核化学与放射化学 第 卷 %<'<"% % "" ==,(",." "' 9$+(""5"% *+.%"!%9$+ =%!%!!%,%'% 胆汁酸是胆汁的主要成分 是在肝细胞内由胆固醇转化而来的 能够促进脂肪和脂溶性维生素的 乳化和吸收 胆汁酸更是一类重要的信号分子 既能激活各种核受体 如 法尼酯

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1 第 卷第 期核 化 学 与 放 射 化 学 年 月!"$%!"'% 一种靶向 2 的胆汁酸类化合物的, 标记与初步评价 贾丽娜 江大卫 程登峰 张 岚 中国科学院上海应用物理研究所放射化学与工程技术部 上海 中国科学院大学 北京 ) 复旦大学附属中山医院 上海 摘要 9( 蛋白偶联受体 9$+ 是一类位于细胞膜上的胆汁酸受体 与体内的糖代谢 能量代谢和胰高血糖素样多肽 ( 的分泌密切相关 相对于正常组织 9$+ 在多种肿瘤组织中过量表达 并与患者的预后相关 是肿瘤诊断 治疗和预后评估的一个潜在靶点 因此 利用点击化学的方法简单高效的制备了一种靶向 9$+ 的 =(, 探针 ==,( 比活度 大于 1' 和放射化学纯度 大于 ))@ ==,( 具有其母体化合物 相似的亲脂性 并具有良好的体外稳定性 本工作为进一步研究 ==,( 作为 9$+ 过量表达的肿瘤的, 探针奠定了良好的基础 关键词 胆汁酸 9$+ = 石胆酸, 显像中图分类号 $* 文献标志码 文章编号 +())+(*( *+56* "!'!%!$%!, )%%(!2 %( 9 ("%,9 "(" 9 "'" $%!"'%,%""%8%%" %"%!%""!"' 8!%"!" 8%%:%"% %""!"' 8!%"!"1"%-%% %=:%"%8%% ()9"%(!""!" 9$+%!"(!".%"!%"!"%!%!"""!"'".%'"""5"%"""!"%!(%<" "%"(9$+%"%" %%"'"%"% "'""5"%%""% ''!'""5"( %""%'%"%!%"%"% "%"""" " =(,." ==,( ""%"%'" %!%"!!%!<!"'%( '" % % %!"'%! %!"'%! % ))@ %"!%%!!%% 1' ==,( %'% %%%!%"".%"!%%!%!!%% '".%!.%%$( 收稿日期 ((* 修订日期 (( 基金项目 国家自然科学基金资助项目 *+ 作者简介 贾丽娜 )+ 女 河北唐山人 博士研究生 主要从事放射性药物研究 通信联系人 张 岚 )* 男 安徽淮南人 博士 研究员 主要从事放射性药物研究,('%%!!

