223 CIK 细 胞 免 疫 治 疗 原 发 性 肝 癌 的 研 究 进 展 综 述 王 惠 成 冯 毅 戴 国 华 摘 要 : 细 胞 因 子 诱 导 的 杀 伤 细 胞 (CIK) 是 人 外 周 血 单 个 核 细 胞 在 体 外 经 多 种 细 胞 因 子 刺 激 后 获 得 的 异 质 细 胞, 兼 有 T 淋 巴 细 胞 的 强 大 抗 瘤 活 性 和 自 然 杀 伤 细 胞 (NK) 及 主 要 组 织 相 容 性 复 合 体 (MHC) 限 制 杀 瘤 特 点, 被 认 为 是 一 类 杀 瘤 活 性 强 和 抗 瘤 谱 广 的 新 型 抗 肿 瘤 效 应 细 胞 目 前,CIK 细 胞 免 疫 治 疗 已 成 为 继 手 术 放 射 治 疗 化 学 治 疗 之 后 的 第 四 种 治 疗 原 发 性 肝 癌 的 手 段, 在 肝 癌 的 综 合 治 疗 方 案 中,CIK 细 胞 免 疫 治 疗 在 提 高 患 者 治 愈 率 改 善 患 者 生 活 质 量 延 长 生 存 期 方 面 起 重 要 作 用, 显 示 出 良 好 的 应 用 前 景 此 文 从 细 胞 因 子 诱 导 的 杀 伤 细 胞 的 生 物 学 特 性 扩 增 培 养 杀 瘤 机 制 实 验 研 究 及 临 床 应 用 的 最 新 进 展 进 行 综 述 关 键 词 : 细 胞 因 子 ; 诱 导 ; 杀 伤 细 胞 ; 肝 癌 ; 细 胞 免 疫 DOI:10.3969/j.issn.1673 534X.2011.04.012 原 发 性 肝 癌 ( 以 下 简 称 肝 癌 ) 是 世 界 范 围 内 最 常 见 的 恶 性 肿 瘤 之 一, 每 年 大 约 有 63 万 的 新 发 病 例, 而 且 近 年 来 发 病 率 有 上 升 趋 势 肝 癌 患 者 的 病 程 短, 临 床 上 较 难 早 期 发 现, 确 诊 时 往 往 病 情 已 进 入 中 晚 期, 病 死 率 高 目 前 肝 癌 的 治 疗 主 要 是 以 手 术 切 除 肝 移 植 局 部 消 融 化 学 治 疗 栓 塞 及 其 他 局 部 区 域 治 疗 分 子 靶 向 治 疗 等, 但 这 些 方 法 的 治 疗 效 果 并 不 理 想, 因 为 肝 癌 患 者 体 内 天 然 免 疫 特 异 性 免 疫 功 能 低 下, 根 治 性 手 术 切 除 率 低, 手 术 后 复 发 率 高, 放 射 化 学 治 疗 疗 效 差, 易 发 生 肝 内 播 散 及 肝 外 转 移, 因 此 急 需 寻 找 新 的 有 效 方 法 来 治 疗 肝 癌 生 物 治 疗 已 经 成 为 肿 瘤 综 合 治 疗 中 的 第 四 种 模 式, 越 来 越 受 到 重 视 目 前 用 于 肿 瘤 生 物 治 疗 的 免 疫 活 性 细 胞 主 要 有 肿 瘤 浸 润 性 淋 巴 细 胞 (TIL) 树 突 状 细 胞 (DC) 以 及 细 胞 因 子 诱 导 的 杀 伤 细 胞 (CIK) 等 CIK 细 胞 是 一 种 新 型 的 免 疫 活 性 细 胞, 其 主 要 效 应 细 胞 的 表 面 标 志 为 CD3 + CD56 +, 与 其 他 过 继 性 免 疫 治 疗 细 胞 相 比, 具 有 增 殖 速 度 快 杀 [1] 瘤 活 性 高 杀 瘤 谱 广 等 优 点 研 究 表 明, 过 继 细 胞 免 疫 治 疗 对 抑 制 肝 癌 的 复 发 和 转 移 提 高 患 者 治 愈 率 改 善 患 者 生 活 质 量 延 长 生 存 期 都 具 有 重 要 作 用 此 文 简 要 概 述 CIK 细 胞 免 疫 治 疗 肝 癌 的 研 究 进 展 1 CIK 细 胞 的 生 物 学 特 性 1.1 CIK 细 胞 表 型 分 析 CIK 细 胞 在 肝 脏 中 分 布 较 多, 其 次 是 外 周 血 通 过 表 面 标 志 分 析,CIK 细 胞 为 CD3 CD56 双 阳 性 细 胞 群, 但 主 要 来 源 于 CD3 + CD56 - 的 T 淋 巴 细 胞, 作 者 单 位 :402260 重 庆 市 江 津 区 中 心 医 院 肝 胆 外 科 通 信 作 者 : 冯 毅,Email:cqfengyi2000@tom.com 而 非 CD3 - CD56 + 的 自 然 杀 伤 细 胞 CIK 细 胞 的 另 一 重 要 来 源 是 CD4 - CD8 + 的 T 淋 巴 细 胞 群 此 外, CD4 - CD8 - 的 T 淋 巴 细 胞 经 过 细 胞 因 子 诱 导 培 养 后, 其 中 56% 可 同 时 表 达 CD3 + CD56 +, 故 CIK 细 胞 也 可 来 源 于 CD4 - CD8 - 的 T 淋 巴 细 胞 这 种 双 阳 性 T 淋 巴 细 胞 按 细 胞 受 体 的 不 同, 进 一 步 可 分 为 CD3 + CD56 + αβt 淋 巴 细 胞 及 CD3 + CD56 + γδt 淋 巴 细 胞 两 个 亚 群 利 用 流 式 细 胞 仪 技 术 测 定 CIK 细 胞 表 面 的 CD 分 子 表 达 情 况 及 其 百 分 率, 显 示 CIK 细 胞 高 度 表 达 