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1 第卷第期 %)8% 草业学报 $ $55 "787$ 年月蒲小剑田久胜田新会等红三叶遗传图谱构建及抗白粉病基因定位草业学报!"#$%#&!"! #$%!&' '%!% ' ( )!*+, -!.!)/&&% -%0./,). 0&&'!!. )%1' ' )' "! 红三叶遗传图谱构建及抗白粉病基因 ' 定位蒲小剑田久胜田新会杜文华甘肃农业大学草业学院草业生态系统教育部重点实验室中美草地畜牧业可持续发展研究中心甘肃兰州摘要本研究以感岷山红三叶抗澳大利亚红三叶品种 "!&'%!! +. 杂交新品系甘农白粉病红三叶材料为父母本杂交并种植成苗经人工接菌后筛选出抗感白粉病的 ( 群体为作图群体利用 ( 标记构建红三叶高密度遗传图谱并利用区间作图法对抗白粉病进行了定位分析可以为红三叶抗白粉病基因克隆和转基因等分子辅助育种奠定基础结果表明个 ( 标记构建得到的遗传图谱包含个连锁群 2 和遗传图谱的总距离为 2 3 其中连锁群的遗传距离 2 3 和标记间平均距离 3 均最大连锁群的遗传距离 3 和标记间平均距离 3 最小应用区间作图法对红三叶抗白粉病基因进行分析定位共检测到个抗白粉病相关位点和其中和位于连锁群上位于连锁群上个位点对抗白粉病的贡献率为 4 4 对红三叶白粉病抗性的贡献率最大 4 为主效关键词红三叶 ( 分子标记遗传连锁图谱抗白粉病分析 &#( & )$ *+,!(&-./$ 0..&% '.&.!( ) 1%$ 0(!%$1 $ (.&$(& $%!$ 5 % 6! 7 8&!+ 7 8! 95 :!! " #$! %! &'!%! %%!% '& #( ()!*!!! & &$! +,** *.7!' &&'./( +!'%!. )%1-)!'&%;'!.%,%&&!+. )%11' &&&'!'!!%!+!."!&'%!!.! +. %, &' ) % &!&'1 3!&!'%-%0./,). 00 ')/!%)'.0' -%0./,). 0!. &. &!'''1 ' ')%&, --!+-%- )'%! (, *&0&.'% %!&' ''+! ' )!*+, -!.'!'1), --!+, ' %.0 & &.'%)% ' ' % &&'!'%-%0./,). 0 &&'./0) &';)&%!.'%!'%+! )% '%!!.'!& +!%&&%. )%17'0 & %!.' '')!*+, -;&.%! (, *&! )..)!*+ + % -& 2!., - %1& '%').&'!% & %!. '%; ') + &' 2 3 0' ' 1+.&'!; '0!'0%, *&;!+ 30 ) 0 & %!.'%; '&, ) &'/ '0' ' +&', *.!&'/%!/ 3!)!+' 0'3%! 1 收稿日期改回日期 2 基金项目国家自然科学基金 22 甘肃省草地畜牧业可持续发展创新团队项目 $ 和现代农业产业技术体系建设专项资金 $" 资助作者简介蒲小剑男甘肃天水人在读博士,)2%, 田久胜男山东枣庄人在读硕士,) 2%, 共同第一作者 & ' % & %!' ; '. )/'%' &0% * 通信作者 $% &-%!.!+ ' %,). 0 +&.!

