操作前请仔细阅读使用说明 KWIK-STIK Microorganisms 产品的使用说明 防范与限制 (PRECAUTIONS AND LIMITATIONS) 这类产品仅适用于体外实验 这些设备以及后来在培养基上生长出的微生物属生物危害材料 (biohazard material ) 这些设备含具有活性的微生物, 在一定的环境下可能致病 需使用适当的技术避免任何微生物的暴露和接触 微生物实验室需有相关实验装备, 且有可接收 处理 储存 丢弃生物危害材料的设备 使用这类设备的微生物实验室工作人员必须在生物危害材料的操作过程, 维护, 储存, 丢弃等方面接受过培训, 具备一定经验, 能熟练示范 相关机构和法规对生物危害材料的处理作了规定 各实验室需了解并遵守该生物危害材料处理规定 储存与有效期 (STORAGE AND EXPIRATION) 在原装密封瓶或含干燥剂的袋中的 LYFO DISK KWIK-STIK 和 KWIK-STIK Plus Microorganisms 三类产品应存放在 2 C -8 C 冻干的微生物制剂在有效期内将保持其规格和性能, 有效期在设备标签上标明 若出现以下情况,LYFO DISK, KWIK-STIK and KWIK-STIK Plus Microorganisms 三类产品不能使用 : 储存不正确 ; 有过度暴露在湿热环境中的迹象 ; 已过有效期
KWIK-STIK TM 操作流程 从凹口处撕开产品包装 撕掉标签上的拉片, 将其贴于 初级培养平板或 QC 记录上 捏管帽处安瓿瓶中部 ( 仅一次 ), 使其释放水合液体 垂直握住试管并 轻拍之, 使液体流 入含小球的管底 通过挤捏压碎 小球, 使其与 液体混合 立即将拭 子浸于水 合悬液中 采用适合的生物危害处理法 丢弃 KWIK-STIK TM 挤压并旋转拭子, 接种于初级培 养平板, 接种圈的直径约 25mm 用一无菌接种环在先前接种区 域划线 10-20 次, 促使其分离出 单菌落 立即培养接种好 的初级培养平板 注 : 请严格按照 操作流程 推荐生长条件 和 推荐培养方法 活化标准菌株, 不建议使用实验室自己的方法及文献方法活化标准菌株, 否则菌种供应商不保证菌株的质量且不提供相应的售后服务
操作流程 注 : 请严格按照 操作流程 推荐生长条件 和 推荐培养方法 活化标准菌株, 不建议使用实验室自己的方法及文献方法活化标准菌株, 否则菌种供应商不保证菌株的质量且不提供相应的售后服务
推荐生长条件 ( 适用于 LYFO DISK 和 KWIK-STIK TM 产品 ) 如何选择最适合的菌种生长条件 1. 最初的生长最好是在非选择性琼脂培养基上 除非 特殊情况或特别推荐, 最初的生长一般不考虑液体 培养基 这是由于在液体培养基中获得冻干菌株的 纯种比较困难, 污染所带来的杂菌可能会过度生长, 影响得到目标菌株的纯种 2. 以下列出可供选择的琼脂培养基和相应的生长条 件, 供各实验室培养菌种时参考 方法 1 胰蛋白胨大豆琼脂, 非选择性羊血琼脂, 标准计数平 板, 或营养琼脂 -----35, 正常环境,24-48 小时 方法 2 非选择性羊血琼脂 ----- 35, 正常环境,24-48 小时 在培养链球菌属和隐秘杆菌属时,CO2 环境可提高其生 长 推荐使用 5%CO2 环境来培养肺炎链球菌和其他甲型 溶血性链球菌 方法 3 巧克力琼脂 -----35,5%-10% CO2 环境,24-48 小时 方法 4 厌氧血琼脂 -----35, 厌氧环境,48-72 小时 ; 部分专性厌氧菌可能需要 5-7 天, 才能充分生长 ; 对于梭菌, 以下新鲜配制的平板也可选用 : 营养琼 脂, 胰蛋白胨大豆琼脂和标准平板计数琼脂 ( 标准方 法琼脂 ); 只是需额外培养 24 小时 方法 5 沙保氏葡萄糖 Emmons 琼脂 -----25, 正常环境,2-7 天 ; 非选择性羊血琼脂也可选用 ; 以下培养基也可选用 : 营养琼脂, 胰蛋白胨大豆琼 脂, 马铃薯葡萄糖琼脂和标准平板计数琼脂, 只是 需额外培养 24 小时 方法 6 巧克力琼脂 -----35, 微需氧环境,48-72 小时 方法 7 Lowenstein Jensen 琼脂或 Middlebrook 琼脂 -----35,5%-10% CO2 环境或正常环境,7 天 M.fortuitum sub fortuitum, M.peregrinum 和 M.smegmatis 