CD3 CD54 CD11a, 中 度 表 达 CD3CD56 HLA DR CD28CD54 CD28, 不 表 达 CD86 CD80 [2] 1.2 CIK 细 胞 的 增 殖 活 性 大 部 分 研 究 者 均 通 过 IFN γ IL 2 和 CD3 单 克 隆 抗 体 等 诱 导 外 周 血 或 脐 血 中 的 CIK 细 胞, 经 14~ 21d 扩 增 的 CIK 细 胞 比 例 可 由 0.10% ~0.13% 上 升 至 19.0% ~20.5%, 细 胞 数 量 平 均 增 加 250 倍, CIK 细 胞 的 高 增 殖 活 性 解 决 了 体 外 扩 增 效 应 细 胞 所 获 细 胞 数 目 少 的 难 题 1.3 CIK 细 胞 的 杀 瘤 活 性 CIK 细 胞 很 强 的 细 胞 毒 活 性 源 于 其 较 高 的 存 活 率 和 较 强 的 增 殖 能 力 研 究 发 现,CIK 细 胞 不 仅 以 非 主 要 组 织 相 容 性 复 合 体 (MHC) 限 制 杀 伤 靶 细 胞, 而 且 以 MHC 限 制 的 方 式 杀 伤 靶 细 胞,DC 以 MHC 限 制 的 方 式 递 呈 抗 原 给 CIK 细 胞 中 的 CD4 + 或 CD8 + T 淋 巴 细 胞, 使 其 中 的 细 胞 毒 T 淋 巴 细 胞 大 量 扩 增, 激 活 CIK 细 胞 中 的 MHC 限 制 性 杀 伤 功 能, 从 而 在 抗 肿 瘤 免 疫 治 疗 中, 清 除 残 存 的 肿 瘤 细 胞, 发 挥 更 强 大 的 细 胞 毒 作 用, 更 有 效 的 阻 止 或 延 缓 肿 瘤 复 发 CIK 细 胞 又 称 自 然 杀 伤 细 胞 样 T 淋 巴 细 胞, 既 具 有 T 淋 巴 细 胞 强 大 杀 伤 活 性, 也 具 有
224 国 际 消 化 病 杂 志 2011 年 8 月 第 31 卷 第 4 期 IntJDigDis,August25,2011,Vol.31,No.4 自 然 杀 伤 细 胞 杀 伤 时 的 非 MHC 限 制 性, 对 于 多 种 肿 瘤 细 胞 系, 包 括 自 然 杀 伤 敏 感 的 白 血 病 细 胞 株 K562 自 然 杀 伤 不 敏 感 的 宫 颈 癌 细 胞 Hela 人 B 淋 巴 瘤 细 胞 系 OCI LY8 等, 均 表 现 出 强 大 的 杀 伤 活 性 2 CIK 细 胞 的 制 备 扩 增 培 养 及 影 响 因 素 2.1 CIK 细 胞 的 来 源 目 前 CIK 细 胞 的 来 源 主 要 是 自 体 异 体 脐 血 骨 髓 CIK 细 胞 自 体 CIK 细 胞 可 以 避 免 交 叉 感 染, 而 且 肝 癌 患 者 的 CIK 细 胞 和 正 常 人 CIK 细 胞 一 样 对 肝 癌 细 胞 有 很 强 的 细 胞 毒 作 用, 且 对 肝 细 胞 无 损 伤 异 体 CIK 细 胞 多 来 自 于 正 常 人, 来 源 广 泛, 但 会 增 加 意 外 感 染 的 机 会 脐 血 CIK 前 体 细 胞 含 量 高, 容 易 扩 增 出 更 多 的 CIK 细 胞, 而 且 淋 巴 细 胞 的 绝 对 数 量 较 高, 含 有 一 定 比 例 的 幼 稚 细 胞, 具 有 较 强 的 增 殖 潜 力, 加 之 脐 血 来 源 广 泛, 因 此 脐 血 CIK 的 杀 伤 率 可 能 更 高 骨 髓 来 源 的 CIK 细 胞 增 殖 能 力 较 外 周 血 来 源 的 CIK 细 胞 稍 差, 但 仍 然 有 较 高 的 增 殖 能 力, 而 且 在 细 胞 毒 方 面 与 外 周 血 CIK 相 比, 无 显 著 性 差 异 [3] 2.2 CIK 细 胞 的 制 备 扩 增 培 养 CIK 细 胞 的 经 典 培 养 方 式 是 在 抽 取 患 者 外 周 血 后 分 离 出 单 个 核 细 胞, 加 入 多 种 细 胞 因 子 诱 导, 经 过 2 至 3 周 的 扩 增 培 养, 产 生 大 量 具 有 高 杀 伤 活 性 的 CIK 细 胞, 然 后 将 这 些 活 性 细 胞 回 输 到 患 者 体 内, 使 其 发 挥 抗 肿 瘤 作 用 CIK 细 胞 是 多 种 细 胞 因 子 共 同 诱 导 培 养 的 细 胞, 多 种 细 胞 因 子 的 作 用 是 相 互 协 同, 单 一 因 子 对 效 应 细 胞 的 增 殖 及 细 胞 毒 活 性 无 作 用 或 者 小 于 多 种 细 胞 因 子 的 联 合 作 用, 在 诱 导 CIK 细 胞 生 成 的 各 种 细 胞 因 子 中, 主 要 是 IFN γ IL 2 抗 CD3 单 抗,IFN γ 诱 导 外 周 血 单 个 核 细 胞 上 的 IL 2 受 体 表 达 增 加 ; 而 IL 2 可 激 活 T 细 胞, 促 进 细 胞 生 长 ; 抗 CD3 单 抗 可 刺 激 T 细 胞 有 丝 分 裂, 促 进 细 胞 增 殖 联 合 作 用 的 机 制 是 最 终 共 同 激 活 静 止 T 细 胞, 提 高 细 胞 表 达 IL 2 受 体 及 产 生 IL 2 的 能 力, 启 动 自 分 泌 途 