标题

Size: px

Start display at page:

Download "标题"

痛忍伍
7 years ago
Views:

1 第 33 卷第 7 期 2013 年 7 月环境科学学报 Acta Scientiae Circumstantiae Vol. 33,No. 7 Jul., 2013 马丹旦,雷雯雯,吴昊,等急性镉染毒对河南华溪蟹精子质量的影响[ J]. 环境科学学报,33(7) : Ma D D, Lei W W, Wu H, et al Effects of acute cadmium on sperm quality of Sinopotamon henanense[ J]. Acta Scientiae Circumstantiae,33(7) : 急性镉染毒对河南华溪蟹精子质量的影响马丹旦,雷雯雯,吴昊,杜丽君,王兰山西大学生命科学学院, 太原收稿日期: 修回日期: 录用日期: 摘要:采用急性毒性实验方法,研究了镉( Cd2 + ) 对河南华溪蟹( Sinopotamon henanense) 精子质量的影响. 实验设置了 5 个 Cd2 + 浓度组( 和 116 mg L - 1 ) 和 1 个空白对照组,在 2 个染毒时间(5 d 和 7 d) 采用特异性的荧光染料和流式细胞术( FCM) 对精子成活率膜完整性顶体完整性及染色质结构进行了测定. 结果显示,随着 Cd2 + 浓度的增加和染毒时间的延长,精子的成活率下降,质膜和顶体缺失率上升, 异染色质所占比率上升. 在 Cd2 + 浓度为 mg L - 1 条件下暴露 5 d 后,精子成活率显著降低( p < 0. 05) ;Cd2 + 浓度为 116 mg L - 1 时,精子质膜完整性和染色质结构均有明显的损伤;而顶体状态在 Cd2 + 浓度为 29 mg L - 1 时就呈现显著的损伤( p < 0. 01). 在 Cd2 + 浓度为 mg L - 1 条件下染毒 7 d 后,精子成活率质膜完整性和顶体完整性降低;在所有的染毒组, DNA 结构受到了显著的破坏. 结果表明,Cd2 + 暴露对华溪蟹精子质量有明显的影响. 关键词:华溪蟹精子;成活率;膜完整性;顶体完整性;染色质结构;镉文章编号: (2013) 中图分类号:X 文献标识码:A Effects of acute cadmium on sperm quality of Sinopotamon henanense MA Dandan, LEI Wenwen, WU Hao, DU Lijun, WANG Lan School of Life Science, Shanxi University, Taiyuan Received 13 November 2012; received in revised form 10 December 2012; accepted 10 December 2012 Abstract: To explore the effects of acute cadmium ( Cd2 + ) on the sperm quality of Sinopotamon henanense, the freshwater crabs Sinopotamon henanense were exposed to 0, 7. 25, 14. 5, 29, 58, and 116 mg L - 1 Cd2 + for 5 and 7 d. Using specific fluorescent dyes and flow cytometry ( FCM), the sperm quality was investigated including sperm viability, plasma- and acrosomal- membrane integrity and chromatin integrity. Our results showed that with the increase of Cd2 + concentration and exposure timethe sperm viability decreased, plasma- and acrosomal- membrane loss increased and the ratio of abnormal DNA increased. When exposed to 58 and 116 mg L - 1 Cd2 + for 5 d, the sperm viability was significantly reduced; sperm membrane integrity and chromatin structure were also significantly damaged by 116 mg L - 1 Cd2 + ; the acrosomal integrity were also damaged starting at 29 mg L - 1 Cd2 +. When exposed to 29, 58, and 116 mg L - 1 Cd2 + for 7 d, the sperm viability was significantly lowered and plasma- and acrosomal- membrane integrity were undermined. The chromatin structure, however, were damaged at all Cd2 + -exposed groups. Our results indicated that Cd2 + exposure can damage sperm quality severely of the crab species. Keywords: Sinopotamon henanense sperm; viability; plasma- and acrosomal-membrane integrity; chromatin integrity; cadmium 1 引言( Introduction) 随着工农业的发展,重金属排放造成的环境问题不断凸显. 由于具有亲脂性高富集性和难降解性,重金属进入水体后容易在水生生物体内积累, 并对水生生物产生显著的毒性作用,增加重金属的潜在危害. 其中,镉( Cd2 + ) 作为一种沿海地带和河口发现的毒性最强和富集最多的重金属,已引起了人们的广泛关注( Millward et al., ). 镉对雄性生殖系统的影响多有报道. 国内外许多研究结果显示,镉可诱导雄性生殖器官结构和功能发生退行性变化,从而引起生精障碍( Siu et al., 基金项目: 国家自然科学基金资助项目( No ),山西省回国留学人员科研项目( No ),高等学校博士学科点专项科研基金 ( No ) Supported by the National Natural Science Foundation of China ( No ), the Shanxi Province Overseas Returnee Research Project ( No ) and the Research Fund for the Doctoral Program of Higher Education( No ) 作者简介: 马丹旦(1989 ),女, madandan890719@ 163. com; 通讯作者( 责任作者), lanwang@ sxu. edu. cn Biography: MA Dandan(1989 ), female, madandan890719@ 163. com; Corresponding author, lanwang@ sxu. edu. cn

