期赵艳飞等暗纹东方卵子磷酸酶等生化指标分析与卵质评估才开始启动因此卵子内部母源性营养遗传物质在卵子受精及整个胚胎发育过程中起着至关重要的作用卵子内磷酸酶在生物体内普遍存在是非特异性的磷酸单脂水解酶也是动物体内重要的解毒酶系对细胞调节和营养物质的吸收转运过程极为重要因此卵子内部

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菜桑
5 years ago
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1 第卷第期年月水产学报文章编号! "#$% 暗纹东方卵子磷酸酶等生化指标分析与卵质评估赵艳飞马爱军何伟国马得友毛美霖王新安刘大勇郭正龙中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部海洋渔业可持续发展重点实验室青岛市海水鱼类种子工程与生物技术重点实验室山东青岛中国海洋大学山东青岛中国海洋大学附属中学山东青岛江苏中洋集团股份有限公司江苏海安摘要为了研究暗纹东方卵子可发育能力与其生化指标的关系用生化分析方法对暗纹东方未受精卵子基本成分磷酸酶活力苹果酸脱氢酶! 活力唾液酸氨基酸含量进行分析同时用 2& 方法对脂肪酸组成及相对含量进行检测并对各物质变化规律与其孵化率的相关性进行分析结果显示酸性磷酸酶活力, 含量与孵化率显著相关碱性磷酸酶, 与孵化率显著负相关与孵化率显著相关并呈现递减趋势! 与孵化率均显著相关并呈现先递增后递减的变化趋势 )& 脂肪酸! 与, 之比, 与之比均与孵化率存在显著相关结果表明磷酸酶脂肪酸等物质变化规律与卵子孵化率存在相关性且, 活力值在, 活力值在含量在含量在含量在! 含量在时均可作为卵子孵化率不低于 * 的参考指标据此可在一定程度上反映暗纹东方苗种繁育生产中所用卵子的可孵化价值亦可作为参考指标对其卵子质量进行初步的客观评价关键词暗纹东方卵子磷酸酶唾液酸脂肪酸孵化率中图分类号文献标志码暗纹东方.* + 为江海洄游性底层鱼亲鱼性成熟时溯游至长江中下游河段产卵幼鱼于当年秋或次年春季返回近海生长为一次性产卵鱼类考虑到经济成本人工养殖的暗纹东方往往在淡水中育苗幼鱼也在盐度较低的环境中养成在暗纹东方人工繁育中亲鱼所产卵子的质量影响着育苗工作的成败而在人工培育亲鱼期间亲鱼性腺内卵母细胞的营养积累及卵细胞形成过程对外界环境的波动较敏感使人工培育亲鱼所产卵子质量参差不齐进而影响后续卵子受精孵化及仔稚鱼的存活生长目前对暗纹东方卵子质量的预估主要通过如外观色泽卵子弹性等经验性指标特征进行判断尚且没有一个严谨科学的评价标准可供参考研究学者从形态学卵质成分代谢酶类等方面对多种经济鱼类的卵子质量做了相关研究也发现一些可作为卵子质量高低参考的指示性物质或形态特征这为一些养殖鱼类卵子评估及育苗工作提供了可靠的指导参数但这些结果往往具有种属特异性只能针对某些种类做出一定评判对暗纹东方及其他种类鱼育苗工作中的卵质评估没有太大参考意义因暗纹东方为卵生型鱼类卵子自受精到孵化的整个胚胎发育过程所需催化酶类蛋白脂肪酸等几乎所有物质均由卵子自身提供且胚胎自身遗传物质的转录翻译直至分裂到囊胚中期收稿日期 && 修回日期 && 资助项目江苏省科技支撑计划 ' 江苏省水产三新工程 7 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金通信作者马爱军 &#($.%%)!"#$%&'

