曼 信 号 强 度 增 加 10 4 到 倍 56

57 拉 曼 散 射 在 光 合 作 用 体 系 中 的 研 究 ( 举 列 一 ) 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 研 究 光 反 应 中 心 II 中 类 胡 萝 卜 素 的 意 义 : 类 胡 萝 卜 素 在 光 合 作 用 中 具 有 多 种 重 要 的 生 理 功 能, 概 括 讲 主 要 有 三 方 面 : 1 作 为 辅 助 色 素 分 子, 吸 收 nm 波 长 范 围 内 的 不 能 被 叶 绿 素 分 子 很 好 吸 收 的 可 见 光, 并 将 激 发 能 传 递 给 叶 绿 素, 从 而 扩 展 了 光 合 生 物 光 能 利 用 范 围 2 作 为 光 保 护 剂, 保 护 光 合 器 官 免 遭 过 多 光 能 而 引 起 损 伤 3 作 为 色 素 - 蛋 白 复 合 物 的 重 要 组 成 成 分, 有 着 稳 定 结 构 的 作 用 搞 清 类 胡 萝 卜 素 在 光 反 应 中 心 II 中, 其 构 型 和 构 像 对 植 物 生 长 中 的 光 抑 止 和 光 保 护 机 理, 对 提 高 植 物 光 合 作 用 率, 促 进 生 长 旺 盛, 产 量 增 加, 是 一 项 具 有 科 学 价 值 和 社 会 经 济 价 值 的 研 究 项 目 特 别 是 光 合 率 提 高 的 机 理 的 研 究, 十 分 有 意 义 57

58 研 究 背 静 与 我 们 的 创 新 实 验 :1972 年 Lutz 等 人 首 次 测 定 了 分 离 纯 化 的 Chl a( 叶 绿 素 a) 分 子 的 拉 曼 光 谱 为 光 合 作 用 研 究 的 深 入 起 到 了 推 动 作 用 在 我 们 的 研 究 中, 最 大 的 创 新 点 就 是 把 共 振 拉 曼 散 射 (RRS) 和 表 面 增 强 拉 曼 散 射 (SERS) 结 合 起 来, 首 先 将 表 面 增 强 共 振 拉 曼 散 射 (SERRS) 运 用 到 光 合 体 系 研 究 中 实 验 效 果 : 利 用 SERRS 技 术, 可 提 高 拉 曼 光 谱 强 度 10 9 倍 即 用 小 的 激 光 功 率, 也 获 得 了 较 低 浓 度 (2 x10-9 mol/l) 下 各 种 类 胡 萝 卜 素 分 子 丰 富 的 拉 曼 光 谱 这 用 普 通 共 振 拉 曼 方 法 是 根 本 得 不 到 得 58

59 SERRS 测 定 Pd OECC 中 β- 胡 萝 卜 素 分 子 构 型 与 强 光 辐 照 后 微 结 构 变 化 所 引 起 拉 曼 光 谱 改 变 的 观 察 Intensity(a.u.) 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 cm-1 附 近 反 映 -CH 基 团 向 共 轭 多 烯 链 平 面 外 的 弯 曲 振 动 程 度, 不 仅 和 多 烯 链 的 平 面 对 称 性 和 电 子 的 分 配 有 关, 而 且 对 类 胡 萝 卜 素 分 子 的 构 象 变 化 十 分 灵 敏 2. 当 样 品 用 光 强 大 于 2500 mol. m -2 s -1 连 续 照 射 150 秒 后, 振 动 带 的 强 度 下 降, 线 宽 加 大, 一 些 胡 萝 卜 素 分 子 结 构 中 与 多 烯 链 平 面 结 构 有 关 的 振 动 带 消 失 Raman shift (cm -1 ) 图 1 Pd OECC 在 SERS 衬 底 上 的 SERS 光 谱 ; 1 为 光 照 前 的 ;2 为 强 光 照 射 后 的 59