Sinopotamon henanense) 精子质量的影响. 实验设置了 5 个 Cd2 + 浓度组(7. 25 14. 5 29 58 和 116 mg L - 1 ) 和 1 个空白对照组,在 2 个染毒时间(5 d 和 7 d) 采用特异性的荧光染料和流式细胞术( FCM) 对精子成活率膜完整性顶体完整性及染色质结构进行了测定.

2 7 期马丹旦等 : 急性镉染毒对河南华溪蟹精子质量的影响 ); 此外, 动物实验表明, 镉会导致精子数目减少 ( Meeker et al., 2008), 运动能力降低 ( Telišman et al., 2000 ), 形态结构发生变化 ( Chia et al., 1994), 精液质量下降 (Benoff et al., 2000), 最终引起雄性不育. 但上述研究主要集中于哺乳动物, 迄今为止镉对甲壳动物生殖系统的影响鲜见报道. 本课题组前期关于镉对河南华溪蟹 ( Sinopotamon henanense) 精巢的影响结果表明, 急性镉暴露可引起精巢氧化损伤, 继而导致精巢细胞凋亡, 生精过程受到干扰 (Wang et al. 2011), 然而对于华溪蟹精子损伤方面的研究还未曾涉及. 华溪蟹是一类对污染物敏感性很高的甲壳动物, 是水环境污染检测的理想指示生物 (Schuwerack et al., 2001; Michele et al., 1998). 本课题组对河南华溪蟹的前期研究表明, 急性镉污染会导致其鳃心脏肝胰腺肌肉等生理生化及形态方面的变化, 使其功能受损 ( Lei et al., 2011; Xuan et al., 2011; 马文丽等,2008). 由于精子质量与受精率及后代成活率紧密相关 ( Au et al., 2002), 因此相比于其它组织, 可更为直接地反映污染物的生态毒性效应 (Ford et al., 2003). 鉴于此, 本文研究了镉对河南华溪蟹精子成活率质膜完整性顶体膜完整性染色质状态的影响 (Cordelli et al., 2005), 旨在阐明镉对华溪蟹精子质量的毒性影响程度, 为进一步探讨重金属对甲壳动物生殖系统的毒性机理奠定基础, 同时为保护生态环境和水产品健康养殖提供科学依据. 2 材料与方法 (Materials and methods) 2. 1 实验动物河南华溪蟹 ( 以下简称华溪蟹 ), 于 2012 年 3 月购自太原市五龙口东安水产批发市场, 在实验室水族缸 (40 cm 30 cm 30 cm) 中暂养,2 周后进行毒性实验主要试剂氯化镉 (CdCl H 2 O)( 分析纯 ), 在实验前用蒸馏水配成 mg L - 1 的母液备用 ; 碘化丙啶 (propidium iodide,pi) 配成 40 μg ml - 1 备用. 