2 期赵艳飞等暗纹东方卵子磷酸酶等生化指标分析与卵质评估才开始启动因此卵子内部母源性营养遗传物质在卵子受精及整个胚胎发育过程中起着至关重要的作用卵子内磷酸酶在生物体内普遍存在是非特异性的磷酸单脂水解酶也是动物体内重要的解毒酶系对细胞调节和营养物质的吸收转运过程极为重要因此卵子内部磷酸酶含量出现异常将可能影响卵子内部单脂水解卵子形成过程中的营养物质积累抵抗外源物质入侵等过程的顺利进行进而影响卵子的正常功能唾液酸 (%%1 属于糖类广泛存在于各种生物组织中其通常位于糖蛋白和糖脂的糖基化非还原末端是糖复合物结构和功能多样化的重要物质基础同时也是卵子皮质囊泡内的主要成分其可从皮质囊泡中释放进入卵周隙内并对外界环境产生渗透压梯度直至卵子绒毛膜硬化进而达到渗透压平衡由此可知在卵子入水后的硬化过程中起到关键作用苹果酸脱氢酶 /-1-01.&-)(-! 为三羧酸循环关键酶在卵内物质代谢和能量转化过程中极为重要保证着卵子及胚胎的正常发育总氨基酸含量在一定程度上可反映卵子内部氨基酸代谢水平其含量可间接反映卵子内部氨基酸代谢状态脂肪不仅是卵子重要的储能物质其多种脂肪酸在卵子代谢中还是多种重要的代谢免疫等功能性物质的前体为卵子及胚胎正常发育的物质基础因此本研究选取了酸性磷酸酶, 碱性磷酸酶, 苹果酸脱氢酶唾液酸氨基酸等种对卵子正常发育有重要作用的代谢物质及脂肪酸作为暗纹东方卵质的评价指标对其未受精卵取样检测并与其受精率孵化率进行数据分析以期发现一些规律及可影响卵质的指示性物质并为暗纹东方的卵质评价及苗种繁育技术推广提供客观性的实践资料材料与方法实验材料本实验用卵子在人工培育条件下获得实验用亲鱼于年月中下旬选自江苏中润农业有限公司共选出腹部性腺轮廓明显的健壮龄雌鱼尾体质健壮的龄雄鱼尾置于催产池雌性亲鱼大小无明显差异雌鱼平均体质量 - 体长 - % 养殖用水为过滤池塘淡水水温溶氧 " 以上采用两针注射法催产并于年月日采用腹部挤压法人工授精授精前每条雌鱼取未受精卵各用蒸馏水冲洗干净滤纸吸干后于离心管内保存并镜检精液保证所用精子活力达 * 以上人工繁育中暗纹东方雌性亲鱼在排卵时会把卵子一次性排净不存在同一亲鱼在一个季节有多次排卵的现象针对生产中同一培育条件下不同亲鱼所产卵子的孵化率常出现较大波动这一现象为使卵子质量在各实验组间出现差异查明这些卵子间是否存在着一些生化成分上的差异进而找出与卵子质量变化规律相近的生化指标参数本实验以每一尾雌鱼所产卵子为一组为更易出现各实验组间卵子发育能力参差不齐的现象本实验所用亲鱼在尾以上具体如下本次人工授精共选取尾雌鱼产卵量 - 其余尾因产卵量过低或未能产卵而排除选择尾精液充足精子活力达 * 以上的雄性亲鱼体质量体长 % 精液量将精液挤于干净光滑烧杯内产卵时每尾雌性亲鱼所产卵子为一组实验一共组用量筒量取未受精卵于洁净瓷碗每组加入等量高活力精液摇匀后加入生理盐水轻轻搅拌 ) 布卵于体积锥形孵化网中流水孵化底部充气流水来自同一水源调节气流速度使受精卵在水中能均匀分散涌起水温繁殖性状统计因鱼类卵子存在假受精现象未受精卵亦可自行发育至囊胚中期待胚胎发育至原肠前期统计受精率受精率 * ) 囊胚后期及原肠期胚胎数 " 总卵数 * 由于同批卵子存在出膜期不同步现象在胚胎开始破膜 0 后根据初孵仔鱼数统计孵化率孵化率 * ) 初孵仔鱼数 " 受精卵数 * 因胚胎在淡水中孵化时存在正常胚胎感染水霉现象孵化过程中需要反复淘去霉卵以防水霉影响正常胚胎孵化每组受精率孵化率重复统计次样品制备及分析匀浆液制备取左右卵子按照质量!"#$%&'