60 用 拉 曼 散 射 确 认 菠 菜 叶 绿 体 的 细 胞 色 素 b 6 f 复 合 物 (spinach Cyt b 6 f complex) 的 β- 胡 萝 卜 素 分 子 为 9- 顺 式 (9-cis) 构 型 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 Intensity (a.u.) 9-cis-β-carrotene in cytochrome b 6 f complex from spinach A g A g A g A g A g A g Intensity (a.u.) A g A g // A g Raman shift (cm -1 ) Raman shift (cm -1 ) 图 1 菠 菜 细 胞 色 素 b 6 f 复 合 物 中 β- 胡 萝 卜 的 SERRS 光 谱 图 2 菠 菜 细 胞 色 素 b 6 f 复 合 物 中 β- 胡 萝 卜 的 高 阶 偏 振 拉 曼 光 谱 对 图 1 和 图 2 拉 曼 光 谱 的 振 动 数 目, 振 动 带 的 相 对 散 射 强 度 和 高 阶 振 动 模 式 的 偏 振 分 析 得 出 在 菠 菜 叶 绿 体 的 细 胞 色 素 b 6 f 复 合 物 中 的 β- 胡 萝 卜 素 分 子 为 9- 顺 式 构 型 60

61 正 常 和 癌 变 乳 腺 组 织 的 表 面 增 强 拉 曼 散 射 研 究 ( 二 ) 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 诊 断 及 时 治 疗 是 提 高 病 人 生 存 机 会 的 最 有 效 途 径 振 动 光 谱 能 从 分 子 水 平 反 应 正 常 与 癌 变 组 织 的 化 学 组 成 和 分 子 结 构 上 的 差 异, 因 而 拉 曼 光 谱 可 以 成 为 一 种 早 期 诊 断 肿 瘤 的 潜 在 途 径 特 点 : 利 用 检 测 灵 敏 度 很 高 的 表 面 增 强 拉 曼 散 射 (Surface Enhanced Raman Scattering,SERS) 技 术, 用 小 的 激 光 功 率 ( 避 免 激 光 加 热 而 破 坏 样 品 ), 可 至 少 提 高 拉 曼 光 谱 强 度 倍 加 上 利 用 SERS 本 身 可 对 自 样 品 荧 光 的 摧 灭, 得 到 清 晰 的 散 射 光 谱 信 号 实 验 方 法 : 样 品 采 用 冷 冻 切 片 机 -30 o C 切 片 在 切 片 上 喷 涂 具 有 SERS 活 性 的 银 胶 溶 液 使 用 法 国 JY-T64000 型 共 焦 显 微 拉 曼 光 谱 仪 进 行 实 验 测 定 氩 离 子 激 光 器 的 nm 为 光 谱 的 激 发 波 长 照 射 在 样 品 的 激 光 功 率 为 2 mw. 信 号 采 集 为 200s 61

62 Intensity (a.u.) b a Raman shift (cm -1 ) 实 验 结 果 : 图 1 正 常 乳 腺 组 织 (a) 和 癌 变 乳 腺 组 织 (b) 的 拉 曼 散 射 光 谱 图 1749 图 1 所 示 了 正 常 与 癌 变 组 织 的 拉 曼 光 谱 正 常 乳 腺 组 织 的 拉 曼 光 谱 以 脂 类 化 合 物 为 主 如 波 数 位 于 1749 和 1658 cm-1 是 来 自 脂 类 的 C=C 双 键 的 伸 缩 振 动,1303 和 1441 cm-1 的 振 动 峰 就 是 属 于 脂 类 的 CH2 的 剪 切 振 动 癌 变 乳 腺 组 织 则 以 蛋 白 的 振 动 为 主 最 为 显 著 的 是, 癌 变 乳 腺 组 织 的 在 位 于 cm-1 处 出 现 了 一 个 很 锐 的 拉 曼 峰, 而 在 正 常 组 织 中 是 没 有 的 其 就 是 来 自 蛋 白 质 中 苯 丙 氨 酸 的 特 征 峰 与 正 常 组 织 相 比, 病 变 组 织 中 的 源 于 脂 类 的 1749 cm -1 拉 曼 峰 就 变 的 很 弱 而 很 难 观 察 到 这 是 由 于 癌 细 胞 生 长 速 度 快, 耗 能 快, 脂 类 物 质 难 以 在 组 织 和 细 胞 内 聚 集, 因 而 含 量 低, 散 射 强 度 变 弱 拉 曼 光 谱 的 变 化 也 与 癌 变 的 生 物 学 的 解 释 是 一 致 的 62