也可以选用胰蛋白胨大豆琼脂 (TSA) 和 Lowenstein Jensen 琼脂或 Middlebrook 琼脂一样, 只是需额外培养一些时间 方法 8 缓冲活性炭酵母提取物琼脂 -----35, 正常环境,3-5 天 方法 9 V 琼脂或巧克力琼脂 -----35,5%-10% CO2 环境,48 小时 方法 10 菌种水解可选用无菌脑心浸出液肉汤, 胰蛋白胨大豆肉汤, 或 0.85% 生理盐水 无菌水水解可能会导致活力下降或不复苏 在 KWIK-STIK 包装中自带的培养基使得菌种很好的复苏 在胰蛋白胨大豆琼脂 (TSA) 上生长 -----35, 正常环境,24-48 小时 Vibrio SP. 也可在 Marine 琼脂上生长方法 11 先接种于 MRS 肉汤中 -----35, 正常环境,48 小时 ; 然后接入含羊血的哥伦比亚 CNA 培养基中 ----35, 5% -10%CO2 环境,48 小时 方法 12 马铃薯葡萄糖琼脂 -----55, 正常环境,48 小时 方法 13 取一颗 M.hominis 或 Ureaplasma 冻干颗粒于 10 B 精氨酸肉汤中, 或将 KWIK-STIK 接种在肉汤中 作系列梯度稀释 ( 例如,1:10,1:100,1:1000,1:10000) 在 35 下, 正常环境中培养 精氨酸瓶中液体一旦变成粉红色 (24-48 小时 ), 转接 0.1 ml 到 A-8 琼脂, 划线分离 不要使用棉质拭子或木质棒 人型支原体,35,5-10%CO2 环境 ; 解脲支原体,35, 厌氧环境, 培养 96 个小时 使用显微镜观察平板菌落 方法 14 取一颗 M.pneumoniae 冻干颗粒于 SP4 葡萄糖肉汤中, 或将 KWIK-STIK 接种在肉汤中 作系列梯度稀释 ( 例如,1:2,1:4,1:8,1:16,1:32) 在 35 下, 正常环境中培养 一旦肉汤从红色变成黄色 (1-4 周 ), 转接 0.2 ml 到 SP4 葡萄糖琼脂, 划线分离
不要使用棉质拭子或木质棒 35,CO2 环境中, 使用烛缸较好, 培养 5-15 天 使用显微镜观察平板菌落 方法 15 取一颗 M.orale 冻干颗粒于 10 B 精氨酸肉汤中, 或将 KWIK-STIK 接种在肉汤中 作系列梯度稀释 ( 例如,1:10,1:100,1:1000) 在 35 下, 正常环境中培养 一旦肉汤从黄色变成粉红色 (48-72 个小时 ), 转接 0.2 ml 到 SP4 葡萄糖琼脂, 划线分离 不要使用棉棒或者木质棒, 将平板至于 35 厌氧环境中培养 3-6 天 使用显微镜观察平板菌落 方法 16 Leeming Notman 琼脂,30 下, 正常环境中培养 72 个小时 方法 17 取一颗 M.gallisepticum 冻干颗粒于 SP4 葡萄糖肉汤中, 或将 KWIK-STIK 接种在肉汤中 作系列梯度稀释 ( 例如,1:2,1:4) 在 35 下, 正常环境中培养 一旦肉汤从红色变成黄色 (4 天 -2 周 ), 转接 0.2 ml 肉汤到 SP4 葡萄糖琼脂, 划线分离 不要使用棉质拭子或木质棒 35,CO2 环境中, 使用烛缸较好, 培养 3 天 -2 周 使用显微镜观察平板菌落 方法 18 取一颗 M.hyorhinis 冻干颗粒于 SP4 葡萄糖肉汤中, 或将 KWIK-STIK 接种在肉汤中 作系列梯度稀释 ( 例如,1:10,1:100,1:1000) 在 35 下, 正常环境中培养 一旦肉汤从红色变成黄色 (4 天 -2 周 ), 转接 0.2 ml 肉汤到 SP4 葡萄糖琼脂, 划线分离 不要使用棉质拭子或木质棒 35,CO2 环境中, 使用烛缸较好, 培养 2 天 -10 天 使用显微镜观察平板菌落 方法 19 取一颗 M.synoviae 冻干颗粒于 SP4 葡萄糖肉汤中, 或将 KWIK-STIK 接种在肉汤中 作系列梯度稀释 ( 例如,1:2,1:4,1:8,1:16,1:32) 在 35 下,5%-10% CO2 环境中培养 7 天 7 天之后没有发生颜色变化, 转接 0.2 ml 肉汤到 SP4 葡萄糖琼脂, 划线分离 不要使用棉质拭子或木质棒 35,CO2 环境中, 使用烛缸较好, 培养 1-4 周 使用显微镜观察平板菌落 方法 20 巧克力琼脂, 羊血琼脂平板,TSA, 添加 15% 去纤维蛋白羊血的 Bordet Gengou 琼脂 --35 正常环境 ---24-48 小时 也可选择标准方法 ( 平板计数琼脂 ) 或营养琼脂, 只是需要额外培养 24 小时方法 21 添加了 15% 去纤维蛋白羊血的巧克力琼脂或 Bordet Gengou 琼脂 --35 正常环境 2 天到一周. B.pertussis,MBL # 100, 和 B.pertussis, MBL # 0843 培养基使用添加了 15% 去纤维蛋白羊血的 Bordet Gengou 琼脂 各类菌株的推荐培养方法见下页