3 水产学报卷体积比加入预冷 * 生理盐水冰水浴手工匀浆.") 离心 ) 制成 * 匀浆上清液卵子干重水分蛋白及总脂含量测定卵子干重水分蛋白和总脂含量参照标准方法测定取粒卵子称重计为 " 粒并于冻干机冷冻干燥机,! 克莱斯特德国内干燥到恒重即为卵子干重 " 粒卵子水分含量 * " * 蛋白定量按照 ' 法测定试剂盒购于赛默飞世尔科技有限公司通过换算可得卵子干重的蛋白含量 " 脂肪的测定取一定量卵在冻干机中冻干称取卵冻干粉参照 %0 等的氯仿甲醇提取法测定匀浆液蛋白总氨基酸定量测定及,,! 活性检测定量测定采用铜离子络合比色法试剂盒购于南京建成生物工程研究所有限公司在一定波长下络合物颜色深浅与总氨基酸含量成正比通过换算得到湿重卵内总氨基酸含量 " 定量测定采用甲基苯二酚络合比色法试剂盒购于南京建成生物工程研究所有限公司通过测定络合物吸光度与标准即可计算出湿重卵内含量 ", 和, 活力测定采用铁氰化钾比色法试剂盒购于南京建成生物工程研究所有限公司! 活力测定采用底物催化反应体系法试剂盒购于南京建成生物工程研究所有限公司样品甲酯化取冷冻干燥卵子加入 & 甲醇溶液于水浴 ) 冷却后加入 & 甲醇溶液水浴 ) 冷却后加正己烷振荡萃取静置分层取上清液样品于气相质谱仪 2 +, 岛津日本检测脂肪酸种类及含量分析气相条件色谱柱毛细管柱升温程序初始温度以 ") 升至再以 ") 升至进样口温度载气 - 流量 ") 自动进样进样体积分流比溶剂切除时间 ) 质谱条件电子轰击离子源离子源温度接口温度电子能量 - 质量扫描范围 "4 通过 ' 谱库进行检索确定脂肪酸组成匹配度高于 * 根据目标脂肪酸与内标峰面积比得出其在总脂中的相对含量数据处理用, 对所得数据进行单因素方差分析 )-&: 采用!)%) 氏多重比较进行差异显著性检验并进行,-.() 相关系数及简单回归方程分析以找到卵质生化参数与其质量相关性并确定几种可判定卵子孵化率不低于 * 的生化指标为保证苗种繁育生产中的经济效益本实验将每尾亲鱼所产卵子最终孵化率不低于 * 作为衡量其有孵化价值的标准数据以平均数 - 标准误 -) - 表示 * 为差异显著性水平 + 可判定为存在相关性结果与分析对个实验组受精率孵化率数据处理显示各实验组间受精率差异不显著 + 孵化率差异显著 * 组内孵化率均具有方差齐性 + 说明孵化率具有统计学意义然而因受精率在各组间差异不显著此后将不再用作卵子质量参考指标为更简单明了地分析卵子质量与生化参数的关系将各实验组按孵化率高低分为孵化率 * * + 孵化率 * 孵化率 ** 个表有个实验组有个实验组有个实验组受精率孵化率与卵子干重水分蛋白及总脂含量变化对个方差分析显示各水平之间具有显著性差异 * 水平内具有方差齐性各实验组间组内受精率均波动不大差异不显著 + 不同的暗纹东方卵子内基本成分均无显著差异卵子干重也无显著性变化表不同间卵子内磷酸酶活力变化组卵子内, 活力明显高于组组间, 活力无显著差异, 活力在个间均有显著差异组, 活力最低次之组, 活力最高平均活力值达 "./ 为组, 活力倍表!"#$%&'

4 期赵艳飞等暗纹东方卵子磷酸酶等生化指标分析与卵质评估表暗纹东方胚胎受精率孵化率与卵子内基本成分变化,!4 #!$%'!-.((!.('!.!.()!.!+',*'(.('!)'-)) 0/%0) -- 0/%0) -- 0/%0) -- 组数 " 组 )5-.$- 5/%0-( 受精率 "* $-./4/)./ 孵化率 "* 0/%0)./ % 干重 " " 粒 1. ;-0/ 水分含量 "* (/.-%)/-)/ 蛋白含量 "*./-) %)/-)/ 脂肪含量 "* $/%)/-)/ 注不同字母表示差异显著 * 相同字母表示差异不显著 + 下同 /-(1$-.-)/-/-.()1%/-()$%)/1$-.-)%- * /0-(--/-.)1%/-() ()$%)/1$-.-)%- + /0-(- (5-; 表不同间卵内几种酶活及代谢物质的含量变化 #!$%#'..!)'-',,!.(0(.!