肺癌患者教育万人行

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请十屈
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1 中国医药教育协会肺部肿瘤专业委员会肺癌分子检测进展 L o g o Academic Committee of Thoracic ncology Society of CMEA

2 声明本专委会 ( ) 制作的幻灯以学术交流为目的, 所有幻灯著作权均为本专委会所拥有, 本专委会拥有所有法定权利任何个人或组织不得未经本专委会许可转载或挪作他用 ; 如需转载或他用, 需征得本专委会许可, 并在转载时请保持相关内容完整性, 并标注出处 ( 专委会幻灯出处编辑者署名等 )

3 主要内容肺癌诊治概况不断涌现的分子靶标百家争鸣的检测方法完善利用的样本类型小结

4 肺癌诊治概况不断涌现的分子靶标百家争鸣的检测方法完善利用的样本类型小结

5 肺癌的特征

6 NSCLC 驱动基因信号通路及靶向药物理论上, 信号通路中基因都有检测需要 Zer and Leighl.frontiers in oncology Volume 4.Article 329

7 肿瘤治疗模式的改变治疗过程中需要对相关基因进行检测分子检测与药物使用同样重要! 检测需求已不限于治疗前的病理检测, 己逐渐扩展到治疗期间疗效监测和预后检测 ( 血液转移灶等 ), 检测将扩展到多次多重检测 ; 涉及病理科等多个科室

8 肺癌诊治概况不断涌现的分子靶标百家争鸣的检测方法完善利用的样本类型小结

EGFR WT Squamous 2010 NCCN Squamous-cell

nonsquamous WT Squamous NCCN Large cell carcinoma

Squamous + WT Current Standard of NSCLC Care 2014

9 NSCLC 临床病理分型的演变组织分型驱动基因分型 NSCLC 分型现状 Non-squamous Squamous 早期 Adenocarcinoma EGFR Mu EGFR WT Squamous 2010 NCCN Squamous-cell carcinoma EGFR Mu ALK+ KRAS Mu ther nonsquamous WT Squamous NCCN Large cell carcinoma EGFR ALK+ KRAS Mu Mu ther non- RS1 squamous Squamous + WT Current Standard of NSCLC Care 2014 NCCN NCCN Guidelines, NSCLC, Version Horn L, et al. Clin ncol. 2009

$8% 36% 21% 25% 肺腺癌 :EGFR\KRAS\BRAF\ALK-RS1\RET 等检测已是共识 ;$ $肺鳞癌发生模式不同, 检测靶标以扩增为主, 同时 EGFR ALK\RS1 某些病例也有必要检测 Aisner DL, et$

10 肺癌驱动基因的突变谱 : 腺癌 & 鳞癌腺癌鳞癌 0.7% 2.2% 0.8% 0.7% 2.6% 0.1% 3.3% 7.8% 36% 21% 25% 肺腺癌 :EGFR\KRAS\BRAF\ALK-RS1\RET 等检测已是共识 ; 肺鳞癌发生模式不同, 检测靶标以扩增为主, 同时 EGFR ALK\RS1 某些病例也有必要检测 Aisner DL, et al ASC Abstract Gadgeel SM, et al ASC Abstract 7592.

11 肺鳞癌的常见驱动基因驱动基因靶点发病率临床相关性可能的靶向药物 PIK3CA 突变 % 未观察到相关性 GDC-0941 XL147 BKM120 FGFR1 扩增 % 曾吸烟 Brivanib (BMS ) Dovitinib (TKI258) Ponatinib (AP24534) E3810 DDR2 突变 2.2% 未观察到相关性 Dasatinib Imatinib Nilotinib xnard GR, et al. J Clin ncol 2013; 31:

12 研究阶段的靶向药物靶点药物研究阶段组织学类型患者数主要终点 NCT 编号 PI3K BRAF Buparlisib II 期 Ib/II 期 Ib/II 期所有 SQCC SQCC PFS MTD/PFS MTD/PFS NCT NCT NCT Dabrafenib II 期所有 60 RR NCT DDR2 Dasatinib II 期 II 期 II 期 II 期 SQCC SQCC 所有所有 RR RR RR RR/PFS NCT NCT NCT NCT PD1 Nivolumab III 期 II 期 SQCC SQCC RR/S RR NCT NCT Lambrolizumab II/III 期所有 920 PFS/S NCT MPDL-3280A II 期 II 期所有所有 RR S NCT NCT CTLA- Ipilimumab III 期 II 期 SQCC 所有 S irpfs NCT NCT Filipits M. Curr pin ncol 2014; 26(2):152-8.