径 IL 2 依 赖 的 T 细 胞 激 活 反 应 随 着 科 技 进 步 和 研 究 的 逐 步 深 入, 经 典 培 养 方 案 被 研 究 者 们 逐 步 优 化 2.2.1 DC 对 CIK 细 胞 扩 增 的 影 响 DC 是 迄 今 新 发 现 的 抗 原 加 工 递 呈 能 力 最 强 的 专 业 抗 原 递 呈 细 胞 (APC) 未 成 熟 DC 主 要 是 摄 取 和 加 工 处 理 抗 原, 成 熟 期 DC 则 主 要 是 递 呈 抗 原 并 活 化 初 始 型 T 细 胞, 这 是 DC 最 大 的 特 点 体 内 外 研 究 表 明,DC 能 诱 导 肿 瘤 宿 主 对 特 异 性 抗 原 的 免 疫 应 答, 提 高 肿 瘤 宿 主 免 疫 效 应 细 胞 的 细 胞 毒 活 性 DC 在 CD4T 细 胞 与 CD8T 细 胞 之 间 相 互 作 用 的 特 异 性 细 胞 免 疫 诱 发 机 制 中 处 于 中 心 环 节 研 究 表 明, 共 同 培 养 的 DC CIK 细 胞 较 单 纯 的 CIK 细 胞 相 比, 在 增 殖 能 力 效 应 细 胞 (CD3 + CD8 + CD3 + CD56 + ) 数 量 以 及 对 肿 瘤 的 细 胞 毒 作 用 等 方 面 都 显 著 增 强 [4] 有 文 献 [5] 报 道 源 于 健 康 人 的 DC 与 同 源 CIK 细 胞 共 培 养 后,DC CIK 细 胞 群 的 增 殖 活 性 和 杀 伤 活 性 较 单 纯 的 CIK 细 胞 更 高, 共 培 养 1 周 后,DC CIK 的 扩 增 倍 数 比 同 源 CIK 约 高 1 倍 2.2.2 双 特 异 性 抗 体 与 CIK 细 胞 双 特 异 抗 体 是 指 具 有 两 种 抗 原 结 合 特 性 的 人 工 抗 体, 它 的 两 个 抗 原 结 合 位 点 可 同 时 结 合 两 个 不 同 的 抗 原 双 特 异 抗 体 的 特 点 是 同 一 抗 体 分 子 上 的 两 个 抗 原 结 合 臂, 一 个 与 靶 抗 原 结 合, 另 一 个 与 免 疫 效 应 细 胞 上 的 标 志 抗 原 结 合 作 为 治 疗 使 用 的 双 特 异 抗 体, 一 方 面 利 用 抗 体 高 特 异 性 结 合 肿 瘤 相 关 抗 原 的 特 性, 另 一 方 面 和 免 疫 效 应 细 胞 诱 发 分 子 结 合, 发 挥 其 细 胞 毒 性 功 能, 裂 解 靶 向 的 肿 瘤 细 胞 双 特 异 性 抗 体 可 用 于 CIK 细 胞 的 导 向, 增 强 CIK 细 胞 对 恶 性 肿 瘤 的 细 [6] 胞 毒 活 性 支 黎 明 等 研 究 发 现, 金 标 双 特 异 抗 体 anti CD3xanti AFP 可 以 加 强 CIK 细 胞 对 AFP 阳 性 肝 癌 细 胞 的 杀 伤 作 用 2.2.3 CIK 细 胞 与 溶 瘤 病 毒 协 同 作 用 或 作 为 新 型 的 细 胞 载 体 溶 瘤 病 毒 是 指 能 特 异 性 感 染 肿 瘤 细 胞, 并 在 肿 瘤 细 胞 内 繁 殖, 最 终 裂 解 肿 瘤 细 胞 的 一 类 病 毒 它 不 感 染 正 常 细 胞 这 类 病 毒 并 非 外 源 基 因 的 载 体, 而 是 依 靠 病 毒 本 身 特 异 性 的 在 肿 瘤 细 胞 中 复 制 来 杀 死 裂 解 肿 瘤 细 胞 裂 解 细 胞 后 释 放 出 来 的 病 毒, 又 可 以 进 一 步 感 染 周 围 的 肿 瘤 细 胞 [7] Thorne 等 利 用 CIK 输 送 溶 瘤 病 毒, 为 小 鼠 提 供 有 效 的 抗 肿 瘤 治 疗, 它 直 接 针 对 肿 瘤 细 胞 而 不 影 响 周 围 的 正 常 组 织, 而 且 CIK 细 胞 能 够 在 深 入 小 鼠 体 内 肿 瘤 细 胞 后, 再 释 放 出 溶 瘤 病 毒, 提 示 CIK 细 胞 与 有 溶 瘤 作 用 的 病 毒 相 结 合 能 产 生 强 大 的 协 同 抗 肿 瘤 作 用, 可 一 定 程 度 上 克 服 靶 向 生 物 治 疗 中 存 在 的 递 呈 及 定 向 等 难 题, 有 可 能 成 为 新 的 抗 肿 瘤 方 案 2.2.4 转 基 因 CIK 细 胞 的 研 究 进 展 通 过 基 因 转 染 方 法 将 相 关 基 因 转 入 CIK, 改 变 CIK 的 某 些 特 性, 包 括 细 胞 因 子 如 IL 24 IL 2 IL 7 等 ; 共 刺 激 分 子 如 B7 分 子 家 族 细 胞 黏 附 分 子 和 LFA23 等, 多 [8] 药 耐 药 基 因 等 Yu 等 利 用 IL 24 基 因 修 饰 转 染 的 DC 和 CIK 细 胞 共 同 培 养, 发 现 与 非 转 染 组 相 比, 基 因 转 染 组 产 生 了 更 多 的 IL 24 IL 12 和 TNF α, 而 且 在 抗 肝 癌 细 胞 SMMC 7721 时 表 现 出 更 强 的 裂 解 肝 癌 细 胞 的 能 力, 显 示 出 更 大 的 抗 瘤 活