2 $ $55 "787$ %)8% + ; '0!, *&(1 &!.)'.'%-%0./,). 0&&'!!.)% '.%!!.0. ''.-!%'/- 1!-)!.;/' & % -%0./,). 0&&'!!+.%, 4 '% 40' ') + &' %!' ; '%!;!+%,% 0 &.!'. &',!+!%!' %)!+-%0./,). 0&&'!!. )%1 $ 1%. )%1-!(, * +! ' )!*+, - -%0./,). 0&&'!!)/&& 红三叶 -! 为豆科三叶草属中最重要的一种牧草其青干草中富含异黄酮具有调节人体新陈代谢抗肿瘤心血管疾病骨质疏松症早老年性痴呆症妇女更年期综合征机体免疫力下降等作用在预防骨质疏松症更年期综合征及治疗胃溃疡胃癌乳腺癌肠癌和前列腺癌等方面具有特殊功效是保健食品业和医药生产中提取异黄酮的重要原料岷山红三叶 -(! 13!&! 是年从美国引进经过多年栽培驯化选育出的适宜于甘肃省高寒阴湿区种植的特有牧草种质资源其青干草中粗蛋白含量为 4 异黄酮含量为 2+,+ 是大豆 %. 的倍近年来其种植面积不断扩大但在长期种植过程中由于品种更新缓慢退化严重重度感染白粉病感病率达 4 对单位面积草产量和异黄酮提取量影响极大因此培育适宜于该区种植的抗白粉病红三叶新品种成为农牧业生产中亟待解决的问题杂交育种诱变育种和杂种优势利用等常规育种技术均能达到培育新品种的目的转基因育种技术能有效 2 弥补传统育种的不足打破物种间的界限使品种选育快速高效定向能够有针对性地改良和选育作物新品种遗传图谱构建和相关性状基因定位是基因克隆和转基因育种的前提分子遗传图谱构建作图群体主要分临时性和永久性两大类常用的标记有 (9 ( "" 和 " 等构建某一植物的图谱时具体选用何种标记要依据具体研究情况决定国内外学者利用不同标记构建了不同植物的遗传图谱就是同一种植物也可以利用不同分子标记构建遗传图谱 ( 标记是一项结合了 ( 和 $ 技术特点的全基因组分子标记它具有 ( 技术的可靠性和 $ 技术的高效性只需要极少量 98 材料而且不需要预知基因组 98 序列特征不需要 "% '! 杂交试验结果稳定可靠可以快速获得大量信息而且再现性高重复性好因而非常适合于品种指纹图谱绘制遗传连锁图谱构建及遗传多样性研究很快便成为植物分子遗传图谱构建的主要标记在一些多态性极少而且待测样品较少的情况下用 ( 分析能达到满意结果徐志等利用 ( 标记构建了小麦 -! $ 白粉菌遗传连锁图谱其他学者也先后利用 ( 标记构建了水果蔬菜棉花大豆等作物的遗传图谱 ( 也是高密度基因图谱绘制或对某个基因所在区域进行精细定位较为理想的方法 ( 是目前农牧业生产中构建遗传图谱和基因定位应用最多的分子标记岷山红三叶为异花授粉植物品种的遗传背景不一致群体内存在遗传多样性白粉病抗性由单基因质量性状遗传位点或多基因数量性状遗传位点控制目前国内外在植物中共检测到白粉病 & 个这些抗白粉病 & 分布在和 9 染色体组里在同源群间第群中检测到最多对抗白粉病基因的定位主要集中在小麦黄瓜!! $! 甜瓜! 和草莓 /! 等植物上小麦抗白粉病基因定位方面的研究尤为突出国际小麦基因命名委员会正式命名了来自个位点的个抗白粉病基因其中个已找到连锁的分子标记这些众多的分子标记类型中以 ""( 和 " 应用最为广泛刘联正等利用 "" 标记将小麦抗白粉病基因 02 定位于染色体上刘素兰等利用 "" 技术将小麦新种质 8 2 的抗白粉病基因定位在 2 " 上李春鑫等利用 "" 和 " 标记将抗小麦白粉病新基因 1 定位于 )!. 等利用 ( 标记将黄瓜中的抗白粉病基因定位在上 (!!.% 等利用 "" 和 ( 标记将甜瓜的抗病基因定位在染色体上目前国内外利用

