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梓何
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1 第卷第期年月西安交通大学学报医学版!" #$# # %&'& & 基础研究一氧化氮对自发性高血压大鼠外周血淋巴细胞亚群的影响申土旺单莉娅于秀石彭珉倪欣李丽司军强李新芝马克涛石河子大学医学院新疆地方与民族高发病教育部重点实验室生理学教研室病理生理学教研室新疆石河子摘要目的探讨一氧化氮 "# 对调节外周血 $ 淋巴细胞亚群的比值和促炎因子的影响及其对高血压造成的靶器官损伤的作用方法选取周龄 %&' 和大鼠随机分为组 %&' 组和 %&' "# 干预组每组只 %&' "# 干预组按 ( 腹腔注射硝普钠 "# 供体 ) 周组和 %&' 组用等量生理盐水腹腔注射 ) 周测量尾动脉血压后采用 &* 染色法观察脑基底动脉和肾脏病理学改变流式细胞术检测外周血 +,) +, 和 +,) +,- $ 细胞比值 *./%0 检测外周血血清肿瘤坏死因子 1$" 1 水平结果与组比较 %&' 组大鼠出现脑基底动脉内皮细胞受损血管壁增厚肾小球萎缩和炎性细胞浸润 %&' "# 干预组较 %&' 组大鼠炎性损伤程度减轻与组比较 %&' 组大鼠外周血 +,) +, 的比值升高 +,) +,- 的比值下降 %&' "# 干预组较 %&' 组 +,) +, 的比值降低 +,) +,- 的比值升高 - %&' 组大鼠血清中 $" 1 表达较组升高 %&' "# 干预组较 %&' 组 $" 1 表达降低 - 结论 "# 通过调节外周血 $ 淋巴细胞亚群的比值减少促炎因子的释放进而改善高血压造成的靶器官损伤关键词自发性高血压大鼠 $ 淋巴细胞一氧化氮 "# 肿瘤坏死因子 1$" 1 中图分类号 ' 文献标志码 0 -!"# $#$% " & %! $#'$% %&*" $ 1! %&0" *"5 6! "/2!./. %/7!18!./2! :.:; :; : 2!! *!!*!, 3 33, ;!: 4 3 : :, ;!: 4 : 3 : :%:: : 6!: % 9!;3% 9 +! ' # ##" ( " )# ""# )) # * & + *$,-"./0") " ""./0 $,- "$,- ' # &-$,- '(# " " ) "##" * ") *./0 "$,- (# " 1)) *&) " " ## ", ) ") - # " # " # ) "' + " # " 23$ & ) " ' + $,- #./0 &) - $,- #./0 收稿日期 +)+ 修回日期 + +) 基金项目国家自然科学基金资助项目 '& 石河子大学国际合作项目 '&4,5 石河子大学应用基础研究青年项目 '&-5-/06+2,-5-/06+2, 兵团中青年科技创新领军人才计划 '& 7 $ " '' $# # " '& 3 8(# $ 9 '&4,5 7 #-# #$ 9 08(# '&-5-/06+2, -5-/06+2,"0 "! ""+ "$##" # #3 2"8 ) '& 7 通信作者李新芝 & +)9 9&"&# 马克涛 & +) )* ) &#) 优先出版 *&#* & *#)" &&-& )& &&) ++)!