225 [9] 性 Nagaraj 等 将 包 含 人 IL 2 基 因 片 段 的 重 组 质 粒 用 电 穿 孔 法 导 入 CIK 细 胞, 体 外 检 测 发 现 转 染 后 CIK 细 胞 在 增 殖 率 和 细 胞 杀 伤 活 性 上 均 高 于 未 转 染 细 胞 也 有 报 道 利 用 电 穿 孔 法 可 以 成 功 的 将 多 药 耐 药 基 因 I 转 入 CIK 细 胞, 转 染 后 的 CIK 细 胞 表 达 Pgp( 阳 性 率 21% ~37%), 并 表 现 出 多 药 耐 药 性 转 染 后 CIK 细 胞 对 多 柔 比 星 的 耐 受 性 较 转 染 前 增 强 了 22.3~45.8 倍, 对 秋 水 仙 碱 的 耐 受 性 增 强 了 6.7~11.35 倍 转 染 前 后 CIK 细 胞 对 ECF7 肿 瘤 细 胞 的 杀 伤 活 性 在 3 组 不 同 效 靶 细 胞 比 的 杀 伤 活 性 比 较 中 均 无 改 变, 说 明 电 穿 孔 转 基 因 后,CIK 细 胞 依 然 保 持 了 原 有 的 杀 伤 肿 瘤 细 胞 的 活 性 3 CIK 细 胞 杀 伤 肿 瘤 的 作 用 机 制 一 般 认 为, 机 体 的 抗 肿 瘤 免 疫 主 要 为 细 胞 免 疫, 其 中 CD8 + T 细 胞 是 抗 肿 瘤 免 疫 的 主 要 效 应 细 胞, 其 杀 伤 肿 瘤 细 胞 的 机 制 如 下 : 一 是 通 过 其 抗 原 受 体 识 别 肿 瘤 细 胞 上 的 肿 瘤 抗 原 并 与 之 结 合, 通 过 溶 细 胞 作 用, 直 接 杀 伤 肿 瘤 细 胞 ; 二 是 通 过 分 泌 多 种 细 胞 因 子, 如 IFN γ TNF 而 间 接 杀 伤 肿 瘤 细 胞 CD4 + Th 通 过 其 辅 助 作 用 参 与 抗 肿 瘤 细 胞 免 疫 效 应, 主 要 是 释 放 细 胞 因 子 如 IL 2 IFN γ 等, 激 活 巨 噬 细 胞 NK 细 胞, 并 激 活 CD8 + T 细 胞, 增 强 其 杀 伤 能 力 关 于 CIK 细 胞 杀 伤 肿 瘤 的 作 用 机 制 还 不 是 十 分 清 楚, 目 前 的 研 究 显 示 CIK 可 能 通 过 3 种 途 径 发 挥 杀 瘤 的 作 用 3.1 CIK 细 胞 对 肿 瘤 细 胞 的 直 接 杀 伤 作 用 CIK 细 胞 对 肿 瘤 细 胞 的 直 接 杀 伤 作 用 可 能 是 通 过 黏 附 因 子 LFA 1/ICAM 1 途 径 与 肿 瘤 细 胞 结 合 后, 分 泌 含 大 量 BLT 酯 酶 的 颗 粒 这 些 颗 粒 能 穿 [10] 透 靶 细 胞 膜, 导 致 肿 瘤 细 胞 的 裂 解 当 CIK 细 胞 被 激 活 时 通 过 FcR 使 LFA 1 和 ICAM 1 的 结 合 状 态 由 低 亲 和 力 转 为 高 亲 和 力, 同 时 向 细 胞 间 排 除 BLT 的 胞 质 毒 性 颗 粒, 而 这 些 颗 粒 能 够 直 接 穿 透 封 闭 的 靶 细 胞 进 行 胞 吐, 从 而 导 致 肿 瘤 细 胞 的 裂 解 进 一 步 研 究 表 明 [11],GATA 3 和 T bet 基 因 参 与 了 LFA 1/ICAM 1 介 导 的 CIK 杀 瘤 途 径 3.2 CIK 细 胞 可 通 过 释 放 多 种 细 胞 因 子 杀 伤 肿 瘤 细 胞 进 入 体 内 活 化 的 CIK 细 胞 可 分 泌 多 种 细 胞 因 子, 不 仅 对 肿 瘤 细 胞 有 直 接 抑 制 作 用, 而 且 还 可 通 过 调 节 免 疫 系 统 间 接 杀 伤 瘤 细 胞 CIK 细 胞 可 以 分 泌 大 量 的 IFN γ IFN γ 是 由 CD4 + 或 CD8 + 细 胞 产 生 的 同 源 二 聚 体 糖 蛋 白, 可 通 过 多 种 途 径 直 接 或 间 接 发 挥 抗 肿 瘤 作 用, 增 强 自 然 杀 伤 细 胞 (NK) 巨 噬 细 胞 (MΦ) 以 及 细 胞 毒 性 T 细 胞 (CTL) 的 活 性 ;IFN γ 还 可 以 促 进 肿 瘤 细 胞 表 达 MHC Ⅰ 类 分 子, 有 助 于 肿 瘤 抗 原 的 递 呈 和 激 活 CTL [12] Kornacker 等 在 用 CIK 治 疗 慢 性 淋 巴 细 胞 白 血 病 (CLL) 的 研 究 中 发 现 CIK 分 泌 的 IFN γ 能 促 使 CLL 细 胞 上 ICAM 1 的 表 达, 从 而 能 提 高 细 胞 毒 效 应 细 胞 所 诱 导 的 调 亡 此 外,CIK 细 胞 还 能 分 泌 IL 2 IL 6 TNF α 及 GM CSF 等 一 些 细 胞 因 子, 增 强 细 胞 毒 作 用 3.3 诱 导 肿 瘤 细 胞 凋 亡 及 坏 死 CIK 细 胞 能 活 化 肿 瘤 细 胞 凋 亡 基 因, 使 得 Bcl 2 Bcl xl DADl 和 survivin 基 因 表 达 上 调 Verneris [13] 等 认 为, 某 些 肿 瘤 细 胞 ( 如 黑 色 素 瘤 卵 巢 癌 ) 通 过 FasL 介 导 淋 巴 细 胞 凋 亡 而 