以下列出各类菌株的推荐培养方法 : A Acetobacter 醋杆菌属 方法 3 注 :25,CO2 环境培养 3-4 天 Budvicia 布戴约维采菌属 方法 1 Achromobacter 无色菌属 方法 1 Acinetobacter 不动杆菌属 方法 1 Burkholderia 伯克霍尔德菌属 方法 1 Actinobacillus 放线杆菌属 方法 3 C Campylobacter 弯曲杆菌属 方法 6 Actinomyces 放线菌属 方法 4 注 : 巧克力琼脂是 Campylobacter jejuni( 空肠弯曲杆菌 ) 的最适普遍生长 Aerococcus 气球菌属 方法 1 培养基 在最初的 48 小时培养期内不要揭开接过种的平皿 Aeromonas 气单胞菌属 方法 2 Candida 念珠菌属 方法 5 注 : Aeromonas hydrophila ( 嗜水气单胞菌 ) 应在 30 培养 Aeromonas salmonicida( 杀鲑气单胞菌 ) 应在 25 培养 Capnocytophaga Cedecea 噬二氧化碳菌属西地西菌属 方法 3 方法 1 Alcaligenes 产碱杆菌 方法 1 Cellulosimicrobium 纤维微细菌 方法 1 Alicyclobacillus 脂环酸芽孢杆菌 方法 12 Citrobacter 柠檬酸杆菌属 方法 1 Aggregatibacter 方法 3 Cladosporium 枝孢霉属 方法 5 Clostridium 注 :Alicyclobcilus acidoterrestris( 酸土环脂芽孢杆菌 ) (MBL, 目录 #0265) 梭菌属 方法 4 注 :C.difficile( 艰难索命菌 ),C.sordellii 和 C.tetani( 破伤风梭 应在 45 培养. 菌 ) 只在厌氧血平板上生长 Alloiococcus 方法 2 Amylomyces 方法 5 Aneurinibacillus 硫胺素芽孢杆菌属 方法 1 Aquaspirillum 水螺菌属 方法 1 注 :25 培养 6 天 Arcanobacterium 隐秘杆菌属 方法 2 Arthrobacter 节杆菌属 方法 1 Aspergillus 曲霉菌属 方法 5 D E Corynebacterium 棒杆菌属 方法 1 Cronobacter 方法 1 Cryptococcus 隐球菌属 方法 5 注 :Cryptococcus( 隐球菌 ) 需在 25 培养 Deinococcus 异常球菌属 方法 1 Delftia 代尔夫特菌属 方法 1 Edwardsiella 爱德华菌属 方法 1 Eggerthella 埃格特菌 方法 4 Eikenella 埃肯菌属 方法 3 注 :A.flavus 在标准计数琼脂上生长不佳 Elizabethkingia 方法 1 B Bacillus 芽孢杆菌属方法 1 注 : 一些芽孢杆菌属经证明在室温下保存后的传代恢复率高于在 2-8 Enterobacter 肠道细菌属 方法 1 Enterococcus 肠球菌属 方法 1 中保存的 Bacteroides 拟杆菌属 方法 4 Erysipelothrix 丹毒丝菌属 方法 2 Escherichia coli 大肠杆菌 方法 1 注 :Bacteroides ureolyticus( 解尿素拟杆菌 ) 应培养 5 天, 菌落很小 有 Exiguobacterium 微小杆菌属方法 1 时需要多传 1 代以得到足够的供试菌落 Bifidobacterium 双岐杆菌属方法 4 F Finegoldia 芬戈尔德菌属 方法 4 Bordetella 支气管炎博德特 方法 20 注 : 厌氧环境中培养 72-96 小时 bronchiseptica Bordetella 氏菌副百日咳博德特 方法 21 Flavobacterium 产黄菌属 方法 1 注 :30 培养 parapertussis 氏菌 Bordetella pertussis 百日咳博代氏杆 方法 21 菌 Brevibacillus 短芽孢杆菌属 方法 1 Brevundimonas 短波单胞菌属 方法 1 Brochothrix 环丝菌属 方法 1 G Fluoribacter 荧光杆菌属 方法 8 Fusarium 镰刀菌属 方法 5 Fusobacterium 梭杆菌属 方法 4 Gardnerella 加德纳氏菌属 方法 9 Gemella 兼性双球菌属 方法 4 Geobacillus 地芽孢杆菌属 方法 1
