144 OIE 陆生动物卫生法典 ( 上卷 ) 原文为英文版第条关于胚胎处理实验室的规定胚胎采集小组可使用流动式或固定处理实验室, 在该实验室完成的主要操作包括从采集培养液中回收胚胎, 对胚胎进行检查和各种必要处理, 如洗涤和冷冻储存前的检查及准备工作固定实验室可以是专门用于胚

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浩支
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1 原文为英文版第四篇关于疫病预防和控制的一般性建议 143 第 4.7 章家畜及马体内受精胚胎采集和处理第条控制目标对国际流通的体内分离胚胎进行官方卫生监管, 旨在确保可能与胚胎相关的特定病原微生物得到控制, 避免通过胚胎将这些病原传播给易感动物或后代第条关于胚胎采集小组的规定胚胎采集小组由一组具有资质的技术人员组成, 其中应至少有一名兽医师小组负责胚胎采集处理加工和贮存, 胚胎采集小组应符合下列条件 : 1) 小组应经过主管部门批准认可 ; 2) 小组应接受小组兽医师的监督指导 ; 3) 小组兽医师负责小组的各项操作, 包括供体动物的卫生状况判定卫生处理外科手术消毒和卫生程序 ; 4) 小组成员应接受关于疫病控制原则和技术的充分培训, 应按标准严格执行卫生措施以防止感染发生 ; 5) 应为下述操作配备足够的设备和装备 : a) 胚胎采集 ; b) 在固定场所或流动实验室进行胚胎加工和处理 ; c) 胚胎贮存上述设备不必放置在同一地点 6) 胚胎采集小组应将其各项活动记录在案, 该记录在胚胎出口后至少保存两年, 供兽医主管部门检查 7) 胚胎采集小组应定期接受官方兽医检查, 至少每年一次, 确保胚胎采集加工和贮存符合相关规程

2 144 OIE 陆生动物卫生法典 ( 上卷 ) 原文为英文版第条关于胚胎处理实验室的规定胚胎采集小组可使用流动式或固定处理实验室, 在该实验室完成的主要操作包括从采集培养液中回收胚胎, 对胚胎进行检查和各种必要处理, 如洗涤和冷冻储存前的检查及准备工作固定实验室可以是专门用于胚胎采集和加工的独立实验室, 也可以是现有建筑的改建部分, 也可设在供体动物的养殖场内无论实验室在哪里, 均应把胚胎处理实验室与动物进行有效的物理性隔离流动式或固定实验室内的洁净加工区和污染区 ( 动物处理区 ) 间也应设置有效的隔离此外还要求 : 1) 实验室应由采集小组兽医师直接监督, 并接受官方兽医的定期检查 2) 在进行出口胚胎加工处理并完成安瓿小瓶或吸管保存分装前, 不应在该实验室同时处理卫生等级状况较差的胚胎 3) 实验室应防啮齿动物和防虫 4) 实验室的建筑材料应便于有效清洁和消毒应经常对实验室进行清洁和消毒, 并在每次处理出口胚胎加工的前后按照程序进行清洁和消毒第条关于供体动物入场的规定 1. 供体母畜 a) 兽医主管部门应掌握供体母畜的原产畜群情况, 并拥有管辖权 b) 供体母畜也不应来自因出现 OIE 名录疫病或病原 ( 参见本法典第 1.2 章 ) 而处于兽医限制状态的畜群, 除国际胚胎移植学会 (IETS)1 类目录所列疫病和病原 ( 参见本法典第条 ) 外 c) 胚胎采集时, 应由胚胎采集小组兽医师或对小组兽医师负责的兽医对供体母畜进行临床检查, 证实无疫病临床症状 2. 精液供体 a) 用于供体动物人工授精的精液应按照本法典第 4.6 章规定进行生产和处理 b) 当为胚胎供体母畜提供人工授精精液的公畜发生死亡, 或精液采集时供精公畜传染病感染情况不明时, 在胚胎采集后, 可要求对供胚母畜进行补充试验检测, 以证实没有感染这些传染病另一种替代方案是检测同一天采集的留样精液

