糖发酵管

常用培养基配方 ( 微生物学与微生物检验学部分 ) 渤海大学生物与食品科学学院 2006 年 3 月 1

目 录 01 糖发酵管 02 ONPG 培养基 03 西蒙氏柠檬酸盐培养基 04 缓冲葡萄糖水 (MR 和 VP 试验用 ) 05 克氏柠檬酸盐培养基 06 丙二酸钠培养基 07 葡葡糖铵培养基 08 Hugh-Leifson 培养基 (O/F 试验用 ) 09 马尿酸钠培养基 10 营养明胶 11 苯丙氨酸培养基 12 氨基酸脱羧酶试验培养基 13 水 ( 靛基质试验用 ) 14 硫酸亚铁 ( 硫化氢试验用 ) 15 尿素 16 氰化钾 (KCN) 培养基 17 氧化酶试验 18 硝酸盐培养基 19 细胞色素氧化酶试验 20 过氧化氢酶试验 21 过氧化物酶试验 22 磷酸盐缓冲液 23 明胶磷酸盐缓冲液 24 乳酸 - 苯酚溶液 25 肉浸液肉汤 26 肉浸液 27 牛肉 ( 或牛心 ) 消化汤 28 血消化汤 29 豆粉 30 血 31 营养 32 营养肉汤 33 乳糖胆盐发酵管 34 乳糖发酵管 35 EC 肉汤 36 缓冲水 (BP) 37 氯化镁孔雀绿增菌液 (MM) 38 四硫磺酸钠煌绿增菌液 (TTB) 39 四硫磺酸钠煌绿增菌液 ( 换用方法 ) 40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液 (SC) 2

41 GN 增菌液 42 肠道菌增菌肉汤 43 亚硫酸铋 (BS) 44 DHL 45 HE 46 SS 47 WS 48 麦康凯 49 伊红美蓝 (EMB) 50 三糖铁 (TSI) 51 三糖铁 ( 换用方法 ) 52 克氏双糖铁 (KI) 53 克氏双糖铁 ( 换用方法 ) 54 葡萄糖半固体发酵管 55 5% 乳糖发酵管 56 CAYE 培养基 57 Honda 氏产毒肉汤 58 Elek 氏培养基 ( 毒素测定用 ) 59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基 60 胰水 61 Rustigian 氏尿素培养液 62 结晶紫增菌液 63 蔗糖 64 嗜盐菌选择性 65 3.5% 三糖铁 66 血 67 3.5% 生化试验培养基 68 改良磷酸盐缓冲液 ( 小肠结肠炎耶尔森氏菌专用 ) 69 CIN-1 培养基 70 嗜盐性试验培养基 71 改良 Y 培养基 72 改良克氏双糖 73 快速硫化氢 (H 2 S) 试验 74 DNA 酶甲基绿 (DTA) 75 Cary-Blair 氏运送培养基 76 Skirrow 氏培养基 77 TTC 78 甘氨酸培养基 79 改良磷酸盐缓冲液 80 氯化镁孔雀绿肉汤 81 胰酪胨大豆肉汤 82 Baird-Parker 氏培养基 83 7.5% 肉汤 84 匹克氏肉汤 3

85 甘露醇卵黄多粘菌素 86 3.8% 柠檬酸钠溶液 87 酪蛋白 88 木糖 - 明胶培养基 89 庖肉培养基 90 卵黄培养基 91 亚硫酸盐 - 多粘菌素 - 磺胺嘧啶 (SPS) 92 液体硫乙醇酸盐培养基 (FT) 93 含铁牛奶培养基 94 动力 - 硝酸盐培养基 (A 法 ) 95 动力 - 硝酸盐培养基 (B 法 ) 96 血清肉汤 97 马丁氏肉汤 98 明胶培养基 99 察氏培养基 100 高盐察氏培养基 101 马铃薯葡萄糖 (PDA) 102 马铃薯 103 孟加拉红培养基 104 玉米粉 105 大米粉培养基 106 亚硒酸盐煌绿增菌液 107 煌绿肉汤增菌液 108 肠毒素产毒培养基 109 0.1% 水稀释剂 110 半固体 4

01 糖发酵管 牛肉膏 磷酸氢二钠 (Na2HPO4 12H2O) 2g 0.2% 滇麝香草酚蓝溶液 12mL ph7.4 制法 : 1 葡萄糖发酵管按上述成分配好后, 按 0.5% 加入葡萄糖, 分装于有一个倒置小管的小试管内, 121 高压灭菌 15min 2 其他各种糖发酵管可按上述成分配好后, 分装每瓶 100mL,121 高压灭菌 15min 另将各种糖类分别配好 10% 溶液, 同时高压灭菌 将 5mL 糖溶液加入于 100mL 培养基内, 以无菌操作分装小试管 注 : 蔗糖不纯, 加热后会自行水解者, 应采用过滤法除菌 试验方法 : 从斜面上挑取小量培养物接种, 于 36 ±1 培养, 一般观察 2~3d 迟缓反应需观察 14~30d 02 ONPG 培养基 邻硝基酚 β-d- 半乳糖昔 (ONPG) 60mg (O-Nitrophenyl-β-D-galactopyranoside) 0.01mol/L 磷酸钠缓冲液 (ph7.5) 10mL 1% 水 (PH7.5) 30mL 制法 : 将 ONPG 溶于缓冲液内, 加入水, 以过滤法除菌, 分装于 10mm 75mm 试管, 每管 0.5mL, 用橡皮塞塞紧 试验方法 : 自斜面上挑取培养物 1 满环接种, 于 36±1 培养 1~3h 和 24h 观察结果 如果 β - 半乳糖苷酶产生, 则于 1~3h 变黄色, 如无此酶则 24h 不变色 03 西蒙氏柠檬酸盐培养基 硫酸镁 (MgSO4 7H2O) 0.2g 磷酸二氢铵 磷酸氢二钾 柠檬酸钠 0.2% 溴麝香草酚蓝溶液 40mL 5

ph6.8 制法 : 先将盐类溶解于水内, 校正 ph, 再加, 加热溶化 然后加入指示剂, 混合均匀后分装试管,121 高压灭菌 15min 放成斜面 试验方法 : 挑取少量培养物接种, 于 36±1 培养 4d, 每天观察结果 阳性者斜面上有菌落生长, 培养基从绿色转为蓝色 04 缓冲葡萄糖水 (MR 和 VP 试验用 ) 磷酸氢二钾 多胨 7g 葡萄糖 ph7.0 制法 : 溶化后校正 ph, 分装试管, 每管 1mL,121 高压灭菌 15min 甲基红 (MR) 试验 : 自斜面挑取少量培养物接种本培养基中, 于 36±1 培养 2~5d, 哈夫尼亚菌则应在 22~25 培养 滴加甲基红试剂一滴, 立即观察结果 鲜红色为阳性, 黄色为阴性 甲基红试剂配法 :10mg 甲基红溶于 30mL95% 乙醇中, 然后加入 20mL V-P 试验 : 用培养物接种本培养基中, 于 36±1 培养 2~4d 哈夫尼亚菌则应在 22~25 培养 加入 6%α- 萘酚 - 乙醇溶液 0.5mL 和 40% 氢氧化钾溶液 0.2mL, 充分振摇试管, 观察结果 阳性反应立刻或于数分钟内出现红色, 如为阴性, 应放在 36±1 下培养 4h 再进行观察 05 克氏柠檬酸盐培养基 柠檬酸钠 葡萄糖 0.2g 酵母浸膏 0. 单盐酸半胱氨酸 0. 磷酸二氢钾 0.2% 酚红溶液 6mL 1 制法 : 加热溶解, 分装试管,121 高压灭菌 15min 放成斜面 试验方法 : 用培养物接种整个斜面, 在 36±1 培养 7d, 每天观察结果 阳性者培养基变为 红色 酵母浸膏 硫酸铵 2g 磷酸氢二钾 0.6g 磷酸二氢钾 0.4g 2g 丙二酸钠 06 丙二酸钠培养基 6

