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1 左 氧 氟 沙 星 中 杂 质 的 LC-MS/MS 定 量 分 析 方 法 及 其 市 售 制 剂 的 质 量 评 价 研 究 郑 亚 杰 1,2, 张 瑞 萍 1, 高 杨 1, 王 玉 成 3, 王 菊 仙 3, 贺 玖 明 1*, 再 帕 尔 阿 不 力 孜 1 (1. 中 国 医 学 科 学 院 北 京 协 和 医 学 院 药 物 研 究 所, 天 然 药 物 活 性 物 质 与 功 能 国 家 重 点 实 验 室, 北 京 ;2. 湖 南 农 业 大 学 兽 用 中 药 资 源 与 中 兽 药 创 制 国 家 地 方 联 合 工 程 研 究 中 心, 湖 南 省 长 沙 市 ;3. 中 国 医 学 科 学 院 北 京 协 和 医 学 院 医 药 生 物 技 术 研 究 所, 北 京 ) 摘 要 : 建 立 了 左 氧 氟 沙 星 制 剂 中 微 量 杂 质 的 LC-MS/MS 定 量 及 筛 查 方 法, 方 法 学 考 察 表 明 该 方 法 快 速 灵 敏 度 高 和 专 属 性 强 利 用 该 方 法 对 19 个 厂 家 市 售 左 氧 氟 沙 星 药 物 制 剂 中 的 杂 质 进 行 检 测 和 质 量 评 价 上 述 样 品 中 超 过 杂 质 限 度 的 杂 质 共 检 出 5 种, 且 不 同 厂 家 制 剂 中 的 杂 质 含 量 差 异 较 大, 仅 3 个 厂 家 制 剂 中 杂 质 的 含 量 均 低 于 0.01% 左 氧 氟 沙 星 的 N 4 - 甲 基 季 铵 类 杂 质 在 左 氧 氟 沙 星 制 剂 中 首 次 检 出 结 合 杂 质 来 源, 认 为 左 氧 氟 沙 星 药 物 制 剂 中 杂 质 水 平 的 差 异 与 原 料 药 制 剂 工 艺 参 数 的 控 制 及 运 输 储 藏 的 环 境 有 着 密 切 关 系 该 方 法 能 专 属 灵 敏 和 全 面 地 检 测 药 物 制 剂 中 的 杂 质, 为 客 观 评 价 制 剂 质 量 及 质 量 控 制 提 供 了 高 效 的 分 析 手 段, 所 检 出 杂 质 种 类 及 含 量 水 平 能 客 观 地 反 映 左 氧 氟 沙 星 制 剂 的 质 量 关 键 词 : 左 氧 氟 沙 星 ; 杂 质 ; 液 质 联 用 ; 制 剂 ; 质 量 评 价 中 图 分 类 号 :R917 Impurity analysis and quality evaluation for commercial levofloxacin formulations using LC-MS/MS method ZHENG Ya-jie 1,2, ZHANG Rui-ping 1, GAO Yang 1, WANG Yu-cheng 3,WANG Ju-xian 3,HE Jiu-ming 1 *, ABLIZ Zeper 1 收 稿 日 期 : ; 修 回 日 期 : 基 金 项 目 : 国 家 重 大 科 学 仪 器 设 备 开 发 专 项 (No. 2012YQ ) * 通 讯 作 者 Tel / Fax: , hejiuming@imm.ac.cn 第 一 作 者 Tel : , zhengyj4@126.com 1

2 (1. State Key Laboratory of Bioactive Substance and Function of Natural Medicines, Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Medical Science and Peking Union Medical College, Beijing , China; 2. Veterinary Herb Resources and Drug Development National-local Joint Engineering Research Center, Hunan Agricultural University, Changsha , China;3. Institute of Medicinal Biotechnology, Chinese Academy of Medical Science and Peking Union Medical College, Beijing , China) Abstract: The study aims to develop a rapid, specific and sensitive method for the quantitative analysis of trace impurities in levofloxacin formulation using LC-MS/MS. The quality of the different formulas from 19 plants was evaluated by comparing the contents of the impurities. The results indicated that there were 5 impurities detected from the above samples, and obvious content differences were observed in the same kind of formulation from different plants. Only the samples from 3 plants were shown in good quality, all impurities were detected under the level of 0.01%. Levofloxacin N 4' -methyl quaternary impurity was first reported as the formulation impurity. It was concluded that the impurities had tightly correlation to the reservation of drug, process control of formulation and storage during transportation. The results showed that the developed method was sensitive and specific to examine the trace impurities in formulation, and could be used to monitor the quality of commercial drug product. Key words: levofloxacin; impurity; LC-MS/MS; formulation; quality evaluation 左 氧 氟 沙 星 是 以 4- 喹 诺 酮 为 母 核 的 人 工 合 成 抗 菌 素, 因 其 具 有 抗 菌 谱 广 抗 菌 效 率 高 和 体 内 生 物 利 用 度 好 等 特 点, 已 成 为 临 床 上 广 泛 使 用 的 抗 菌 类 药 物 之 一 [1,2] 据 年 国 家 药 品 不 良 反 应 监 测 年 度 报 告, 喹 诺 酮 类 药 物 的 严 重 不 良 反 应 报 告 数 量 居 抗 感 染 药 物 不 良 反 应 / 事 件 的 前 三 位, 左 氧 氟 沙 星 药 物 的 不 良 反 应 报 道 居 该 类 药 物 的 首 位 药 物 不 良 反 应 除 药 物 自 身 理 化 性 质 外, 与 药 物 中 的 杂 质 也 有 密 切 关 系 [1,3] 根 据 ICH 指 导 原 则, 对 于 原 料 药 和 制 剂 中 存 在 的 工 艺 相 关 杂 质 (impurity,imp) 和 降 解 产 物 (degradation product, DP), 尤 其 是 超 过 鉴 定 阈 值 或 随 着 时 间 呈 增 加 趋 势 的 杂 质 必 须 进 行 杂 质 结 构 研 究, 并 建 立 杂 质 的 定 量 分 析 方 2

3 法, 为 杂 质 的 限 度 控 制 和 药 物 的 质 量 控 制 提 供 必 要 的 数 据 支 持 [4] 基 于 LC-MS/MS 技 术 的 多 反 应 离 子 监 测 (multiple reaction monitoring, MRM) 方 法 具 有 灵 敏 准 确 和 选 择 性 强 等 特 点, 能 够 有 效 地 排 除 干 扰 离 子, 因 此 被 广 泛 用 于 复 杂 样 品 体 系 中 微 量 成 分 的 定 量 分 析 [5-8] 本 课 题 组 前 期 开 展 了 基 于 LC-MS/MS 技 术 的 左 氧 氟 沙 星 原 料 药 中 微 量 