13 2015 NSCLC NCCN 指南对于 NSCLC 患者建议检测 EGFR 和 ALK 基因状态 ; 对于 RS1/MET/RET/BRAF/ HER2 等崭露头角的靶基因也给予关注

14 在多基因检测上的探索我院第三季度临床与前瞻性科研检测情况 EGFR KRAS BRAF ALK RS1 PI3K 检测数突变数

与靶向药物治疗敏感性相关的 EGFR 基因突变主要发生于 18-21 外显子上的

15 另外一个方向 : 单基因不同位点的深入挖掘! EGFR 基因 29 种突变研究透了吗? 与靶向药物治疗敏感性相关的 EGFR 基因突变主要发生于外显子上的 29 种突变, 该 29 种突变又分为两大类, 其一是药物敏感性相关突变, 其二是药物耐药性相关突变抗耐药位点 T790M 突变的明星药物 AZD9291 尚未上市...

16 在单个基因多位点挖掘上的工作突变数量病理科临床检测 EGFR 突变类型分布突变类型

17 分子病理检测的主要方法检测水平检测对象检测技术检测基因基因突变 (SNPs) DNA sequencing, ARMS EGFR,KRAS,BRAF, BRCA, BCR-ABL,JAK2 拷贝数改变 (Copy Number Variation, CNV) 基因重排 (Gene rearrangement) FISH EML4-ALK,RS1,HER2, RET 基因表达 (mrna/rna expression) 反转录 + 荧光定量 PCR (RT-qPCR) BRCA1,TP2A,TYMS 蛋白 ( 质 ) 表达 (Protein expression) 免疫组织化学 (IHC) EGFR,EML4-ALK, HER2

18 肺癌诊治概况不断涌现的分子靶标百家争鸣的检测方法完善利用的样本类型小结

19 肺癌基因检测方法选择重要性突变 RT-PCR 融合基因 NSCLC 突变率 EGFR 10-45% KRAS 15-25% BRAF 1-3% 基因 NSCLC 突变率 ALK 3-10% RS1 2-4% RET 1-2% 检测方法 : 除 FISH 和免疫组化外, 基本上都属于基因扩增检验技术, 灵敏快捷准确

20 Steps NSCLC 基因扩增检验技术 NGS PCR CLUSTER ANALYZER <0.1% ddpcr ddpcr: <0.1% ARMS & PNA-LNA clamp PCR: Real-time Detection 1% TaqMan PCR: Real-time Detection ~10% Pyro Sequencin g PCR Clean-up Electrophoresis Sizing Pyrosequencing Rxn ~10% PCR/ SURVEYR PCR SURVEYR cleavage dhplc Sizing = Transfer product /add reagent/ open tube Confirmation by sequencing PCR/ RFLP PCR RFLP Capillary Electrophoresis Confirmatio n by sequencing PCR/ HRMA/ dhplc PCR Heteroduplex Confirmation by sequencing 3-10% 10% 3-12% ARMS 类方法是目前临床应用最为广泛且最为适合的方法! PCR/ Nested ME-PCR/ Sequencing PCR/ Sequencing Sequencing PCR Clean-up Sequencing Rxn Clean-up Capillary Sequencing 20~30% PCR PCR Clean-up Sequencing Rxn Clean-up Capillary Sequencing 20~30% PCR RFLP PCR Clean-up Sequencing Rxn Clean-up Capillary Sequencing <1%

21 本科室检测方法免疫组织化学 (IHC) 荧光原位杂交技术 (FISH) IHC 评分实时逆转录 - 聚合酶链反应 ARMS!

22 科室不同方法检测情况检测样本 IHC 测试数 ARMS 测试数 fish 测试数常规会诊 14 胸水小标本 E-Bus 89 穿刺合计

23 数字 PCR 是 PCR 技术的再次革新 2011/10

24 Digital PCR 技术液滴生成 (20,000) 微体系 PCR 阳 / 阴性液滴计数定量及定性分析 PCR Droplets Read Droplets X target copies Results 要求标本 DNA 片段短, 方法灵敏度 0.1%, 但实验室要求较高实现绝对定量 24

25 高通量测序技术的发展 25

26 二代测序技术加速基因组序列分析 Derek Sand Qi L. Biological Procedures nline 2013;15:4 Sebastien Couraud, et al.clin Cancer Res;2014,20(17) 26

27 TCGA Research Network 为首的大数据库使用 The Cancer Genome Atlas Pan-Cancer Analysis Project NGS 暂时未到应用时候, 但要尽快搭建平台, 为后期临床应用做准备! Cancer Genome Atlas Research Network.Nat Genet ct;45(10):