0.2% 溴麝香草酚蓝溶液 12mL ph6.8 制法 : 先将酵母浸膏和盐类溶解于水, 校正 ph 后再加入指示剂, 分装试管,121 高压灭菌 15min 试验方法 : 用新鲜的培养物接种, 于 36±1 培养 48h, 观察结果 阳性者由绿色变为蓝色 07 葡葡糖铵培养基 硫酸镁 (MgSO4 7H2O) 0.2g 磷酸二氢铵 磷酸氢二钾 葡萄糖 2g 0.2% 溴麝香草酚蓝溶液 40mL ph6.8 制法 : 先将盐类和糖溶解于水内, 校正 ph, 再加, 加热溶化, 然后加入指示剂, 混合均匀后分装试管,121 高压灭菌 15min, 放成斜面 试验方法 : 用接种针轻轻触及培养物的表面, 在盐水管内做成极稀的悬液, 肉眼观察不见混浊, 以每一接种环内含菌数在 20~100 之间为宜 将接种环灭菌后挑取菌液接种, 同时再以同法接种普通斜面一支作为对照 于 36±1 培养 24h 阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长; 阴性者不生长, 但在对照培养基上生长良好 如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果 注 : 容器使用前应用清洁液浸泡 再用清水 冲洗干净, 并用新棉花做成棉塞, 干热灭菌后使用 如果操作时不注意, 有杂质污染时, 易造成假阳性的结果 08 Hugh-Leifson 培养基 (O/F 试验用 ) 2g 磷酸氢二钾 0. 4g 葡萄糖 0.2% 溴麝香草酚蓝溶液 12mL ph7.2 制法 : 将和盐类加水溶解后, 校正 ph 至 7.2 加入葡萄糖 煮沸, 溶化, 然后加入指示剂 混匀后, 分装试管,121 高压灭菌 15min, 直立凝固备用 试验方法 : 从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种, 同时接种两支培养基, 其中一支于接种后滴加溶化的 1% 液于表面, 高度约 1cm, 于 36±1 培养 09 马尿酸钠培养基 马尿酸钠 7

肉浸液 100mL 制法 : 将马尿酸钠溶解于肉浸液内, 分装于小试管内, 并于管壁画一横线 以标志管内液面高度, 高压灭菌 121 20min 试剂 : 三氯化铁 (FeCl3 6H2O)12g, 溶于 2% 盐酸溶液 100mL 中即成 试验方法 : 用纯培养物接种, 于 42 培养 48h, 观察培养液是否到达试管壁上记号处, 如不足时, 用补足至原量 经离心沉淀, 吸取上清液 0.8mL, 加入三氯化铁试剂 0.2mL, 立即混合均匀, 经 10~15min, 观察结果 结果 : 出现恒久之沉淀物为阳性 10 营养明胶 牛肉膏 明胶 1 ph6.8~7.0 制法 : 加热溶解 校正至 ph7.4~7.6, 分装小管,121 高压灭菌 10min, 取出后迅速冷却, 使其凝固 复查最终 ph 应为 6.8~7.0 试验方法 : 用培养物穿刺接种, 放在 22~25 培养, 每天观察结果, 记录液化时间 或放在 36 士 1 培养, 每天取出, 放冰箱内 30min 后再观察结果 11 苯丙氨酸培养基 酵母浸膏 DI- 苯丙氨酸 ( 或 L- 苯丙氨酸 ) 2g 磷酸氢二钠 12g 制法 : 加热溶解后分装试管,121 高压灭菌 15min, 使成斜面 试验方法 : 自斜面上挑取大量培养物, 移种于苯丙氨酸, 在 36±1 培养 4h 或 18~24h 滴加 10% 三氯化铁溶液 2~3 滴, 自斜面培养物上流下, 苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色 12 氨基酸脱羧酶试验培养基 酵母浸膏 葡萄糖 1.6% 滇甲酚紫 - 乙醇溶液 1mL L- 氨基酸或 DL- 氨基酸 0.5 或 /100mL ph6.8 制法 : 除氨基酸以外的成分加热溶解后, 分装每瓶 100mL, 分别加入各种氨基酸 : 赖氨酸 精氨酸和鸟氨酸 L- 氨基酸按 0.5% 加入,DL- 氨基酸按 1% 加入 再行校正 ph 至 6.8 对照培养基 8

不加氨基酸 分装于灭菌的小试管内, 每管 0.5mL, 上面滴加一层液体石蜡,115 高压灭菌 10min 试验方法 : 从斜面上挑取培养物接种, 于 36±1 培养 18~24h, 观察结果 氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱, 培养基应呈紫色 阴性者无碱性产物, 但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色 对照管应为黄色 13 水 ( 靛基质试验用 ) ( 或胰 ) ph7.4 制法 : 按上述成分配制, 分装小试管,121 高压灭菌 15min 靛基质试剂柯凡克试剂 : 将 对二甲氨基苯甲醛溶解于 75mL 戊醇中 然后缓慢加入浓盐酸 25mL 欧 - 波试剂 : 将 对二甲氨基苯甲醛溶解于 95mL95% 乙醇内 然后缓慢加入浓盐酸 20mL 试验方法 : 挑取小量培养物接种, 在 36±1 培养 1~2d, 必要时可培养 4~5d 加入柯凡克试剂约 0.5mL, 轻摇试管, 阳性者于试剂层呈深红色 ; 或加入欧 - 波试剂约 0.5mL, 沿管壁流下, 覆盖于培养液表面, 阳性者于液面接触处呈玫瑰红色 注 : 中应含有丰富的色氨酸 每批买来后, 应先用已知菌种鉴定后方可使用 14 硫酸亚铁 ( 硫化氢试验用 ) 牛肉膏 酵母浸膏 硫酸亚铁 0.2g 硫代硫酸钠 0. 12g ph7.4 制法 : 加热溶解, 校正 ph, 分装试管,115 高压灭菌 15min, 取出直立候其凝固 试验方法 : 挑取培养物, 沿管壁穿刺, 于 36±1 培养 1~2d, 观察结果 产硫化氢者使培养基变为黑色 注 : 肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生, 应采用三糖铁或本培养基 葡萄糖 磷酸二氢钾 2g 0.4% 酚红溶液 3mL 15 尿素 9

20% 尿素溶液 100mL ph7.2±0.1 制法 : 将除尿素和以外的成分配好, 并校正 ph, 加入, 加热溶化并分装烧瓶 121 高压灭菌 15min 冷至 50~55, 加入经除菌过滤的尿素溶液 尿素的最终浓度为 2%, 最终 ph 应为 7.2±0.1 分装于灭菌试管内, 放成斜面备用 试验方法 : 挑取培养物接种, 在 36±1 培养 24h, 观察结果 尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色 16 氰化钾 (KCN) 培养基 磷酸二氢钾 0.22 磷酸氢二钠 5.64g 0.5% 氰化钾溶液 20mL ph7.6 制法 : 将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶,121 高压灭菌 15min 放在冰箱内使其充分冷却 每 100mL 培养基加入 0.5% 氰化钾溶液 2.0mL( 最后浓度为 1 10000), 分装于 12mm 100mm 灭菌试管, 每管约 4mL, 立刻用灭菌橡皮塞塞紧, 放在 4 冰箱内, 至少可保存两个月 同时, 将不加氰化钾的培养基作为对照培养基, 分装试管备用 17 氧化酶试验 试剂 : 1% 盐酸二甲基对苯二胺溶液 : 少量新鲜配制, 干冰箱内避光保存 1%α- 萘酚 - 乙醇溶液 试验方法 : 取白色洁净滤纸沾取菌落 加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴, 阳性者呈现粉红色, 并逐渐加深 ; 再加 α- 萘酚溶液一滴, 阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色 阴性于两分钟内不变色 以毛细吸管吸取试剂, 直接滴加于菌落上, 其显色反应与以上相同 18 硝酸盐培养基 硝酸钾 0.2g 蛋白 ph7.4 制法 : 溶解, 校正 ph, 分装试管, 每管约 5mL,121 高压灭菌 15min 硝酸盐还原试剂 : 甲液 : 将对氨基苯磺酸 0.8g 溶解于 2.5mol/L 乙酸溶液 100mL 中 乙液 : 将甲萘胺 0. 溶解于 2.5mol/L 乙酸溶液 100mL 中 试验方法 : 接种后在 36±1 培养 1~4d, 加入甲液和乙液各一滴, 观察结果 硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色 注 : 本试验阴性的原因有三 : 细菌不能还原硝酸盐 ; 亚硝酸盐继续分解, 生成氨和氮 ; 培养基不 10