2 期申土旺单莉娅于秀石等一氧化氮对自发性高血压大鼠外周血 $ 淋巴细胞亚群的影响 && ) " ' + $,- ' # $,- ) - # $,- &-& ' # ) ") #" " )# ""#)) # & ( ) )# '' + 高血压是最常见的心血管疾病之一其发病机制复杂受遗传和环境等多种因素的共同影响近来研究表明高血压是一种慢性低级别炎症反应炎症因子可促进高血压的发生发展且免疫系统失调 ) 与高血压发病关系密切其中 $ 淋巴细胞作为主要的免疫细胞在高血压的发生发展中发挥重要作用特别是效应 $ 细胞和调节性 $ 淋巴细胞之间的 -1 平衡对血压升高和相关器官的损害至关重要在自发性高血压大鼠 3:!!: 3!31 ; 3%&' 中一氧化氮! ; :"# 合成和释放减少而 "# 不仅具有重要的免疫调节功能且在调节炎症方面也发挥重要作用目前 "# 供体药如硝普钠已广泛应用于临床高血压的治疗但其具体机制目前尚不清晰本实验用 &* 染色观察大鼠脑基底动脉和肾脏病理学改变流式细胞术检测大鼠外周血 +,) +, 和 +,) +,- $ 细胞比值 *./%0 技术检测大鼠外周血血清肿瘤坏死因子 $" 1 的表达探讨 "# 是否通过调节外周血 $ 淋巴细胞亚群的比值和减少促炎因子的释放进而改善高血压造成的靶器官损伤为 "# 供体药治疗高血压提供新的实验依据 * 材料与方法 * * 主要试剂硝普钠购自美国 % 公司 /$+! 1; +,04+! 1; +,)4*! 1; +, 和 4*! 1; +,- 均购自美国 :! 公司大鼠淋巴细胞分离液购自北京索莱宝科技有限公司大鼠 $" 1 *./%0 试剂盒购自杭州联科生物技术有限公司 * + 实验动物选取周龄的 %&' 和大鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司动物合格证号 %+2 京 1 随机分为组每组只 %&' "# 干预组按 ( 腹腔注射硝普钠 ) 周组和 %&' 组等量生理盐水腹腔注射 ) 周 *, 大鼠尾动脉血压测量使用 41 无创血压测量仪测量大鼠尾动脉血压使用前先预热 -! 待大鼠安静后重复测量次取其平均值 * - 流式细胞仪检测外周血 $ 淋巴细胞亚群大鼠麻醉后采集腹主动脉血液. 离心去上清加入等体积 4 % 溶液稀释混匀轻铺于等量淋巴细胞分离液上离心抽取中间白膜层部分离心弃上清 4 % 溶液重悬制备淋巴细胞悬液取淋巴细胞悬液于测定管中设空白管和同型对照管按照说明书加入 +, +,) +, +,- 荧光抗体充分混匀后室温避光孵育!4 % 溶液重悬上机使用 +*..3 软件进行检测 *./0 技术检测大鼠外周血血清 1 的表达取腹主动脉血液 ;! 离心 -! 取上层血清采用 *./%0 试剂盒检测 $" 1 的表达水平所有操作按照说明书进行 *. 染色观察大鼠脑基底动脉和肾脏病理学改变大鼠麻醉后断头处死取其脑和肾组织.. 中性甲醛溶液固定 ) 后制作石蜡切片厚度 ) 进行 &* 染色并用光学显微镜观察其病理学改变 *. 统计学分析采用 %4%% 软件进行统计学分析计量资料以均数 < 标准差表示多组间比较采用单因素方差分析 #!1 0"#=0 两两比较采用.%,1 检验 - 表示差异有统计学意义 + 结果 + * 各组大鼠的尾动脉血压与组尾动脉血压 <& & > (4 相比 %&' 组 ) <) & 显著升高 %&' "# 干预组 - < -& 较 %&' 组明显降低差异均有统计学意义图图 * 各组大鼠的尾动脉血压 $; ;; ::;33 ;: ; ;: 3 与组比较与 %&' 组比较 >!