逃 脱 免 疫 清 除, 但 对 CIK 细 胞 敏 感, 这 是 因 为 在 CIK 细 胞 诱 导 的 过 程 中, 由 于 IFN γ 等 细 胞 因 子 的 作 用, 或 是 活 化 诱 导 的 细 胞 死 亡 机 制 导 致 对 Fas 敏 感 的 或 已 被 活 化 的 T 细 胞 逐 渐 被 选 择 性 清 除, 最 后 诱 导 获 得 的 CIK 细 胞 便 对 Fas 耐 受 此 外, 由 于 细 胞 型 Fas 相 关 死 亡 区 域 蛋 白 样 IL 1β 转 换 酶 抑 制 蛋 白 (cflip) 的 存 在 及 Fas 死 亡 区 结 合 蛋 白 (FADD) 水 平 很 低, 影 响 了 死 亡 信 号 的 转 导, 再 加 上 CIK 细 胞 高 水 平 表 达 抗 凋 亡 基 因, 这 些 原 因 共 同 导 致 了 CIK 细 胞 可 以 耐 受 表 达 FasL 的 肿 瘤 细 胞 诱 导 的 凋 亡, 从 而 对 其 进 行 有 效 的 杀 伤 此 外,CIK 细 胞 表 达 的 FasL 可 诱 导 肿 瘤 细 胞 凋 亡, 但 由 于 CIK 细 胞 有 抗 凋 亡 基 因 的 表 达, 因 此 在 体 内 能 抵 抗 FasL 阳 性 肿 瘤 细 胞 对 CIK 的 反 作 用, 故 CIK 能 对 肿 瘤 细 胞 发 挥 持 久 的 溶 瘤 作 用 4 CIK 细 胞 应 用 于 治 疗 肝 癌 的 临 床 前 研 究 目 前,CIK 细 胞 应 用 于 肝 癌 治 疗 的 临 床 前 试 验 和 动 物 实 验 已 在 国 内 外 广 泛 开 展, 大 量 文 献 报 道 都 显 示 了 CIK 细 胞 良 好 的 应 用 前 景 据 报 道, 正 常 人 的 CIK 细 胞 体 外 增 殖 明 显, 具 有 显 著 的 抗 移 植 瘤 活 [14,15] 性 国 内 初 步 研 究 表 明, 源 于 健 康 人 CIK 细 胞 对 肝 癌 细 胞 具 有 明 显 的 抑 制 作 用, 并 且 可 以 抑 制 裸 鼠 肝 癌 移 植 瘤 的 生 长 有 研 究 者 应 用 肝 癌 患 者 术 中 失 血 及 脐 血 分 离 单 个 核 细 胞 诱 导 培 养 DC 细 胞 和 CIK 细 胞, 诱 导 的 DC 细 胞 可 以 成 功 激 活 CIK 细 胞 的 增 殖 和 对 肿 瘤 细 胞 的 杀 伤 能 力, 有 望 为 肝 癌 的 免 疫 治 疗 提 供 一 种 新 的 途 径 也 有 研 究 者 选 取 了 人 肝 癌 高 转 移 裸 鼠 模 型 (LCI D20), 通 过 对 治 疗 组 动 物 应 用 CIK 细 胞 治 疗, 发 现 对 照 组 动 物 模 型 肝 内 转 移 率 58.3%, 明 显 高 于 CIK 细 胞 治 疗 组 (16.7% ), 对 照 组 动 物 模 型 发 生 肺 转 移 率 为 25.0%, 而 治 疗 组 未 发 现 肺 转 移, 治 疗 组 动 物 肝 癌
226 国 际 消 化 病 杂 志 2011 年 8 月 第 31 卷 第 4 期 IntJDigDis,August25,2011,Vol.31,No.4 组 织 湿 重 也 明 显 小 于 对 照 组 动 物 肝 癌 湿 重, 提 示 CIK 细 胞 通 过 对 裸 鼠 体 内 人 肝 癌 细 胞 的 非 特 异 性 杀 伤 使 肿 瘤 细 胞 数 量 减 少, 减 慢 肿 瘤 的 生 长 速 度, 并 有 效 抑 制 肿 瘤 生 长, 减 少 肿 瘤 转 移 率, 降 低 外 周 血 AFP 水 平, 最 终 延 长 动 物 的 生 存 期 5 临 床 应 用 CIK 细 胞 治 疗 肝 癌 的 主 要 策 略 CIK 细 胞 具 有 增 殖 速 度 快 杀 瘤 活 性 高 杀 瘤 谱 广 不 良 反 应 小 对 正 常 骨 髓 造 血 影 响 轻 微 等 优 点, 成 为 新 一 代 抗 肿 瘤 过 继 免 疫 治 疗 的 主 力 军 [16] 临 床 上 应 用 CIK 细 胞 治 疗 肝 癌 已 取 得 一 些 实 际 成 效, 包 括 CIK 细 胞 具 有 提 高 机 体 免 疫 功 能, 清 除 肿 瘤 患 者 体 内 微 小 残 余 病 灶, 防 止 复 发 的 作 用, 已 有 文 献 报 道 CIK 细 胞 免 疫 治 疗 可 以 提 高 肝 癌 患 者 生 活 质 量 延 长 生 存 期, 减 缓 复 发, 降 低 病 毒 载 量 等 作 用, 是 继 手 术 放 射 治 疗 化 学 治 疗 后 的 又 一 种 新 的 有 效 的 治 疗 肝 癌 患 者 的 途 径 目 前 临 床 应 用 CIK 细 胞 治 疗 肝 癌 的 主 要 策 略 包 括 以 下 几 种 5.1 手 术 后 的 CIK 细 胞 巩 固 治 疗 早 期 肝 癌 以 手 术 治 疗 为 主, 手 术 后 配 合 CIK 细 胞 输 注, 不 仅 可 以 消 除 目 前 影 像 学 检 查 等 无 法 检 测 到 的 残 留 肿 瘤 细 胞, 而 且 还 可 以 帮 助 患 者 尽 快 恢 复 [17] 和 提 高 机 体 免 疫 力, 