3 原文为英文版第四篇关于疫病预防和控制的一般性建议 145 c) 在自然交配或使用新鲜精液的情况下, 供体公畜应符合本法典第 4.6 章所列有关不同畜种的卫生条件要求第条风险管理就疫病传播而言, 体内胚胎移植是一种疫病传播风险很低的动物遗传物质转移方式无论动物种类如何, 在胚胎转移过程中主要有三个阶段决定最终风险水平 : 1) 第一阶段涉及胚胎感染潜在风险, 适用于非 IETS 目录一类疫病 ( 参见本法典第条 ), 该风险取决于 : a) 出口国或地区的疫病状况 ; b) 畜群和胚胎供体动物的卫生状况 ; c) 进口国兽医当局所关注的特定病原体的致病特性 2) 第二阶段涉及根据 IETS 手册规定, 使用国际通行的胚胎加工规程降低风险, 这些程序如下 : a) 胚胎至少清洗 10 次, 每次清洗应至少达到稀释 100 倍, 每次清洗均使用新的移液管来转移胚胎 ; b) 只有来自同一供体的胚胎才能一起清洗, 每次洗涤不能多于 10 个胚胎 ; c) 当需要灭活或消除某一特定病毒时, 如牛疱疹病毒 1 型伪狂犬病病毒, 应根据 IETS 手册规定, 修改标准清洗流程, 增加胰酶清洗处理环节 ; d) 在放大不低于 50 倍的显微镜下观察胚胎整个表面的透明带, 确保完整无损并没有黏附物 ( 注 : 每批胚胎应附有胚胎采集小组兽医签发的证书, 证明已完成各项加工处理程序 ) 3) 第三阶段涉及采取以下降低风险措施 ( 适用于非 IETS 目录一类疫病 ( 参见本法典第条 ) 但为进口国兽医当局关注的疫病 ): a) 根据已知疫病潜伏期对供体动物和及其原产畜群进行采集后监测, 在胚胎贮存期间 ( 可以进行低温保存的情况下 ), 对出口国供体动物卫生状况进行回顾性确定 ; b) 对胚胎采集液 ( 冲洗液 ) 和不能存活的胚胎或如血样等其他样本进行检测, 确定是否存在特定病原体

4 146 OIE 陆生动物卫生法典 ( 上卷 ) 原文为英文版第条关于胚胎采集和贮存的规定 1. 培养基胚胎采集加工洗涤或贮存所用培养基和溶液中的任何动物源性生物制品应无致病微生物存在胚胎采集和贮存中使用的培养基及溶液应按 IETS 手册批准的方法进行灭菌消毒, 并无菌操作以确保其保持无菌状态采集洗涤和贮存用培养基应根据 IETS 手册添加抗生素 2. 设备 a) 用于胚胎采集处理洗涤冷冻和贮存的理想设备是新设备, 或至少在使用前按 IETS 手册进行灭菌消毒 ; b) 不可回收在国家之间转运用过的设备, 以供胚胎采集小组重复使用第条备选检测和处理 1) 进口国可要求对样本进行检查检测, 以证实确实不会通过体内受精胚胎传播病原微生物, 或帮助评估胚胎采集小组 ( 就遵照执行 IETS 手册的相关规程而言 ) 的质量控制级别是否达到可以接受的水平样本可以是 : a) 无活性胚胎和卵出口某供体动物有活性透明带完整的胚胎时, 对该供体动物的非受精卵退化或透明带受损的胚胎, 应按 IETS 手册进行清洗并混合保存, 以备进口国要求进行检测时使用应同时处理和贮存同一供体的无活性胚胎和卵 b) 胚胎采集 ( 冲洗 ) 液采集液应置于无菌密闭容器如量大, 应静置 1h, 然后去掉上层上清液, 把底层的 10~20mL 液体连同沉积物轻轻倒入无菌瓶中如果采用滤膜收集胚胎和卵, 滤膜上的所有沉积物均应冲洗到回收液中 c) 洗涤液根据 IETS 手册规定, 应混合最后 4 次的胚胎和卵洗涤液以便检验 d) 样本上述样本均应保存在 4, 并在 24h 内进行检测如不能在 24h 内检测, 样本应置 -70 或更低温度保存 2) 在用胰酶对活性胚胎进行额外洗涤时 ( 见本法典第条 2c 段 ), 应按 IETS 手册规定方法进