+,.!$'(.(+(-.!.() 0 0/%0) -- 0/%0) -- 0/%0) --,""./ ,""./ %!""./ " " % "" 不同间卵子内代谢参数变化! 活力在各间有变化但均无显著性差异在个间呈现显著性变化具体表现为孵化率越高含量也越高在各间变化很小差异不显著表不同间卵子脂肪酸种类及比例变化 )& 和 )& 在个间均无显著性差异 + 和在不同间均表现出显著性差异 )& 在孵化率高的卵子组脂类中的比例明显偏高与低孵化率组呈现显著性差异 * 而其在的比例与均无显著性差异 )& 在间差异显著 * )& 在间也表现出显著差异 *!)& 在间没有显著变化 + 但在却表现出与显著的差异 *, 在中的含量均与水平存在显著性差异 * 之间差异却很小 + 表表不同间卵子脂肪酸组成变化 #!$%#'..!)'--!.!(+ (+(-.!.() 0 " 脂肪脂肪酸 0/%0) 0/%0) 0/%0) $/ % % % )& )& )& )& )& )& )&, )& )&! %, )& )& )&)& , !, %, 通过对以上脂肪酸统计发现其中饱和脂肪酸在脂类中的比例在不同全都呈!"#$%&'

5 水产学报卷现显著性差异 * 多不饱和脂肪酸, 总 )&, 在中的比例均较高无显著差异 + 然而其在中的比例却显著低于 * 单不饱和脂肪酸在中显著高于 * 之间并无显著性变化 + 总 )&, 在中的比例显著高于 * 之间无显著性差异 + )& )&,!, 和, 在不同间也都存在不同的显著性差异 * 不同实验组孵化率的波动与各组卵子生化参数变化的相关性分析研究发现组卵子内部磷酸酶脂肪酸等多种生化参数的变化有着一定的统计学意义为找出其与各自孵化率的波动是否存在一定的相关性本实验分别将组卵子的磷酸酶脂肪酸等生化参数建立回归模型发现, 活力含量与卵子孵化率呈正相关 ) * )* 表, 活力与孵化率呈负相关 )* 而对卵子氨基酸含量! 活力分析结果未显示出其与孵化率存在相关性对脂肪酸相对含量回归分析发现在脂类中的比例在不同组随孵化率升高而降低 )* 在高孵化率组较低孵化率组的比例低与孵化率呈反比关系 )*! 在脂类中的比例在范围内与孵化率成正比然而在之后孵化率未能继续上升 ) * 另统计显示多不饱和脂肪酸及 )& 脂肪酸或受! 影响表现出与! 相似的回归曲线! 与, 之比在之间并与孵化率表现出正相关 )*, 与之比在之间与孵化率表现出负相关 ) * 另外 )& )&, )& 也表现出与孵化率存在一定的相关性但相关性均较低 * ** )&)&)&)& 均未表现出与孵化率的相关性表各生化参数与孵化率相关性 #!$%#'!.(''-$(',(!*!!,.!+!.()!. 自变量 )1--)1-)/.5- 回归模型.-.-() 1- #, )((, )(( ) (( )( (( )( (( )& )( (( )& )( (( ) ((, )( (( )& ) ((! )( (( )( ((, )( (( )( (( )& )( ((!, )( ((, )(( 注 * + 表示该模型有意义越大模型吻合性越大 /-(* + )1%/-(/0//0-1-0(/0-()$%)%-/0-5-./0- /0-.-/-./0-()$%)%-$/0-1-!"#$%&'