改 善 生 活 质 量 国 外 有 研 究 者 报 道 了 150 例 肝 癌 患 者 术 后 CIK 细 胞 治 疗 的 临 床 试 验 结 果, 治 疗 无 明 显 不 良 反 应, 治 疗 组 复 发 率 较 对 照 组 下 降 18%, 表 明 这 一 治 疗 方 法 能 够 降 低 术 后 肝 癌 患 者 的 复 发 率, 延 长 术 后 无 复 发 的 生 存 时 间 最 近 有 文 献 报 道, 对 肝 癌 患 者 行 经 皮 微 波 消 融 治 疗 后 辅 以 CIK 细 胞 为 主 的 过 继 细 胞 免 疫 治 疗 安 全 有 效, 而 且 改 善 了 外 周 血 的 淋 巴 细 胞 百 分 比 5.2 CIK 细 胞 与 介 入 疗 法 的 联 合 应 用 肝 动 脉 栓 塞 化 学 治 疗 (TACE) 被 公 认 为 中 晚 期 肝 癌 的 首 选 治 疗 方 法, 但 肝 癌 介 入 治 疗 后 存 在 残 余 癌 灶 是 复 发 的 主 要 因 素, 采 用 肝 动 脉 栓 塞 化 学 治 疗 联 合 CIK 细 胞 疗 法 治 疗 中 晚 期 肝 癌 可 以 明 显 提 高 肝 癌 介 入 治 疗 的 疗 效, 减 少 化 学 治 疗 药 物 对 肝 脏 的 毒 性 作 用, 提 高 局 部 效 应 细 胞 的 浓 度, 增 强 对 局 部 肿 瘤 细 胞 的 杀 伤 力, 提 高 患 者 的 免 疫 力, 减 少 复 发, 延 长 无 进 展 生 存 和 总 生 存 期 [18] 肝 癌 术 后 补 充 TACE 术 联 合 CIK 细 胞 免 疫 治 疗, 也 能 降 低 患 者 的 复 发 率 延 长 生 存 期 在 对 经 过 肝 动 脉 化 学 治 疗 栓 塞 联 合 射 频 消 融 术 后 的 肝 癌 患 者 进 行 CIK 细 胞 局 部 灌 注 的 治 疗 研 究 过 程 中, 发 现 CIK 细 胞 回 输 后 患 者 外 周 血 中 T 淋 巴 细 胞 亚 群 中 CD3 + CD4 + 效 应 细 胞 的 比 例 和 CD4 + /CD8 + 比 值 显 著 上 升, 复 发 率 比 [19] 对 照 组 降 低, 无 复 发 生 存 率 较 对 照 组 显 著 升 高 5.3 中 晚 期 肝 癌 的 CIK 细 胞 治 疗 中 晚 期 肝 癌 患 者 由 于 肝 功 能 严 重 受 损 或 其 他 原 因, 不 能 接 受 手 术 放 射 治 疗 化 学 治 疗 甚 至 介 入 治 疗, 采 用 CIK 细 胞 疗 法 联 合 其 他 保 守 治 疗 更 有 利, 可 延 长 生 存 期, 改 善 生 活 质 量, 而 且 安 全 可 行 [20] Shi 等 应 用 CIK 细 胞 治 疗 肝 癌, 治 疗 后 患 者 外 周 血 中 的 DC1 和 DC2 细 胞 百 分 比 分 别 从 治 疗 前 的 (0.59±0.23)% 和 (0.26±0.12)% 升 高 到 (0.85± 0.27)% 和 (0.43±0.19)%,DC 细 胞 与 CIK 细 胞 两 者 相 互 激 活 相 互 促 进, 使 患 者 的 免 疫 功 能 得 到 更 好 的 改 善 同 时, 患 者 临 床 症 状 和 肝 功 能 指 标 也 有 显 著 的 好 转,AFP 下 降,ALT 下 降, 病 毒 载 量 下 降, 表 明 CIK 细 胞 是 治 疗 中 晚 期 肝 癌 的 一 种 安 全 有 效 的 新 途 径 5.4 CIK 细 胞 用 于 慢 性 乙 型 肝 炎 的 治 疗 大 部 分 肝 癌 由 肝 炎 后 肝 硬 化 转 变 而 来, 而 目 前 治 疗 慢 性 乙 型 肝 炎 的 药 物 主 要 是 IFN α 和 核 苷 类 似 物 ( 拉 米 夫 定 阿 德 福 韦 ), 但 效 果 都 不 理 想,IFN α 治 疗 病 毒 清 除 率 仅 为 30%, 核 苷 类 似 物 虽 能 有 效 抑 制 病 毒 复 制, 但 长 期 治 疗 容 易 发 生 病 毒 变 异, 导 致 病 毒 学 反 弹 或 乙 型 肝 炎 复 发 有 研 究 利 用 CIK 细 胞 治 疗 慢 性 乙 型 肝 炎, 结 果 显 示 乙 型 肝 炎 病 毒 复 制 受 到 抑 制, 部 分 患 者 乙 型 肝 炎 表 面 抗 原 转 阴, 机 体 的 免 疫 功 能 得 到 恢 复 和 提 高 有 临 床 研 究 结 果 显 示 联 合 CIK 细 胞 治 疗 组 HBV DNA 含 量 在 治 疗 后 显 著 下 降, 并 有 部 分 病 例 乙 型 肝 炎 表 面 抗 原 转 阴, 而 对 照 组 只 有 轻 度 的 下 降,HBV DNA 含 量 在 治 疗 前 后 有 统 计 学 意 义, 也 表 明 CIK 细 胞 免 疫 治 疗 除 了 具 有 杀 伤 肿 瘤 细 胞 的 作 用 外, 还 具 有 抗 乙 型 肝 炎 病 毒 的 作 用 在 关 于 CIK 细 胞 治 疗 肝 癌 的 疗 程 研 究 中,Hui [17] 等 对 肝 癌 切 除 术 后 127 例 肝 癌 患 者 进 行 了 不 同 CIK 细 胞 治 疗 疗 程 的 