3 第卷第期草业学报年 ( 标记构建红三叶遗传图谱及抗白粉病定位方面的报道较少本研究拟以红三叶抗感白粉病材料杂交得到的 ( 代为作图群体利用 ( 标记构建红三叶高密度遗传图谱并对抗白粉病进行定位为抗白粉病基因克隆和转基因等分子辅助育种奠定基础材料与方法试验地概况本试验田间部分在甘肃省临洮县临洮农校农场进行 <8< 海拔, 降水量 2,, 无霜期. 年平均气温 = 最高气温 2 = 最低气温 = 土壤为黑麻土有灌溉条件试验地肥力均匀前茬作物为玉米 %! 试验材料鉴定及接种以重度感染白粉病岷山红三叶为父本,) -!'3 甘肃农业大学培育的高抗白粉病红三叶新品系甘农据任继周病害调查与研究方法分别确定为重感和高抗数据未发表其中新品系甘农为育种用试验材料为母本,) -!'( 杂交形成 ( 代群体以及亲本年月下旬将杂交 ( 代种子点播株距, 行距, 播种深度, 得到 ( 代群体利用项目组前期研究筛选出的对 ( 引物对提取自红三叶亲本及杂交 ( 代群体的基因组 98 进行电泳 >$ 高压电泳仪北京君意东方电泳设备有限公司 > " ( 水平电泳槽北京君意东方电泳设备有限公司根据电泳图谱条带特征淘汰假杂种保留真杂种用于构建遗传图谱参照文献的白粉菌接种方法和侵染型记载标准于年 2 月中旬为 ( 代群体和父母本苗期人工接种白粉菌待岷山红三叶 2 月底充分发病后记载 ( 代群体中每个单株的侵染型从 ( 代群体中分别随机选取株抗病和感病单株采用改良 $'/)', ' /),,%!,; %,. 法分别提取 9823 型台式高速冷冻离心机湖南凯达科学仪器有限公司水浴锅并用 4 琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测其浓度和纯度 $ 扩增仪 %. 3/$/ ) 紫外凝胶成像仪 5 9" 超微量紫外分光光度计 0 ) 相机?9 2 符合试验要求提纯合格后的 98 样置于 $ 冰箱内保存备用次重复进行实验试剂!7'7 和 98 连接酶均购自,%"!' $ 3 &' * 均购自 7 "!& 引物及接头表由上海生工生物工程上海有限公司人工合成其他试剂均为国药分析纯表接头和引物序列.!$ $ $ #$&$ ).%.$.&% (0$ 接头或引物.-'!.-, 序列 "! 接头或引物.-'!.-, 序列 "! '7 双链接头 < $$$ $$$<!7 双链接头 < $$$ $$$< '7.% ;)&'!..-'& < $$ $ <!7.% ;)&'!..-'& < $$ $ < $ $$$$ 3 $$ $ $ $ $$ 3 $ $$ $ $ $ $$ 3 $ $$ $ $ $ $ $ 3 $ $$ $ $ $ $ 3 $ $$ $ $ $ $ $ 3 $ $$ $ 2 $ $ $ $ 32 $ $$ $ $ $ $ $ 3 $ $$ $$ $ $ $$ 3 $ $$ $

4 $ $55 "787$ %)8% ( 分析参照 %& 等的方法略作调整分步法酶切体系! '725!7..#? 补齐 = 水浴 2 = 水浴,! = 保存连接体系单链人工接头加..#? 稀释至,%) 经 $ 反应合成双链加入 5 98 连接酶于 = 下连接过夜接头制作将合成的人工单链稀释至,%) 经 $ 反应 =,! 2 =,! =,! =,! = 保存合成双链接头 = 保存备用预扩增体系连接产物模板 98'72!7 预扩增引物 $ 3 &'3 然后..#? 补平离心混匀进行 $ 反应 $ 反应程序 =,! 进行变性 = & 2 =,! =,! 进行扩增共个循环 =,! 进行延伸 = 保存备用选择性扩增体系稀释倍的预扩增产物,,3 $ 3 &'3..#?2 $ 反应程序 =,! 进行变性 2 = & =,! 每个循环开始温度下降 = 共扩增个循环 = & 2 = & =,! 共扩增个循环 = 保存备用扩增产物检测制备 4 变性聚丙烯酰胺凝胶待胶聚合后恒电压预电泳,! 