适于细菌的生长 如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解, 可再加入锌粉少许, 可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色 19 细胞色素氧化酶试验 试剂 : 1% 盐酸二甲基对苯二胺溶液 1%α- 萘酚 - 乙醇溶液 试验方法 : 取 37 ( 或低于 37 ) 培养 20h 的斜面培养物一支, 将两种试剂各 2~3 滴, 从斜面上端滴下, 并将斜面略加倾斜, 使试剂混合液流经斜面上的培养物 如系平板培养物, 则可用试剂混合液滴在菌落上 结果 : 于 2min 内呈现蓝色者为阳性 阳性培养物大多数于半分钟内出现强阳性反应,2min 以后出现微弱或可疑反应均作为阴性结果 20 过氧化氢酶试验 试剂 :3% 过氧化氢溶液 : 临用时配制 试验方法 : 挑取固体培养基上菌落一接种环, 置于洁净试管内, 滴加 3% 过氧化氢溶液 2mL, 观察结果 结果 : 于半分钟内发生气泡者为阳性, 不发生气泡者为阴性 21 过氧化物酶试验 试剂 :2% 儿茶酚溶液 3% 过氧化氢溶液 试验方法 : 挑取固体培养基上菌落一接种环, 置于洁净试管内, 滴加 2% 儿茶酚溶液 1mL 及 3% 过氧化氢溶液 1mL 静置于室温(20 ) 中 30~60min, 观察结果 结果 : 阳性反应, 细菌变为黑褐色 ; 阴性反应, 细菌不变色 注 : 过氧化物酶的作用可受氰化钾的抑制 22 磷酸盐缓冲液 储存液磷酸二氢钾 34g 1mol/L 氢氧化钠溶液 175mL 825mL ph7.2 制法 : 先将磷酸盐溶解于 500mL 中, 用 1mol/L 氢氧化钠溶液校正 ph 后, 再用稀释至 稀释液 : 取储存液 1.25mL, 用稀释至 分装每瓶 100mL 或每管 10mL,121 高压灭菌 15min 23 明胶磷酸盐缓冲液 明胶磷酸氢二钠 ph6.2 2g 4g 11

制法 : 加热溶解, 校正 ph,121 高压灭菌 15min 24 乳酸 - 苯酚溶液 苯酚 乳酸 ( 比重 1.21) 甘油 10mL 制法 : 将苯酚在水中加热溶解, 然后加入乳酸及甘油 用途 : 检验真菌形态时用 25 肉浸液肉汤 绞碎牛肉 500g 磷酸氢二钾 2g 制法 : 将绞碎之去筋膜无油脂牛肉 500g 加, 混合后放冰箱过夜, 除去液面之浮油, 隔水煮沸半小时, 使肉渣完全凝结成块, 用绒布过滤, 并挤压收集全部滤液, 加水补足原量 加入 和磷酸盐, 溶解后校正 ph7.4~7.6 煮沸并过滤, 分装烧瓶,121 高压灭菌 30min 26 肉浸液 肉浸液肉汤 (PH7.4) 17~ 制法 : 加热溶化, 分装烧瓶或试管,121 高压灭菌 30min 根据需要, 倾注平板或放成斜面 27 牛肉 ( 或牛心 ) 消化汤 绞碎牛肉 ( 或牛心 ) 1000g 15% 氢氧化钠溶液 27mL 胰蛋白酶 40mL 三氯甲烷 1mL 2000mL 制法 : 1 称取碎牛肉, 加, 隔水加热到 80, 维持 15min 2 加氢氧化钠溶液, 对 ph 试纸呈弱碱性, 冷至 40 3 加胰蛋白酶 氯仿, 在 36±1 放置 4~5h, 每小时摇动一二次 4 4h 后, 吸取上层液 5mL 于试管中, 加 5% 硫酸铜溶液 0.1mL 4% 氢氧化钠溶液 5mL, 混合之 若呈红色, 则不须再消化, 可由温箱取出 5 加入 15% 乙酸溶液 45mL, 对 ph 试纸呈酸性 6 煮沸 15min, 使胰蛋白酶破坏, 冷后, 放冰箱内一夜 12

7 次日吸取上层清液, 加, 并加水补足原量, 煮沸 8 校正 ph7.4~7.6( 加 15% 氢氧化钠溶液约 10mL), 加热, 用滤纸过滤, 分装烧瓶,121 高压灭菌 20min 注 :1 此培养基可作为培养基的基础, 不需加 2 胰蛋白酶之配制 : 称取去脂绞碎的猪胰 500g, 加入乙醇 500mL 1500mL, 混合之, 装人玻塞瓶内 每日摇匀三次 3d 后, 用绒布过滤挤出其汁, 加盐酸至 0.05%, 放冰箱内保存备用 28 血消化汤 绞碎猪胃 100g 绞碎猪血块 100g 浓盐酸 10mL 制法 : 1 洗涤猪胃, 除去油脂, 保留胃粘膜, 用绞肉机绞碎 2 用绞肉机将猪血块绞碎 3 将加热至 55, 加入猪胃 猪血块和盐酸, 置 55 水浴中 24h, 时常加以摇动 4 从水浴内取出, 加入 1moL/L 碳酸钠溶液 5mL, 煮沸 10min, 置于冰箱内一夜 5 吸取上层清液, 加磷酸氢二钾, 加热至 75, 加入 1mol/L 碳酸钠溶液 45mL, 煮沸, 校正 ph7.2~7.4 6 用滤纸过滤, 分装烧瓶,121 高压灭菌 20min 29 豆粉 牛心消化汤 (PH7.4~7.6) 黄豆粉浸液 50mL 制法 : 将加在牛心消化汤内, 加热溶解, 过滤 加入豌豆粉浸液, 分装每瓶 100mL,121 高压灭菌 15min 豌豆粉浸液制法 : 取豌豆粉, 加入 100mL 置 100 水浴内加热 1h, 放于冰箱中过夜 吸取上清液即为豌豆浸液 30 血 ph7.4~7.6 豆粉 100mL 脱纤维羊血 ( 或兔血 ) 5~10mL 制法 : 加热溶化, 冷至 50, 以灭菌手续加入脱纤维羊血, 摇匀, 倾注平板 亦可分装灭菌试管, 置成斜面 亦可用其他营养丰富的基础培养基配制血 31 营养 13

牛肉膏 15~ 制法 : 将除以外的各成分溶解于内, 加入 15% 氢氧化钠溶液约 2mL, 校正 ph 至 7.2~ 7.4 加入, 加热煮沸, 使溶化 分装烧瓶,121 高压灭菌 15min 注 : 此培养基可供一般细菌培养之用, 可倾注平板或制成斜面 如用于菌落计数, 量为 1.5%; 如作成平板或斜面, 则应为 2% 32 营养肉汤 蛋白陈 牛肉膏 ph7.4 制法 : 按上述成分混合, 溶解后校正 ph, 分装烧瓶, 每瓶 225mL,121 高压灭菌 15min 33 乳糖胆盐发酵管 猪胆盐 ( 或牛 羊胆盐 ) 乳糖 0.04% 滇甲酚紫水溶液 25mL ph7.4 制法 : 将 胆盐及乳糖溶于水中, 校正 ph, 加入指示剂, 分装每管 10mL, 并放入一个小倒管,115 高压灭菌 15min 注 : 双料乳糖胆盐发酵管除外, 其他成分加倍 34 乳糖发酵管 乳糖 0.04% 溴甲酚紫水溶液 25mL ph7.4 制法 : 将及乳糖溶于水中, 校正 ph, 加入指示剂, 按检验要求分装 30mL 10mL 或 3mL, 并放入一个小倒管,115 高压灭菌 15min 注 :1 双料乳糖发酵管除外, 其他成分加倍 230mL 和 10mL 乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用,3mL 乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用 35 EC 肉汤 14

