张红丽 等 部分功能域基因的原核表达与分析 第６期 发表序列 ＡＹ８１９６５０ 同源性为 １００ 与国外 １０ 株 同源性为 ９８畅 ８ 有 １３ 个碱基发生了突 变 其中 ４ 个是有意义的突变 这 ４ 个有意义的 突变分别为第 ２５７ 位 Ｔ Ｃ 第 ５０５ 位 Ａ Ｃ 第 ９０８ 位 Ａ Ｇ 第 １０１２ 位 Ｇ Ｃ 图 ４ 这些差异可 能是捻转血矛线虫株间存在地域差异所致 ２畅 ５ ＨＰＳ 原核表达与鉴定 ＳＤＳ ＰＡＧＥ 及 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ 结果见图 ５９５ ５ 结果表明 采用 １ ｍｍｏｌ爛 Ｌ ＩＰＴ Ｇ ３７ 培 养 ｐｅｔ２８ｂ ＢＬ２１ ｐ ＥＴ ２８ｂ ＨＰＳ ＢＬ２１ 都可以 诱导表 达 其 中 ｐｅｔ ２８ｂ ＨＰＳ ＢＬ２１ 在 约 ４０ ｋｄａ 处出现特异性融合蛋白条带 采用 ＳＭ Ｓ 生 物软件分析 载体蛋白与抗原分子量的相加值 为 ３７畅 ３４ ｋｄａ 以该抗原基因制备的多抗血清 为一抗进行 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ 证实其为 ｐ ＥＴ ２８ｂ ＨＰＳ 融合蛋白 １ Ａ Ｍ 蛋白分子量标准 １ ｐｅｔ ２８ｂ ＢＬ２１ 未诱导 ２ ４ ｐｅｔ ２８ｂ ＢＬ２１ 诱导 ２ ４ ６ ｈ ５ ｐｅｔ ２８ｂ Ｈ ＰＳ ＢＬ２１ 未诱导 ６ ９ ｐｅ Ｔ ２８ｂ Ｈ ＰＳ ＢＬ２１ 诱导 ２ ４ ６ ８ ｈ Ｂ １０ ｐｅｔ ２８ｂ ＢＬ２１ 诱导 ６ ｈ Ｍ 预染蛋白分子量标准 Ｆｉｇ ５ ３ 讨 图 ５ ＳＤＳ ＰＡＧＥ 及 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ 分析 ＳＤＳ ＰＡ Ｇ Ｅ ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ｔｉｎｇ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ 论 寄生虫核酸疫苗是近年来出现和发展的一 种新型疫苗 它不仅可以引起体液免疫 而且还 能诱导高水平的细胞免疫应答 在寄生虫病的 预防方面显示出了强大的优势 而其中的重组 ＤＮ Ａ 疫苗已经成为一种可行的商业化疫苗 锌结合功能域的氨基酸组成特征为 ＧＳ Ｔ ＡＬＩＶ Ｎ ＰＣＨＲ ＫＮＤ Ｈ Ｅ ＬＩＶＭ ＦＹＷ ＤＥＨＲＫＰ Ｈ ＥＫＰＣ ＬＩＶＭ ＦＹＷＧＳＰＱ 糖基化位点氨基酸的组 成特征为 Ｎ Ｐ Ｓ Ｔ Ｐ 通过生物信息学软 件分析 Ｈ１１ 抗原发现其含有 ４ 个糖基化位点 和 １ 个锌结合功能域 Ｈ１１ 是迄今为止从捻转 血矛线虫肠道中分离到的最具保护性的隐蔽抗 原 可引起与血清抗体有关的高水平的保护作 用 但天然蛋白含量低 分离纯化过程复杂 而 全基因编码蛋白分子量较大导致体外表达较为 困难 Ｈ１１ 抗原是一种糖基化蛋白 而其糖基 化位点可能能够携带部分必需的寄生虫特有的 保护性多肽 锌结合功能域氨基酸可发挥中性 锌金属肽酶的活性 这可能极大地影响重组蛋 白的免疫效果 捻转血矛线虫同其他毛圆线虫 一样 其 Ｎ 末端连接的糖基化作用有其特有的 １１ １３ 模式 包含有高度岩藻糖化的核心结构的 低聚糖 但这在其他有机体中是很少见的 同 时 天然蛋白含量低 分离纯化过程复杂 而全 基因蛋白分子量较大导致体外表达较为困难 因此 部分功能域基因的重组表达蛋白作为核 酸疫苗可能会对该病起到一定的防治作用 １４ Ｒｅｓｚｋａ 等 利用杆状表达系统进行 Ｈ１１