将 $ 扩增产物与上样混合均匀经 = 变性,! 后置于 = 保存等待点样点样后恒功率电泳左右采用 $ )%& 银染方法胶版微干后拍照并统计数据统计与分析以个 ( 群体真杂种个体及双亲共个单株的基因组 98 为 $ 模板用对 ( 引物进行 $ 扩增读带的原则记录清晰明确的条带模糊不易辨认的条带不做纪录同一位点有带记为 # 无带记为缺失用表示 ( 标记名称由引物组合编号和多态性条带序号组合而成由同对引物组合扩增出多个多态性条带分别记为引物组合名依此类推如 33 等最后按软件 %!3 - 的作图格式要求对获得的标记基因型数据进行整理和编辑 2 利用 %!3 - 软件构建遗传图谱的过程 ()8 0 %6' %.9' 分别将基因型数据导入 %!3 - 作图软件然后运行 9' %&!%'($))' 9.% 对标记进行卡方检验剔除偏分离标记接着运行?9 % -!+&' 窗口下的 $))' 命令对各标记间的连锁关系进行分组图距也由 $))' 命令计算出来然后根据计算后不同的分组运行 %- )'%! $' % -& &!+'% -!+& 选择适宜的?9 值在 %- )'%! 菜单下分别构建各个基因连锁群然后运行 % - $))' 3 - 命令对每个连锁群创建连锁图最后用 -% ' 命令导出结果利用本试验构建的红三叶 ( 图谱和 32 软件对抗白粉病有关进行定位分析并计算各位点性状的育种值和贡献率结果与分析红三叶遗传图谱构建基于个 ( 标记构建的红三叶基因连锁图包含个连锁群图表所获得连锁图谱总距离为 2 3 标记间平均距离 3 各连锁群的距离为 2 3 标记数为标记间的距离为 3 其中连锁群的遗传距离 2 3 最大包含个 ( 标记标记间平均距离为 3 的遗传距离为 2 3 包含个 ( 标记标记间平均距离为 3 的遗传距离为 3 包含个 ( 标记标记间平均距离为 3 的遗传距离 3 是所有连锁群中最小的但包含个 ( 标记标记间平均距离为 3 的遗传距离为 3 包含个 ( 标记标记间平均距离为 32 的遗传距离为 3 包含的 ( 标记最多个标记间平均距离为 3 的遗传距离为 3 包含个 ( 标记标记间平均距离为 3 红三叶抗白粉病基因分析利用 32 对红三叶抗白粉病进行定位分析图?9 时检测到个与红三叶抗白粉病性状有关的分别定位于遗传图谱的和连锁群图中阴影部分

5 第卷第期草业学报年图红三叶遗传图谱及抗白粉病 ' 定位 +(/ (&-./$0..&%'.&.!(& 1%$0(!%$1 $ (.&$(& $%!$ 图中和的阴影为红三叶抗白粉病位点 ".%0&%!!.,!&&&'!''%'-%0./,). 0!. )%1 个与红三叶抗白粉病相关的暂命名和其中和位于连锁群上位于连锁群上个位点的加性效应均为负值对抗白粉病表现增效加性效应其中最小最大表在个位点中的遗传距离为 2 3 包含的 ( 标记数最多个其?9 值和对红三叶白粉病抗性的贡献率 4 最大为主效基因的?9 值次之包含个 ( 标记其加性效应和贡献率分别为和 4 的遗传距离最大 2 3 但包含的位点数最少?9 值和贡献率 4 相对较低其也是唯一一个不在连锁群上的位点

6 $ $55 "787$ %)8% 讨论作图群体的选择作图群体的选择是影响遗传图谱构建和图谱质量好坏的主要因素之一常见遗传连锁图谱作图群体有临时性作图群体和永久性分离群体临时性作图群体包括杂交 ( 代 ( 代和 ( 代群体永久性分离群体包括近等基因系群体双单倍体群体重组自交系群体回交自交系群体如果植物的亲本基因型杂合度较高则 ( 分离作图群体为适宜作图群体包括红三叶在内的大多数多年生牧草为异花授粉植物亲本高度杂合自交不亲和选育高纯度自交系相对较难构建回交群体有一定阻碍杂交 ( 代是大多数牧草分子遗传连锁图谱构建的常用作图群体已应用于紫花苜蓿 &! $ 红三 2 叶鸭茅 %! 