PowerMag Air & Water DNA/RNA Isolation Kit (Optimized for epmotion ) 自 动 化 空 气 / 水 样 滤 膜 DNA/RNA 提 取 试 剂 盒 货 号 规 格 总 提 取 次 数 27800-4-EP 4 96 次 384 简 介 PowerMag Air & Water DNA/RNA Isolation Kit 专 门 设 计 结 合 Eppendorf epmotion 5075 TMX 自 动 化 磁 珠 核 酸 纯 化 系 统 使 用 本 试 剂 盒 可 用 于 过 滤 到 滤 膜 上 任 何 来 源 空 气 或 液 体 样 本 中 微 生 物 DNA 和 RNA 的 自 动 化 提 取 直 径 25mm 或 47mm, 任 何 材 质 的 滤 膜 都 适 用 专 利 抑 制 因 子 去 除 技 术 在 提 取 过 程 中 能 轻 松 去 除 滤 膜 上 的 盐 重 金 属 腐 殖 质 及 其 它 有 机 物 创 新 的 专 利 磁 珠 系 统 只 选 择 性 捕 捉 核 酸 分 子, 最 终 干 净 的 DNA 和 RNA 可 直 接 用 于 下 游 PCR qpcr RT-PCR 第 二 代 测 序 等 应 用 经 过 DNA/RNA 提 取 验 证 的 各 种 类 型 空 气 水 样 滤 膜 滤 膜 类 型 空 气 水 样 Mixed Cellulose Ester (MCE) 混 合 纤 维 素 酯 Cellulose Acetate (CA) 醋 酸 纤 维 素 Cellulose Nitrate (CN) 硝 化 纤 维 素 Polyethersulfone (PES) 聚 醚 砜 Glass Fiber (GF/F)* 玻 璃 纤 维 * Polycarbonate (PC) 聚 碳 酸 酯 Nylon 聚 酰 胺 纤 维 Gelatin* 明 胶 * Polytetrafluoroethylene (PTFE) 聚 四 氟 乙 烯 * 玻 璃 纤 维 和 明 胶 滤 膜 需 要 修 改 说 明 书 才 能 保 证 DNA RNA 最 佳 回 收 得 率 对 应 的 操 作 请 参 考 下 文 的 注 意 事 项 和 疑 难 点 为 了 提 高 样 品 处 理 效 率, 该 试 剂 盒 需 要 使 用 专 门 的 振 荡 器 帮 助 5ml PowerWater 研 磨 管 的 珠 磨 研 磨 研 磨 管 内 含 直 径 0.7mm 和 0.15mm 的 去 RNA 酶 DNA 酶 化 处 理 的 混 搭 石 榴 石 研 磨 珠 我 们 推 荐 使 用 莱 驰 的 96 孔 板 振 荡 器 和 一 次 可 同 时 处 理 32 个 样 品 的 5ml 振 荡 器 适 配 器 (MOBIO 货 号 :11980) 同 时, 还 有 可 在 96 孔 板 离 心 机 上 一 次 离 心 32 个 5ml PowerWater 研 磨 管 的 5ml 管 离 心 转 子 (MOBIO 货 号 :11981) 本 试 剂 盒 针 对 Eppendorf epmotion 5075 TMX 自 动 核 酸 提 取 仪 作 了 优 化, 可 从 试 剂 盒 提 供 的 2ml 深 孔 板 (DWP) 最 多 每 孔 850ul 的 裂 解 物 中 回 收 DNA 和 RNA 试 剂 盒 需 要 用 到 96 孔 板 振 荡 器 为 获 得 最 佳 效 果, 我 们 强 力 推 荐 使 用 MOBIO 的 PowerMag 磁 力 分 离 器 (MO BIO 货 号 27400) 不 过, 其 它 能 从 深 孔 中 高 效 分 离 出 磁 珠 的 磁 力 分 离 器 也 可 以 内 容 介 绍 :
