123 表 1 苦荞品种名称及来源编号品种名称来源编号品种名称来源 1 黑丰 1 号山西 26 苦荞陕西 2 六荞 2 号贵州 27 苦荞陕西 3 苦荞陕西 28 刺荞四川 4 苦荞麦安徽 29 苦荞贵州 5 苦荞陕西 30 苦荞宁夏 6 苦荞陕西 31 荞麦山西

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1 122 高帆, 宋餠. 基于 AFLP 标记的苦荞种质资源遗传多样性研究 [J]. 江苏农业科学,2016,44(5): doi: /j.isn 基于 AFLP 标记的苦荞种质资源遗传多样性研究高帆 1 2, 宋餠 (1. 山西大学生命科学学院, 山西太原 ;2. 山西体育职业学院, 山西太原 ) 摘要 : 用 AFLP 分子标记手段对我国苦荞种质资源遗传多样性进行研究, 为综合评价我国苦荞种质资源提供依据以 50 份苦荞核心种质为试验材料, 优化筛选出 19 对 AFLP 标记分析引物, 经 AFLP-PCR 扩增 PAGE 检测, 统计分析 AFLP 图谱, 运行 PopgeneVer.1.31 和 NTSYSpcVer.2.2 软件对苦荞种质资源遗传多样性和遗传关系进行分析, 共检测到 211 个 AFLP 特异性标记, 平均每对引物组合产生个多态性位点 (PIC), 遗传相似系数 (GS) 分布区间均较大, 变幅为 0.515~0.954, 辛普森指数和香农指数计算结果表明来自四川的苦荞种质资源多样性最为丰富 ; PopgeneVer.1.31 运行结果表明, 当 GS 为时,50 份苦荞材料被分为 5 个组群, 聚类结果与苦荞种质的地理分布有一定的相关性说明 AFLP 是一种有效的分子标记方式, 适合于苦荞种质遗传多样性分析 ; 我国苦荞种质资源多样性丰富, 须要在保护利用现有种质资源的基础上继续加强区域间引种育种, 为我国荞麦产业的发展提供帮助关键词 : 苦荞 ;AFLP; 遗传多样性中图分类号 :S 文献标志码 :A 文章编号 : (2016) 苦荞 (Fagopyrumtataricum) 属廖科 (Polygonaceae) 荞麦属 (FagopyrumMil), 尼泊尔我国西藏东部和云南西北部是苦荞的分布中心和起源地 [1] 我国是苦荞的主产区, 栽培面积超过 30 万 hm 2, 产量水平达 900kg/hm 2, 总产量达 3 亿 kg [2] 苦荞粮药兼用, 不仅营养价值高, 而且具有降糖脂降胆固醇抗氧化和消炎等功效, 被誉为 21 世纪重要的绿色食品资源 [3] 我国苦荞种质资源丰富, 利用 AFLP 分子标记对我国苦荞种质资源遗传多样性进行分析对我国苦荞种质资源的保护品种的改良分子育种及优良基因的挖掘具有重要的意义尽管国内外学者已采用形态学标记 [4] 细胞学标记 [5] [6] [7] 种子蛋白标记和同功酶标记等手段对荞麦的遗传多样性进行分析, 但分子标记技术仍然是目前最主要的遗传多样性分析手段, 国内外已采用 RAPD [8] SSR [9] ISSR [10] 和 SRAP [11] 等分子标记方式对苦荞遗传多样性进行了研究 AFLP 是一种可靠性高适用性强多态性水平高的分子标记方式, 非常适合于对研究背景模糊材料来源广泛的作物进行标记分析 Tsuji 等利用 