精子成活率检测试剂盒 ( 伊红 Y 染色法 ) 购于天津瑞爱金生物科技有限公司 ; 精子顶体形态花生凝集素荧光标记 ( PNA-FITC) 染色试剂盒精子 DNA 吖啶橙 (acridine orange,ao) 荧光检测试剂盒均购自上海杰美基因医药科技有限公司实验设计与样品制备将随机选取的 10 只体重为 (25. 0 ± 3. 0) g 的健康成熟雄蟹, 暴露于盛有 2 L 已曝气 2 d 的自来水 (ph = 6. 8) 的容器 (45 cm 30 cm 30 cm) 中. 实验根据镉对华溪蟹急性攻毒 96h 的 LC 50 ( 李涌泉等,2008), 按 1 / 2 1 / 4 1 / 8 1 / 16 1 / 32 比例, 分别设 5 个处理组和 1 个对照组, 处理组 Cd 2 + 浓度分别为 mg L - 1, 在暴露 5 d 和 7 d 的时候从每组中取出 5 只个体进行实验. 染毒期间不喂食, 不换水, 每天检查华溪蟹的健康状况. 将华溪蟹迅速解剖, 取出储精囊置于培养皿中, 加入 2 ml 的磷酸缓冲液 (PBS,pH = 7. 4); 将储精囊慢慢的划破, 使精荚释放并破裂, 其中的精子释放, 轻轻搅匀, 置于 1. 5 ml EP 管中,1000 g 离心 10 min; 弃上清, 再加入 1 ml 的 PBS 混匀, 即得到精子悬浮液. 用血细胞计数板于普通显微镜下观察计数, 使其浓度为 10 7 个 ml 精子成活率检测取 4. 5 μl 染色液 ( 伊红 Y) 加到载玻片上, 再取相同体积的精子悬浮液和染色液混匀, 静置 2 min 后加盖玻片进行显微观察. 精子染成粉红色的为死亡精子, 未着色的为活精子. 共计数 200 个精子, 计算未着色的活精子数所占的比例精子质膜和顶体状态检测用 PNA-FITC 和 PI 双标记精子, 通过流式细胞仪 (FACSCalibur,BD) 检测精子的顶体状态和质膜通透性. PI - 的为质膜完整性的精子,PNA - 的为顶体完整的精子精子染色质状态检测精子经 AO 染色后进行 FCM 测定, 二维图中呈绿色荧光的精子 ( 双链核酸 ) 为染色质状态正常的精子, 呈红色荧光的精子 ( 核酸解旋为单链 ) 为染色质状态异常的精子. 用 αt 表示异常精子占总数的比例数据处理实验结果用平均值 ± 标准差 ( Mean ± S. D. ) 表示, 利用 SPSS15. 0 统计分析软件, 检验实验数据的正态分布性, 采用单因素方差分析 ( One-Way ANOVA), 并应用 Dunnett 法将处理组与相应对照组进行比较, p < 为差异显著. 3 结果 (Results) 3. 1 镉对河南华溪蟹精子成活率的影响由图 1 可见, 在 Cd 2 + 浓度为 mg L - 1 条

本课题组前期关于镉对河南华溪蟹 ( Sinopotamon henanense) 精巢的影响结果表明, 急性镉暴露可引起精巢氧化损伤, 继而导致精巢细胞凋亡, 生精过程受到干扰 (Wang et al.