试 剂 盒 提 供 了 推 荐 使 用 的 塑 料 管, 这 种 管 子 的 管 壁 很 薄, 有 利 于 磁 性 传 导 以 便 更 高 效 地 分 离 磁 珠 注 意 : 自 动 提 取 平 台 的 试 剂 组 分 订 购 信 息 请 查 询 官 网 上 的 软 件 操 作 说 明 书 其 它 开 放 式 自 动 化 核 酸 提 取 仪 也 能 兼 容 本 试 剂 盒 不 过, 具 体 如 何 修 改 本 说 明 书 来 满 足 机 器 要 求, 需 联 系 咨 询 仪 器 供 应 商 操 作 预 览 : 将 装 有 单 张 25mm 或 47mm 直 径 滤 膜 的 5ml 研 磨 管 放 入 到 5ml 管 96 孔 板 震 荡 器 适 配 器 (MO BIO 货 号 11980) 中, 再 装 到 96 孔 板 震 荡 器 上 进 行 快 速 彻 底 的 匀 质, 在 机 械 力 和 化 学 试 剂 的 共 同 作 用 下 裂 解 细 胞 通 过 IRT 技 术, 彻 底 去 除 样 品 中 的 抑 制 因 子 特 殊 的 磁 珠 在 缓 冲 溶 液 中 特 异 性 捕 捉 核 酸 分 子, 避 免 使 用 高 盐 和 酒 精 溶 液, 结 合 到 磁 珠 上 的 核 酸 经 洗 涤 后 用 去 RNase 水 洗 脱 下 来 值 得 注 意 的 是, 因 存 在 少 量 残 留 的 洗 涤 液, 用 PicoGreen 法 测 得 的 DNA 量 大 概 比 实 际 得 率 低 15% 残 留 的 洗 涤 液 不 影 响 下 游 PCR cdna 分 析 RT-PCR 或 二 代 测 序 等 其 它 下 游 应 用 本 试 剂 盒 仅 供 研 究, 不 适 用 于 临 床 诊 断 用 途 相 关 产 品 货 号 规 格 96 Well Plate Shaker 11996 1 unit (120 V) PowerMag Magnetic Separator 27400 1 unit 5 ml Tube Adapter Set 11980 1 set 5 ml Tube Centrifuge Blocks 11981 1 set Water Filter Adapter 14800-10-WFA 1 adapter Water Filter (0.45 μm) 14800-50-WF 50 units Water Filter (0.22 μm) 14880-50-WF 50 units DNase Max Kit 15200-50 50 preps RNase A Solution (25 mg/ml) 1202-1 1 ml
设 备 和 试 剂 要 求 一 次 性 / 可 重 复 使 用 的 过 滤 漏 斗 或 空 气 样 本 过 滤 器 滤 膜 ( 使 用 可 重 复 使 用 过 滤 漏 斗 时 需 准 备 ) 移 液 器 可 4500 x g 离 心 的 96 孔 板 离 心 机 注 意 : 如 果 离 心 机 转 速 达 不 到 要 求 请 参 考 疑 难 点 排 枪 (50ul-100ul) 96 孔 板 振 荡 器 和 5 ml 管 96 孔 板 振 荡 器 适 配 器 (MOBIO 货 号 :11980) 带 3 英 寸 橡 胶 垫 片 的 涡 旋 仪 (MOBIO 货 号 :13111-V-220) β- 巯 基 乙 醇 全 自 动 平 台 设 备 要 求 振 荡 器 (epmotion 5075 TMX 平 台 自 带 thermo-mixer) 磁 力 分 离 器 (MO BIO 货 :27400) 自 备 耗 材 请 联 系 Eppendorf 代 理 商 购 买 epmotion 平 台 相 关 耗 材, 或 进 入 网 址 www.mobio.com/powermag 获 得 epmotion 产 品 链 接 合 适 大 小 的 多 通 道 移 液 器 枪 头 注 意 : 枪 头 需 兼 容 试 剂 盒 1ml Blocks 的 圆 底 微 孔 ( 可 选 用 Molecular Bioproducts ART 货 号 :ART 2179-HR Eppendorf 货 号 :0030 077.750 或 Rainin 货 号 : RT-1000F) 试 剂 盒 组 分 试 剂 盒 货 号 :27800-4-EP 组 分 货 号 量 5 ml Bead Tubes 27800-4-EP-BT 384 PowerMag Lysis Solution 27800-4-EP-1 424ml PowerMag Inhibitor Removal Solution 27800-4-EP-2 85ml ClearMag Binding Solution 27800-4-EP-3 2x188ml ClearMag