杂 质 的 定 性 分 析 方 法 研 究, 利 用 该 方 法 结 合 强 制 破 坏 试 验 对 药 物 原 料 药 中 可 能 产 生 的 杂 质 结 构 及 其 来 源 进 行 了 阐 明, 鉴 定 出 20 个 左 氧 氟 沙 星 相 关 的 杂 质 [9] 由 于 实 验 室 的 强 制 破 坏 条 件 并 不 完 全 代 表 原 料 药 和 制 剂 生 产 存 储 和 流 通 等 环 节 中 实 际 的 化 学 或 环 境 影 响 因 素, 因 此 有 必 要 对 市 售 左 氧 氟 沙 星 药 物 制 剂 中 的 杂 质 进 行 分 析 检 测, 了 解 杂 质 在 制 剂 中 的 实 际 存 在 状 况 本 研 究 开 展 了 基 于 LC-MS/MS 技 术 的 药 物 制 剂 中 杂 质 的 定 量 分 析 与 筛 查 方 法 研 究, 针 对 市 售 左 氧 氟 沙 星 药 物 制 剂 中 的 杂 质 进 行 全 面 准 确 快 速 地 检 测, 完 成 不 同 厂 家 的 市 售 药 物 制 剂 中 杂 质 的 筛 查 检 测, 并 对 其 质 量 进 行 初 步 评 价, 为 左 氧 氟 沙 星 药 物 制 剂 的 质 量 控 制 及 安 全 性 评 价 提 供 参 考 材 料 与 方 法 仪 器 与 试 药 Agilent 1200 Series 快 速 高 效 液 相 色 谱 仪 ( 安 捷 伦 公 司, 美 国 ); Zorbax SB-C18 (150 mm 2.1 mm, 5 μm) 色 谱 柱 ;QTRAP TM 四 极 杆 - 线 性 离 子 阱 串 联 质 谱 仪 ( QTRAP 5500, 美 国 AB Sciex 公 司 ), 配 备 Turbo Ion spray (ESI) 离 子 源 以 及 Analyst 数 据 采 集 和 处 理 系 统 ; 分 析 天 平 (METTLER TOLEDO AG135 型, 梅 特 勒 托 利 多 仪 器 有 限 公 司 );Eppendorf 微 量 移 液 器 和 移 液 管 左 氧 氟 沙 星 对 照 品 及 氧 氟 沙 星 杂 质 A 对 照 品 均 购 自 中 国 食 品 药 品 检 定 研 究 院 ;Descarboxyl levofloxacin, Desmethyl levofloxacin hydrochloride 和 N,N-desethylene levofloxacin hydrochloride, 购 自 加 拿 大 TRC (Toronto Research Chemicals Inc.) 公 司 左 氧 氟 沙 星 季 铵 盐 由 中 国 医 学 科 学 院 医 药 生 物 技 术 研 究 所 王 玉 成 研 究 员 课 题 组 提 供 左 氧 氟 沙 星 片 剂 胶 囊 和 滴 眼 液 等 均 为 市 售 药 品 ; 甲 醇 和 甲 酸 ( 色 谱 纯 ) 购 自 Merck 公 司 ; 实 验 用 水 为 娃 哈 哈 纯 净 水 对 照 品 溶 液 的 配 制 分 别 精 密 称 取 上 述 各 对 照 品 适 量, 加 甲 醇 超 声 溶 解 并 定 容, 得 到 浓 度 约 为 0.5 mg L -1 的 溶 液, 作 为 储 备 液 吸 取 上 述 储 备 液 各 适 量 体 积, 3

4 混 匀 配 制 成 所 需 浓 度 的 混 合 标 准 品 溶 液 样 品 预 处 理 取 片 剂 样 品 各 10 片, 分 别 研 细, 备 用 ; 取 胶 囊 样 品 各 10 粒, 取 内 容 物, 分 别 混 匀, 备 用 ; 液 体 制 剂 样 品 直 接 取 样 不 需 经 预 处 理 供 试 品 溶 液 的 配 制 取 上 述 预 处 理 后 的 市 售 制 剂 样 品 各 适 量, 分 别 加 入 一 定 体 积 的 甲 醇, 固 体 制 剂 样 品 分 别 超 声 提 取 1h, 放 至 室 温 后 补 足 失 重, 离 心 取 上 清 液 各 适 量, 加 甲 醇 稀 释 至 含 左 氧 氟 沙 星 约 2 μg ml -1, 备 用 液 体 制 剂 样 品 直 接 用 甲 醇 稀 释 至 相 应 浓 度, 备 用 样 品 制 备 过 程 中 随 行 空 白 溶 剂, 得 到 空 白 样 品 溶 液 色 谱 条 件 采 用 Agilent Zorbax SB-C 18 (150 mm 4.6 mm, 5 μm) 色 谱 柱 ( 含 在 线 过 