3 2046 环境科学学报 33 卷件下暴露 5 d 后, 精子的成活率显著降低 ( p < 3. 3 镉对河南华溪蟹精子顶体完整性的影响后,与对照组相比,精子成活率出现了显著差异,并呈升高趋势,在 Cd2 + 浓度为 mg L - 1 条件 0 01) ;在 Cd 2+ 浓度为 mg L -1 暴露 7 d 在 Cd2 + 浓度为 116 mg L - 1 暴露 7 d 后达到了最低值(85. 59% ± 0. 92% ). Fig. 1 Effect of Cd 2+ 由图 2 所示,质膜损伤率随着染毒时间和 Cd ( p < 0. 01),在 Cd2 + 浓度为 116 mg L - 1 条件下暴露图 3 镉对河南华溪蟹精子顶体膜完整率的影响( p < 0. 05, p < 0. 01, n = 5) on sperm viability of S. henanense 3. 2 镉对河南华溪蟹精子质膜完整性的影响下暴露 5 d 或 7 d 后与对照相比均出现显著差异 7 d 后达到最高值(1. 35% ± 0. 18% ). 图 1 镉对河南华溪蟹精子成活率的影响( p < 0. 05, p < 0. 01, n = 5) 由图 3 可知,随着 Cd2 + 浓度的增高顶体缺失率 Fig. 3 Effect of Cd2 + on sperm acrosomal-membrane integrity of S. henanense 2+ 浓度呈现逐渐升高的趋势, 在 Cd2 + 浓度为 116 mg L - 1 条件下暴露 5 d 后与对照组相比出现了显著性差异 ( p < ) ; 在 Cd2 + 浓度为 mg L 条件下暴露 7 d 后,质膜损伤率与对照组相 -1 比均出现显著的升高( p < 0. 01),且在 Cd2 + 浓度为 3. 4 镉对河南华溪蟹精子染色质状态的影响由图 4 观察到,在 Cd2 + 处理组,精子的染色质结构发生了较严重的损伤:在染毒 5 d 后,只有 116 mg L - 1 Cd2 + 处理组出现显著变化( p < 0. 05),但在 7 d 后,各处理组均出现了显著变化. 116 mg L - 1 条件下暴露 7 d 后达到了最大值 (15 05% ± 0. 21% ). 图 4 镉对河南华溪蟹精子染色质状态的影响( p < 0. 05, p < 0. 01, n = 5) 图 2 镉对河南华溪蟹精子质膜完整率的影响( p < 0. 05, p < 0. 01, n = 5) Fig. 2 Effect of Cd2 + on sperm plasma-membrane integrity of S. henanense Fig. 4 Effect of Cd2 + on chromatin integrity of S. henanense 4 讨论 ( Discussion) 精子质量高,则精子具有成功受精的能力,而

1 Effect of Cd 2+ 由图 2 所示,质膜损伤率随着染毒时间和 Cd ( p < 0. 01),在 Cd2 + 浓度为 116 mg L - 1 条件下暴露图 3 镉对河南华溪蟹精子顶体膜完整率的影响( p < 0. 05, p < 0. 01, n = 5) on sperm viability of S. henanense 3.