3 西安交通大学学报医学版第卷 +.+ 各组大鼠外周血 - 和细胞表达频率及 - 比值流式细胞仪检测结果显示组 +,) 和 +, 表达比率分别为 - < -)? 和 ) <?%&' 组分别为 <? 和 <?%&' "# 干预组分别为 < )? 和 <?%&' 组较组均升高差异具有统计学意义 %&' "# 干预组较 %&' 组均降低差异有统计学意义 %&' 组 +,) +, 比值为 - < - 较组的 )< 升高差异有统计学意义 %&' "# 干预组为 < ) 较 %&' 组降低差异具有统计学意义图图 + 各组大鼠外周血 - 细胞的表达比率 $ ;33 :!;:: +,) +, $ 3!; ;::: ; ;: 3 0 外周血 +,) +, 和 +,) +, 的表达外周血 +,) +, 和 +,) +, 表达的统计学分析与组比较与 %&' 组比较 > +., 各组大鼠外周血 - +/ 细胞的表达频率流式细胞术检测结果显示 %&' 组 +,) +,- 表达 - <? 低于组 <? 差异有统计学意义 %&' "# 干预组为 )-<? 高于 %&' 组差异有统计学意义 - 图 +.- 各组大鼠外周血血清 1 的表达 *./%0 检测结果显示 %&' 组外周血血清 $" 1 表达 )) < )? 较组 < -? 升高差异有统计学意义 %&' "# 干预组 <? 较 %&' 组下降差异有统计学意义 - 图 )!

期申土旺单莉娅于秀石等一氧化氮对自发性高血压大鼠外周血 $ 淋巴细胞亚群的影响图, 各组大鼠外周血 - +/

且都有明显的炎性细胞浸润 %&' "# 干预组脑基底动脉内皮受损程度血管壁增厚程度肾小球萎缩程度和炎性细胞浸润程度均较

3; : ; ; ::: ; ;: 3 与组比较与 %&' 组比较 -> 高血压发病机制复杂是最常见的慢性疾病之一

大鼠脑基底动脉血管壁增厚内皮受损肾小球萎缩炎性细胞浸润图 / 各组大鼠脑基底动脉和肾脏的染色 - &:!!:3!

: ; ;: 3@ 0 脑基底动脉肾组织标尺箭头图 0 箭头所示为炎性细胞图箭头所示为肾小球明显这和孙莉等

4 期申土旺单莉娅于秀石等一氧化氮对自发性高血压大鼠外周血 $ 淋巴细胞亚群的影响图, 各组大鼠外周血 - +/ 细胞的表达比率 $ ;33 :!;:: +,) +,- $ 3!; ;::: ; ;: 3 与组比较与 %&' 组比较 -> +./ 各组大鼠脑基底动脉和肾脏病理学改变 &* 染色结果显示 %&' 组较组脑基底动脉内皮细胞受损血管壁增厚肾小球萎缩且都有明显的炎性细胞浸润 %&' "# 干预组脑基底动脉内皮受损程度血管壁增厚程度肾小球萎缩程度和炎性细胞浸润程度均较 %&' 组减轻图 -, 讨论图 - 各组大鼠外周血血清 1 的表达 ) $ ;33 :!: $" 1!3; : ; ; ::: ; ;: 3 与组比较与 %&' 组比较 -> 高血压发病机制复杂是最常见的慢性疾病之一影响着约全球三分之一的成年人研究表明高血压是一种以 $ 淋巴细胞浸润血管和肾脏为特征的低度炎症性疾病本实验 %&' 大鼠脑基底动脉血管壁增厚内皮受损肾小球萎缩炎性细胞浸润图 / 各组大鼠脑基底动脉和肾脏的染色 - &:!!:3!3!! : ;;!3 ; ;;!(! : ; ;: 3@ 0 脑基底动脉肾组织标尺箭头图 0 箭头所示为炎性细胞图箭头所示为肾小球明显这和孙莉等研究结果一致经 "# 干预后 %&' 脑基底动脉内皮受损程度血管壁增厚程度和肾脏炎性损伤程度均减轻这与徐莉等的研究结果相似表明 "# 可减轻高血压造成的靶器官炎性损伤 $ 淋巴细胞是一种重要的免疫细胞在高血压动物模型中血管和靶器官都显示有免疫细胞的浸 ) 润 +,) $ 细胞和 +, $ 细胞作为 $ 淋巴细胞的主要亚群在调节机体免疫反应和炎症等方面起!