28 肺癌诊治概况不断涌现的分子靶标百家争鸣的检测方法完善利用的样本类型小结

29 EGFR 基因突变检测的常规标本金标准组织学外科手术标本活检标本在肺癌诊断领域这些标本的应用已经毫无争议了! 有效补充细胞学穿刺胸水 E-bus 等液基样本无法获取组织 >> 无法检测 >> 无法实现精准治疗

30 当组织和细胞学标本无法获取时血液样本作为补充可检测 EGFR 状态患者数量可检测 EGFR 状态患者数量可评估样本 : 突变阳性肿瘤或细胞学样本可评估样本 : 突变阴性肿瘤细胞学或 ctdna 样本不可评估样本 / 无法获取样本

即循环肿瘤细胞, 指释放到外周血中的肿瘤细胞, 目前 CTC 的捕获比较困难 Crowley E, Di Nicolantonio F, Loupakis F, Bardelli

31 血液标本的检测对象 cfdna cell free DNA, 即血浆游离 DNA, 是外周血中一种细胞外呈游离状态的小片段核酸, 即 cfdna 包含了 ctdna ctdna circulating tumor DNA, 即循环肿瘤 DNA, 指由肿瘤细胞释放到血液循环系统中的 DNA CTC circulating tumor cell, 即循环肿瘤细胞, 指释放到外周血中的肿瘤细胞, 目前 CTC 的捕获比较困难 Crowley E, Di Nicolantonio F, Loupakis F, Bardelli A. Nat Rev Clin ncol Aug;10(8): Liquid biopsy: monitoring cancer-genetics in the blood.

32 血液标本 EGFR 检测的探索检测数突变数突变率 % 日期 2014Q3 2014Q4 2015Q1 2015Q2 例数血液检测仅适用于晚期无法取得组织标本的 NSCLC 血液标本采集后需及时做好前期处理使用商业化获批准的血液 DNA 提取试剂盒和 ARMS 血液检测试剂盒血液 EGFR 检测, 质控与规范化亟待指导! ADx-EGFR ARMS

33 ctdna 用于判断预后 Landmark analysis of time to progression (A) and overall survival (B) based on interim circulating tumour DNA result drawn on day 1 of cycle 3 Lancet ncol Published nline April 2,

34 ctdna 用于药物疗效监测 N Engl J Med DI: /NEJMoa

35 Plan A: 初筛血液补充组织检测在肺癌诊断中可能的两种趋势! Plan B: 同步检测, 互为补充血检

36 肺癌诊治概况不断涌现的分子靶标百家争鸣的检测方法完善利用的样本类型小结

37 小结肺癌的诊疗是肿瘤精准医学的经典模式, 取得了分子病理检测指导临床实践的巨大成就, 检测和药物使用同等重要不断涌现的分子靶标百家争鸣的检测方法完善利用的样本类型将肺癌的分子病理不断推向新的高度肺癌相关的分子检测带给病理的机遇很多, 但需要方方面面的合作引导和支持才能更好地转化成发展的动力

38 致谢 : 白冲第二军医大学附属长海医院曾瑄北京协和医院常建华复旦大学附属肿瘤医院陈公琰哈尔滨医科大学附属肿瘤医院丁翠敏河北医科大学第四医院丁礼仁浙江大学医学院附属第二医院姚烽 / 方文涛上海交通大学附属胸科医院傅小龙上海交通大学附属胸科医院高蓓莉上海交通大学附属瑞金医院谷伟南京医科大学第一附属医院姜丽岩上海交通大学附属胸科医院李达浙江大学医学院附属邵逸夫医院刘莉华中科技大学同济医学院附属协和医院刘士远第二军医大学附属长征医院孙加源上海交通大学附属胸科医院王凯浙江大学医学院附属第二医院王征北京医院徐建芳同济大学附属上海市肺科医院颜美琼上海交通大学附属胸科医院张杰上海交通大学附属胸科医院张晓菊河南省人民医院张新复旦大学附属中山医院赵快乐复旦大学附属肿瘤医院肺部肿瘤专委会秘书处按首字母排名, 不分先后

39 谢谢!

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肺癌患者教育万人行中国医药教育协会肺部肿瘤专业委员会肺癌靶向治疗相关靶点的检测 L o g o Academic Committee of Thoracic Oncology Society of CMEA 声明 Centre of Excellence 本专委会 ( ) 制作的幻灯以学术交流为目的, 所有幻灯著作权均为本专委会所拥有, 本专委会拥有所有法定权利任何个人或组织不得未经本专委会许可转载或挪作他用 ;