黑麦草和高羊茅 /! 等牧草表红三叶遗传连锁图谱中各连锁群的图距和标记分布.!$$&$(%(.&$.&%%(( #( & )0. -$(& $!(&-./$/#) $%!$ 连锁群!*+ + % - 距离 9&'! 3 标记数 8,;%, *& 平均距离 1+.&'! 平均 1+ 合计 %') 2 表红三叶抗白粉病性状的 ' 分析.!$ '.&.!() 1%$0(!%$1 $ (.&$(& $%!$ 标记连锁群?9 值最近的连锁标记包含标记数图距加性效应贡献率 %'), *!*+ + % -?91)! &', * 8,;%, *& 9&'! 3..'1 ' 1!-)! 作图标记的选择 98 分子标记直接体现植物 98 水平上的遗传多样性因为其易操作不易受环境影响和可重复性强等优点在牧草遗传图谱构建研究中应用广泛现阶段 "( ""( 和 9 等分子标记是遗传作图的主要方法遗传图谱构建的关键在于选取适宜的标记系统实践证明 ( 的多态性条带在图谱上定位的比例非常高能够满足构建遗传连锁图谱要求荷兰 A /+! 公司和公司共同构建了拟南芥 " &!!* 遗传连锁图谱共有多个 ( 位点拟南芥的全部基因组在图谱中体现的非常好, 等利用 ( 结合个形态学性状对马铃薯! 多态性水平及其亲缘关系进行了研究遗传图谱构建 2 牧草的草产量品质和非生物抗性等性状往往具有连续的表型变异并且由多个数量性状位点调控 2 前人主要利用回交法对具有优良性状的亲本进行改良其育种时间较长效率十分低分子遗传连锁图谱不仅能够在分子层面分析而且可以对主要农艺性状的基因进行标记定位和基因克隆并可以将目标基因转入到特定植物中利用转基因等分子标记辅助育种可加快牧草育种进程一般而言连锁框架图要求标记间平均间隔要小于 3 如果标记间的平均距离为 3 或更小时

7 第卷第期草业学报年就可以进行主基因定位本试验由个 ( 标记构建的遗传图谱全长 2 3 标记间平均距离为 3 平均间距 3 图谱标记分布均匀可用于定位抗白粉病定位近年来定位研究是国内外高度重视的一种方法其发展非常迅猛最初使用传统的单标记分析法然后发明了利用两个侧邻标记的区间作图法后来发展为在模型中加入其他类型标记以减少遗传背景效应 2 误差的复合区间作图法目前定位最先进的方法是多重区间作图法多重区间作图法能够对单一进行快速有效定位本研究以抗感白粉病红三叶材料杂交形成的 ( 群体为作图群体构建 ( 遗传图谱并利用多重区间作图法对抗白粉病进行定位分析可以为红三叶分子辅助育种奠定基础结论本试验利用红三叶杂交 ( 代群体为作图群体由个 ( 标记构建得到个连锁群 2 和所获得遗传图谱的总距离和标记间平均距离分别为 2 和 3 在所得连锁图谱中遗传距离最小 3 包含的标记数高达个标记间平均距离最小 3 是所有连锁图谱中最密集的应用区间作图法对红三叶抗白粉病基因进行分析定位共检测到个与抗白粉病相关的位点和分布在和连锁群上其中上含有个位点对红三叶白粉病抗性的贡献率最大 4 为主效参考文献 2$)$ $&$!+> :!+$B$ :'%. )%1&% )1%! %!,,! % +!&+&!.!' %.'%! '1'/% ; %) *&' +&' "! 姜义宝王成章崔国文红车轴草异黄酮对肉鸡免疫器官免疫球蛋白及抗氧化性能的影响草地学报 9 : #. )%1!C %!& "!!.!%)%+/ &&2 杜文华红三叶兰州甘肃科学技术出版社 2 9 : #"%!+$'&%!' %+!!.- %&- %& ')C'%!%!&% )1%!%!'!'!. )%1' + ) '%) %.!')&"! 2 刘晓玲杜文华宋超氮磷肥施用量对红三叶中异黄酮含量的影响西北农业学报 2 :!+B3>3 9 : #)!') +,%.!+!.,.!3!&!-!')') "! 王志明岳民勤杜文华等集饲用和药用价值于一体的牧草新秀岷山红三叶草业科学 "%!