滤 器 ); 流 动 相 为 甲 醇 (A)-0.3% 甲 酸 水 (B), 采 用 梯 度 洗 脱, 进 样 前 用 起 始 流 动 相 预 平 衡 色 谱 柱 5 min, 梯 度 洗 脱 条 件 为 t(min)/a%: 0/5 8/22 18/22 30/60 35/60 36/5; 柱 温 为 30 C; 流 速 为 1.0 ml min -1, 柱 后 分 流 约 30% 注 入 质 谱 仪 ; 进 样 体 积 为 5 μl 质 谱 条 件 在 ESI 正 离 子 模 式 下 检 测, 离 子 源 温 度 为 450, 喷 雾 电 压 (IS) 为 5.5 kv, 雾 化 气 (GS1) 压 力 为 60 psi(1psi 6.9kPa), 辅 助 气 (GS2) 压 力 为 40 psi, 入 口 电 压 (EP) 为 10 V; 采 用 MRM 扫 描 方 式 测 定,Q1 和 Q3 的 分 辨 率 均 设 为 Unit; 被 列 入 MRM 方 法 中 的 每 个 杂 质 选 取 [M+H] + 分 子 离 子 与 两 个 相 对 丰 度 最 高 或 特 异 的 子 离 子 组 成 离 子 对 (transition), 对 其 解 簇 电 压 (decluster potential, DP) 和 碰 撞 能 量 (collision energy, CE) 进 行 了 优 化, 优 化 后 参 数 如 表 1 所 示 方 法 学 考 察 吸 取 各 对 照 品 储 备 液 适 量, 配 制 系 列 浓 度 的 混 合 对 照 品 溶 液 ; 选 取 其 中 一 个 浓 度 的 对 照 品 溶 液 和 空 白 样 品 溶 液, 按 上 述 LC-MS/MS 方 法 进 行 分 析, 考 察 方 法 的 专 属 性 配 制 系 列 浓 度 的 对 照 品 溶 液, 按 上 述 色 谱 和 质 谱 条 件 进 行 LC-MS/MS 谱 分 析, 以 峰 面 积 值 对 浓 度 进 行 线 性 回 归 并 计 算 相 关 系 数 取 混 合 对 照 品 溶 液 逐 步 稀 释 进 样, 考 察 该 方 法 下 各 目 标 化 合 物 的 检 测 限 及 定 量 限 ; 取 同 一 浓 度 的 混 合 对 照 品 溶 液 在 上 述 实 验 条 件 下 连 续 进 样 6 次, 进 行 仪 器 的 精 密 度 考 察 ; 取 相 同 厂 家 同 一 批 号 样 品, 按 供 试 品 溶 液 的 配 制 项 下 方 法 制 备 供 试 品 溶 液 6 份 ( 含 左 氧 氟 沙 星 约 20 ng ml -1 ), 在 上 述 实 验 条 件 下 进 样, 进 行 重 复 性 实 验 4

5 Table 1 The parameters for LC-MS/MS analysis of impurities and drug Name Transition Dwell Decluster Collisio time/ms potential n energy DP DP DP DP DP DP DP DP DP DP-10, IMP IMP Levofloxacin DP DP DP DP DP DP IMP DP-1~DP-17 are the degradation products (DPs). IMP-1~IMP-3 are the process impurities (IMPs). All of the above DPs and IMPs are listed in the table according to their retention time, which were identified by LC-MS/MS [9]. DP-8, DP-12, DP-14, DP-15, IMP-1 and IMP-3 are respectively descarboxyl levofloxacin, N, N -desethylene levofloxacin, desmethyl levofloxacin, levofloxacin N-oxide, levofloxacin quaternary ammonium salt and ofloxacin acid. The quantitative transitions list in left column while the qualitative transitions in right column 5