注 :Geobacillus stearothemophilus ( 嗜热脂肪地芽孢杆菌 ) 需在 55 培养 gallisepticum H I K Geobacillus stearothemophilus,mbl 货号为 0137, 在羊血琼脂上不 能生长 Geotrichum 地丝菌属 方法 5 Haemophilus 嗜血杆菌属 方法 3 Hafnia 哈夫尼菌属 方法 1 Issatchenkia 伊萨酵母属 方法 5 Kingella 金氏杆菌属 方法 2 注 : 在 5-10% CO2 环境下培养 Klebsiella 克雷伯氏菌属 方法 1 Kloeckera 克勒克酵母属 方法 5 N Mycoplasma hominis 人型支原体 方法 13 Mycoplasma orale 口腔支原体 方法 15 Mycoplasma 肺炎支原体 方法 14 pneumoniae Mycoplasma synoviae 滑液支原体 方法 19 方法 18 Mycoplasma hyorhinis Myroides 香味菌属 方法 2 Neisseria 奈瑟 ( 氏 ) 菌属 方法 3 注 : 巧克力平板是 Neisseria ( 奈瑟菌 ) 的最适普遍生长培养基 在最 Kocuria 库克菌属方法 1 初的 48 小时培养期内不要揭开接过种的平皿 注 :K.rosea 应在 25 培养 Lactobacillus 乳酸杆菌方法 2 Nocardia 诺卡氏菌属 方法 1 Novosphingobium 鞘脂单胞菌属 方法 1 注 :L. acidophilus ( 嗜酸乳杆菌 ), L. casei ( 干酪乳杆菌 ), L. delbrueckii ( 德 氏乳杆菌 ) 和 L.gasseri ( 加氏乳杆菌 ) 需用方法 11 L Lactococcus 乳球菌属 方法 2 Leclercia 勒克菌属 方法 1 Legionella 军团菌属 方法 8 Listeria 李斯特菌属 方法 1 O P Ochrobactrum 苍白杆菌属 方法 1 Oligella 寡源杆菌属 方法 2 Paecilomyces 拟青霉属 方法 5 Paenibacillus 类芽胞杆菌属 方法 1 M Lysinibacillus 方法 1 Macrococcus 巨型球菌属 方法 1 Malassezia 马拉色氏霉菌属 方法 16 Mannheimia 曼海姆菌属 方法 1 Methylobacterium 甲基杆菌属 方法 1 注 :25 培养 5 天 在标准平板计数琼脂上生长最好 在 TSA 或非选 注 :P.larvae 应在 30 度, 需氧环境中培养 Parabacteroides 方法 4 Parvimonas 方法 4 注 : P.micra 厌氧环境培养 5-7 天 Pasteurella 巴斯德菌属 方法 2 Pediococcus 片球菌属 方法 11 择性羊血琼脂平板上不生长 注 :Pediococcus damnosus( 有害片球菌 ) 在 MRS 肉汤,25 度环境培养 Microbacterium 细杆菌属 方法 1 注 :30 培养 Micrococcus 微球菌属 方法 1 注 : 胰蛋白胨大豆琼脂或非选择性的羊血琼脂对于货号 0337 和 0689 是最好的生长培养基 Microsporum 小孢菌属 方法 5 注 :Microsporum canis( 犬小孢子菌 ) 在沙保氏葡萄糖琼脂上生长 困难 Moraxella 莫拉菌属 方法 2 Morganella 摩根 ( 氏 ) 菌属 方法 1 Mycobacterium 分枝杆菌属 方法 7 注 :Mycobacterium gordonae ( 戈氏分枝杆菌 ), Mycobacterium