+$9 : #"'./%!,!&,% &&'!'%-%0./,). 0!3!&!. )%1&&)!.!. 2 刘晓玲宋超杜文华红三叶对白粉病抗性机理研究草原与草坪 2 :!+B #B9> $ --) '%!!+,-)&,,- %1,!'%,. )-)!'&1 ;%'!%)%+/) '!% "!!.!%)%+/2 王忠华朱东亮俞超现代育种技术在药用植物品种改良中的应用科技通报 2 (3 "!)/&&%. % + ''%)!!. ;. &&'!!'!&+! -%''%-)!'&%1 -&&!+ )' " ' ')' "! 2 贾小霞齐恩芳马胜等转 )' " 双价基因马铃薯的耐旱性及除草剂抗性分析草业学报 2 9 3$%!&' '%!&%!')!*+ +! ', -!., --!+ %% + / ).!.&'&&'!)'.' '&!' ' )!C %!&+ )')5!1&'/2 李冬梅饲草型小黑麦的遗传图谱构建及草产量和抗锈病相关基因的定位兰州甘肃农业大学 2 3 B3 #B> +! ' )!*+, -% &-' ' ;&.%! (,%) ), *&!. 1)!+! &' /'%-' %)%+ "! 2 徐志梅丽宏李志英等利用 ( 分子标记和无毒基因构建小麦白粉菌遗传连锁图谱植物病理学报 2

8 2 $ $55 "787$ %)8% # ($ ( %0./,). 0&&'!')%&!-%!'!&)% '%!)! &!!%!+2, --.;/,% ) ), *&3%) ))!'.!+2 徐金秋何方崔法等小滨麦易位系山农 2 抗白粉病基因的分子标记定位分子植物育种 2 B#>!+ 3 --!+% +! &&'!'%0'-%0./,). 0 &!+"", *&' %'! % )?.!') "! 刘联正李华杨睿等小麦抗白粉病基因 "" 标记定位西北植物学报 ":!+$>:!+ >""!)/&&% -%0./,). 0&&'!+!!! 0 3"3 8 2 % -! $ ' + %!%, "! 刘素兰王长有王秋英等小麦新种质 8 2 抗白粉病基因的 "" 分析作物学报 >B!+ B!+B.1!% &'. &%! %!&' '!+)!*+, -!$! &;;+&!+,%) ), * %'!%)%+/) '!2 李巧云张晓亮张志刚等大白菜分子遗传图谱构建研究进展生物技术通报 2 B:!+B %>7.!''%!% --) 1' &0'(,%) ), *&' #% ')' "! 2 祝军王涛赵玉军等应用 ( 分子标记鉴定苹果品种园艺学报 2 %B % $:!+ $$%!&' '%!%(!+-!'% - ') + &&'!'%)%0- %&- %&&'&& +!%'/-!" + ;' $!!+&+ )')"!&2 2 高金秋周建朝王孝纯等部分高抗低磷胁迫基因型甜菜 ( 指纹图谱的构建江苏农业科学 2 2 :!+9> > B (!)/&&% +! '.!&,%!+ )'/;.-%''%)! &' ')' "! 2 王丹于肖夏于卓等马铃薯杂种优良株系遗传差异的 ( 分析草业学报 2 :!+ $!, --!+%',!$!- -- ';&.%! (!."" $! &+ ) ')"!) '!2 谢立波王雪陈立新等基于 ( 和 "" 技术对辣椒果实维生素 $ 含量的定位中国农学通报 2 :!+B :: 3 3 &';)&,!'%%'%!+! ', -!.!)/&&%;)'/' '&;/ &!+ (!+&+ )')"!& 王志伟魏利民谢晓美等利用 ( 构建棉花遗传图谱及纤维品质性状分析江苏农业科学 3 :!+ BB %B!+ 3 - %!&' '%!!.!)/&&% %) %!'!'!&%/;!$! & %!)%?) $ %-"!& 王贤智周蓉张晓娟等大豆遗传图谱的构建和含油量的分析中国油料作物学报 $ : :!