研 究, 结 果 显 示, 接 受 3 次 和 6 次 CIK 细 胞 输 入 治 疗 组 之 间 无 瘤 生 存 率 无 显 著 性 差 异 表 明 肝 癌 切 除 术 后 进 行 3 次 CIK 细 胞 输 入 治 疗 后 可 达 到 预 防 术 后 复 发 的 效 果, 无 需 继 续 进 行 CIK 细 胞 治 疗 另 外,CIK 细 胞 免 疫 治 疗 不 良 反 应 少, 从 目 前 报 道 来 看, 低 热 是 其 最 常 见 的 不 良 反 应, 而 且 多 数 能 很 快 自 行 消 退, 不 需 服 药 或 用 少 量 阿 司 匹 林 等 退 热 药 就 能 退 热 6 展 望 肝 癌 的 生 物 治 疗 是 继 手 术 放 射 治 疗 化 学 治 疗 后 的 第 四 种 模 式, 既 能 直 接 清 除 体 内 的 残 存 肝 癌 细 胞, 又 能 提 高 机 体 的 整 体 免 疫 功 能, 是 一 种 新 的 有 效 的 治 疗 手 段, 虽 然 只 经 历 了 十 多 年 的 发 展, 但 已 证 实 细 胞 免 疫 治 疗 具 有 改 善 肝 癌 患 者 生 活 质 量,
227 延 长 生 存 期, 减 缓 复 发, 降 低 病 毒 载 量 等 作 用, 显 示 了 细 胞 免 疫 治 疗 肝 癌 的 良 好 前 景 在 肝 癌 患 者 的 综 合 治 疗 中, 细 胞 免 疫 治 疗 成 为 提 高 肿 瘤 治 愈 率 和 有 效 率 的 一 个 关 键 措 施, 但 CIK 细 胞 过 继 免 疫 疗 法 作 为 一 种 新 免 疫 治 疗 方 法, 尚 缺 乏 大 规 模 的 前 瞻 性 随 机 试 验 数 据 及 长 期 的 疗 效 观 察, 没 有 统 一 的 治 疗 标 准 和 方 案, 其 作 用 机 制 及 不 良 反 应 都 有 待 进 一 步 研 究 但 可 确 信, 随 着 基 础 研 究 的 不 断 深 入 和 临 床 应 用 的 不 断 规 范 化, 以 CIK 细 胞 为 主 的 免 疫 治 疗 手 术 放 射 治 疗 化 学 治 疗 等 综 合 治 疗 将 为 肝 癌 患 者 带 来 新 的 希 望 参 考 文 献 1 HuiD,QiangL,Jian W,etal.Arandomizedcontroledtrial opostoperative adjuvant cytokine induced kiler cels immunotherapy after radical resection of hepatocelular carcinoma.digliverdis,2009,41:36 41. 2 Linn YC,Lau SK,Liu BH,etal.Characterizationofthe recognitionandfunctionalheterogeneityexhibitedbycytokine induced kiler celsubsets against acute myeloid leukaemia targetcel.immunology,2009,126:425 435. 3 NishimuraR,BakerJ,Beilhack A,etal.Invivotraficking andsurvivalofcytokine inducedkilercelsresultinginminimal GVHDwithrententionofantitumoractivitiy.Blood,2008,12: 2563 2574. 4 WeiXC,ZhaiXH,HanXR,etal.BiologicalActivityofDC CIKcelsandItsEfectAgainstLeukemiaCelsInVitro.Zhong GuoShiYanXueYeXueZaZhi,2008,16:1150 1153. 5 LiH,WangC,YuJ,etal.Dendriticcel activatedcytokine induced kiler cels enhance the anti tumor efect of chemotherapyonnon smalcellungcancerinpatientsafter surgery.cytotherapy,2009,11:1076 1083. 6 支 黎 明, 颜 江 华, 车 莹 等. 双 特 异 性 抗 体 CD3XAFP 介 导 CIK 细 胞 对 AFP 阳 性 肝 癌 细 胞 的 杀 伤 应 用. 中 国 生 化 药 物 杂 志, 2010,31:297 301. 7 ThorneSH,Negrin RS,Contag CH.Synergisticantitumor efectsofimmunecel viralbiotherapy.science,2006,311: 1780 1784. 8 YuX,XiaW,ZhangT,etal.EnhancedcytotoxicityofIL 24 gene modifieddendriticcelsco cultured withcytokine induced kilercelstohepatocelularcarcinomacels.intj Hematol, 2010,92:276 282. 