63 一 光 反 射 差 法 二 光 镊 三 超 快 光 谱 四 拉 曼 散 射 五 近 场 光 学 六 纳 米 光 学 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 63

64 近 场 扫 描 光 学 显 微 镜 示 意 图 Scan Range: 100 x 100 x 20 μm Position Accuracy: x,y : < 3 nm, z : < 0.5 nm Optical Resolution : < 100 nm, 最 好 : 50 纳 米 64

65 近 场 扫 描 光 学 显 微 镜 (NSOM) 的 性 能 突 破 光 学 衍 射 极 限, 空 间 分 辨 率 可 以 达 到 : 实 验 室 :1 nm 商 品 :50 nm 可 同 时 给 出 样 品 的 形 貌 和 光 学 性 质 ( 空 间 定 域 ) 可 在 自 然 环 境 和 各 种 人 工 条 件 下 运 行 对 样 品 的 性 质 无 特 殊 要 求, 可 测 各 种 样 品 无 损 伤 探 测, 可 测 量 活 样 品 多 种 工 作 模 式 : 透 射 反 射 接 触 拍 打 样 品 的 光 吸 收 发 光 荧 光 的 空 间 分 布 样 品 的 纳 米 空 间 分 辨 光 谱 样 品 的 纳 米 空 间 fs 时 间 分 辨 光 谱 65

66 物 理 所 引 进 的 NSOM100 (RHK /Nanonics/Zeiss, USA/Israel/Germany) Scan Range: 30 x 30 x 30 μm Position Accuracy: x, y, z < 0.1 nm Optical Resolution: < 100 nm, 最 好 :50 纳 米 Transmission Mode, Reflection and Accept Mode 66

67 物 理 所 NSOM100 的 原 理 图 和 技 术 参 数 工 作 模 式 : 接 触,Tapping 新 增 : 接 收 和 反 射 测 量 范 围 : 光 吸 收 和 荧 光 空 间 分 辨 : < 100 nm 扫 描 精 度 :0.1 nm 扫 描 范 围 :30 x 30 µm 样 品 尺 寸 :φ 20 mm 样 品 移 动 :6 mm 光 源 : Ar + - Laser 465, 488, 514 nm 67

68 精 子 头 部 的 单 次 跨 膜 蛋 白 YWK-II 经 过 荧 光 标 定 后 的 跨 膜 分 布 测 量 合 作 单 位 : 中 国 协 和 医 科 大 学 激 发 波 长 : 488 nm 荧 光 波 长 : 510 nm YWKII 68

69 形 貌 荧 光 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 69

70 鼠 胸 腺 细 胞 凋 亡 的 NSOM 测 量 合 作 单 位 : 广 安 门 中 医 医 院 鼠 胸 腺 细 胞 功 能 : 免 役 细 胞 细 胞 凋 亡 的 描 述 : 程 序 性 死 亡 : 染 色 体 断 裂 细 胞 凋 亡 的 触 发 :DEX ( 已 知 ) GSNO( 待 测 ) 细 胞 凋 亡 的 阻 断 : 萊 菔 子 硷 ( 中 药 提 取 ) ( 待 测 ) 细 胞 凋 亡 的 标 定 : 荧 光 标 定 染 色 体 断 裂 后 的 DNA 片 断 细 胞 凋 亡 的 测 量 : 测 量 DNA 片 断 荧 光 分 布 70