4 7 期马丹旦等 : 急性镉染毒对河南华溪蟹精子质量的影响 2047 这依赖于一定的活精子数目及其结构和功能的完整性 ; 精子质量下降, 种群的繁衍必然受到影响 (Lewis et al., 2012). 有研究者发现, 在急性毒性试验中精子对外界环境污染物较为敏感 ( Kobayashi, 1980), 精子的运动能力及氧消耗量对重金属污染尤为敏感 ( Lewis et al., 2012). 这可能与其结构有关. 精子在成熟过程中失去了大部分的细胞质, 因此, 与其它组织相比缺乏有效的酶防御系统. 此外, 精子还缺乏有效的解毒系统, 至今为止还未有文献报道甲壳动物精子中发现如金属硫蛋白 ( MT) 之类的金属结合蛋白 (Zhang et al., 2010). 关于污染物对精子质量的研究主要集中在哺乳类动物, 而对水生动物尤其是水生甲壳动物的研究非常有限 ( Yang et al., 2008). 甲壳动物精子质量的研究主要体现在疾病防控 ( Primavera et al., 2000 ) 食物质量 (Bray et al., 1998; Leung-Trujillo et al., 1991) 育种 (Rodriguez et al., 2007) 及冷冻保存等技术 (Bart et al., 2006; Gwo et al., 2000) 的甲壳类水产养殖方面. 因此, 污染物对甲壳动物精子的毒理学研究需要加强. 环境中镉污染可引起水生动物精子发生氧化损伤 (Li et al., 2010), 导致其形态结构发生异常 ( 王兰等,2002) 成活率和运动能力下降 DNA 结构受损受精能力减弱等 (Dietrich et al., 2010). 鉴于此, 本实验突破传统的甲壳动物精子质量检测方法 ( 管卫兵等,2003), 将流式细胞术首次应用在重金属对甲壳动物精子毒理学研究上, 检测了急性镉污染对河南华溪蟹精子成活率质膜完整性顶体膜完整性染色质状态的影响. 需要指出的是, 本实验中采用的 Cd 2 + 浓度比国家环境质量标准允许的浓度 (0. 01 mg L - 1 ) 要大 100 甚至 1000 倍, 主要原因有三方面 : 在中国某些严重污染的地区, 镉浓度可达到与本实验设定相近的浓度, 文献报道在含镉丰富的矿区沉积物中镉含量可达到 mg kg - 1 ( 赵传东等,2008); 第二, 本研究检测的是单一金属 Cd 2 + 的精子毒性效应, 但真实环境中可能存在一系列的具生殖毒性的金属, 如 Cu Mn Pb Ni 和 Zn (Gjorgieva et al., 2012), 这些金属的叠加效应可能会与本文中使用的 Cd 2 + 浓度产生的效应一致 ; 第三, 在本实验中, 华溪蟹在 Cd 2 + 暴露时间为 5 ~ 7 d, 但在自然环境下, 可能终其一生都处在镉污染的环境中, 因此, 本实验中采用的高浓度是有必要的. 精子成活率检测是一种快速高效的方法, 可作为污染物对精子损伤的生物指标, 目前广泛应用于哺乳动物精子毒理学实验中, 在一些水生无脊椎动物中也有应用 ( Favret et al., 2010). 本研究中采用伊红 Y 将急性镉染毒后华溪蟹精子进行活体染色观察并计数 ( 马强等,2007). 结果显示, 华溪蟹精子的成活率在高浓度组 ( Cd 2 + 为 mg L - 1 ) 暴露 5 d 和 7 d 后显著下降, 但这是否会影响受精率还有待进一步探究. 根据 Gopalakrishnan(2008) 等对多毛类动物重金属毒理的研究, 其精子在镉浓度为 100 μg L - 1 暴露 20 min 后, 精子成活率和受精率均显著降低 ; 且 Bellas(2001) 等对肉足鞭毛类动物的研究显示, 其精子在镉离子浓度为 μg L - 1 暴露 30 min 后成活率和受精率显著降低. 因此, 成活率的高低直接影响着受精率, 低的成活率会使物种下一代的种群数量受到威胁. 精子质膜是精子最外层的细胞结构, 起着维持细胞内外生理环境的屏障作用, 膜完整性是精子维持正常生理功能的基本条件 ( Wu et al., 2012), 因此, 精子膜的完整性常作为评价精子质量的最基本指标. 此外, 是否具有完整顶体也是精子能否成功受精的关键, 因此, 对精子顶体完整性的检测也是评价精子质量的一个重要指标 ( Kim et al., 2011). 采用花生凝集素 ( PNA-FITC) 和碘化丙啶 (PI) 双标记的方法, 应用流式细胞术, 可同时反映顶体状态和质膜完整性 ( 华咏等,2006). 本实验结果表明, 在镉染毒 5 d 和 7 d 后, 质膜损伤率和顶体损伤率在高浓度组均呈现显著升高, 且具有浓度 - 时间效应. 在 Cd 2 + 浓度为 mg L - 1 暴露 5 d 后, 精子的顶体就发生了显著性损伤, 而质膜只在 116 mg L - 1 时出现了显著性损伤, 提示顶体结构对 Cd 2 + 引起的损伤更为敏感, 可能是重金属的重要靶标之一. 在精子生成的过程中, 精子因失去了绝大部分的细胞质而缺乏抗氧化系统及有效的 DNA 修复能力 (Aitken et al., 2004). 因此, 在外界污染物的暴露下, 精子 DNA 的完整性极易受到影响. 动物研究表明, 完整的染色质和 DNA 结构是精子成功受精及产生健康后代的前提条件 ( Fraser et al., 2011). 环境污染物对精子 DNA 损伤的研究已广泛应用于人类及脊椎动物的毒理学研究中 ( Hauser et al., 2007; Xu et al., 2007), 但对水生无脊椎动物的 DNA 损伤情况却缺乏关注. 本文结果显示, 急性 Cd 2 + 暴露对华溪蟹精子 DNA 结构的损伤具有浓度