AFLP 标记技术对野生苦荞和栽培苦荞进行了系统研究 [12] ;Yasui 等利用 AFLP 标记, 构建了野生收稿日期 : 基金项目 : 国家科技支撑计划 ( 编号 :2011BAD09B01) 作者简介 : 高帆 (1985 ), 男, 山西长治人, 博士, 实验师, 主要从事荞麦种质资源遗传多样性研究 gaofan@sxu.edu.cn 櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄 [2] 宋志剑, 刘仁建, 雄奴塔巴, 等. 拉萨地区春青稞产量构成因素相关性和通径分析 [J]. 西藏农业科技,2008,30(4): [3] 陈超, 邹滢. 常用功能与应用实例精讲 [M]. 北京 : 电子工业出版社,2009: [4] 杜家菊, 陈志伟. 使用 SPSS 线性回归实现通径分析的方法 [J]. 生物学通报,2010,45(2):4-6. [5] 杨金华, 于亚雄, 刘丽, 等.CIMMYT 不同棱型大麦产量构成因素及其对产量的影响 [J]. 西南农业学报,2008,21(4): 荞 (F.homotropicum) 和甜荞的 8 个连锁群的遗传图谱 [13] ; Konishi 等利用 AFLP 标记揭示了野生甜荞和栽培甜荞间的起源关系 [14] ; 侯雅君等对百余份苦荞材料进行了遗传多样性分析 [15] 以上研究虽利用不同的标记方式对苦荞进行了遗传多样性分析, 但利用 AFLP 标记分析我国极具代表性的苦荞核心种质 ( 精准鉴定品种 ) 的研究几乎没有尽管到目前为止国内外已有一些关于苦荞 AFLP 标记方面的报道, 但大多数分析范围或是过于狭窄或是过于宽泛, 分析材料多数不具有典型的地域代表性本研究在前人研究的基础上, 从国家种质库中精心挑选出 50 份极具代表性的苦荞精准鉴定材料为研究对象, 从 40 对引物组合中筛选出 19 对信息量丰富多态性好的 AFLP 引物, 对我国苦荞种质资源进行遗传多样性分析, 旨在揭示我国苦荞种质资源间的遗传关系, 为苦荞种质资源的收集保护利用提供依据 1 材料与方法 1.1 试验材料我国苦荞精准鉴定材料 50 份, 分别来自 12 个省 ( 区 ), 具体情况见表 1, 供试材料由中国农业科学院农作物种质保存中心提供 1.2 DNA 提取与酶切 [16] 取 0.5g 嫩叶, 用 CTAB 法提取总 DNA, 稀释 100 倍后 [6] 王建武, 姜龙. 啤酒大麦产量构成因素分析与应用 [J]. 大麦科学,2000(3):18-19,36. [7]PaunovicAS,MadicM,NezevicDK,etal.Theinterdependenceof productiveandtechnologicaltraitsintwo-rowedspringbarley[j]. ActaAgricculturaeSerbica,2006,22(6): [8]MilomirkaM A,Paunovic,DjurovicD,etal.Corelationsandpath coeficientanalysisforyieldandyieldcomponentsinwinterbarley [J].ActaAgricculturaeSerbica,2005,20(5):3-9.