5 原文为英文版第四篇关于疫病预防和控制的一般性建议 147 行仅在可能存在 IETS 推荐使用这种额外处理 ( 如胰酶 ) 某病原体时, 才可使用酶处理须注意, 酶处理并非总是有益, 对胚胎活力如马胚胎可能会产生副作用, 酶可能会损伤胚嚢, 因此不能作为一种常规消毒剂使用第条关于胚胎贮存与运输的规定 1) 应严格按照卫生标准, 把出口胚胎保存在无菌密闭的安瓿小瓶或吸管中, 并存放在经出口国兽医主管部门批准的无污染风险贮藏室内 2) 只有同一供体胚胎可存放在同一安瓿小瓶或吸管中 3) 应尽可能在严格的卫生条件下, 在经批准的贮藏点根据动物种类用新鲜液氮冷冻胚胎, 并贮存在灭菌的干净容器中 4) 安瓿小瓶或吸管必须在冷冻时或出口到无低温冷冻条件地区之前密封, 并按 IETS 手册推荐的标准化体系进行清晰标识 5) 应在从出口国启运前, 在官方兽医的监督下进行液氮容器密封 6) 兽医证书手续完整后方可出口胚胎第条显微操作程序若需对胚胎进行显微操作, 应在完成本法典第条第 2 点要求的相关处理后, 按照本法典第 4.9 章规定进行第条关于猪胚胎的特别规定原产群应无猪水疱病和布鲁氏菌病的临诊症状透明带完整猪胚胎的有效低温冷冻保存技术还处于早期研究阶段

6 148 OIE 陆生动物卫生法典 ( 上卷 ) 原文为英文版第条关于马胚胎的特别规定有关建议主要适用于长期生活于国内马群的马胚胎采集, 可能不适用于经常参加国际活动或赛事的马例如, 在某些情况下, 在附有国际兽医证书的马匹国际运输中, 可根据两国兽医当局达成的双边协议, 免除相关限制第条关于骆驼科动物胚胎的特别规定采用常规非手术技术在排卵后 6.5~7 天从子宫腔内冲洗采集到的南美骆驼科动物胚胎几乎均处于孵化期囊胚阶段, 而透明带已消失鉴于排卵后 6.5~7 天之前胚胎尚未进入子宫而无法回收, 所以要求只有透明带完整的骆驼胚胎才能进行国际贸易显然是不现实的骆驼胚胎冷冻保存方法的研究还处于早期阶段, 尚未开展关于病原体对骆驼胚胎影响的研究第条关于鹿类胚胎的特别规定有关建议适用于长期驯养鹿群或农场化饲养鹿群的胚胎采集, 可能不适用于野生鹿胚胎采集或生活在生物多样性或遗传资源保护项目条件下的鹿群胚胎采集第条关于体内获得胚胎疫病传播风险的建议根据 IETS 的结论, 将以下疫病和病原体划分为四个类别, 该分类仅适用于体内分离胚胎 1. 一类 a) 一类疫病或病原体指在按照 IETS 手册规定正确操作胚胎采集和运输的前提下, 有足够证据证明其传播风险可忽略不计 b) 一类疫病或病原体如下 : 伪狂犬病 ( 猪 ): 胚胎需经胰酶处理

7 原文为英文版第四篇关于疫病预防和控制的一般性建议 149 蓝舌病 ( 牛 ) 牛海绵状脑病 ( 牛 ) 流产布鲁氏菌病 ( 牛 ) 地方流行性牛白血病口蹄疫 ( 牛 ) 牛传染性鼻气管炎 : 胚胎需经胰酶处理痒病 ( 绵羊 ) 2. 二类 a) 二类疫病指在按照 IETS 手册规定正确操作胚胎采集和运输的前提下, 有确定的证据显示其传播风险可忽略不计, 但需要有补充评估证实现有数据 b) 二类疫病如下 : 蓝舌病 ( 绵羊 ) 山羊关节炎 / 脑炎古典猪瘟 3. 三类 a) 三类疫病或病原体指在按照 IETS 手册正确操作胚胎采集和运输的前提下, 有初步证据表明其传播风险可忽略不计, 但需要其他体内和体外补充实验数据证实初步结论 b) 三类疫病或病原体如下 : 牛免疫缺陷性病毒 ( 非 OIE 名录疫病 ) 牛传染性海绵状脑病 ( 山羊 )( 非 OIE 名录疫病 ) 牛病毒性腹泻病毒 ( 牛 ) 胎儿弯曲杆菌 ( 绵羊 )( 非 OIE 名录疫病 ) 口蹄疫 ( 猪绵羊和山羊 ) 睡眠嗜血杆菌 ( 牛 )( 非 OIE 名录疫病 ) 梅迪 - 维斯那病 ( 绵羊 ) 副结核分支杆菌 ( 牛 ) 犬新孢子虫 ( 牛 )( 非 OIE 名录疫病 ) 绵羊肺腺瘤病 ( 非 OIE 名录疫病 ) 猪繁殖与呼吸综合征 (PRRS) 牛瘟 ( 牛 ) 猪水疱病