6 将 相 同 厂 家 同 一 批 号 样 品 9 份, 往 样 品 添 加 三 个 浓 度 的 药 物 和 杂 质 对 照 品, 每 个 浓 度 平 行 三 份, 按 供 试 品 溶 液 的 配 制 项 下 方 法 进 行 样 品 溶 液 的 制 备, 进 行 LC-MS/MS 分 析, 将 目 标 待 测 物 的 提 取 离 子 色 谱 峰 峰 面 积 代 入 线 性 回 归 方 程 计 算 目 标 待 测 物 的 浓 度 测 定 值 与 理 论 值 的 差 值, 考 察 方 法 的 准 确 性 取 同 一 浓 度 的 混 合 标 准 品 溶 液, 在 LC-MS/MS 分 析 条 件 下, 对 流 速 柱 温 和 流 动 相 酸 水 浓 度 等 进 行 考 察, 计 算 目 标 化 合 物 的 提 取 离 子 色 谱 峰 峰 面 积 的 RSD 值, 对 方 法 的 耐 用 性 进 行 考 察 结 果 1 LC-MS/MS 分 析 方 法 学 建 立 和 验 证 1.1 专 属 性 取 2 ng L -1 的 混 合 对 照 品 溶 液 和 空 白 样 品 溶 液 进 行 LC-MS/MS 分 析, 在 与 杂 质 对 照 品 相 同 保 留 时 间 的 出 峰 位 置, 空 白 样 品 无 干 扰, 左 氧 氟 沙 星 对 照 品 和 杂 质 对 照 品 的 保 留 时 间 见 表 精 密 度 检 出 限 和 定 量 限 按 上 述 LC-MS/MS 方 法 对 方 法 的 精 密 度 进 行 考 察, 药 物 及 杂 质 的 日 内 精 密 度 RSD 在 0.83 %~4.09 %, 日 间 精 密 度 RSD 在 2.41 %~12.84 %, 方 法 的 检 出 限 在 0.16~11.77 ng ml -1, 定 量 限 在 0.50~39.24 ng ml 线 性 关 系 通 过 对 系 列 混 合 对 照 品 溶 液 进 行 LC-MS/MS 分 析, 由 Analyst 的 数 据 处 理 软 件 给 出 各 目 标 物 化 合 物 的 线 性 回 归 曲 线 和 相 关 系 数 ( 见 表 2) Table 2 The linear equations of levofloxacin and impurity standards Compound t R /min Linearity Correlation Range coefficient /ng ml -1 DP y= 3.14 e 4 x e IMP y= 1.12e 5 x e Levofloxacin y= 1.12 e 5 x e DP y=6.71 e 3 x e DP y= 2.45 e 5 x e DP y= 5.83 e 4 x e IMP y= 3.11 e 4 x e

7 1.4 重 复 性 选 取 厂 家 4 ( 批 号 :113005) 为 代 表 样 品, 平 行 制 备 6 份 供 试 品 溶 液, 进 行 LC-MS/MS 分 析 因 杂 质 离 子 的 提 取 离 子 峰 面 积 值 偏 小, 不 在 线 性 范 围 内, 因 此 仅 计 算 了 左 氧 氟 沙 星 药 物 本 身 的 相 关 数 据, 其 RSD 为 0.11% 1.5 加 样 回 收 率 左 氧 氟 沙 星 对 照 品 按 50% 100% 和 150% 三 个 水 平 在 已 知 含 量 的 样 品 粉 末 中 添 加, 杂 质 对 照 品 的 添 加 量 为 和 0.2 mg, 按 供 试 品 溶 液 的 配 制 方 法 样 品 溶 液, 进 行 LC-MS/MS 分 析 除 化 合 物 ( 离 子 对 : ) 的 回 收 率 为 63.21%, 其 余 目 标 化 合 物 的 回 收 率 在 80%~105% 1.6 耐 用 性 取 同 一 浓 度 的 混 合 对 照 品 溶 液, 对 可 能 影 响 分 析 条 件 的 流 速 ( ) 柱 温 ( ) 和 流 动 相 酸 水 浓 度 (0.2% 0.3% 0.4%) 进 行 考 察, 除 上 述 条 件 外 按 设 定 的 LC-MS/MS 分 析 条 件 进 样 分 析, 计 算 各 目 标 分 析 物 浓 度 的 RSD 为 2.52%~3.93%, 表 明 该 分 析 方 法 耐 用 性 良 好, 不 易 受 分 析 条 件 的 微 小 波 动 影 响 2 市 售 左 氧 氟 沙 星 中 杂 质 的 LC-MS/MS 筛 查 