+ "3%) ), *, --!+!.+! '!)/&&%!%1 )-%0./,). 0&&'! +!1"!' + )' "! 李春鑫许为钢王根松等小麦白粉病抗病新基因 1 的遗传分析和分子标记定位中国农业科学 )!.3>"! $%!&' '%!% +! ' )!*+, -!.)% )C'%!% & % -%0./,). 0&&'!!,;!! $!7 7!'!'%!)"/,-%&,%!$;'& (!!.%>$,!$,)%"! ' )!*+, -%, )%!!!.)% )C'%!% % -%0./,). 0&&'!3%) ).!+!B"!'&, ' %.&% - ')')&!6!+$! + )') && 2 任继周草业科学研究方法北京中国农业出版社 2 %& #%+&)* 3 (! 0'!% 98!+-!'!+8).&& "' );%)%+ ) &'%)%+ )'! &6!+"! && 刘世新实用生物组织学技术北京科学出版社!+B>> > B$%!&' '%!% +! ' )!*+, - % ' ' -)%. /;.0'+ && &!+ "",%) ), *' ')' "! 2 2 姜志艳于肖夏于卓等利用 "" 分子标记构建四倍体杂交冰草的遗传连锁图谱草业学报 2 2 9!+$ >8!)/&&% ' '&)'!+'% %).&&'!% %! ' +&' "!,6%

9 第卷第期草业学报年丁成龙刘颖许能祥等日本结缕草抗寒相关性状的分析草地学报 $$( $!+(>" )'!+%-',)(& ++'%!-%- )'%! % +! ' )!*+, --!+!' - %!/ %!)% 6!+(%&' /5!1&'/ 蔡长福刘改秀成仿云等牡丹遗传作图最适 ( 分离群体的选择北京林业大学学报 3 % #!+$!+!!' + '.+! ' )!*+, -%,'(-%- )'%!% )'1'.-! '" *!*% ' + %!%, "! 22 郭建斌黄莉成良强等利用个 ( 群体整合高密度栽培种花生遗传连锁图作物学报 22 9B!+B ::$%!&' '%!!.!)/&&% +! ' )!*+, -!' ' /;*0'/ % &!+"" $! &+ )')"!) '!2 2 杜晓磊张宗文吴斌等苦荞 "" 分子遗传图谱的构建及分析中国农学通报 2 2!+B>> > B$%!&' '%!%! (;&.+! ' )!*+, -% ' ' -)%. /;.0'+ &&%!)%' $ %-&2 姜志艳于肖夏于卓等四倍体杂交冰草 ( 遗传连锁图谱的构建麦类作物学报 2 (!+> >> > B, --!+!)/&&%,-% '!'' '&!* & + && /;.%!)% 8% ' 0 &' D(5!1&'/8' "!.'%!2 房永雨于肖夏于卓等高丹草个重要性状的定位分析西北农林科技大学学报自然科学版 2 $!B :9 BB! ', --),! /&' ' % )%0!' %+!'%)! &.9#-%- )'%!!; ) / %!)%' $ %-& 2 李梁陈志伟杜志钊等大麦 9# 群体在耐低氮相关遗传连锁图谱初步构建中的运用麦类作物学报 2 "'.!&! #!'-"! ' '&'%!% &./ ).!. ')'/' '&!-!!) / + && %' )!. --).! ' & :!+ 3 >B!+%!+ $ ),! / %!&' '%!% +! ', -!' ' -)%. ) ) ' +&' "! 2 王梦颖张铁军龙瑞才等四倍体紫花苜蓿遗传图谱的初步构建草地学报 2 7&%; "AE)* #&!%#$%!&' '%!% %!&!& &)!*+, - %. )%1-!3$ )!' %)%+/ :! ' )!*+, -!. )%0!+', +!, --!+!%.+ && %! >!"