8 150 OIE 陆生动物卫生法典 ( 上卷 ) 原文为英文版 4. 四类 a) 四类疫病或病原体是已做过研究或正在进行研究, 结果表明 : ⅰ) 尚未能就传播风险程度得出结论 ; 或 ⅱ) 通过胚胎传播的风险可能不可忽略, 即使已按照 IETS 手册正确操作胚胎采集和运输 b) 四类疫病或病原体如下 : 非洲猪瘟赤羽病 ( 牛 )( 非 OIE 名录疫病 ) 牛无形体病蓝舌病 ( 山羊 ) 边界病 ( 绵羊 )( 非 OIE 名录疫病 ) 牛疱疹病毒 4 型 ( 非 OIE 名录疫病 ) 鹦鹉热衣原体 ( 牛, 绵羊 ) 马传染性子宫炎肠病毒 ( 牛, 猪 )( 非 OIE 名录疫病 ) 马鼻肺炎马病毒性动脉炎大肠杆菌 O9:K99( 牛 )( 非 OIE 名录疫病 ) 博氏钩端螺旋体 ( 牛 )( 非 OIE 名录疫病 ) 钩端螺旋体属 ( 猪 )( 非 OIE 名录疫病 ) 牛结节性皮肤病牛分支杆菌 ( 牛 ) 支原体属 ( 猪 ) 绵羊附睾炎 ( 绵羊布鲁氏菌 ) 副流感病毒 3 型 ( 牛 )( 非 OIE 名录疫病 ) 细小病毒 ( 猪 )( 非 OIE 名录疫病 ) 猪圆环病毒 (2 型 )( 猪 )( 非 OIE 名录疫病 ) 痒病 ( 山羊 ) 胎儿三毛滴虫 ( 牛 ) 脲原体属和支原体属 ( 牛, 山羊 )( 非 OIE 名录疫病 ) 水疱性口炎 ( 牛, 猪 )

152 OIE 陆生动物卫生法典 ( 上卷 ) 原文为英文版 7) 胚胎生产小组应定期接受官方兽医检查, 至少每年一次, 确保卵母细胞的采集加工, 胚胎生产和贮存符合相关规程第条关于胚胎加工实验室的规定胚胎生产小组可使用流动式或固定加工实验室, 该实验室可设在卵细胞回收区域附近

152 OIE 陆生动物卫生法典 ( 上卷 ) 原文为英文版 7) 胚胎生产小组应定期接受官方兽医检查, 至少每年一次, 确保卵母细胞的采集加工, 胚胎生产和贮存符合相关规程第条关于胚胎加工实验室的规定胚胎生产小组可使用流动式或固定加工实验室, 该实验室可设在卵细胞回收区域附近第四篇关于疫病预防和控制的一般性建议 151 第 4.8 章家畜和马体外受精胚胎或卵的采集和处理第 4.8.1 条控制目的动物体外胚胎生产技术主要操作步骤有 : 从供体卵巢采集卵母细胞, 卵母细胞体外成熟和受精, 把受精卵培养至桑椹胚 / 囊胚阶段, 待植入受体官方对动物体外胚胎国际贸易进行卫生控制的目的在于, 在确保胚胎无特定病原体传播风险, 避免将感染传播给受体动物和后代本章的规定同样适用于体外成熟的卵母细胞运输