123 表 1 苦荞品种名称及来源编号品种名称来源编号品种名称来源 1 黑丰 1 号山西 26 苦荞陕西 2 六荞 2 号贵州 27 苦荞陕西 3 苦荞陕西 28 刺荞四川 4 苦荞麦安徽 29 苦荞贵州 5 苦荞陕西 30 苦荞宁夏 6 苦荞陕西 31 荞麦山西 7 82-8-1 安徽 32 荞麦甘肃 8 苦荞陕西 33 辽荞 75( 苦 ) 辽宁 9

2 123 表 1 苦荞品种名称及来源编号品种名称来源编号品种名称来源 1 黑丰 1 号山西 26 苦荞陕西 2 六荞 2 号贵州 27 苦荞陕西 3 苦荞陕西 28 刺荞四川 4 苦荞麦安徽 29 苦荞贵州 5 苦荞陕西 30 苦荞宁夏 6 苦荞陕西 31 荞麦山西安徽 32 荞麦甘肃 8 苦荞陕西 33 辽荞 75( 苦 ) 辽宁 9 苦荞四川 34 黑苦荞青海 10 苦荞陕西 35 湖南 2-2 湖南 11 苦荞山西 36 塘弯苦荞湖南 12 威宁 3 号贵州 37 六荞 1 号贵州 13 苦荞湖北 38 湖南 1-2 湖南 14 额洛木尔惹四川 39 苦荞青海 15 湖南 3-1 湖南 40 湖南 6-2 湖南 16 海源苦荞宁夏 41 晋荞麦 2 号山西 17 凤凰苦荞湖南 42 苦荞青海 18 湖南 5-2 湖南 43 苦荞麦安徽 19 苦荞陕西 44 苦荞麦甘肃 20 苦荞湖北 45 苦荞湖北 21 西农 9909 陕西 46 镇巴苦荞 Ⅱ 陕西 22 彭泽苦荞江西 47 老鸦苦荞四川 23 洗马苦荞湖南 48 麻苦荞甘肃 24 苦荞湖北 49 新邵苦荞湖南 25 麻苦荞甘肃 50 湖南 3-2 湖南参考闫龙等的试验方法 [17],37 条件下用 MseⅠ 和 EcoRⅠ 对总 DNA 酶切 8h, 检测酶切效果 1.3 加接头与预扩增将酶切产物分别加上 EcoRⅠ 和 MseⅠ 接头在 T 4 连接酶的作用下,16 过夜连接后获得连接产物, 稀释 5 倍后用预扩增引物 M(5 -GATGAGTCCTGAGTAA-3 ) 和 E(5 - GACTGCGTACCAATTC-3 ) 进行预扩增反应预扩增反应体系为 : 连接产物 4.0μL,M 引物 1.0μL,E 引物 1.0μL, 10 PCRbufer2.0μL,dNTP0.4μL,Taq 酶 0.2μL,ddH 2 O 补齐至 20μL 预扩增反应程序为:94 1min;94 30s, 56 35s,72 1min,30 个循环 ;72 7min 检测预扩增效果后, 稀释 20 倍备用 1.4 引物筛选与选择性扩增选用遗传差异较大的 7 份苦荞材料对 40 对 AFLP 引物组合进行筛选, 筛选出扩增条带数量多多态性好清晰度高分布均匀的 19 对引物组合 :E-AA/M -CAG E-AA/M - CTG E-AC/M -CCC E-AG/M -GCA E-GA/M -CGT E-GC/M -ACG E-GC/M -CCT E-GG/M -GAT E- GG/M-GCA E-TG/M -ACG E-CTG/M -AC E-CTG/ M-CG E-CTG/M-TT E-GCT/M-CG E-GCT/M-CT E-GTC/M -CC E-ACA/M -GT E-ACT/M -CAG E- ACT/M-CTG 获取有效的 AFLP 引物组合后, 进行选择性扩增反应选择性扩增反应体系为 : 预扩增产物 2.5μL, AFLP 引物组各 0.8 μl,10 PCR bufer1.5 μl,dntp 0.3μL,Taq 酶 0.15μL,ddH 2 O 补齐至 15μL 选择性扩增反应程序为 :94 1min,94 30s,65 35s( 每个循环降低 0.7 ),72 1min,12 个循环 ;94 30s,56 35s, 72 1min,25 个循环 ;72 7min 反应结束后加入 5μL Loadingbufer,94 变性 3min 后立即置于冰上冷却备用 1.5 PAGE 检测与数据统计分析 [18] 参考赵丽娟的方法进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) 检测, 固定银染显影后用拍照计数在电泳图谱上, 清晰条带记为 1, 同一位置上无条带记为 0 用 PopgeneVer. [19] 1.31 软件计算多态性信息指数 (PIC) 多态性性息位点百分数 (PPB) 辛普森指数 (Simpson index) 香农指数 (Shannon-Weaverindex) 遗传相似系数 (GS) 根据 GS, 采 [20] 用 UPGMA 法, 利用 NTSYSpcVer.2.2 软件进行苦荞品种聚类分析 2 结果与分析 2.1 酶切与预扩增检测琼脂糖凝胶电泳检测苦荞基因组 DNA 酶切和预扩增结果见图 1 由图 1-A 和图 1-B 结果可知,DNA 酶切片段均匀, 预扩增片段丰富, 基本位于 100~750bp 之间, 适宜进行选择性扩增 [21] 2.2 选择性扩增检测本研究从 40 对 AFLP 引物组合中筛选出适宜的选择性扩增引物 19 对, 筛选率为 47.5% 19 对引物在 50 份苦荞材料上共扩增出清晰条带 890 条 ( 图 2), 平均每对引物可扩增出条带条, 长度分布在 45~570bp 之间如表 2 所示, 共扩增出多态性条带 211 条, 平均每对引物的多态性条带有条, 平均多态性位点百分率 (PPB) 为 24.05%,PIC 最大值为 ( 引物组合为 E-CTG/M -CG), 最小值为 ( 引物组合为 E -AA/M -CAG),PIC 平均值为苦荞种质遗传多样性分析鉴于有些地区有代表性的苦荞核心种质材料太少, 将少于 4 份材料的省份划分至与其毗邻或种植环境相似的省份, 计算各组群苦荞种质资源的遗传多样性参数由表 3 可知, AFLP 标记的苦荞品种, 辛普森指数为 0.892~0.989, 平均 0.940; 香农指数为 0.095~0.194, 平均四川是我国

124 引物组合表 2 苦荞的 AFLP 引物扩增结果多态性条带数带数 ( 条 ) ( 条 ) 多态性位点百分率 (%) PIC 值 E-AA/M-CAG 5 24 20.83 0.0241 E-AA/M-CTG 9 75 12.00 0.1264 E-AC/M-CCC 4 40 10.00 0.0546 E-AG/M-GCA 11 52 21.15 0.

3 124 引物组合表 2 苦荞的 AFLP 引物扩增结果多态性条带数带数 ( 条 ) ( 条 ) 多态性位点百分率 (%) PIC 值 E-AA/M-CAG E-AA/M-CTG E-AC/M-CCC E-AG/M-GCA E-GA/M-CGT E-GC/M-ACG E-GC/M-CCT E-GG/M-GAT E-GG/M-GCA E-TG/M-ACG E-CTG/M-AC E-CTG/M-CG E-CTG/M-TT E-GCT/M-CG E-GCT/M-CT E-GTC/M-CC E-ACA/M-GT E-ACT/M-CAG E-ACT/M-CTG 平均值表 3 AFLP 标记下不同地理来源苦荞种质的遗传参数值组群组群大小辛普森指数香农指数山西 / 辽宁贵州陕西安徽 / 江西四川湖北湖南宁夏 / 青海甘肃平均值苦荞遗传多样性最为丰富的地区, 无论辛普森指数 (0.989), 还是香农指数 (0.194) 均为最大虽然湖南和陕西的供试材料最多 ( 均为 10 份 ), 但遗传多样性并不丰富, 这从分子水平上证明资源量与遗传多样性并非正相关的观点安徽 / 江西宁夏 / 青海 2 个组群的辛普森指数和香农指数均较低, 说明该地区的苦荞种质资源多样性不够丰富, 需要在保护其遗传稳定性的基础上, 加强区域间引种部分省份的核心种质抽样材料太少 ( 如江西和辽宁各仅有 1 份 ), 这也可能对遗传多样性参数值的计算造成一定的误差 [22], 不能完全反映该区域内的种质资源多样性情况 2.4 苦荞种质遗传关系分析用 NTSYSpcVer.2.2 软件计算 50 份苦荞种质的遗传相似系数 (GS) AFLP 标记结果 ( 表 4) 表明,50 份苦荞种质的 GS 值在 0.515~0.954 之间, 分布区间较大, 说明苦荞种质多态性较为丰富, 同时也表明 AFLP 标记适宜于我国苦荞种质遗传多样性分析采用 UPGMA 法进行聚类, 当 GS 为时, 大部分苦荞材料可被分成五大组群第 Ⅰ 组群可分为 2 个小组, 第 1 小组包括来自山西 (1) 陕西 (5 6) 湖南 ( ) 甘肃 (32) 和青海 (39) 的 8 份材料, 其中山西和陕西的材料聚为一类, 湖南青海和甘肃的材料聚为一类 ; 第 2 小组包括来自安徽 (7) 陕西 ( ) 和湖北 ( ) 的 7 份材料, 其中安徽 (7) 陕西 ( ) 和湖北 (13) 的材料聚为一类, 而另 2 份湖北材料 (20 24) 聚为另一类第 Ⅱ 组群可分为 2 