2 核化学与放射化学 第 卷 %<'<"% % "" ==,(",." "' 9$+(""5"% *+.%"!%9$+ =%!%!!%,%'% 胆汁酸是胆汁的主要成分 是在肝细胞内由胆固醇转化而来的 能够促进脂肪和脂溶性维生素的 乳化和吸收 胆汁酸更是一类重要的信号分子 既能激活各种核受体 如 法尼酯 6 受体 又能激活细胞膜受体 9( 蛋白偶联受体 9$+ 9$+ 又称 19* 或 (1$ 它与体内的糖代谢 能量代 ( 谢和胰高血糖素样多肽 ( 的分泌密切相关 人体中 9$+ 在单核细胞 巨噬细胞 肠等高表达 在肺 脾 肾 子宫等中度表达 其他组织中弱表达 +( 或不表达 9$+ 通过多条信号通路调节细胞内的生理活性 它可以通过激活? 通路调节胆 * 汁酸诱导的肝细胞凋亡 9$+ 在单核细胞和巨噬细胞中高表达 可通过提升! 浓度阻断促 炎因子的分泌 从而起到抗炎效果 在人胃癌细胞系 98 中 可由 9$+ 通过 1(,9= 机制发生 ) 对,9=$ 的反式激活 研究发现 9$+ 在正常胃上皮细胞弱表达 而在胃癌细胞和胃癌肠转移细胞中高表达 9$+ 的表达情况与胃腺癌病人的生 存率负相关 在胆管细胞癌 食管癌和结 直肠癌中的研究也发现 9$+ 相对于正常细胞会过量表达 因此 9$+ 是一个非常有潜力的核医学肿瘤诊断和预后评估靶点 胆汁酸是 9$+ 的天然内源性配体 多种胆汁酸可以激活 9$+ 激活能力的顺序为 非结合型胆汁酸 石胆酸 脱氧胆酸 鹅去氧胆酸 胆酸 其中 是最有效的非结合型胆汁酸 半最大效应浓度, + 为 +' 是 9$+ 生理水平的胆汁酸类配体 研究发现 在胆汁酸甾核的 ( 和 ( 位进行结构修饰后 胆汁酸依然保持了对 + 其受体的识别能力 目前 对于 9$+ 为靶点的显像剂的报道很少见并极具潜力 因此 本工作拟通过点击化学的方法对 进行 = 标记 并对其体外稳定性进行评价 以期获得一种能够对胃癌 胆管癌和结直肠癌等肿瘤靶向性诊断和预后评估的新型, 显像探针, 实验部分,-, 试剂与仪器 石胆酸 炔丙基胺和 ( 羟基苯并三唑 1 纯度均大于 )@ 上海泰坦化学有限公司 (( 二甲氨基丙基 (( 乙基碳二亚胺盐酸盐, 纯度大于 )@( 抗坏血酸钠 %' (!." 纯度大于 ))@ 超干乙腈!8"( 二甲氨基吡啶 纯度大于 ))@ 比利时! 公司 叠氮化钠 纯度大于 )+@ 上海景颜化工科技有限公司 * ( 六氧 (( 二氮双环 二十六烷? 法国 16 公司 ( 辛醇 梯希爱 上海 化成工业发展有限公司 == > 上海原子科兴药业有限公司 三乙胺, 二氯甲烷 五水硫酸铜 8 + ( 二甲基甲酰胺 = 等 国药集团上海化学试剂有限公司 超导核磁共振波谱仪 瑞士 1<" 公司 +( 型恒温磁力搅拌器 上海闵行江浦仪器厂 $,(+( 旋转蒸发仪 上海沪西分析仪器厂 =(,8(8 质谱仪 日本岛津公司 高效液相色谱仪 美国安捷伦公司 8:( 箱式紫外分析仪 上海科学器材公司 分离分析条件 流动相 水相 体积分数 下同 三氟乙酸 1 乙腈 三氟乙酸 紫外检测波长为 +' 半制备柱 %" 61 ) '' D '' +' 流速 ''% 分析梯度 +'%@+@)+@)+@@ 1,- 标记前体 的合成 标记前体 的合成路线示于图 搅拌下 于石胆酸 **''' 的 ' 溶液中依次加入,''' 1''' 三乙胺 '' 搅拌 '% 后加入炔丙基胺 +'' 上述反应液在室温搅拌反应 反应液依次用 ' 水 ' 饱和碳酸氢钠溶液 ' 稀盐酸各洗 次 再用饱和氯化钠溶液洗 次 每次 ' 有机层无水硫酸钠干燥后 柱层析纯化 固定相 层析硅胶 *+' 展开剂 石油醚 乙酸乙酯 得白色固体 *+' 收率为 *@ 纯度大于 ))@,- 参比化合物, (( 的合成 参比化合物 ) ==,( 的合成示于图

3 第 期 贾丽娜等 一种靶向 9$+ 的胆汁酸类化合物的 = 标记与初步评价 ) 图 标记前体的合成路线 =%8"% "."%"! 图 参比化合物 ) ==,( 的合成路线 =%8"% """"!"!' ) ==,(,--, 对甲苯磺酸氟乙酯 + 冰浴下 将对甲苯磺酰氯 *+ *+ '' 溶于 ' 中 然后依次加入三乙胺 *'+ '' 和 '' 充分溶解后缓慢向上述溶液中滴加 ( 氟乙醇 的 ' 溶液 滴加完毕后反应体系在室温下搅拌反应 反应液过滤 有机相浓缩后柱层析分离 固定相 层析硅胶 *+' 流动相 乙酸乙酯 石油醚梯度洗脱 后得到无色油状物 + 收率为 +@,--( 氟叠氮乙烷 ) ==, 向化合物对甲苯磺酸氟乙酯 +)+ '' 的 ' 无水 = 溶液中 加入叠氮化钠 +'' 反应混合物在室温下搅拌反应 监测 石油醚 3,B3+ 无对甲苯磺酸氟乙酯时 过滤除去固体后得到 ) ==, 的 = 溶液 产物未进一步纯化 直接用于后面的反应,-- 参比化合物 ) ==,( 的点击合成 磁力搅拌下 向 +'B 磷酸盐缓冲液中先后加入 硫酸铜溶液 +' 和 抗坏血酸钠溶液 +' 混匀后加入化合物 '' 的 = 溶液 ' '% 后加入 ) ==, 的 = 溶液 ' +++A 搅拌反应 冷却至室温 反应液加 ' 水稀释 产物用氯仿萃取 次 每次 +' 合并有机层 用饱和氯化钠溶液 +' 洗有机层 减压浓缩后得到产物为白色固体 无需纯化 B ' 收率为 +@ 纯度大于 ))@,-1, (( 的点击化学合成 ==,( 的合成路线示于图,-1-,( = 氟叠氮乙烷 ==, ==, 的合成根据文献 的步骤 有少量修改 氮气保护下 向含有活化后的 == > *)+1 图 ==,( 的合成路线 =%8"% ==,(