5 西安交通大学学报医学版第卷 - 重要作用 +,) $ 细胞可分为 $$$ 和 $; 等亚群其中 $ 和 $ 型细胞可促进高血压的发生和发展而 $; 细胞具有缓冲血压和减轻靶器官损害的作用 $" 1 是一种促炎因子可引起强效收缩血管活性物质内皮素 1 的释放增加导致血压升高而应用 $" 1 拮抗剂之后可以降低血压和血管超氧化物的产生本实验结果表明 %&' 外周血 +,) +, 比值和 $" 1 表达比率显著升高 +,) +,- $ 细胞表达下降这与 1 本课题组前期研究结果相一致也进一步表明高血压确实发生了免疫炎症反应而给予 "# 干预后可下调 +,) +, 比值和 $" 1 表达水平上调 +,) +,- $ 细胞表达表明 "# 可改善高血压免疫炎症反应以上研究结果表明 "# 可以通过调节高血压外周血 $ 细胞亚群比值和抑制促炎因子释放改善脑和肾脏等重要靶器官发生的炎性损伤而本课题组前 1 期研究结果也表明缝隙连接蛋白在高血压免疫反应中起了重要作用由此推测 "# 可能通过外周血 $ 细胞间缝隙连接来调节 $ 细胞亚群比值和抑制促炎因子释放进而改善靶器官炎性损伤的但具体是通过何种机制还有待进一步研究证明总之本研究有助于进一步研究 "# 治疗高血压的可能机制为治疗高血压免疫炎症反应提供新的思路和策略参考文献王恩帮何芳 & 缝隙连接与高血压的研究进展 & 中国现代医药杂志 +)&. '5 28/' --!/ $$! ''$ &29 )!+ )# )"33+ "#" + " #"#&#) +& '4 0 ',,3 $$ ' %2,-8 &3 + * + # - +* +)"" " "# " & "#- )+ )& ) '$,,'$ ' -&- )) ) &8- + )& - $,3-3' 2& )# & ', + & $,3-3' 2& )) )- &" --)+-)& '! 4,3 / 4 $,3- //!! & ##" ## ) + # #)"&, &!, 78$3'4, /8$!3', '! &- #" )) " # ) #&% " ) +& 2 3,2,, '4 0 & # ) ))"((")# + #""## +*7 # ) "&8 ' ))+)-&! $88-32$-- 72 &)"#+ "" ) )"+ " ) )) " ' ))' &! )- - +-&!! $-.4/3-7!, -!$ &3)+ ) )) " "+ ") & #--+& $ '240, 3 ' / &3))" & # 8# $# -)+& 徐莉 & 高血压脑出血模型大鼠不同时间段脑损伤程度与 ' 含量和表达的关系 & 湖北科技学院学报医学版 ) +-& )! $ ' 2&3))# * " + " ( & )8-8) - )+-& -!3' /& )# ")" )&3)) )) -+)& 5, '4 8 2!7$ '4 0$ & # )# ) ") &#- )+& 7 -,!3 / $ 2 23!. & )#33+ "#" " # ( &, - ) +)& '4 2 35,$ & #+ )) # "" "#+ &!" ) ) + )& 4 53/,, ' 7-.'/&- # 33 "#" " #+ "#&!" )))+) & 王爱张海超张亮等 & 自发性高血压大鼠外周血 ) 淋巴细胞比率增加且连接子蛋白 )) 和炎症因子水平升高 & 细胞与分子免疫学杂志 )-+)& 张海超王爱张亮等 & 自发性高血压大鼠肾损伤伴随调节性淋巴细胞下降及连接蛋白 ) 的表达增强 & 免疫学杂志 -)+))& 编辑国荣!

7 北京大学学报医学版 # +94* 4 ' % 论著!! "# $ #% %"&!%'!! $ "( )& * $ +,-.)/ ) 01 " * ). " 2")3 )01 ( /" 433% /1 " 0 "51 " -.)/$ 6',)") 4.))%) 0

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