个小组, 第 1 小组又可分为 2 个亚组, 第 1 亚组包括来自陕西 ( ) 安徽 (4) 甘肃 (25) 湖南 ( ) 和山西 (41) 的 9 份材料, 第 2 亚组包括来自安徽 (43) 甘肃 (44) 湖北 (45) 陕西 (46) 和湖南 (49,50) 共 6 份材料 ; 第 2 小组包括山西 (11) 和辽宁 (33) 的 2 份材料第 Ⅲ 组群包括来自山西 (31) 青海 (42) 四川 (47) 和湖南 (23) 的 4 份材料第 Ⅳ 组群包括来自贵州 ( ) 四川 (9 28) 和宁夏 (16) 的 7 份材料, 其中来自贵州 (29) 和四川 (28) 的 2 份材料遗传相似度最近, 为第 Ⅴ 组群包括来自江西 (22) 宁夏 (30) 和湖南 (15) 的 3 份材料剩余的来自四川 (14) 青海 (34) 陕西 (8) 和甘肃 (48) 的 4 份材料与以上 5 个组群的遗传距离较远, 单独聚为一类特殊的类型 ( 图 3) 由聚类图 ( 图 3) 可知, 来自四川和贵州的刺荞和苦荞 GS 值最高 (0.954), 原因可能是四川的刺荞属于当地地方品种有翅苦荞的一类, 而来自贵州的苦荞也是当地的一个地方品种, 两者同属于苦荞的栽培品种, 两地也同属我国栽培荞麦的主产区西南地区, 地理位置接近及品种交流频繁等因素导致两者遗传相似性较高来自四川的额洛木尔惹和来自甘肃的麻苦荞 GS 值最低 (0.515), 原因可能是甘肃的麻苦荞为当地的一个栽培品种, 四川的额洛木尔惹来自于川西南部的凉山彝族自治州, 该地区地貌复杂, 具有独特的生态气候, 是我国苦荞麦主要的生产和次生起源地之一, 荞麦种质资源丰富 [23], 而该品种也很可能是当地野生荞麦的一个近缘种, 丰富的荞麦遗传资源背景造成四川的额洛木尔惹与甘肃的麻苦荞遗传差异度较大 3 结论与讨论 3.1 AFLP 标记技术的有效性和适用性自 AFLP 标记技术被发明以来, 该技术以其特殊的标记特点被广泛应用于作物分子标记分析和遗传多样性研究中国内外专家均认为,AFLP 是一种有效的分子标记系统 [24-25] 本研究的苦荞种质资源 AFLP 标记结果表明,AFLP 标记丰富度高 (19 对引物组扩增出 890 个条带 ) 灵敏度强 ( 平均每对

4 125 表 4 AFLP 标记的 50 份苦荞品种遗传相似系数序号 GS GS 序号最大值最小值平均值最大值最小值平均值 (5) 0.693(14) (35) 0.670(8) (16) 0.626(8) (35) 0.656(34) (27) 0.635(14) (29) 0.653(34) (10) 0.670(14) (28) 0.626(48) (1) 0.667(34) (50) 0.581(34) (1) 0.576(34) (46) 0.596(34) (21) 0.647(34) (39) 0.663(34) (48) 0.524(14) (11) 0.677(8) (18) 0.640(49) (8) 0.516(14) (13) 0.676(48) (36) 0.693(34) (43) 0.646(34) (35) 0.664(14) (16) 0.619(48) (28) 0.670(8) (10) 0.641(34) (35) 0.676(34) (12) 0.515(48) (40) 0.687(14) (50) 0.536(34) (39) 0.691(14,34) (12) 0.626(48) (36) 0.699(8) (18) 0.640(34) (39) 0.663(8) (17) 0.667(34) (44) 0.673(14) (13) 0.624(34) (43) 0.649(14) (4) 0.630(34) (42) 0.652(14) (7) 0.627(34) (43,45) 0.650(34) (27) 0.627(48) (40) 0.606(34) (39) 0.629(34) (47) 0.515(14) (35) 0.604(34) (50) 0.630(14) (35) 0.647(48) (45) 0.639(14) 注 : 表示最大遗传相似系数 ; 表示最小遗传相似系数表中的序号为表 1 中的苦荞品种编号