4 + 核化学与放射化学 第 卷 反应瓶中迅速加入对甲苯磺酸叠氮乙酯 +' 的无水乙腈溶液 )+A 下密闭反应 +'% 检测标记率 将该反应液在 +A 用氮气流辅助蒸馏 '% 冰水浴冷却下收集蒸馏液 得到 ==, 的乙腈溶液约,-1- ==,( 的点击化学合成 向 B 磷酸盐缓冲液中依次加入 硫酸铜溶液 +' 和 抗坏血酸钠溶液 +' 混匀后加入标记前体 ' )*' 的 = 溶液 涡旋混合 '% 后 加入蒸馏冷凝得到的 ( = 氟叠氮乙烷 ==, 的乙腈溶液 + 1 振荡器 +A 反应 +'% 标记产物用 检测并分离 收集产物峰 $ $ B+'% 减压浓缩除掉溶剂 乙醇的 18B* 溶解 无菌滤膜过滤后得到 ==,( 的制剂,- 脂水分配系数取 ==,( 的制剂于 ' 离心管中 含有 正辛醇和 +)18 密封好 在室温下充分涡旋 '% 后 高速离心 '%'% 至两相平衡 用移液器从有机相和水相各取样 分置于两只 计数管中 用 计数器测定计数 重复取样测定三次 平行进行两批次实验 根据下面公式计算得到平均 * 值 *B 其中 每毫升辛醇的放射性计数率 '% > ' > 每毫升缓冲溶液 18 的放射性计数率 '% > ' >,- 体外稳定性取 ==,( 的制剂 约 *1+ 分别置于新生牛血清 ' 和 18' 中 置于 *A 下 振荡孵育 '% 后 用 测定其放射化学纯度 以观察其体外稳定性 结果与讨论 -, 标记前体 的合成表征文献报道胆汁酸类化合物在甾核的 ( 和 ( 进行结构修饰后 依然能被其特异性受体识别 据此 通过一步反应设计制备了标记前体 即在 的 ( 上引入了端炔基 从而可以利用点击化学反应 催化的叠氮化物与端炔的 偶极环加成反应 来实现石胆酸的 = 标记 标记前体的结构经质谱 核磁氢谱和 碳谱表征确认 =(,8(8 * B, *2 2 )2 2 $ ) *))++* *) *++)++*+*)*)) * $ +. + (B + (B' )') ) 标记前体 可获得较高的收率 *@ 和纯度 大于 ))@ 满足后面 = 标记的应用 - 参比化合物的合成, (( 参比化合物的合成参照文献 略有修改 ) ==,( 通过三步反应制备 点击反应可在室温进行 但需要反应过夜 反应时间较长 通过加热到 +A 进行此步反应 可极大加快反应速率 且 监测反应无副产物生成 最终产物无需纯化 即可获得较高纯度 纯度大于 ))@ 三步反应的收率均较高 参比化合物 ) ==,( 用于标记时所用的 分离分析方法的建立和标记产物的确定 反应产物经质谱 氢谱 碳谱表征确认 对甲苯磺酸氟乙酯 +=(,8(8 ) = 8B +, 2 2 * $ *+ **)*B***+ B**' =+*'= )*'8 * '8 ++ ) ==,(=(,8(8 ) *= B +*, $ *+.+=B *=B B B + B+ ' +')' )'))') ) ) $ *)++*+ *+++)*+**