6 期赵艳飞等暗纹东方卵子磷酸酶等生化指标分析与卵质评估 8 几种重要的可作为卵质评估依据的生化指标总结暗纹东方卵子内,, 和! 这种生化指标以及, 总 )&!,, 种脂肪酸统计参数均与各实验组的孵化率表现出较好相关性 + 且在, 活力范围不低于时卵子孵化率可达到 * 以上且随, 活力的升高而升高相关系数 ) 与之相反, 活力范围在时卵子孵化率也可保持在 * 以上但孵化率随着, 活力的升高呈现降低趋势相关系数 ) 含量在时孵化率呈现先升高后降低的趋势相关系数 ) 孵化率在 * 以上时脂肪酸中的含量一般在且呈现递减趋势表表几种重要的生化指标与孵化率的相关性 #!$%#'!.(''-',()(-(!.$(',(!*!!,.!+!.()!. 自变量 ( )1--)1-)/.5- 时 ( 取值范围 /0-1/.)-$(;0-) 随 ( 的变化趋势./) /.-)1 $) ;/0 /0-%0)-$(, ( 递增 )%.-(-..-(-, ( 递减 1-%.-(-..-(- ( 先递增后递减 $.(/)%.-(-)1 /0-) 1-%.-(-..-((- ( 递减 1-%.-(-..-(- ( 先递增后递减 $.(/)%.-(-)1 /0-) 1-%.-(-..-((-! ( 先递增后递减 $.(/)%.-(-)1 /0-) 1-%.-(-..-((-, ( 先递增后递减 $.(/)%.-(-)1 /0-) 1-%.-(-..-((- )& ( 先递增后递减 $.(/)%.-(-)1 /0-) 1-%.-(-..-((-!, ( 递增 )%.-(-..-(-, ( 递减 1-%.-(-..-(- 讨论在暗纹东方雌鱼性成熟阶段其肝脏大量合成蛋白质脂肪等营养物质并经血液循环运至卵巢为卵子的成熟和早期发育提供母源性营养和遗传物质磷酸酶通过参与上述营养物质在未成熟卵内积累的过程影响着暗纹东方卵子的成熟度而且因, 定位于溶酶体和内膜系统在酸性环境中其还可破坏表面带有磷酸酯的外源异物具有非特异性免疫的功能, 是一类膜结合糖蛋白通过细胞跨膜运输在蛋白质脂类等物质转运和代谢中有着重要作用贾玉东等对大菱鲆 &( 卵子磷酸酶活性研究发现大菱鲆成熟卵子内部, 活性明显强于前期卵子而, 在卵子营养物质积累过程中活力最高待营养物质积累完成成熟卵子内部活力明显下降这与, 和, 在卵子形成及早期发育过程中所起的生理功能相吻合本实验中暗纹东方高孵化率的卵子内部, 活性显著升高这表明成熟卵子内部高活力的, 可为其提供良好的免疫作用从而保证胚胎正常孵化, 活力随孵化率升高而降低则是因为暗纹东方是通过人工催产并腹部挤压法人工授精此时可能尚有部分卵子未达最佳成熟状态卵子内部营养物质转运尚未结束, 活力处于较高状态具体表现为低孵化率卵子内部具有较高, 活力这一结论与贾玉东等的研究结果一致一些学者在金头鲷 & 卵子的研究中得出含量在一定程度上可影响其胚胎孵化率并表现为对数型正相关本实验中暗纹东方受精卵孵化率随含量上升表现为先升高后略微下降趋势这个结果均表明含量的上升在一定程度上有助于卵内糖代谢过程或者有助于卵子正常吸水硬化的发生从而保证卵子入水后的正常孵化这与在卵子吸水及硬化过程中所扮演的生理功能相一致而! 及卵子基本成分并未表现出与孵化率具有显著相关性但这不能说明其含量的波动不影响胚胎的正常孵化鱼类的胚胎发育是极其复杂的生理生化系统运转的过程对卵子单一物质的研究并不能提供一个可信度高的功能性研究结果脂肪是鱼卵中最重要的储能物质可分为与, 鱼类卵子脂类中富含不饱和脂肪酸其中是 )&, 的一种为!"#$%&'