精子在成熟过程中失去了大部分的细胞质, 因此, 与其它组织相比缺乏有效的酶防御系统. 此外, 精子还缺乏有效的解毒系统, 至今为止还未有文献报道甲壳动物精子中发现如金属硫蛋白 ( MT) 之类的金属结合蛋白 (Zhang et al.

5 2048 环境科学学报 33 卷和时间效应关系. 在 Cd 2 + 浓度为 116 mg L - 1 暴露 5 d 后精子染色质结构出现显著性损伤 ; 在暴露 7 d 后, 所有染毒组的 DNA 均出现了显著损伤, 表明精子 DNA 对重金属镉是极为敏感的. 精子表面富含不饱和脂肪酸, 因此极易受到自由基的攻击, 镉对华溪蟹精子 DNA 的损伤可能源于镉直接或间接引起的氧化损伤 (Ong et al., 2007). 5 结论 (Conclusions) 综上所述, 镉能够导致河南华溪蟹精子质量下降, 精子成活率质膜和顶体的完整性以及染色质状态损伤的变化均能反应镉对水生动物生殖系统的胁迫程度及毒性影响, 故均可作为水环境重金属生殖毒性效应机理研究的生物评估指标. 镉是否对精子的生理生化及形态学方面也造成影响, 还有待下一步的研究论证. 责任作者简介 : 王兰 (1960 ), 女, 教授, 博士生导师, 主要从事典型重金属污染物的生物学效应与分子机制方面的研究. 参考文献 (References): Aitken R J, Koopman P, Lewis S E M Seeds of concern[ J]. Nature, 432: Au D W T, Chiang M W L, Tang J Y M, et al Impairment of sea urchin sperm quality by UV-B radiation: predicating fertilization success from sperm motility[ J]. Mar Pollut Bull, 44: Bart A N, Choosuk S, Thakur D P S Permatophore cryopreservation and artificial insemination of black tiger shrimp, Penaeus monodon ( Fabricius) [ J]. Aquac Res, 37: Bellas J, Vázquez E, Beiras R Toxicity of Hg, Cu, Cd and Cr on early developmental stages of Ciona Intestinalis ( Chordata, Ascidiacea) with potential application in marine water quality assessment[ J]. Wat Res, 35(12): Benoff S, Jacob A, Hueley I Male infertility and environmental exposure to lead and cadmium[ J]. Hum Reprod Update, 6: Bray W A, Lawrence A L Male viability determinations in Penaeus vannamei: evaluation of short-term storage of spermatophores up to 36h and comparison of Ca-free saline and seawater as sperm homogenate media[ J]. Aquaculture, 160: Chia S E, Xu B, Ong C N, et al Effect of cadmium and cigarette smoking on human semen quality[ J]. Int J Fertil, 39: Cordelli E, Eleuteri P, Leter G, et al Flow cytometry applications in the evaluation of sperm quality: semen analysis, sperm function and DNA integrity[ J]. Contraception, 72: Dietrich G J, Dietrich M, Kowalski R K, et al Exposure of rainbow trout milt to mercury and cadmium alters sperm motility parameters and reproductive success [ J ]. Aquat Toxicol, 97: Favret K P, Lynn J W Flow-cytometric analyses of viability biomarkers in pesticide-exposed sperm of three aquatic invertebrates [J]. Arch Environ ConTox, 58: Ford A T, Fernandes T F, Rider S A, et al Measuring sublethal