5 第 期!!!!!!! 贾丽娜等"一种靶向 JW6C 的胆汁酸类化合物的a 标记与初步评价 )C+ * '+B)!C ',C)!C ',)!C '!C)! ',))! 'C,)!! '))!+ '"))!* 'CC) ), ')C) )B '+A) )" '+) ) ')+) )! '!,) 反应极为有利* )* ',)) '!B) +) '*!* DY EG! Z$ Z-@!O%@ 的点击化学合成 L. \$催化下通过点击化 学反应 制备反 应 只 需 要 +C9 标 记 率 大 于 A"d * 该 法 不 需 要 保 护 基 ' 通 过化 合 物! 与' ad= 在 由 于a 具 有 优 良 的 核 性 质 和 化 学 性 质 其 避免 了 羟 基 的 保 护 和 脱 保 护 反 应* 并 且 由 于 半 衰 期 为 +*A ',9 能 满 足 多 步 化 学 反 应 的 需 要 并 能 监 测 较 慢 的 生 化 过 程!具 有 较 低 的 正 电 L.==L 反 应 具 有 极 高 的 化 学 选 择 性 和 优 越 的 区 域 选 择 性 反 应 中 没 有 明 显 的 放 射 性 副 产 物 子能 "A`$$易 于 获 得 高 分 辨 率 的 图 像 并 生 成 *' ad=@ol= 通 过 与 参 比 化 合 物 产 物 且 临 床 使 用 更 加 安 全 因 此 选 择a 对 OL= 进 行了标记合成* +A ' ad=@ol= 共 同 [KOL 进 样 分 析 确 认 图 $*通过半 制 备 [KOL 纯 化放 射 化 学 产 率 L 3` 合成 子 ' ad= 通 过 对 甲 苯 磺 酸 叠 b 氮乙酯 "$与 a 亲核取代反应制备并采用氮气 为 A*d "ACd 1f!从 ' ad= 计衰 变 校 正$两步反应放射化学产率为 ""d"bd 1f! 辅助蒸馏纯化*通过优化蒸馏温度由 ACe 降低 从ab 计衰变校正$*' ad=@ol= 的放射化 为,C e $可 以 减 少 叠 氮 前 体 " 的 蒸 出从 而 提 高 学纯度AAd $和 比 活 度!**KI^+9% $均 较 高*' ad=@ol= 总 合 成 时 间 为 B*",C 9 了合成子' ad= 的 比 活 度该 步 放 射 化 学 产 率为 ",d"bcd 1fC衰变校 正含 蒸 馏 步$比 活度大于 +C*KI^+9% *' ad= 合 成简单放 射化学产率和比活度高纯化方法简单快速纯化 后可获得 高 比 活 度 的 产 品对 于 下 一 步 的 L 3` 含 [KOL 纯化时间$*通 过点击 化学 对 OL= 进 行a标记的方法高效可靠适合于大规模生产* EI! 脂水分配系数 ' ad=@ol= 的 脂 水 分 配 系 数 >B' f 1$%%%紫外谱图 X$ 1 3 $ 1 3 $ +A 图! ' ad=@ol= 与参比化合物' ad=@ol= 一起进样的 [KOL 谱图 +A a![kol38 %91 %> 19:% 2' ad=@ol= _ 83 3 %% %9H%.5 ' ad=@ol= >? E 新生牛血清中 \ (ILV$" 1$%%%!*9 F$%%%"*9 3$%%%*9! KIV中 \ KIV$" 5$%%%!*9 $%%%"*9 2$%%%*9 图 C! ' ad=@ol= 在新生牛血清和 KIV 中的稳定性分析 a C!V 1F : :% 2' ad=@ol= :.915KIV >? <11 <

6 + 核化学与放射化学 第 卷 *E+B 保持了胆汁酸类化合物的亲脂性 因此 ==,( 具有其母体化合物 相似的性质 - 体外稳定性 *A 下 ==,( 在新生牛血清和 18 中分别孵育 '% 其 图示于图 + 由图 + 可知 均未发现脱氟或放射性降解产物 表明 ==,( 具有良好的体外稳定性 这对于显像剂进一步的体内评价奠定了基础 结 论通过合成含端炔基的标记前体 并采用点击化学的方法制备得到了一种潜在的靶向 9$+ 的, 分子显像探针 ==,( 其制备简单快速 具有较高的放射化学产率 比活度和放射化学纯度 ==,( 具有其母体化合物 相似的亲脂性 并具有良好的体外稳定性 无明显的脱氟或降解现象 为该, 探针进行进一步的体内评价奠定了良好的基础 参考文献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郑鹏 胆汁酸受体 9$+ 和 =6$ 在结直肠癌中的表达及临床意义 兰州 兰州大学 %%%%9$+"'"%.%"!%9( "%(!" "!" " " "% "'" '".%!%" %! ))(+(+ +"%!!%%$9%%" % 9"1!< '% " "% 6"!""% "%.%%!"% "%" %"!%'%%"!""5!%!!%"%%" ""')(+ %"8%"=%"(."%.!%!<!"'%'%"."% " $%*+(*

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