5 126 引物扩增条带个 ) AFLP 标记位点多态性丰富 ( 平均多态性比率为 25.7%), 有效性强 ( 平均每对引物可扩增个多态性条带, 高于 RAPD 标记苦荞所得的 6.90 个多态性条带 [8] ) 有效的 AFLP 引物组合筛选率较高 ( 引物筛选率 47.5%, 高于 SSR [9] 和 ISSR [10] 的引物筛选率 ) 以上结果表明,AFLP 是一种十分适合于苦荞种质资源多样性分析的标记方式进一步扩大引物遴选范围, 筛选出更多的 AFLP 扩增引物, 建立苦荞 AFLP 引物扩增库是下一步的工作重点 3.2 苦荞种质资源的遗传多样性从不同来源苦荞种质的遗传关系发现, 我国苦荞种质资源遗传多样性十分丰富 [26] ; 从不同组群苦荞品种的遗传参数值发现, 四川地区的种质资源遗传多样性最为丰富, 是我国苦荞种质资源的重点保护地区 ; 从 UPGMA 聚类图发现, 处于相近地理范围内的苦荞品种可聚在一起, 这体现了我国苦荞种质资源遗传关系的地缘性特征因此, 需要在加强区域内苦荞种质资源保护的基础上, 不断加强区域间的引种育种, 尤其是针对某些特殊珍贵品种 ( 如四川的额洛木尔惹 ) 的保护与开发, 这将不断丰富我国苦荞种质资源的遗传多样性本研究结果为我国苦荞种质资源的保护和利用品种的开发以及荞麦产业的发展提供必要的参考依据参考文献 : [1]JiangJF,JiaX.Sichuandaliangshanareaisoneoforiginregionof Fagopyrumtataricum[J].Fagopyrum:Novostioajdi,1990,12 (1): [3] 徐丽华, 潘宏, 赵英明. 荞麦一种新兴的多用途作物 [J]. 国外农学 : 杂粮作物,1998,18(3): [4] 高金锋, 张慧成, 高小丽, 等. 西藏苦荞种质资源主要农艺性状分析 [J]. 河北农业大学学报,2008,31(2):1-5,20. [5]OhnishiO,AsanoN.GeneticdiversityofFagopyrumhomotropicum, awildspeciesrelatedtocommonbuckwheat[j].geneticresources andcropevolution,1999,46(4): [6]DvoǐáčekV,ČepkováP,MichalováA,etal.Seedstorageproteinpol ymorphism ofbuckwheatvarieties(fagopyrum esculentum Moench; FagopyrumtataricumL.)[M]//AdvancesinBuckwheatResearch, 2004: [7]OhmishiO.Populationgeneticofcultivatedcommonbuckwheatof FagopyrumesculentumMoench.Ⅳ.AlozymevariabilityinNepaland Koshmirionpopulations[J].Genet,1985,60: [2]LinRF,ProductionCY.ResearchandacademicexchangesofChina onbuckwheat[m].xi an:northwesta&funiversitypres,2007:7-12. [8]SenthikumaranR,BishtIS,BhatKV.Diversityinbuckwheat(Fago pyrumspp.)landracepopulationsfromnorth-weaternindianhima layas[j].geneticresourcesandcropevolution,2008,55: [9] 王耀文, 夏楠, 韩瑞霞, 等. 苦荞 SSR-PCR 反应体系的优化及引物筛选 [J]. 贵州农业科学,2011,39(4):4-8. [10] 赵丽娟, 张宗文, 黎裕, 等. 苦荞种质资源遗传多样性的 ISSR 分析 [J]. 