按 照 供 试 品 溶 液 的 配 制 项 下 方 法 制 备 供 试 品 溶 液, 在 上 述 实 验 条 件 下 进 行 测 定, 结 果 见 图 1 和 表 3 从 19 个 不 同 厂 家 的 市 售 左 氧 氟 沙 星 药 物 制 剂 样 品 (S1~S19) 中 仅 检 出 了 表 1 所 列 的 5 种 杂 质, 包 括 1 种 工 艺 相 关 杂 质 (IMP-1) 和 4 种 降 解 产 物 (DP-8,DP-12,DP-14 和 DP-15), 这 些 降 解 产 物 分 别 在 酸 性 (DP-8) 光 照 (DP-12 和 DP-14) 和 氧 化 (DP-15) 条 件 下 由 药 物 降 解 生 成 [9] 不 同 厂 家 的 市 售 左 氧 氟 沙 星 药 物 制 剂 中 杂 质 的 含 量 存 在 较 大 差 异,S14~S16 三 个 厂 家 的 样 品 中 杂 质 含 量 远 低 于 其 他 厂 家 DP-14 在 所 有 样 品 中 均 被 检 出 且 含 量 较 其 他 杂 质 相 对 偏 高, 其 次 为 DP-12 和 DP-15 Figure 1 The contents of impurities in the levofloxacin formulation samples (S1~S19) from different pharmaceutical plants. 7

8 Sample Table 3 The results of impurities in the levofloxacin formulation samples (S1~S19) Formulation from different pharmaceutical plants. ND: No detection Plant (Batch Number) Content/% DP-8 IMP-1 DP-12 DP-14 DP-15 S1 Tablets Plant 1(B ) ND S2 Tablets Plant 2(120901) ND ND S3 Tablets Plant 3(121004) S4 Tablets Plant 4( ) S5 Tablets Plant 5( ) S6 Capsules Plant 6( ) S7 Capsules Plant 7(121201) S8 Capsules Plant 8( ) ND S9 Capsules Plant 9( ) ND S10 Capsules Plant 10(130302) ND S11 Capsules Plant 11(130301) ND S12 Injection Plant 12( ) S13 Injection Plant 12( ) S14 Injection Plant 12( ) S15 Injection Plant 13( ) S16 Injection Plant 14( ) S17 Sodium chloride injection Plant 15( ) S18 Eye drops Plant 16( ) S19 Eye drops Plant 17( ) 讨 论 由 于 杂 质 对 照 品 的 获 取 成 本 高, 因 而 针 对 所 有 可 能 杂 质 建 立 定 量 分 析 方 法 具 有 很 大 难 度 本 研 究 利 用 LC-MS/MS 分 析 的 高 灵 敏 和 高 特 异 性, 建 立 了 一 种 同 时 检 测 左 氧 氟 沙 星 药 物 制 剂 中 20 种 杂 质 的 筛 查 方 法 对 于 不 能 够 获 取 对 照 品 的 15 种 杂 质, 利 用 不 加 校 正 因 子 的 主 成 分 自 身 对 照 法 对 市 售 左 氧 氟 沙 星 制 剂 中 的 这 些 杂 质 进 行 定 量 筛 查, 能 够 更 加 全 面 地 获 得 药 物 中 杂 质 的 存 在 情 况 和 含 量 水 平 本 研 究 建 立 的 LC-MS/MS 定 量 分 析 方 法 专 属 性 强 灵 敏 度 高, 可 定 量 检 出 制 剂 中 相 对 于 药 物 含 量 高 于 0.1% 的 杂 质, 能 够 满 足 ICH 相 关 指 导 原 则 分 析 方 法 的 要 求 利 用 该 方 法 对 不 同 厂 家 的 市 售 左 氧 氟 沙 星 药 物 制 剂 中 的 杂 质 进 行 了 筛 查, 从 所 有 样 品 中 仅 检 测 出 5 种 杂 质, 分 别 为 IMP-1 DP-8 DP-12 DP-14 和 DP-15 除 IMP-1 为 原 料 药 中 带 入 的 工 艺 杂 质,DP-8 等 杂 质 均 为 左 氧 氟 沙 星 在 酸 性 光 照 8