71 样 品 的 制 备 和 测 量 分 组 鼠 胸 腺 细 胞 来 源 : 3-4 周 BALB/C 鼠 胸 腺 细 胞 的 提 取 :SWIM'S-77 medium 胸 腺 细 胞 的 处 理 :Triton X-100, 膜 孔 胸 腺 细 胞 的 标 定 :Propidium iodide (PI) 激 发 :488 nm 荧 光 :523 nm 胸 腺 细 胞 的 分 组 : 1. 无 任 何 处 理, 不 产 生 凋 亡 已 知 2. 加 入 Dexamethasone (DEX), 触 发 凋 亡 已 知 3. 加 入 S-nitrosoglutathione (GSNO), 待 测 4. 加 入 GSNO + 萊 菔 子 硷 待 测 71

72 测 量 结 果 ( 荧 光 分 布 ) 荧 光 NSOM 可 用 于 测 量 活 细 胞 的 变 化 荧 光 NSOM 的 空 间 分 辨 率 可 达 100 nm 荧 光 NSOM 给 出 GSNO 引 起 细 胞 凋 亡 的 空 间 分 布 萊 菔 子 硷 有 阻 止 细 胞 凋 亡 的 作 用 4 GSNO+ 1 无 处 理 2 DEX 3 GSNO 萊 菔 子 硷 72

73 73

74 一 光 反 射 差 法 二 光 镊 三 超 快 光 谱 四 拉 曼 散 射 五 近 场 光 学 六 纳 米 光 学 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 74

75 量 子 点 (quantum dot, QD) 是 一 种 由 II-VI 族 或 III-V 族 元 素 组 成 的 纳 米 颗 粒 量 子 局 域 效 应 吸 收 和 发 射 峰 随 量 子 奌 半 径 增 加 而 红 移 化 学 制 备 界 面 可 控 75

76 The Characteristics of Quantum Dots 同 一 波 长 的 光 可 激 发 多 种 不 同 的 量 子 点 生 命 科 学 : 76

77 The Characteristics of Quantum Dots QD can be conjugated with protein, DNA etc 77

78 The Characteristics of Quantum Dots Narrow symmetric emission spectra 78

79 自 制 量 子 点 的 发 光 形 态 碲 化 镉 量 子 点 ( 硫 化 镉 壳 ) 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 硒 化 镉 / 硫 化 锌 核 壳 量 子 点 79

80 CdSe 量 子 点 的 TEM 形 貌 ( 左 ) 和 发 光 相 ( 荧 光 显 微 镜, 右 ) 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 80

81 核 壳 量 子 点 发 光 效 率 高 达 90% 转 水 后 要 降 低 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 81

82 CdSe 量 子 点 的 界 面 偶 联 -- 与 生 物 分 子 或 细 胞 连 接 界 面 修 饰 方 可 连 接 生 物 分 子 油 相 量 子 点 从 油 相 左 瓶 转 换 到 水 相 右 瓶 CdSe 量 子 点 水 相 不 同 尺 度 量 子 点 现 在 开 展 干 细 胞, 癌 细 胞 标 记 研 究 82

83 此 外, 还 有 x 光 衍 射 红 外 光 谱 THz 光 谱 等 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 83

84 把 物 质 科 学 领 域 的 先 进 手 段 用 于 生 命 科 学 研 究 把 物 质 科 学 领 域 的 思 维 方 法 及 对 客 观 世 界 规 律 的 认 识 用 于 生 命 科 学 研 究 把 生 命 科 学 领 域 的 研 究 方 法 和 规 律 带 入 物 质 科 学 研 究, 推 动 物 质 科 学 发 展 ( 复 杂 系 统 ) 84

85 谢 谢! 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 85

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