胰 3 号胆盐 ( 或混合胆盐 ) 1. 乳糖 磷酸氢二钾 4g 磷酸二氢钾 1. 制法 : 将上述成分混合, 溶解后, 分装有发酵倒管的试管中,121 高压灭菌 15min, 最终 ph 为 6.9±0.2 36 缓冲水 (BP) 磷酸氢二钠 (Na2HPO4 12H2O) 9g 磷酸二氢钾 1. ph7.2 制法 : 按上述成分配好后以大烧瓶装,121 高压灭菌 15min 临用时无菌分装每瓶 225mL 注 : 本培养基供沙门氏菌前增菌用 37 氯化镁孔雀绿增菌液 (MM) 甲液胰 8g 磷酸二氢钾 1.6g 乙液氯化镁 ( 化学纯 ) 40g 100mL 4.13.3 丙液 0.4% 孔雀绿水溶液 制法 : 分别按上述成分配好后,121 高压灭菌 15min 备用 临用时取甲液 90mL 乙液 9mL 丙液 0.9mL, 以无菌操作混合即可 注 : 本培养基亦称 Rappaport 10(R10) 增菌液 38 四硫磺酸钠煌绿增菌液 (TTB) 基础培养基多胨或眎胨胆盐碳酸钙硫代硫酸钠 30g 15

碘溶液碘 6g 碘化钾 20mL 制法 : 将基础培养基的各成分加入中, 加热溶解, 分装每瓶 100mL 分装时应随时振摇, 使其中的碳酸钙混匀 121 高压灭菌 15min 备用 临用时每 100mL 基础培养基中加入碘溶液 2mL 0.1% 煌绿溶液 1mL 39 四硫磺酸钠煌绿增菌液 ( 换用方法 ) 基础液 : 牛肉膏 碳酸钙 4 将各成分加入于中, 加热至约 70 溶解, 校正 ph 至 7.0±0.1,121 高压灭菌 20min 硫代硫酸钠溶液硫代硫酸钠 (Na 2 S 2 O 3 5H 2 O) 50g 加至 100mL 碘溶液碘片 碘化钾 2 加至 100mL 将碘化钾充分溶解于是少量的中, 加入碘片, 振摇玻瓶至碘片全部溶解, 再加入至规定量 贮于棕色玻瓶内, 紧塞瓶盖备用 煌绿水溶液煌绿 0. 100mL 存放暗处, 不少于 1d, 使其自然灭菌 牛胆盐溶液干燥的牛胆盐 100mL 煮沸溶解,121 高压灭菌 20min 制备 : 基础液 900mL 硫代硫酸钠溶液 100mL 碘液 20mL 煌绿溶液 2mL 牛胆盐溶液 50mL 临用前, 按上列顺序, 以无菌操作依次加入于基础液中, 每加入一种成分, 均应摇匀后再加入另一种成分 分装于灭菌瓶中, 每瓶 100mL 40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液 (SC) 16

乳糖 4g 亚硒酸氢钠 4g 磷酸氢二钠 5. 磷酸二氢钾 4.58 L- 胱氨酸 0.0 1%L- 胱氨酸 - 氢氧化钠溶液的配法 : 称取 L- 胱氨酸 0.( 或 DL- 胱氨酸 0.2g), 加 1mol/L 氢氧化钠 1.5mL, 使溶解, 再加入 8.5mL 即成 制法 : 将除亚硒酸氢钠和 L- 胱氨酸以外的各成分溶解于 900mL 中, 加热煮沸, 俟冷备用 另将亚硒酸氢钠溶解于 100mL 中, 加热煮沸, 候冷, 以无菌操作与上液混合 再加入 1%L - 胱氨酸 - 氢氧化钠溶液 1mL 分装于灭菌瓶中, 每瓶 100mL,pH 应为 7.0±0.1 41 GN 增菌液 胰 葡萄糖 甘露醇 2g 柠檬酸钠 去氧胆酸钠 0. 磷酸氢二钾 4g 磷酸二氢钾 1. ph7.0 制法 : 按上述成分配好, 加热使溶解, 校正 ph 分装每瓶 225mL,115 高压灭菌 15min 42 肠道菌增菌肉汤 1 葡萄糖 牛胆盐 磷酸氢二钠 8g 磷酸二氢钾 2g 煌绿 0.01 ph7.2 制法 : 按上述成分配好, 加热使溶解, 校正 ph 分装每瓶 30mL,115 高压灭菌 15min 43 亚硫酸铋 (BS) 牛肉膏 17

葡萄糖 硫酸亚铁 0. 磷酸氢二钠 4g 煌绿 0.02 柠檬酸铋铵 2g 亚硫酸钠 6g 18~ ph7.5 制法 : 1 将前面 5 种成分溶解于 300mL 中 2 将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用 50mL 溶解 3 将于 600mL 中煮沸溶解, 冷至 80 4 将以上三液合并, 补充至, 校正 ph, 加 0.5% 煌绿水溶液 5mL, 摇匀 冷至 50~55, 倾注平皿 注 : 此培养基不需高压灭菌 制备过程不宜过分加热. 以免降低其选择性 应在临用前一天制备, 贮存于室温暗处 超过 48h 不宜使用 44 DHL 牛肉膏 乳糖 蔗糖 去氧胆酸钠 硫代硫酸钠 2. 柠檬酸钠 柠檬酸铁铵 中性红 0.0 18~ ph7.3 制法 : 将除中性红和以外的成分溶解于 400mL 中, 校正 ph 再将于 600mL 蒸 馏水中煮沸溶解, 两液合并, 并加入 0.5% 中性红水溶液 6mL, 待冷至 50~55, 倾注平板 45 HE 脙胨牛肉膏乳糖蔗糖水杨素胆盐 12g 12g 12g 2g 18

18~ 0.4% 溴麝香草酚蓝溶液 16mL Andrade 指示剂 20mL 甲液 20mL 乙液 20mL ph7.5 制法 : 将前面七种成分溶解于 400mL 内作为基础液 ; 将加入于 600mL 内, 加热溶解 加入甲液和乙液于基础液内, 校正 ph 再加入指示剂, 并与液合并, 待冷至 50~ 55, 倾注平板 注 :1 此培养基不可高压灭菌 2 甲液的配制硫代硫酸钠 34g 柠檬酸铁铵 4g 100mL 2 乙液的配制去氧胆酸钠 100mL 2Andrade 指示剂酸性复红 0. 1mol/L 氢氧化钠溶液 16mL 100mL 将复红溶解于中, 加入氢氧化钠溶液 数小时后如复红褪色不全, 再加氢氧化钠溶液 1~2mL 46 SS 基础培养基 : 牛肉膏 眎胨 三号胆盐 3. 17g 再将两液混合,121 高压灭菌 15min, 保存备用 完全培养基 : 基础培养基 100mL 乳糖 柠檬酸钠 8. 硫代硫酸钠 8. 10% 柠檬酸铁溶液 10mL 1% 中性红溶液 2.5mL 0.1% 煌绿溶液 0.33mL 加热溶化基础培养基, 按比例加入上述染料以外之各成分, 充分混合均匀, 校正至 ph7.0, 加入中性红和煌绿溶液, 倾注平板 注 :1 制好的培养基宜当日使用, 或保存于冰箱内于 48h 内使用 19