Beads 27800-4-EP-4 9ml ClearMag Wash Solution 27800-4-EP-5 765ml ClearMag RNase-Free Water 27800-4-EP-6 49ml MO BIO 2 ml Deep Well Plates (DWP) 27800-4-EP-DWP 12 PowerMag Microplates (MO BIO MTP) 27800-4-EP-MTP 4 Sealing Tape 27800-4-EP-ST 32 Round Well Mats 27800-4-EP-RWM 4 实 验 前 请 先 逐 一 检 查 试 剂! 保 存 室 温 (15-30 ) 保 存 2 年
操 作 步 骤 ANBIOSCI TECH LTD 实 验 开 始 前,60 C 预 热 PowerMag Lysis Solution 15-20 分 钟, 确 保 沉 淀 充 分 溶 解 通 过 以 下 实 验 步 骤, 可 同 时 提 取 DNA RNA: a. 当 需 要 同 时 提 取 DNA 和 RNA, 或 者 只 提 取 RNA 时, 往 每 ml PowerMag Lysis Solution 中 加 入 25ul-ME 每 96 份 样 品 需 要 准 备 98ml PowerMag Lysis Solution / β-me 混 合 液 ( 每 个 样 品 1ml, 另 冗 余 制 备 2ml) b. 若 只 提 DNA, 则 每 ml PowerMag Lysis Solution 中 加 9ul RNA 酶 A 每 96 份 样 品 需 准 备 98ml PowerMag Lysis Solution / RNase A 混 合 液, 此 处 不 需 要 β-me 1 用 25mm 或 47mm 直 径 的 滤 膜 过 滤 空 气 或 水 样 注 意 : 如 果 使 用 玻 璃 纤 维 滤 膜 或 明 胶 滤 膜, 请 在 操 作 前 请 参 考 疑 难 点 2 用 一 对 无 菌 镊 子 从 滤 膜 对 称 的 边 缘 夹 起 并 将 上 表 面 朝 里 卷 成 圆 筒 状 3 将 卷 好 的 滤 膜 放 入 5ml 研 磨 管 内 4 每 个 5ml 研 磨 管 加 入 1ml 预 热 的 PowerMag Lysis Solution / β-me 混 合 液 ( 只 提 DNA 时 加 入 的 是 1ml 预 热 的 PowerMag Lysis Solution / RNase A 混 合 液 ) 注 意 :PowerMag Lysis Solution 含 有 SDS, 室 温 下 易 形 成 沉 淀 60 C 加 热 可 使 沉 淀 溶 解 溶 液 可 以 趁 热 使 用 使 用 明 胶 滤 膜 时, 此 步 需 加 入 30ul 蛋 白 酶 K( 浓 度 20mg/ml) 并 且 65 C 加 热 10min 5 每 块 5ml 管 96 孔 板 振 荡 器 适 配 器 上 (MO BIO 货 号 11980) 放 16 个 5ml 研 磨 管, 再 将 其 装 到 96 孔 板 震 荡 器 上 接 下 来 的 参 数 设 置 请 参 考 5ml 管 96 孔 板 振 荡 器 适 配 器 使 用 说 明 书 将 速 度 调 到 20 档 振 荡 5min 注 意 : 使 用 玻 璃 纤 维 滤 膜 则 调 至 10 档 振 荡 5min 6 第 一 次 振 荡 5min 以 后, 将 适 配 器 翻 转 过 来 装 置, 再 振 荡 5min 注 意 : 振 荡 过 程 中 有 必 要 将 适 配 器 翻 转 一 次 以 确 保 研 磨 力 度 均 匀, 关 于 怎 样 在 震 荡 器 上 装 卸 适 配 器, 请 参 考 MO BIO 官 网 在 线 视 频 (http://www.mobio.com/5mladapterplates), 或 按 下 方 联 系 方 式 联 系 技 术 支 持 使 用 玻 璃 纤 维 滤 膜 则 请 调 至 10 档 振 荡 5min 7 4500 x g 室 温 离 心 5ml 研 磨 管 1min( 需 要 用 5ml 管 离 心 转 子,MO BIO 货 号 11981) 注 意 : 使 用 玻 璃 纤 维 滤 膜 时 将 研 磨 后 管 内 所 有 内 容 物 转 移 到 10ml 注 射 器 针 管 内, 并 将 针 管 放 到 15ml 离 心 管 里 4000 x g 离 心 3min, 吸 取 上 清 待 用 8 转 移 上 清 到 干 净 的 2ml 深 孔 板 (DWP), 吸 取 时 将 枪 头 尽 可 能 伸 到 管 底, 以 获 得 更 多 上 清 ; 注 意 : 该 上 清 可 能 仍 然 含 有 一 些 杂 质 9 每 孔 加 入 200ul PowerMag Inhibitor Removal Solution, 并 盖 紧 深 孔 板 的 密 封 盖, 涡 旋 5sec 确 保 溶 液 混 匀 室 温 孵 育 5 分 钟 10 4500 x g 室 温 离 心 DWP 6min, 揭 开 并 弃 去 板 盖
11 避 开 沉 淀, 转 移 所 有 上 清 到 新 的 DWP 对 于 DWP 板 中 间 孔 内 上 清 的 吸 取, 为 了 避 免 碰 到 沉 淀, 最 好 在 枪 头 上 画 线 以 提 示 插 入 的 深 度 盖 上 新 的 密 封 盖 4500 x g 再 次 离 心 6min 以 去 除 剩 下 的 杂 质 12 转 移 上 清 的 体 积 不 超 过 850ul 注 意 : 如 果 需 要 暂 停, 或 一 次 性 处 理 不 了 2 块 板, 可 以 将 此 步 的 DWP 板 放 置 4 数 小 时 13 按 照 epmotion 工 作 台 面 上 的 程 序 指 示 将 含 有 上 清 的 DWP 板 放 到 epmotion 自 动 化 提 取 平 台 上 14 每 处 理 一 块 96 孔 板, 请 按 程 序 指 示 往 平 台 上 正 确 位 置 上 的 400ml 容 器 中 装 入 174ml ClearMag Wash Solution 15 每 处 理 一 块 96 孔 板, 请 按 程 序 指 示 往 平 台 上 正 确 位 置 上 的 30ml 容 器 中 装 入 11ml ClearMag RNase-Free Water 16 每 处 理 一 块 96 孔 板, 需 事 先 制 备 ClearMag Binding Solution / ClearMag Beads 混 合 液 先 涡 旋 使 ClearMag Beads 均 匀 重 悬, 再 取 2ml 重 悬 的 ClearMag Beads 加 入 到 85ml ClearMag Binding Solution 中 ( 自 行 准 备 容 器 ), 涡 旋 混 匀 17, 将 ClearMag Binding Solution / ClearMag Beads 混 合 物 装 入 100ml Eppendorf 管 中, 并 按 指 示 装 到 自 动 化 平 台 的 正 确 位 置 18 启 动 提 取 程 序 注 意 : 立 即 开 始 提 取 非 常 必 要, 否 则 磁 珠 会 沉 降 如 果 耽 误 较 久 ( 超 过 3min) 则 需 搅 动 重 悬 磁 珠 19 以 上 步 骤 完 成 后, 用 试 剂 盒 提 供 的 Round Well Mat 盖 到 PowerMag Microplate 上 无 需 额 外 处 理,DNA/RNA 可 直 接 用 于 下 游 扩 增 建 议 -20 C 或 -80 C 冷 冻 保 存 核 酸 感 谢 使 用 PowerMag Air & Water DNA/RNA Isolation Kit! 疑 难 点 水 和 空 气 样 本 不 同 类 型 的 滤 膜 可 过 滤 的 空 气 或 水 样 的 量 取 决 于 样 品 来 源 滤 膜 类 型 直 径 和 孔 径 清 澈 水 样 : 水 样 有 清 澈, 也 有 浑 浊 清 澈 水 样 不 易 堵 塞 滤 膜, 因 此 可 以 处 理 较 大 体 积 样 本 饮 用 水 一 般 可 以 过 滤 较 大 体 积, 主 要 取 决 于 悬 浮 微 粒 总 量 和 性 质 大 多 情 况 下, 可 以 处 理 100ml 到 10L 不 等, 甚 至 有 些 实 验 者 证 实 可 以 处 理 更 大 体 积 的 样 本 浑 浊 水 样 : 含 有 大 量 悬 浮 颗 粒 或 沉 积 物 的 浑 浊 水 样 很 容 易 堵 塞 0.22um 的 滤 膜, 所 以 这 类 样 本 推 荐 使 用 0.45um 的 滤 膜 过 滤 前, 可 以 先 将 样 品 静 置 一 段 时 间, 至 悬 浮 颗 粒 沉 淀 对 于 那 些 没 有 或 不 需 要 沉 淀 的 样 品, 避 免 堵 塞 滤 膜 的 推 荐 做 法 就 是 在 要 求 孔 径 滤 膜 的 上 方 叠 一 层 更 大 孔 径 的 滤 膜, 一 般 的 做 法 是 在 小 孔 径 滤 膜 (0.22 um 或 0.45um) 上 方 加 一 层 1um 孔 径 的 无 菌 滤 膜, 这 种 方 法 能 滤 去 大 的 杂 质 碎 片, 使 小 孔 径 滤 膜 截 留 住 微 生 物 可 以 用 无 菌 盐 水 或 磷 酸 缓 冲 液 冲 洗 过 滤 装 置 和 上 层 堵 塞 的 大 孔 径 滤 膜, 尽 管 效 果 称 不 上 完 美, 但 至 少 可 以 提 高 微 生 物 DNA 的 得 率
空 气 样 品 : 空 气 是 典 型 的 低 生 物 丰 度 样 本, 使 用 的 是 25-35mm 直 径 的 滤 膜 提 高 核 酸 得 率 需 要 在 操 作 过 程 中 延 长 取 样 时 间 或 加 热 处 理 ( 具 体 参 考 以 下 难 裂 解 细 胞 部 分 ), 根 据 膜 的 材 质 和 样 品 采 集 设 备 的 不 同, 使 用 的 滤 膜 孔 径 从 0.45um 到 5um 不 等 由 于 空 气 采 集 设 备 不 尽 相 同, 小 孔 径 滤 膜 可 能 导 致 压 力 大, 减 少 空 气 流 量, 因 此 我 们 推 荐 针 对 采 样 设 备 选 择 合 适 孔 径 的 滤 膜 以 达 到 最 佳 空 气 流 速 滤 膜 的 运 输 和 保 存 滤 膜 干 燥 后 可 稳 定 保 存 条 件 允 许 时, 可 以 -20 保 存 在 不 含 裂 解 液 的 研 磨 管 中 玻 璃 纤 维 滤 膜 玻 璃 纤 维 具 有 很 强 的 吸 附 性, 不 管 25mm 还 是 47mm 直 径 的 膜, 都 会 吸 收 大 量 PowerMag Lysis Solution/β-ME 混 合 液, 为 使 机 械 裂 解 后 能 回 收 足 量 的 上 清, 必 须 对 膜 进 行 离 心 以 释 放 出 其 吸 收 的 上 清 待 后 续 处 理 取 10ml 注 射 器, 弃 去 活 塞, 小 心 将 5ml 研 磨 管 内 容 物 转 移 到 注 射 器 针 筒 内, 并 将 针 筒 插 入 15ml 离 心 管,4,000 x g 离 心 3min, 此 时, 膜 留 在 了 针 筒 内, 而 上 清 进 入 15ml 离 心 管 管 底 使 用 相 同 设 备 进 行 机 械 研 磨 时, 与 其 他 类 型 滤 膜 比 较 而 言, 玻 璃 纤 维 滤 膜 对 DNA 的 剪 切 力 度 更 大 为 降 低 DNA 的 损 伤, 建 议 将 96 孔 板 振 荡 器 速 度 减 至 10 档 使 用 明 胶 滤 膜 明 胶 纤 维 通 常 用 来 采 集 可 培 养 的 病 毒 等 微 生 物 采 集 完 样 本 的 明 胶 滤 膜 溶 解 在 水 性 缓 冲 液 中 在 琼 脂 平 板 里 进 行 培 养 要 提 取 滤 膜 DNA 或 RNA, 珠 磨 研 磨 之 前 需 要 先 用 蛋 白 酶 消 化, 也 就 是 加 入 PowerMag Lysis solution / β-me 混 合 液 之 后, 需 再 加 30ul 蛋 白 酶 K( 浓 度 20mg/ml) 并 置 65ºC 孵 育 10min, 再 接 第 着 5 步 操 作 难 裂 解 细 胞 对 裂 解 的 微 生 物, 可 在 加 入 PowerMag Lysis Solution 后,65ºC 孵 育 10min 对 于 某 些 类 型 的 微 生 物, 可 能 会 导 致 一 定 程 度 的 RNA 降 解 加 热 后, 接 着 第 5 步 操 作, 用 96 孔 板 振 荡 器 对 细 胞 进 行 机 械 裂 解 离 心 机 最 大 转 速 不 足 