9 NagarajS,ZiskeC,SchmidtWolfIG,etal.Humancytokine inducedkilercelshaveenhancedinvitrocytolyticactivityvia non viralinterleukin 2 genetransfer.genet Vaccines Ther, 2004,2:12 17. 10 Marten A,ZiskeC,SchotkerB,etal.Interactionsbetween dendriticcels and cytokine induced kiler cels lead to an activation of both populations.j Immunother,2001,24: 502 510. 11 刘 苗, 吴 小 艳, 金 润 铭. 细 胞 因 子 诱 导 的 杀 伤 细 胞 生 物 活 性 及 杀 瘤 机 制. 实 用 儿 科 临 床 杂 志,2009,24:1163 1166. 12 Kornacker M,MoldenhauerG,Herbst M,etal.Cytokine induced kiler celagainst autologous cel:direct cytotoxic efects and induction of immune accessory molecules by interferon gamma.intjcancer,2006,119:1377 1382. 13 VernerisMR,KornackerM,MailanderV,etal.Resistanceof ex vivo expanded CD3 + CD56 + T cels to fas mediated apoptosis.cancerimmunolimmunother,2000,49:335 345. 14 SangioloD,MesianoG,Carnevale schiancaf,etal.cytokine induced kiler cels as adoptiveimmunotherapy strategy to augment graft versus tumor after hematopoietic cel transplantation.expertopinbiolther,2009,9:831 840. 15 Wang FS,Liu MX,Zang B,etal.Antitumoractivitiesof humanautologouscytokine inducedkiler (CIK)celsagainst hepatocelularcarcinomacelsin vitroandin vivo. WorldJ Gastroenterol,2002,8:464 468. 16 OliosoP,GiancolaR,DiritiM,etal.Immunotherapy with cytokineinducedkilercelsinsolidandhematopoietictumours: apilotclinicaltrial.hematoloncol,2009,27:130 139. 17 HuiD,QiangLi,JianW,etal.Arandomizedcontroledtrialof postoperative adjuvant cytokine induced kiler cels immunotherapy after radical resection of hepatocelular carcinoma.digliverdis,2009,41:36 41. 18 Hao MZ,Lin HN,Ye YB,etal.Eficacyoftranscatheter arterial chemoembolization combined with cytokine induced kilerceltherapyonhepatocelularcarcinoma:acomparative study.chinjcancer,2010,29:182 189. 19 WengDS,ZhouJ,ZhouQM,etal.Minimalyinvasivetreatment combinedwithcytokine inducedkilercelstherapylowerthe short term recurrence rates of hepatocelular carcinomas.j Immunotherapy,2008,31:63 71. 20 ShiM,ZhangB,RongZ,etal.Autologouscytokine induced kilerceltherapyinclinicaltrialphaseiissafeinpatientswith primary hepatocelular carcinoma. World J Gastroenterol, 2004,10:1146 1151. ( 收 稿 日 期 :2011 04 16) ( 本 文 编 辑 : 周 骏 )