terrae ( 地 分枝杆菌 ) 和 Mycobacterium Tuberculosis ( 结核病分枝杆菌 ) 可能 需要一个月的培养时间 Mycoplasma 鸡毒支原体 方法 17 48-72 小时 肉汤变浑浊, 需从 MRS 肉汤转入 MRS 琼脂上次代 培养, 需在 25,5%-10%CO2 环境培养 5-7 天 或者冻干颗粒 直接在 MRS 琼脂,25,5%-10%CO2 环境培养 5-7 天 Penicillium 青霉菌属 方法 5 Peptoniphilus 嗜胨菌属 方法 4 注 : 在厌氧环境中培养 72-96 小时 Peptostreptococcus 消化链球菌属 方法 4 Plesiomonas 毗邻单胞菌属 方法 1 Porphyromonas 卟啉菌属 方法 4 注 : 需在厌氧环境培养 5-7 天 Prevotella 普雷沃菌属 方法 4 注 : 需在厌氧环境培养 5-7 天 Propionibacterium 丙酸菌属 方法 4 注 : 需在厌氧环境培养 3-5 天
Proteus sp 变形菌属方法 1 着菌龄 培养基种类 传代数变化而降低, 传菌最适是在脑心浸 出液琼脂中加入 4 mcg/ml 万古霉素 P.hauseri 在血琼脂或 TSA 平板上生长最好 Prototheca 原壁菌属 方法 5 Providencia 普罗威登斯菌属 方法 1 Stenotrophomonas 寡养单胞菌 方法 1 Streptococcus 链球菌属 方法 2 注 : Streptococcus cricetus( 大鼠链球菌 ) 应在微需氧环境培养 Pseudomonas 假单胞菌属方法 1 Streptococcus ( 链球菌属 )(MicroBioLogics 货号 #0978) 应在 注 :Pseudmonas fluorescens( 荧光假单胞菌 ) 应在 25 培养, 假单胞菌属 CO2 中生长 (MicroBioLogics 目录号 0162) 应在 30 培养 Streptomyces 链霉菌属方法 5 R Ralstonia 雷尔氏菌 方法 1 Raoultella 拉乌尔菌属 方法 1 Rhizopus 根霉菌属 方法 5 Rhodococcus 红球菌属 方法 2 T 注 :Streptomyces ( 链霉菌属 ) 不能在马铃薯葡萄糖琼脂上生长 Thermoanaerobacteriu m 高温厌氧芽孢杆菌属 方法 4 注 : T. thermosaccharolyticum ( 嗜热细菌热解糖热厌氧杆菌, Rhodotorula 红酵母属方法 5 MicroBioLogics 目录号 0728) 的最初生长培养基应为庖肉培养 S Saccharomyces 酵母菌属方法 5 注 : 沙保氏葡萄糖琼脂和沙保氏葡萄糖 Emmons 琼脂是 Saccharomyces 基 45 C, 培养 72 小时 然后接种至厌氧血平板上培养,45 C, 72 小时, 厌氧环境培养 ( 酵母菌属 ) 生长的最适培养基 Salmonella 沙门氏菌属 方法 1 Scopulariopsis 帚霉属 方法 5 Serratia 粘质沙雷菌 方法 1 Shewanella 希瓦氏菌属 方法 10 Shigella 志贺菌属 方法 1 Sordaria 粪壳菌属 方法 5 U V Y Trichophyton 发癣菌属 方法 5 Trichosporon 毛孢子菌属 方法 5 Ureaplasma 脲原体属 方法 13 Veillonella 韦荣球菌属 方法 4 Vibrio 弧菌属 方法 10 Virgibacillus 枝芽孢菌属 方法 1 Yarrowia 亚罗酵母属 方法 5 注 :Sordaria ( 粪壳菌属 ) 在沙保氏葡萄糖 Emmons 琼脂上比在沙保氏葡萄糖琼脂上更易形成孢子 Sphingobacterium 鞘氨醇杆菌属方法 1 Z Yersinia 耶尔森菌属 方法 1 Zygosaccharomyces 接合酵母属 方法 5 Sphingomonas 鞘氨醇单胞菌属方法 1 注 :Z.bailii, MBL 目录号 01011, 在非选择性羊血平板, 营 养琼脂或 TSA 上生长不佳 Sporidobolus SP. 方法 5 Staphylococcus 葡萄球菌属方法 1 注 : 对于金黄色葡萄球菌,MBL 货号为 0158, 对万古霉素的耐受力随