9 和 氧 化 条 件 下 降 解 产 生 的 主 要 杂 质 [9] 在 实 验 室 强 制 破 坏 试 验 条 件 下 产 生 的 降 解 产 物 大 多 数 未 被 检 出, 分 析 认 为 与 强 制 破 坏 条 件 相 比, 实 际 制 剂 样 品 在 生 产 运 输 或 储 存 过 程 中 的 条 件 均 相 对 温 和, 因 此 大 多 数 杂 质 不 会 产 生 或 者 含 量 不 一 定 会 增 加 但 如 果 保 存 条 件 不 当 或 工 艺 条 件 未 能 得 到 很 好 控 制, 上 述 杂 质 就 会 产 生 或 含 量 增 加 而 被 检 出 此 方 法 获 得 的 检 测 结 果 能 够 反 映 最 终 药 品 制 剂 的 质 量 情 况 [9,10,12-17] 另 外, 通 过 与 文 献 进 行 比 较, 工 艺 杂 质 IMP-1 是 左 氧 氟 沙 星 的 N 4 - 甲 基 季 铵 类 化 合 物, 在 左 氧 氟 沙 星 制 剂 中 的 检 出 报 道 尚 属 首 次 研 究 结 果 表 明, 不 同 厂 家 的 药 品 杂 质 控 制 水 平 存 在 一 定 的 差 异, 其 中 S14~S16 三 个 不 同 厂 家 药 物 制 剂 中 所 检 出 杂 质 的 含 量 均 低 于 0.01%, 而 另 外 16 个 市 售 制 剂 中 杂 质 的 含 量 相 对 较 高, 尤 其 是 S12 和 S17~S19 四 个 不 同 厂 家 的 市 售 左 氧 氟 沙 星 药 物 制 剂 中 杂 质 含 量 明 显 偏 高 结 合 本 课 题 组 前 期 研 究 结 果, 作 者 认 为 本 研 究 中 不 同 厂 家 制 剂 样 品 的 检 测 结 果 产 生 的 明 显 差 异 可 能 与 制 剂 生 产 工 艺 或 工 艺 参 数 控 制 的 不 同 有 关 本 研 究 建 立 的 LC-MS/MS 分 析 方 法 较 LC-UV [10,11] 方 法 具 有 更 好 的 专 属 性 和 灵 敏 度 ; 在 不 需 要 全 部 对 照 品 的 情 况 下, 可 针 对 更 广 泛 的 杂 质 种 类 和 市 售 制 剂 品 种 开 展 定 量 分 析 和 质 量 评 价 工 作, 为 客 观 评 价 左 氧 氟 沙 星 药 物 质 量 及 质 控 水 平 提 供 了 有 效 手 段 References [1] Domagala JM. Structure-activity and structure-side-effect relationships for the quinolone antibacterials [J]. J Antimicrob Chemother, 1994, 33: [2] Kresse H, Belsey MJ, Rovini H. The antibacterial drugs market [J]. Nat Rev Drug Discov, 2007, 6: [3] Mandell L, Tillotson G. Safety of fluoroquinolones: an update [J]. Can J Infect Dis, 2002, 13: [4] ICH Guidelines Q3A(R1). Impurities in New Drug Substances [M]. Geneva: IFPMA, [5] Yu X, Warme C, Lee D, et al. Characterization of a low-level unknown isomeric degradation product using an integrated online-offline top-down tandem mass spectrometry platform [J]. Anal Chem, 2013, 85: [6] Wu CS, Wang CH, Zhang JL, et al. Separation, determination of six impurities in 9

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