impacts of pollution on reproductive output of marine Crustacea[ J]. Mar Ecol Prog Ser, 265: Fraser L, Strzeżek J, Kordan W Effect of freezing on sperm nuclear DNA[ J]. Reprod Dom Anim, 46: Gjorgieva D, Kadifkova-Panovska T, Mitrev S, et al Assessment of the genotoxicity of heavy metal in Phaseolus vulgaris L. as a model plant system by Random Amplified Polymorphic DNA ( RAPD ) analysis[ J]. J Environ Sci Health A, 47: Gopalakrishnan S, Thilagam H, Vivek Raja P Comparison of heavy metal toxicity in life stages ( spermiotoxicity, egg toxicity, embryotoxicity and larval toxicity ) of Hydroides elegans [ J ]. Chemosphere, 71: 管卫兵, 王桂忠, 李少菁甲壳动物精子质量和活力评价 [ J]. 海洋通报, 22: Gwo J C Cryopreservation of aquatic invertebrate semen: a review [J]. Aquat Res, 31: Hauser R, Meeker J D, Singh N P, et al DNA damage in human sperm is related to urinary levels of phthalate monoester and oxidative metabolites[ J]. Hum Reprod, 2: 华咏, 钱宪明, 陈炳官, 等流式细胞术在精子质量检测中的应用 [J]. 中华检验医学杂志,29(6): Kim S, Lee Y J, Ji D B, et al Evaluation of different cryoprotectants ( CPAs) in Boar semen cryopreservation[ J]. J Vet Med Sci, 73 (7): Kobayashi N Comparative sensitivity of various developmental stages of sea urchins to some chemicals[ J]. Marine Biology, 58: Lei W, Wang L, Liu D, et al Histopathological and biochemical alterations of the heart induced by acute cadmium exposure in the freshwater crab Sinopotamon yangtsekiense [ J]. Chemosphere,84: Leung-Trujillo J R, Lawrence A L Spermatophore generation times in Penaeus setiferus, Penaeus vannamei and Penaeus stylirostris [J]. J World Aquacult Soc, 22: Lewis C, Fort A T Infertility in male aquatic invertebrates: A review[ J]. Aquat Toxicol, :79-89 李涌泉, 王兰, 刘娜, 等镉对长江华溪蟹酶活性及脂质过氧化的影响 [J]. 水生生物学报,32: Li Z H, Li P, Rodina M, et al Evaluating the function of calcium antagonist on the Cd-induced stress in sperm of Russian sturgeon, Acipenser gueldenstaedtii[ J]. Aquat Toxicol, 100: 马强, 丁银娣, 曲迪, 等伊红台盼蓝检测河蟹精子存活率的比较 [J]. 动物学杂志,42 (4): 马文丽, 王兰, 何永吉, 等镉诱导华溪蟹不同组织金属硫蛋白表达及镉蓄积的研究 [J]. 环境科学学报,28(6): Meeker J D, Rossano M G, Protas B, et al Cadmium, lead, and other metals in relation to semen quality: Human evidence for

5 结论 (Conclusions) 综上所述, 镉能够导致河南华溪蟹精子质量下降, 精子成活率质膜和顶体的完整性以及染色质状态损伤的变化均能反应镉对水生动物生殖系统的胁迫程度及毒性影响, 故均可作为水环境重金属生殖毒性效应机