4500 x g 为 达 到 总 离 心 力 ( 或 速 度 ) 的 要 求, 可 延 长 离 心 时 间 或 提 高 离 心 速 度 用 总 的 离 心 力 除 以 最 大 转 速, 便 可 得 到 需 要 离 心 的 时 间 例 如 :10min x 4500g=45000 如 果 你 的 离 心 机 最 大 离 心 速 度 是 2500g,45000 2500 = 18, 则 需 离 心 18 分 钟 如 果 DNA 无 法 进 行 PCR 扩 增 请 用 分 光 光 度 计 结 合 凝 胶 电 泳 检 测 DNA 和 RNA 的 得 率 以 DNA 为 模 板 时, 但 一 般 一 管 反 应 加 10ng DNA 如 果 调 整 模 板 浓 度 之 后 仍 然 无 法 扩 增, 请 尝 试 优 化 ( 改 变 反 应 条 件 验 证 引 物 或 更 换 酶 )PCR 条 件 DNA/RNA 的 浓 缩 洗 脱 的 DNA 或 RNA 的 终 体 积 是 100ul, 如 需 浓 缩, 可 加 入 5ul 5M 的 NaCl 溶 液 上 下 颠 倒 3-5 次 混 匀 再 加 入 200ul 100% 的 乙 醇 颠 倒 3-5 次 混 匀 -20 C 孵 育 至 少 10min, 可 以 过 夜 13,000 x g 离 心 15min 弃 上 清, 再 用 70% 预 冷 酒 精 洗 涤 DNA 沉 淀 13,000 x g 离 心 10min 收 集 沉 淀, 弃 去 酒 精, 用 真 空 离 心 蒸 发 器 干 燥 器 或 冷 干 机 除 去 残 余 乙 醇, 用 无 菌 水 或 10mM 的 无 菌 Tris 缓 冲 液 重 悬 DNA 注 意 : 这 一 过 程 需 在 核 酸 被 洗 脱 到 微 量 离 心 管 内 之 后 再 操 作
DNA 的 保 存 溶 解 在 ClearMag RNase-Free Water 中 的 RNA 或 DNA 需 -20 保 存 避 免 过 快 降 解,-80 保 存 时 间 更 长 用 ph 7 的 10mM Tris 缓 冲 液 或 TE 溶 液 洗 脱 核 酸 能 更 好 的 避 免 降 解, 但 EDTA 可 能 抑 制 下 游 PCR 或 测 序 反 应 洗 脱 到 微 量 板 (MTP) 中 的 核 酸 置 4 C 保 存 时 间 过 长 会 因 蒸 发 导 致 溶 液 体 积 减 少 试 剂 盒 提 供 的 TE-4 溶 液 ( 成 分 :10 mm Tris, 0.1 mm EDTA, ph 8.0m 货 号 :17320-1000) 能 在 保 存 期 间 最 大 程 度 上 保 护 DNA 而 不 会 一 直 PCR 反 应 推 荐 产 品 更 全 的 产 品 介 绍, 请 查 看 www.anbiosci.com 名 称 货 号 提 取 次 数 PowerWater DNA Isolation Kit 14900-50-NF 50 次 14900-100-NF 100 次 PowerWater RNA Isolation Kit 14700-50-NF 50 次 PowerWater Sterivex DNA Isolation Kit 14600-50-NF 50 次 PowerMag Soil DNA Isolation Kit (Optimized for epmotion 27100-4-EP 4 x 96 次 PowerMag Microbial DNA Isolation Kit 27200-4 4 96 次 PowerMag epmotion Accessory Pack 27300-4-EP 1 套 PowerMag Microbiome RNA/DNA Isolation Kit (Optimized for epmotion ) 27500-4-EP 4 96 次 epmotion 是 Eppendorf 的 注 册 商 标 Inhibitor Removal Technology (IRT) 是 MO BIO 公 司 的 注 册 商 标, 包 含 授 权 专 利, 其 使 用 仅 限 许 可 更 多 实 用 技 巧 请 参 阅 http://www.anbiosci.com/mbweibo/blog.htm