2 煌绿溶液配好后应在 10d 以内使用 3 可以购用 SS 的干燥培养基 47 WS 2 胨 12g 牛肉膏 乳糖 12g 蔗糖 12g 十二烷基硫酸钠 2g 1 Andrade 指示剂 20mL 0.4% 溴麝香草酚蓝溶液 16mL 甲液 20mL ph7.0 制法 : 除指示剂和甲液外, 将其他成分加热溶解, 不需消毒, 校正 ph 后加入指示剂和甲液, 倾 注平板应呈草绿色 注 :1 供沙门氏菌分离用 2Andrade 指示剂和甲液的配制均见 HE 48 麦康凯 17g 眎胨 猪胆盐 ( 或牛 羊胆盐 ) 17g 乳糖 0.01% 结晶紫水溶液 10mL 0.5% 中性红水溶液 5mL 制法 : 1 将 眎 胆盐和溶解于 400mL 中, 校正 ph7.2 将加入 600mL 加热溶解 将两液合并, 分装于烧瓶内,121 高压灭菌 15min 备用 2 临用时加热溶化, 趁热加入乳糖, 冷至 50~55 时, 加入结晶紫和中性红水溶液, 摇匀后倾注平板 注 : 结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌 49 伊红美蓝 (EMB) 乳糖 20

磷酸氢二钾 2g 17g 2% 伊红 Y 溶液 20mL 0.65% 美蓝溶液 10mL ph7.1 制法 : 将 磷酸盐和溶解于中, 校正 ph, 分装于烧瓶内,121 高压灭菌 15min 备用 临用时加入乳糖并加热溶化, 冷至 50~55, 加入伊红和美蓝溶液, 摇匀, 倾注平板 50 三糖铁 (TSI) 牛肉膏 乳糖 蔗糖 葡萄糖 硫酸亚铁铵 Fe(NH 4 ) 2 (SO 4 ) 2 6H 2 O 0.2g 硫代硫酸钠 0.2g 12g 酚红 0.02 ph7.4 制法 : 将除和酚红以外的各成分溶解于中, 校正 ph 加入, 加热煮沸, 以溶化琼 脂 加入 0.2% 酚红水溶液 12.5mL, 摇匀 分装试管, 装量宜多些, 以便得到较高的底层 121 高压灭菌 15min 放置高层斜面备用 51 三糖铁 ( 换用方法 ) 1 眎胨 牛肉膏 酵母膏 乳糖 蔗糖 葡萄糖 硫酸亚铁 0.2g 硫代硫酸钠 0. 12g 酚红 0.02 ph7.4 制法 : 将除和酚红以外的各成分溶解于中, 校正 ph 加入, 加热煮沸, 以溶化琼 21

脂 加入 0.2% 酚红水溶液 12.5mL, 摇匀 分装试管, 装量宜多些, 以便得到较高的底层 121 高压灭菌 15min, 放置高层斜面备用 52 克氏双糖铁 (KI) 上层培养基成分血消化汤 (ph7.6) 500mL 6. 硫代硫酸钠 0. 硫酸亚铁铵 0. 乳糖 0.2% 酚红溶液 5mL 下层培养基成分血消化汤 (ph7.6) 500mL 2g 葡萄糖 0.2% 酚红溶液 5mL 制法 : 1 取血消化汤按上层和下层的用量, 分别加入, 加热溶解 2 分别加入其他各种成分 将上层培养基分装于烧瓶内 ; 将下层培养基分装于灭菌 12mm 100mm 试管内, 每管约 2mL 115 高压灭菌 10min 3 将上层培养基放在 56 水浴箱内保温 ; 将下层培养基直立放在室温内, 使其凝固 4 当下层培养基凝固后, 以无菌手续将上层培养基分装于下层培养基的上面, 每管约 1.5mL, 放成斜面 53 克氏双糖铁 ( 换用方法 ) 牛肉膏 酵母膏 乳糖 葡萄糖 柠檬酸铁铵 0. 硫代硫酸钠 0. 12g 酚红 0.02 ph7.4 制法 : 将除和酚红以外的各成分溶解于中, 校正 ph 加入, 加热煮沸, 以溶化琼 脂 加入 0.2% 酚红水溶液 12.5mL, 摇匀 分装试管, 装量宜多些, 以便得到比较高的底层 121 高压灭菌 15min 放置高层斜面备用 54 葡萄糖半固体发酵管 22

牛肉膏 0. 0. 1.6% 溴甲酚紫酒精溶液 0.1mL 葡萄糖 0. 100mL ph7.4 制法 : 将 牛肉膏和加入于水中, 校正 ph 后加入加热溶解, 再加入指示剂和 葡萄糖, 分装小试管, 灭菌 121 15 min 55 5% 乳糖发酵管 0.2g 0. 乳糖 2% 溴麝香草酚蓝水溶液 1.2mL 100mL ph7.4 制法 : 除乳糖以外的各 溶解于 50mL 内, 校正 ph 将乳糖溶解于另外 50mL 内, 分别灭菌 121 15min, 将两液混合, 以无菌操作分装于灭菌小试管内 注 : 在此培养基内, 大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于 1d 内发酵 56 CAYE 培养基 此培养基附在肠毒素诊断试剂盒内, 如无此培养基, 亦可用 Honda 氏产毒肉汤 57 Honda 氏产毒肉汤 水解酪蛋白 酵母浸膏粉 2. 磷酸氢二钠 1 葡萄糖 微量元素 0.5mL ph7.5 制法 : 溶解后校正 ph, 高压灭菌 121 15min, 待冷至 45~50 时, 加入林可霉素溶液, 每毫升培养基内含 90μg 微量元素配方 : 硫酸镁, 氯化铁 0., 氯化钻 2g, 100mL 58 Elek 氏培养基 ( 毒素测定用 ) 胨麦芽糖 23

乳糖 0.7g 1 40% 氢氧化钠溶液 1.5mL ph7.8 制法 : 用 500mL 溶解以外的成分, 煮沸, 并用滤纸过滤 用 1mo1/L 氢氧化钠校正 ph 用另外 500mL 加热溶解 将两液混合, 分装试管 10mL 或 20mL 121 高压灭菌 15min 临用时加热溶化倾注平板 59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基 甲液 : 胰 乙液 : 磷酸氢二钠 9. 丙液 : 氯化镁 (MgCl 2 6H 2 O) 40g 400mL 以上分别在 121 灭菌 15min 丁液 : 孔雀绿 0.2g 100mL 戊液 : 羧苄青霉素 1mg/mL 制法 : 取甲液 620mL 乙液 160mL 丙液 212mL 混合, 再加入丁液 6.4mL 和戊液 2.4mL, 即为 培养基 分装灭菌烧瓶, 每瓶 100mL, 或灭菌试管 10mL 60 胰水 胰 ph7.0 制法 : 将上述成分溶解, 校正 ph 分装试管,121 高压灭菌 15min 61 Rustigian 氏尿素培养液 尿素 20.0g 酵母浸膏 0. 磷酸二氢钾 (KH 2 PO 4 ) 0.09 磷酸氢二钠 (Na 2 HPO 4 ) 0.09 酚红 0.0 制法 : 将上述 于中溶解, 校正 ph 为 6.8±0.2 不要加热, 过滤除菌, 无菌分装于 灭菌小试管 中, 每管为约 3mL 用途 : 尿素酶试验用 24

62 结晶紫增菌液 40g 0.01% 结晶紫溶液 5mL ph9.0 制法 : 除结晶紫外, 其他按上述 配好, 加热溶解 约加 30% 氢氧化钾溶液 4.5mL, 校正 ph 加热煮沸, 过滤 再加入结晶紫溶液, 混合后分装试管 121 高压灭菌 15min 63 蔗糖 牛肉膏 50g 蔗糖 18g 0.2% 溴麝香草酚蓝溶液 20mL ph7.8 制法 : 将牛肉膏 及溶解于中, 校正 ph 加入, 加热溶解, 过滤 加入指示剂, 分装烧瓶 100mL 121 高压灭菌 15min 备用 临用前在 100mL 培养基内加入蔗糖, 加热溶化并冷至 50, 倾注平板 64 嗜盐菌选择性 40g 17g 0.01% 结晶紫溶液 5mL ph8.7 制法 : 除结晶紫和外, 其他按上述成分配好, 校正 ph 加入, 加热溶解 再加入结晶紫溶液, 分装烧瓶, 每瓶 100mL 65 3.5% 三糖铁 三糖铁 30g 制法 : 按前面三糖铁, 再加入 30g, 分装试管,121 高压灭菌 15min 放置高层斜面备用 66 血 25