植物遗传资源学报,2006,7(2): [11]LiYQ,FanXL,ShiTL,etal.SRAPmarkerrevealsgeneticdiver sityintartarybuckwheatinchina[j].frontiersofagriculturein China,2009,3(4): [12]TsujiK,OhnishiO.Phylogeneticrelationshipsamongwildandculti vatedtartarybuckwheat(fagopyrumtataricumgaert.)populations revealedbyaflpanalyses[j].genes& GeneticSystems,2001, 76(1): [13]YasuiY,WangYJ,OhnishiO,etal.Constructionofgeneticmaps ofcommonbuckwheat(fagopyrumesculentummoench)anditswild relative,f.homotropicumohinishibasedonamplifiedfragmentlength polymorphism(aflp)markers[c]//advances in Buckwheat Research,Proceedingof8thInternationalStmposiumonBuckwheat. 2001: [14]KonishiT,YasuiYasuo,OhnishiO.Originalbirthplaceofcultivated commonbuckwheatinferedfrom geneticrelationshipsamongculti vatedpopulationsandnaturalpopulationsofwildcommonbuckwheat revealedbyaflpanalysis[j].genes& GeneticSystems,2005, 80(2): [15] 侯雅君, 张宗文, 吴斌, 等. 苦荞种质资源 AFLP 标记遗传多样性分析 [J]. 中国农业科学,2009,42(12): [16]ManubensA,LobosS,JadueY,etal.DNAisolationandAFLPfin gerprintingofnectarineandpeachvarieties(prunuspersica)[j]. PlantMolecularBiologyReporter,1999,17(3): [17] 闫龙, 关建平, 宗绪晓. 木豆种质资源 AFLP 标记遗传多样性分析 [J]. 作物学报,2007,33(5): [18] 赵丽娟. 荞麦种质资源遗传多样性分析 [D]. 北京 : 中国农业科学院,2006. [19]YehFC,BoyleR,YeT,etal.POPGENE,theuser-friendlyshare wareforpopulationgeneticanalysis,version1.31[m].edmonton: Molecular Biology and Biotechnology Centre, University of Alberta,1997. [20]RohlfFJ.NTSYS-pcnumericaltaxonomysystem,exeterpublish ing[m].newyork:setauket,2002. [21] 徐微. 裸燕麦种质资源遗传多样性及遗传图谱构建研究 [D]. 北京 : 中国农业科学院,2009. [22] 赵茹, 程舟, 陆伟峰, 等. 基于分子标记的野生大豆居群遗传多样性估算与取样策略 [J]. 科学通报,2006,51(9): [23] 赵佐成, 周明德, 罗定泽, 等. 四川省凉山彝族自治州南部三县苦荞麦栽培居群的遗传多样性研究 [J]. 遗传学报,2000,27 (6): [24]PejicI,Ajmone-MarsanP,MorganteM,etal.Comparativeanalysis ofgeneticsimilarityamongmaizeinbredlinesdetectedbyrflps, RAPDs,SSRs,andAFLPs[J].TheoreticalandAppliedGenetics, 1998,97(8): [25]SmithJ,ChinE,ShuH,etal.AnevaluationoftheutilityofSSR lociasmolecularmarkersinmaize(zeamaysl.):comparisonswith datafrom RFLPS and pedigree[j]. Theoreticaland Applied Genetics,1997,95(1/2): [26] 王艳青, 卢文洁, 李春花, 等. 同异分析法在苦荞新品种 ( 系 ) 综合评价中的应用 [J]. 江苏农业科学,2014,42(12):