! + )')5!1&'/ 谢文刚鸭茅分子遗传连锁图谱构建及开花基因定位雅安四川农业大学 %>$3 B!+ 98!+-!'!+%!! ) / + &&,1' & &!+"", * &%!)%+ )') %'!%)%+/ 罗永聪马啸张新全利用 "" 技术构建多花黑麦草品种指纹图谱农业生物技术学报 3 B %!+>!+$>"#&- %+&&%!+! ' ;.!+% ' )& /! & "; + )')"!D!%)%+/22 "B % ( (,%) ), *!.'& --) '%!' %'! %)?.!') "! 2 李珊赵桂仿 ( 分子标记及其应用西北植物学报 2 # B#%# >#! '.1&'/%!! $;&.%! (!)/&&%!)%)!'! ' &%& 2 胡尊红郭鸿彦胡学礼等大麻品种遗传多样性的 ( 分析植物遗传资源学报 2 # >B>!! '.1&'/! & * '1-%- )'%!& &!+ (, *%!)%)!'! ' &%&2 李鸿雁李志勇辛霞等野生扁蓿豆种质资源 ( 遗传多样性的分析植物遗传资源学报 2 :!+ :!+ 3 -! -)!. --) '%!%( #/;. 2 王斌翁曼丽 ( 的原理及其应用杂交水稻 2 ' ($, ' "%.)+.!&'/,%) ), - %/ + &&&!+ (, *& %' )!. --).! ' &, ""9!C 3 5 %!.% 3%) ). &-'%!!.&,) '/)'%!& -&,%!+!'1 +,-)&,-%''% &! &&-! &!+,% - %)%+ ).'!. (, *& )' %! %!)%%'!%)%+/ 2

10 $ $55 "787$ %)8% : : B!+3%) ) +! ' )!*+, -!.'& --) '%!! % + %-&')')"!2 谢文刚刘文献张建全等牧草分子遗传连锁图谱及其应用草业科学 2!+B > : &.1!&!+!%, &!.'!&+! %% +! ; %. %'!%)%+/) '! 井赵斌俞靓魏琳等国外牧草基因组学和转基因技术研究进展生物技术通报 B> :!> $!&- %+&&%,%) ) ;.!+!$! %!)%,!5!1&'/8') "! 朱义旺林雅容陈亮我国水稻分子育种研究进展厦门大学学报自然科学版 # ' 3$# :7!% 39 1 )%-,!'% &,-) &!- '"", *&!. %!&' '%!%!"" ;&.)!*+, -!7')! / + &&,%' )!. --).! ' &2! $%!&' '!+% +! ', -&!., --!+% -%0./,). 0&&'!!;', )%!"!/!+"!/!+ + )')5!1&'/ 田丽波苦瓜遗传图谱构建及白粉病抗性的定位沈阳沈阳农业大学 "!+! '!)/&&% '%&& &!+; *%&&-%- )'%!! -)!. %'%!!% *! 6!+ $! + )')5!1&'/2 商连光陆地棉回交群体杂种优势遗传基础研究北京中国农业大学 2 B!+$%!&' '%!%+.!&'/+! ', -!.!)/&&% %!,!')' '&!3 6!+6!+(%&' /5!1&'/2 张杰梅花高密度遗传图谱构建及部分观赏性状分析北京北京林业大学 2 :!+$%!&' '%!% 0',%) ) +! ', -!.!)/&& % + %!%,!.!)'/' '&!"!.%!+ + )')5!1&'/ 王霖小麦遗传连锁图谱构建及主要农艺和品质性状定位泰安山东农业大学

福建农业学报材料与方法试验菌株引物主要仪器主要试剂细菌培养模板的制备反应条件扩增产物的检测特异性试验敏感性试验分离菌株检测产物的克隆及序列测定结果与分析

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