酵母膏 70g 磷酸氢二钠 甘露醇 结晶紫 0.00 1 制法 : 调 ph8.0 加热 30min( 不必高压 ), 待冷至 45 左右时, 加入新鲜人或兔血 (5%~10%) 混合 均匀, 倾注平皿 67 3.5% 生化试验培养基 成分及制法 : 根据所需糖的种类按 3.2 配制 只是将含量改为 3.5%,pH 为 7.7 68 改良磷酸盐缓冲液 ( 小肠结肠炎耶尔森氏菌专用 ) 磷酸氢二钠 (Na 2 HPO 4 8.2 磷酸二氢钠 (NaH 2 PO 4 H 2 O) 1.2g (NaCl) 5.0g 三号胆盐 1. 山梨醇 制法 : 将磷酸盐及溶于中, 再加入三号胆盐及山梨醇, 溶解后校正 ph 为 7.6, 分装 试管, 于 121 高压灭菌 15min, 备用 69 CIN-1 培养基 基础培养基 胰胨 20.0g 酵母浸膏 2.0g 甘露醇 20.0g 1.0g 去氧胆酸钠 2.0g 硫酸镁 (MgSO 4 7H 2 O) 0.0 12.0g 950mL ph7.5±0.1 将基础培养基高压灭菌 Irgasan 以 95% 的乙醇作溶剂, 溶解二苯醚, 配成 0.4% 的溶液, 待基础液冷至 80 时, 加入 1mL 混匀 冷至 50 时, 加入 : 中性红 (3mg/mL) 10.0mL 结晶紫 (0.1mg/mL) 10.0mL 头孢菌素 (1.5mg/mL) 10.0mL 26

新生霉素 (0.25mg/mL) 10.0mL 最后不断搅拌着加入 10.0mL 的 10% 氯化锶, 倒平皿 70 嗜盐性试验培养基 2g 按不同量加 100mL ph7.7 制法 : 配制 2% 水, 校正 ph, 共配制 5 瓶, 每瓶 100mL 每瓶分别加入不同量的: (1) 不加 ;(2);(3)7g;(4)9g;(5)1 待溶解后分装试管 121 高压灭菌 15min 71 改良 Y 培养基 15.0g 5.0g 乳糖 10.0g 草酸钠 2.0g 去氧胆酸钠 6.0g 三号胆盐 5.0g 丙酮酸钠 2.0g 孟加拉红 40mg 水解酪蛋白 5.0g 17.0g 制法 : 将上述 混合, 于 121 高压灭菌 15min, 待冷至 45 左右时, 倾注平皿 最终 ph7.4±0.1 72 改良克氏双糖 牛肉膏 酵母膏 山梨醇 葡萄糖 柠檬酸铁铵 0. 硫代硫酸钠 0. 12g 酚红 0.02 ph7.4 制法 : 将除和酚红以外的各成分溶解于中, 校正 ph 加入 0.02% 酚红水溶液 12.5mL, 摇匀 分装试管, 装量宜多些, 以便得到比较高的底层 121 高压灭菌 15min, 放置高层斜面备 用 27

73 快速硫化氢 (H 2 S) 试验 制法 : A 液 : 布氏杆菌肉汤 970mL 无水磷酸氢二钠 1.18g 无水磷酸二氢钾 0.2 2g 加热溶解, 高压灭菌,121 15min 加入 B 液 10% 硫酸亚铁 ( 含 7H 2 O),C 液 10% 偏亚硫酸氢钠,D 液 10% 丙酮酸钠 上述 B C D 溶液均新鲜配制, 用除菌滤膜过滤 将此除菌溶液各 1mL 混合后再入 A 液中, 无菌调 ph 到 7.3, 无菌分装, 每管 3mL, 塞紧备用 74 DNA 酶甲基绿 (DTA) DNA 2.0g 植物 5.0g 胰 15.0g 5.0g (1.5%) 15.0g ph7.3 制法 : 称取各成分后, 加水徐徐加热, 避免形成饼溶性丝状物,121 15min 高压 甲基绿配制 (MG): 配制 0.5% 的甲基绿水溶液 用等体积氯仿作 5~7 次抽提, 直到氯仿层无色为止 过滤除菌, 置 4 保存 每 100mL 灭菌溶化的 DTA 培养基加 1mL(MG) 染料液, 甲基绿最终浓度为 0.005% 75 Cary-Blair 氏运送培养基 硫乙醇酸钠 1. 磷酸氢二钠 1. 1% 氯化钙溶液 9mL ph8.4 制法 : 除氯化钙外, 其他均按上述成分配制, 加热溶解 冷至 50, 加入氯化钙溶液, 校正 ph 到 8.4 分装试管, 每支 5mL, 或注入具有胶塞的瓶内 121 高压灭菌 15min 用途 : 作空肠弯曲杆菌 霍乱弧菌 沙门氏菌 志贺氏菌采样时用 注 : 在该采样管中的标本, 只能保存 72h 76 Skirrow 氏培养基 15.0g 胰 (tryptone) 2. 28

酵母浸膏 5.0g 5.0g 15.0g 1000.0mL 甲氧苄氨嘧啶 (trimethoprim,tmp) 5.0mg 万古霉素 (vancomycin) 10.0mg 多粘菌素 B(polymyxin) 2500.0 国际单位冻溶马血 70.0mL 制法 : 1 除甲氧苄氨嘧啶 抗生素和冻溶马血外, 将其他成分混合溶解 校正 ph7.4, 装瓶 100mL 121 高压灭菌 15min, 备用 此即血基础培养基 2 临用前, 加热溶解基础培养基, 冷至 60 每 100mL 基础培养基中, 加入冻溶两次的马血 7mL 及 TMP 抗生素混合液 0.5mL, 摇匀, 倾注无菌平板 用途 : 分离空肠弯曲菌之用 说明 : 1 TMP 抗生素混合液配法: 先配成乳酸 TMP 溶液, 以乳酸 62mg( 约 1~2 滴 ) 混合于 100mL 灭菌中, 然后再加入 TMP 溶液 取乳酸 TMP 溶液 5mL, 再加入万古霉素及多粘菌素 B, 摇匀后, 即成 TMP 抗生素混合液 2 TMP 抗生素的作用 TMP( 甲氧苄氨嘧啶, 又称磺胺增效剂或抗菌增效剂 ): 为广谱抗菌剂, 其抗菌谱与磺胺嘧啶相似, 但对链球菌及大多数革兰氏阴性菌的抗菌作用较磺胺嘧啶强, 与抗生素合用有协同作用, 能增加杀菌和抑菌作用 万古霉素 : 是窄谱抗菌素, 仅对革兰氏阳性菌有较强的杀菌和抑菌作用, 如溶血性链球菌 草绿色链球菌 肠球菌 金黄色葡萄球菌等 多粘菌素 B: 仅限于对革兰氏阴性菌, 如对产气杆菌 流感杆菌 痢疾杆菌等 TMP 和抗生素称量必须正确, 操作必须慎重小心 77 TTC 胰 (tryptone) 17.0g 大豆胨 3.0g 葡萄糖 6.0g 2. 硫乙醇酸钠 0. 15.0g L- 胱氨酸 - 盐酸 (L-Cys HCl) 0.2 亚硫酸钠 0. 1% 氯化血红素溶液 0.5mL 1% 维生素 K1 溶液 0.1mL 2,3,5- 氯化三苯四氮唑 (TTC) 0.4g 制法 : 1 除 1% 氯化血红素 维生素 K1 和 TTC 外, 将其他 混合, 加热溶解 L- 胱氨酸先 用少量氢氧化钠溶解后加入, 校正 ph7.2, 然后加入预先配成的氯化血红素和维生素 K1, 充分摇 29