6 7 期马丹旦等 : 急性镉染毒对河南华溪蟹精子质量的影响 2049 molybdenum as a male reproductive toxicant [ J]. Environ Health Perspect, 116: Michele J S, Hein H D, Johan H J The freshwater river crab, Potamonautes warreni, as a bioaccumulative indicator of iron and manganese pollution in two aquatic systems[ J]. Ecotoxicology and Environmental Safety, 41(2): Millward G E, Turner A Metal Pollution [ J]. 1 st Edition of Encyclopedia of Ocean Sciences, 3: Ong C N, Shen H M, Chai S E Biomarkers for male reproductive health hazards: Are they avaliable? [ J]. Toxicol Lett, 2007, 134: Primavera J H, Quinitio E T Runt-Deformity Syndrome in cultured giant tiger prawn Penaeus monodon[ J]. Crustacean Biol, 20: Rodriguez R S, Regalado M E, Perez C J A, et al Comparison of some reproductive characteristics of farmed and wild white shrimp males Litopenaeus vannamei ( Decapoda: Penaeidae) [ J]. Rev Biol Trop, 55: Schuwerack P M, Lewis J W, Jones P The potential use of the South African river crab, Potamonautes warreni, as a bioindicator species for heavy metal contamination [ J]. Ecotoxicology, 10 (3): Siu E R, Mruk D D, Porto C S, et al Cadmium-induced testicular testicular injury [ J ]. Toxicol Appl Pharmacol, 238: Telišman S, Cvitkovic P, Jurasovic J, et al Semen quality and reproductive endocrine function in relation to biomarkers of lead, cadmium, zinc and copper in men [ J]. Environ Health Perspect, 108: 王兰, 孙海峰, 李春源镉对长江华溪蟹精子发生的影响 [ J]. 动物学报,48(5): Wang L, Xu T, Lei W, et al Cadmium-induced oxidative stress and apoptotic changes in the testis of freshwater crab, Sinopotamon yangtsekiense[ J]. Plus One, 6(11): e27853 Wu C, Zhang B, Dai J, et al Effects of cryopreservation on the quality and ultrastructure of Tibetan Mastiff Sperm[ J]. Agricultural Science & Technology, 13(6): Xuan R, Wang L, Sun M, et al Effects of cadmium on carbohydrate and protein metabolisms in the freshwater crab Sinopotamon yangtsekiense [ J ]. Comp Bichem Physiol, 154C: Xu D X, Shen H M, Zhu Q X, et al The associations among semen quality, oxidative DNA damage in human spermatozoa and concentrations of cadmium, lead and selenium in seminal plasma [J]. Mutat Res- gen Tox En, 534: Yang G,Kille P,Ford A T Infertility in a marine crustacean: have we been ignoring pollution impacts on male invertebrates? [ J ]. Aquat Toxicol, 88:81-87 Zhang Z, Cheng H, Wang Y, et al Acrosome reaction of sperm in the mud crab Scylla serrata as a sensitive toxicity test for metal exposures[ J]. Arch Environ Contam Toxicol, 58: 赵传东, 陈富荣, 陈兴仁, 等长江流域沿江镉异常源追踪与定量评估的方法技术研究 : 以长江流域安徽段为例 [ J]. 地学前缘,15:

Ecotoxicology and Environmental Safety, 41(2): 203-214 Millward G E, Turner A. 2001. Metal Pollution [ J]. 1 st Edition of Encyclopedia of Ocean Sciences, 3: 1730-1737 Ong C N, Shen H M, Chai S E.

第期马海燕等臭氧水和超声波协同作用在速冻西兰花中的应用研究材料与方法臭氧水的制取臭氧水处理超声波处理超声波和臭氧水协同处理对照处理邻苯二胺分光光度法测

第期马海燕等臭氧水和超声波协同作用在速冻西兰花中的应用研究材料与方法臭氧水的制取臭氧水处理超声波处理超声波和臭氧水协同处理对照处理邻苯二胺分光光度法测第卷第期年月食品与生物技术学报臭氧水和超声波协同作用在速冻西兰花中的应用研究马海燕张慜孙金才食品科学与技术国家重点实验室江南大学江苏无锡海通食品集团股份有限公司浙江慈溪由于速冻蔬菜加工过程中的热烫处理对