7 水产学报卷前列腺素和白三烯生理活性物质的前体而这种物质在胚胎发育孵化及幼体生长中起着重要的调节作用, 和! 是 )&, 的种活性形式均是细胞膜磷脂的重要组成物质对细胞膜系统转运物质有重要影响研究显示卵子中! 与, 之比的波动可对胚胎发育产生影响此外因 )& 与 )& 脂肪酸代谢过程所需酶相同二者代谢过程将不可避免发生竞争并产生不同的类二十烷酸因此 )& 与 )& 脂肪酸比例直接关系到不同类二十烷酸的比例而所产类二十烷酸具有促炎作用, 所产类二十烷酸具有抗炎作用胚胎中两者比例的不同将直接关系到胚胎抗感染能力的强弱及等饱和脂肪酸在大菱鲆金头鲷等鱼类胚胎发育中作为重要能源首先被利用更长链的不饱和脂肪酸作为能源的利用率很低在本实验中发现暗纹东方卵子内与孵化率呈现显著负相关! 与孵化率呈显著正相关显然这与! 生理特性有关含量的增加导致促炎性类二十烷酸含量的增加进而使胚胎更易感染病菌增加死亡率! 与作用正相反可降低胚胎的病菌感染率从而提高孵化成功率! 与, 之比和孵化率表现出的正相关, 与之比和孵化率表现出的负相关亦表明脂肪酸组成及比例对卵子胚胎发育有着重要的影响 )& )&,)& 和也表现出与孵化率存在一定的相关性对大菱鲆研究显示其卵子内 )& )& 与 )& 在产卵中期含量最高此时卵子的孵化率也最高与本实验结果一致另外在其他鱼类卵子研究中也同样发现脂肪酸种类及比例与孵化率的显著相关性这表明脂肪酸组成在鱼类卵子质量评价中具有一定的参考价值暗纹东方人工繁育中卵子的孵化率波动很大从外观上看质量极差的卵子常出现结块现象其孵化率在 * 以下但生产经验表明孵化率在 ** 以上的卵子与质量差的卵子外观并无显著差异经验不足的育苗人员常常难以判断其潜在发育价值这给暗纹东方育苗行业规范化及卵子质量标准化带来一定难度本实验结果表明,, 及脂肪酸中的和! 这几种生化参数与孵化率存在重要相关性并在一定程度上可作为判定暗纹东方卵子孵化率高低的生化指标且在暗纹东方苗种人工繁育中, 活力值在, 活力值在含量在含量在含量在! 含量在时卵子才具有一定的繁育价值即孵化率在 * 以上据此可对暗纹东方卵质进行初步的客观评价为暗纹东方育苗行业健康发展提供了一定的参考资料以上物质对卵子孵化率有显著影响但各物质之间有无关联性本实验中其他未能体现出与孵化率相关性的生化参数是否隐藏着现有统计手段未察觉到的关联性现在尚不得而知且不同鱼类在各自卵子成熟过程中易受环境波动而影响卵子发育能力的脆弱性指标尚不清晰未来还需深入研究参考文献 0) 7 7)1( /) $- 6/.-/-.((.-1%/.($0/%0) (%%-(()1 -..(.) 03 (* 6%/.- 0.(-).- 5-./7-.-)/ -/01(/ )/./0-.1%/) )1 6/ $ -($%/-.)-$(0.)$./0;-(/ /)/%(0-. %-)%- -:) 8+/ -/) $ 5.1(/%3 -/-( )1.- ) /.5/ & (.)- %-)%- 马爱军雷霁霖王新安等大菱鲆亲鱼配子和仔稚鱼的质量评价海洋科学 )(. 0)(/-)-. %-) -/)(0 5-/;--) $-.// )1 $/ %1.$-$ (-. )1 -().%/%%0. & 6%/.- 7 -) 9 8 '%0-% %(/) )1 6/ $ /.5/ & ( -(/0.0//0-.-.1%/-(-() (0,0( )1 '%0-(/. 0)(/-) /- -/5( $ /--)%$ %-()1 -($&+ -.)1- )1 $ )1 $!"#$%&'

8 期赵艳飞等暗纹东方卵子磷酸酶等生化指标分析与卵质评估 -5.( $&.1- (0,0( )1 '%0-(/. '5-55< )1 (-. 6/ ) $(0 2-)-.)1./-)1%.) :),) 8 ) 80)-() %//-( $ %1 0(0/(- )1 3)- 0(0/(- 1.) -5.)% 1---)/ $ 1$(0 (0-.-(%-)%- 王书平孔祥会江红霞等金鱼胚胎发育过程中磷酸酶活性的变化水产科学 '. /, 2.)-5-.,./-) 0(0/(-()1 /0-.-/) $/((.)$ -%-)%- 0-) 2 -(-.