匀 装瓶, 每瓶 100mL 121 高压灭菌 15min, 备用 2 临用前, 溶解基础, 每 100mL 基础培养基中, 加入 TTC40mg, 充分摇匀, 倾注无菌平板 3 说明将可疑空肠弯曲菌接种于平板上, 在微氧环境下, 于 43 培养 48h 阳性菌落呈紫红色, 空肠弯曲菌呈阳性反应 ; 胎儿和肠道弯曲菌呈阴性反应 1% 氯化血红素溶液和 1% 维生素 K1 溶液配法 : 称取氯化血红素 和 1mol/L 氢氧化钠 5mL 混合 再用稀释到 100mL, 即为 1% 氯化血红素溶液 称取维生素 K1 和纯乙醇 99mL 混合, 或用维生素 K1 针剂 78 甘氨酸培养基 布氏 (Brucella) 肉汤 1.6g 甘氨酸 (glycine)( 又称氨基乙酸 aminoacetic acid) 10.0g 制法 : 将以上成分混合, 加热溶解, 校正 ph7.0±0.2, 分装 13mm 100mm 试管, 每支约 4mL 左右,121 高压灭菌 15min, 备用 说明 : 空肠弯曲菌对甘氨酸有耐受性, 穿刺接种于甘氨酸培养基中, 置于微需氧环境下, 在 43 培养 48h 在培养基表面出现云雾状现象为阳性, 胎儿弯曲菌空肠亚种为阳性结果 79 改良磷酸盐缓冲液 磷酸氢二钠 (Na 2 HPO 4 ) 8.2 磷酸二氢钠 (NaH 2 PO 4 H 2 O) 1. (NaCl) 5.0g 1000.0mL 山梨醇 10.0g 胆盐 1. 制法 : 将磷酸盐及溶于中, 再加入山梨醇及胆盐, 溶解后, 校正 ph 为 7.6, 分装试 管 于 121 高压灭菌 15min, 备用 80 氯化镁孔雀绿肉汤 1% 胰胨水 ( 高压灭菌 ) 156mL 1/15mo1/L 磷酸氢二钠 (Na 2 HPO 4 ) 溶液 ( 高压灭菌 ) 40mL 40%(m/V) 氯化镁 (MgCl 2 6H 2 O) 水溶液 (100 煮沸数分钟 ) 53mL 0.2% 孔雀绿溶液 1.6mL 制法 : 将上述几种溶液按列出的容量混合, 即成氯化镁孔雀绿肉汤 分装试管, 每管 10mL, 于 4 可保存 10 个月 如若配氯化镁孔雀绿羧节青霉素肉汤, 除上述几种溶液外, 再配制羧节青霉素 (carpenicillin) 溶液 ( 溶解 1mg 于 1mL 水中 ), 将此溶液与其他溶液混合, 即成 81 胰酪胨大豆肉汤 胰酪胨 ( 或胰 ) 17g 30

植物 ( 或大豆 ) 100g 磷酸氢二钾 2. 葡萄糖 2. 制法 : 将上述成分混合, 加热并轻轻搅拌并溶解, 分装后,121 高压灭菌 15min, 最终 ph7.3±0.2 82 Baird-Parker 氏培养基 胰 牛肉膏 酵母膏 丙酮酸钠 甘氨酸 12g 氯化锂 (LiCl 6H 2 O) 950mL PH7.5 增菌剂的配法 :30% 卵黄盐水 50mL 与除菌过滤的 1% 亚蹄酸钾溶液 10mL 混合, 保存于冰箱内 制法 : 将各成分加到中, 加热煮沸至完全溶解 冷至 25, 校正 ph 分装每瓶 95mL,121 高压灭菌 15min 临用时加热溶化, 冷至 50, 每 95mL 加入预热至 50 的卵黄亚蹄酸钾增菌剂 5mL, 摇匀后倾注平板 培养基应是致密不透明的 使用前在冰箱储存不得超过 48h 83 7.5% 肉汤 牛肉膏 7 ph7.4 制法 : 将上述成分加热溶解, 校正 ph, 分装试管,121 高压灭菌 15min 84 匹克氏肉汤 含 1% 胰的牛心浸液 200mL 1:25000 结晶紫盐水溶液 10mL 1:800 三氮化钠溶液 10mL 脱纤维兔血 ( 或羊血 ) 10mL 制法 : 将上述已灭菌的各种成分, 用无菌手续依次混合, 分装于无菌试管内, 每管约 2mL, 保存于冰箱内备用 85 甘露醇卵黄多粘菌素 31

牛肉膏 甘露醇 1 0.2% 酚红溶液 13mL 50% 卵黄液 50mL 多粘菌素 B 100 国际单位 /ml ph7.4 制法 : 将前面五种成分加入于中, 加热溶解, 校正 ph, 加入酚红溶液 分装烧瓶, 每瓶 100mL,121 高压灭菌 15min 临用时加热溶化, 冷至 50, 每瓶加入 50% 卵黄液 5mL 及 多粘菌素 B10000 国际单位, 混匀后倾注平板 86 3.8% 柠檬酸钠溶液 柠檬酸钠 3.8g 100mL 制法 : 取柠檬酸钠 3.8g, 加到 100mL, 溶解后过滤, 装瓶,121 高压灭菌 15min 注 : 兔 ( 人 ) 血浆制备 : 取 3.8% 柠檬酸钠溶液一份加兔 ( 或人 ) 全血四份, 混好静置之, 则血球下降, 即可得血浆进行试验 87 酪蛋白 酪蛋白 牛肉膏 磷酸氢二钠 2g 1 0.4% 溴麝香草酚蓝溶液 12.5mL ph7.4 制法 : 将除指示剂外的各成分混合, 加热溶解 ( 但酪蛋白不溶解 ), 校正 ph 加入指示剂, 分装烧瓶,121 高压灭菌 15min 临用时加热溶化, 冷至 50, 倾注平板 注 : 将菌株划线接种于平板上, 如沿菌落周围有透明圈形成, 即为能水解酪蛋白 胰胨 酵母膏 木糖 磷酸氢二钠 明胶 1 0.2% 酚红溶液 25mL 88 木糖 - 明胶培养基 32

ph7.6 制法 : 将除酚红以外的各成分混合, 加热溶解, 校正 ph 加入酚红溶液, 分装试管,121 高压灭菌 15min, 迅速冷却 89 庖肉培养基 牛肉浸液 30g 酵母膏 磷酸二氢钠 葡萄糖 可溶性淀粉 2g 碎肉渣适量 ph7.8 制法 : 1 称取新鲜除脂肪和筋膜的碎牛肉 500g, 加 和 1mol/L 氢氧化钠溶液 25mL, 搅拌煮沸 15min, 充分冷却, 除去表层脂肪, 澄清, 过滤, 加水补足至 加入除碎肉渣外的各种成分, 校正 ph 2 碎肉渣经水洗后晾至半干, 分装 15mm 150mm 试管约 2~3cm 高, 每管加入还原铁粉 0.1~ 0.2g 或铁屑少许 将上述液体培养基分装至每管内超过肉渣表面约 1cm 上面覆盖溶化的凡士林或液体石蜡 0.3~0.4cm 121 高压灭菌 15min 90 卵黄培养基 1 基础培养基肉浸液 1 25~30g ph7.5 2 50% 葡萄糖水溶液 3 50% 卵黄盐水悬液 制法 : 制备基础培养基, 分装每瓶 100mL 121 高压灭菌 15min 临用时加热溶化, 冷至 50, 每瓶内加入 50% 葡萄糖水溶液 2mL 和 50% 卵黄盐水悬液 10~15mL, 摇匀, 倾注平板 91 亚硫酸盐 - 多粘菌素 - 磺胺嘧啶 (SPS) 胰酶消化酪 1 酵母膏 柠檬酸铁 0. 1 10% 亚硫酸钠水溶液 ( 新配 ) 5mL 0.12% 多粘菌素 B 硫酸盐水溶液 10mL 33

1.2% 磺胺嘧啶钠水溶液 10mL ph7.0 制法 : 前面五种成分配合后加热溶解, 校正 ph 分装每瓶 100mL,121C 高压灭菌 15min 临用时加热溶化, 冷至 50 按比例加入后 3 种溶液, 摇匀, 倾注平板 92 液体硫乙醇酸盐培养基 (FT) 胰酶消化酪 1 L- 胱氨酸 0. 葡萄糖 酵母膏 2. 硫乙醇酸钠 0. 刃天青 (Resazurin) 0.00 0.7 ph7.1 制法 : 煮沸溶解, 冷却后校正 ph, 分装试管, 每管 10mL,121 高压灭菌 15min 临用前隔水煮 沸 10min, 以驱除培养基中溶解的氧气, 迅速冷却 93 含铁牛奶培养基 新鲜全脂年奶 硫酸亚铁 50mL 制法 : 将硫酸亚铁溶解于中, 不断搅拌, 缓慢地加入于 牛奶中, 混匀 分装试管, 每管 10mL,121 高压灭菌 15min 本培养基必须新鲜设备 94 动力 - 硝酸盐培养基 (A 法 ) 牛肉膏 硝酸钾 ph7.0 制法 : 加热溶解, 校正 ph 分装试管, 每管 10mL,121 高压灭菌 15min 95 动力 - 硝酸盐培养基 (B 法 ) 34

牛肉膏 销酸钾 磷酸氢二钠 2. 半乳糖 甘油 ph7.4 制法 : 将以上各成分混合, 加热溶解, 校正 ph 分装试管,121 高压灭菌 15min 96 血清肉汤 在肉浸液肉汤 (3.1) 中按 10 1 以无菌操作加马 ( 或羊 兔 ) 血清即为血清肉汤 97 马丁氏肉汤 液 500mL 肉浸液 500mL 冰乙酸 6g 葡萄糖 制法 : 1 将液 500mL 与肉浸液 500mL 混合, 加热至 80, 加冰乙酸 1mL, 摇匀, 再煮沸 5min 2 加 15% 氢氧化钠溶液约 20mL, 校正 ph 至 7.2 3 加乙酸钠 6g, 再校正 ph 至 7.2 4 继续煮沸 10min, 用滤纸过滤 在每 肉汤内, 再加葡萄糖 然后装瓶, 每瓶 500mL 放置高压灭菌器内经 121 灭菌 15min, 备用 注 : 液的制备 : 取新鲜猪胃, 去脂绞碎 称取 350g 加 50 左右, 充分摇匀 再加盐酸 ( 化学纯, 比重 1.19)10mL, 经充分混合后, 置 56 温箱中消化 24h( 每小时搅拌 1~2 次 ), 消化完毕后, 加热, 用滤纸过滤, 备用 98 明胶培养基 牛肉膏 明胶 1 制法 : 将上述成分混合, 置流动蒸气灭菌器内, 加热溶解, 校正 ph 至 7.0~7.2, 用绒布过滤 分装试管,121 灭菌 15min, 备用 35

硝酸钠 磷酸氢二钾 硫酸镁 (MgSO4 7H2O) 0. 氯化钾 0. 硫酸亚铁 0.0 蔗糖 30g 制法 : 加热溶解, 分装后 121 灭菌 20min 用途 : 青霉 曲霉鉴定及保存菌种用 99 察氏培养基 100 高盐察氏培养基 硝酸钠 2g 磷酸二氢钾 硫酸镁 (MgSO 4 7H 2 O) 0. 氯化钾 0. 硫酸亚铁 0.0 60g 蔗糖 30g 制法 : 加热溶解, 分装后,115 高压灭菌 30min 必要时, 可酌量增加 用途 : 分离霉菌用 101 马铃薯葡萄糖 (PDA) 马铃薯 ( 去皮切块 ) 300g 葡萄糖 制法 : 将马铃薯去皮切块, 加, 煮沸 10~20min 用纱布过滤, 补加至 加入葡萄糖和, 加热溶化, 分装,121 高压灭菌 20min 用途 : 分离培养霉菌 102 马铃薯 马铃薯 ( 去皮切块 ) 200g 36

制法 : 同马铃薯葡萄糖 用途 : 鉴定霉菌用 103 孟加拉红培养基 葡萄糖 磷酸二氢钾 硫酸镁 (MgSO 4 7H 2 O) 0. 1/3000 孟加拉红溶液 100mL 氯霉素 0. 制法 : 上述各成分加入中溶解后, 再加孟加拉红溶液 另用少量乙醇溶解氯霉素, 加入培 养基中, 分装后,121 灭菌 20min 用途 : 分离霉菌及酵母 104 玉米粉 玉米粉 60g 15~18g 制法 : 将玉米粉加入中, 搅匀, 文火煮沸 1h, 纱布过滤, 加后加热溶化, 补足水量至 分装,121 灭菌 20min 用途 : 鉴定假丝酵母及霉菌 105 大米粉培养基 制法 : 将不含荧光物质的籼米挑去杂质和变质米粒, 磨成粗粉, 分装后 121 高压灭菌 20min 用途 : 霉菌产毒用 酵母浸膏 甘露醇 牛磺胆酸钠 20% 亚硒酸氢钠溶液 20mL 0.25mol/L 磷酸盐缓冲液 (ph7.0) 100mL 106 亚硒酸盐煌绿增菌液 37

2% 煌绿溶液 0.25mL 900mL 制法 : 1 将前面四种成分溶解于中 2 校正 ph, 当用于干鸡蛋白样品时,pH8.2±0.1; 用于其他干蛋品时,pH7.2±0.1; 用于冰蛋品时 ph7.0±0.1;121 高压灭菌 15min, 放冷备用 3 临用前加入灭菌的 20% 亚硒酸氢钠溶液及磷酸盐缓冲液, 复查混合液的 ph, 必要时进行校正 4 加入煌绿溶液定量分装于灭菌的烧瓶内, 每瓶 150mL, 于 1~5d 内使用 注 :120% 亚硒酸氢钠溶液 121 高压灭菌 15min 20.25mol/L 磷酸盐缓冲液 (ph7.0) 配法 : 磷酸氢二钾 ( 无水 ) 21.8g 磷酸二氢钾 ( 无水 ) 17. 121 高压灭菌 15min 后备用 107 煌绿肉汤增菌液 肉浸液肉汤 ( 或牛肉膏汤 ) 磷酸氢二钾 2% 煌绿溶液 0.5~10mL 制法 : 1 将肉浸液肉汤加入磷酸氢二钾 ( 原已有磷酸氢二钾者可不加 ), 校正 ph, 分装烧瓶, 每瓶 100mL,121 高压灭菌 20min 2 2% 煌绿水溶液于临用前配制 3 按比例 [ 见 GB 4789.19 94 食品卫生微生物学检验蛋与蛋制品检验 ] 于肉汤内加入煌绿溶液, 摇匀, 备用 注 :1 加入煌绿溶液时, 肉汤温度不宜过高, 一般以放冷为宜 2 煌绿的纯度不应低于 93% 108 肠毒素产毒培养基 胰消化酪蛋白 200mg( 氨基酸 ) 磷酸氢二钾 磷酸二氢钾 氯化钙 0. 硫酸镁 0.2g 芋酸 0.0 10~12g( 固体透析培养用 ) 38

ph7.2~7.4 制法 : 除外将所有成分混于水中, 溶解后调 ph7.2~7.4, 如用固体透析培养法再加入, 121 高压灭菌 30min 109 0.1% 水稀释剂 制法 : 溶解于中, 校正 ph 至 7.0,121 灭菌 15min 110 半固体 生肉膏 0. 0. 0.35~0.4g 100mL ph7.4 制法 : 按以上成分配好, 煮沸使溶解, 并校正 ph 分装小试管 121 高压灭菌 15min 直立凝固备用 注 : 供动力观察 菌种保存 H 抗原位相变异试验等用 39