%0..-(($(%%1 )1 /(5%()$%)%-) /0--.1(-(-( 5./. -1%)- 程铖高春芳唾液酸的生物学意义及其在肝病中的研究进展检验医学 )(. 0)(/-)-.,/4)-.,0(%)1 5%0-%) -(//)() - (/%3)-(() %) %. )-.1%/) %-)%- 1-.1%-! (/% )1 )%.-/) ) /--(/-()1.- (0,0( '-2.-)/.%01)% %1 ) 6%/.- $--1( %.-)/ (//( )1 $/.-./)/-( 6%/.- %0-.! / % )/() )/-) $.)- )1 $.-(0;/-. $(0 6%/.- -(-.%0 ((%/) $ $% )/% 0-(/( $%-/01($)(($$% )/%0-(/( )/-.)/) /0-1.)/) ((%/) $ $% )/% 0-(/( %0 --()-2 (--/01 $. /0-(/) )1.$%/) $//1($. ) /((-( 0-.) $ '% 0-(/. 7! -) 9 8 %//-( $ 0(0/(- ) -( )1.) $1( )1 /( %.-/) ;/0 /0- $-./4/)./- 1.) /0-.-.1%/-%%-$/.5/ &( %-) -/) )% 贾玉东孟振刘新富等大菱鲆 &( 繁殖期卵子和卵巢液中磷酸酶活性变化及其与受精率相关性海洋与湖沼 ) 8:) ) -()(-($%1 " 3)-0(0/(-(4-)1 %/(-%//-( ) /) / -.%. -(.-1.) /0- -5.)% 1---)/ $ 1$(0 6/%% 9 :) + 7-(-.%0..-(($ )-.-/-1 -)4-() (%.)- (0-.-(-(-.%0 刘志鸿牟海津王清印软体动物免疫相关酶研究进展海洋水产研究,-)) ',3-. 3)- 0(0/(-() -1 ) /0-%)/.$1-)-(( ) /0-.)-.-1%/-%-)- )%0%%/ 0)(/-)-.,/.)-, 6/ 1-/-.)/) ) /0- /0-1 (-5.- & ;/0 5%0-%.-/-.( 6%/.-./)3 7/ $-%/($ 00 --($ ) 5.1(/%3 1-/) - 6/ )1 - $/ %1 %(/) $)-(- $)1-. 6%/ ( :,-1-.(-)!-/-%/) $-& )() 0) ()1.-()(-/ /.-/-)/;/0 -& %1 -/0-(/-.(.)$1 -(-.%0 0-. '-.-. -& $/ %1() %/- /-)/( )% /./) --)/( 8 :) 7 :)! 0-(/1 $ $/ %1 %)-)/() )/(/-$,*. %-) -/ ))% 徐善良王亚军王丹丽等条石鲷,*. 发育早期的脂肪酸组成变化研究海洋与湖沼 7 -) 9 8 '%0-% %(/) )1 6/ $/.5/ & ( -(/0.0//0-.-.1%/-(-()!"#$%&'

9 水产学报卷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

人工催产干法授精孵化胚胎发育观察

人工催产干法授精孵化胚胎发育观察金万昆俞丽杨建新张慈军高永平赵宜双王春英人工催产干法授精孵化胚胎发育观察胚盘隆起细胞期细胞期细胞期细胞期细胞期多细胞期囊胚早期囊胚中期囊胚晚期原肠早期原肠中期原肠晚期神经胚期胚孔封闭期眼泡出现期尾芽期晶体出现期肌肉效应期心脏搏动期孵出期日龄仔鱼日龄仔鱼日龄仔鱼日龄仔鱼感谢中国水产科学院黑龙江水产研究所沈俊宝研究员的悉心指导